Антиаритмическое лекарственное средство



Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство
Антиаритмическое лекарственное средство

Владельцы патента RU 2664668:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Уфимский федеральный исследовательский центр Российской академии наук (УФИЦ РАН) (RU)

Изобретение относится к фармакологии и касается антиаритмического лекарственного средства на основе алкалоида лаппаконитина, представляющего собой фармацевтическую комбинацию, включающую в себя лаппаконитин, глицирризиновую кислоту и метилурацил при определенном мольном соотношении компонентов. Вышеописанное средство является эффективным антиаритмическим средством, может применяться для профилактики и лечения предсердных и желудочковых, в том числе и злокачественных, нарушений сердечного ритма. 10 ил., 3 табл.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается фармацевтической комбинации, включающей в себя лаппаконитин, глицирризиновую кислоту и метилурацил при мольном соотношении компонентов лаппаконитин : глициризиновая кислота : метилурацил, равном 1:4:2, в качестве лекарственного средства с антиаритмической активностью, которое может применяться для профилактики и лечения предсердных и желудочковых, в том числе и злокачественных, нарушений сердечного ритма.

Проблема профилактики и лечения злокачественных нарушений сердечного ритма и, как следствие этого, снижения риска возникновения внезапной сердечной смерти является одной из наиболее актуальных задач, стоящих перед современной кардиофармакологией.

В настоящее время для лечения нарушений ритма сердца применяют медикаментозные и интервенционные методы лечения. Медикаментозное лечение этой патологии основано на применении антиаритмических препаратов I-IV классов по классификации Vaughan Williams, в основе механизма действия которых лежит их способность подавлять аномальную активность трансмембранных, потенциалзависимых ионных каналов (Na, K и Са), встроенных в клеточную мембрану кардиомиоцитов. К сожалению, представленные на фармацевтическом рынке антиаритмические лекарственные средства, несмотря на достаточно высокую эффективность, обладают целым рядом существенных побочных эффектов (бронхоспазм, ортостатическая гипотензия, проатерогенное действие и др.), а также способностью угнетать функциию основного водителя ритма сердца - синусового узла [В.Г. Кукес. Клиническая фармакология // Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2014.). Не менее важно, что всем им присуще проаритмическое действие [Wolberette D.L. // Am. J. Cardiol., 2003, v. 91, P. 39D-44D; Nishimura H. Nippon Rinsho., 2007, v. 65, Suppl. 8. - Р. 430-435].

В связи с этим представляется очевидным, что целью антиаритмической терапии должно быть не только эффективное устранение нарушений сердечного ритма, но и улучшение качества жизни больного с гарантией безопасности применяемой терапии, т.е. при выборе антиаритмического лекарственного средства предпочтение должно быть отдано препарату, обладающему наименьшим количеством побочных эффектов, включая проаритмическое действие, особенно при необходимости его длительного регулярного приема.

На фоне многих синтетических антиаритмических лекарственных средств особое место занимает препарат растительного происхождения Аллапинин, получаемый из травы борца белоустого (Aconitum leucostomum Worosch) и корней и корневищ борца северного (Aconitum septentrionale Koelle (A. excelsum Reichenb)) семейства лютиковых - Ranunculaceae. Аллапинин (лаппаконитин гидробромид) предложен и запатентован отечественными учеными [SU 1335293, 08.05.1987] как лекарственное средство для лечения аритмии сердца; получены патенты в США [US 4656178, 07.04.1987], во Франции [FR 2551975, 22.03.1985], Швейцарии [СН 661208, 15.07.1987] и других странах [JPS 6061527, 09.04.1985], [JPH 0341448, 24.06.1991].

Аллапинин является ингибитором быстрого входящего трансмембранного натриевого тока и относится к классу IС антиаритмиков по классификации Vaughan Williams, замедляет проведение импульсов по предсердиям и системе Гиса-Пуркинье, однако в отличие от большинства антиаритмиков I класса не угнетает автоматизм синусового узла, не оказывает отрицательного инотропного действия и не вызывает гипотензию. Лаппаконитин гидробромид с успехом применяют для купирования как предсердных, так и желудочковых нарушений ритма сердца, а также предупреждения пароксизмов наджелудочковых тахиаритмий. Препарат блокирует антеградные (аномальные) проводящие пути, что делает его особенно эффективным при лечении больных с синдромом WPW, в том числе и рефрактерных к другим антиаритмическим лекарственным средствам [http://allapinin.ru/faq.php?page=1. С.Ф. Соколов. Аллапинин® и современные подходы к лечению нарушений ритма сердца (методические рекомендации по применению препарата) ФГУ РКНПК Росмедтехнологий].

Согласно ФСП 42-8380-07 использующийся в медицинской практике препарат Аллапинин® представляет собой гидробромид алкалоида лаппаконитина с сопутствующими алкалоидами и используется в виде 0,5% раствора для инъекций [RU №2238103] и таблеток 25 мг [Р N000405/02-010811], содержащих вспомогательные вещества - сахарозу (сахар), крахмал картофельный; кальция стеарат; натрий кроскармеллозу. Известно техническое решение, представляющее собой композицию (Аллафорте®), обеспечивающую пролонгированное антиаритмическое действие активного компонента лаппаконитин гидробромида с сопутствующими алкалоидами, содержащую прожелатинизированый крахмал, моногидрат лактозы гипромеллозу, стеарат кальция и коллоидный диоксид кремния [RU 2513580, 20.04.2014]. Известно техническое решение, относящееся к средствам для лечения различных форм нарушения ритма сердца и представляющее собой комплексное соединение дитерпенового алкалоида лаппаконитина с глицирризиновой кислотой [RU 2180583, 20.03.2002], однако данные о доклинических исследованиях отсутствуют. Известно техническое решение, относящееся к области медицины, а именно к кардиохирургии, которое касается профилактики нарушений ритма сердца при коронарном шунтировании и предусматривает использование лаппаконитин гидробромида в предоперационно - и после операционном периодах [RU 23929939, 27.06.2010]. В настоящее время из перечисленных в медицинской практике используется только препарат Аллапинин®.

Несмотря на высокий антиаритмический индекс, высокая токсичность не позволяет в клинике проявить все преимущества Аллапинина перед существующими препаратами аналогичного типа действия. В ранние сроки лечения лаппаконитин гидробромидом наиболее часто встречаются внекардиальные побочные эффекты. Более выраженные головокружения, часто сочетающиеся с головной болью и нарушением фиксации взора, могут обусловить необходимость снижения дозы препарата. Установлено, что эти симптомы вызваны высокими дозами лаппаконитин гидробромида. Описаны другие редкие внекардиальные побочные эффекты, определенно связанные с приемом аллапинина (почечная колика, кожный зуд).

Побочные эффекты лаппаконитина гидробромида в 22,4% случаев не позволяют достичь терапевтической дозы препарата. При достижении этой дозы они встречаются у 31,2% больных [С.Ф. Соколов. Современные подходы к лечению больных с нарушениями ритма сердца и результаты клинического изучения препарата аллапинин // Вестник аритмологии. 2011. №64. С. 60].

Задача, на решение которой направлено заявленное техническое решение, заключается в создании эффективного, низкотоксичного комбинированного лекарственного средства для лечения различных форм нарушения ритма сердца и, следовательно, расширения спектра используемых в клинике антиаритмических лекарственных средств.

Поставленная задача решается созданием фармацевтической комбинации на основе растительного алкалоида лаппаконитина, обладающей антиаритмическим действием. Наиболее близким аналогом заявляемой фармацевтической комбинации является лекарственное средство Аллапинин (лаппаконитин гидробромид).

Сущность предлагаемого технического решения заключается в составе фармацевтической комбинации, включающей лаппаконитин, глицирризиновую кислоту и метилурацил при мольном соотношении компонентов: лаппаконитин : глициризиновая кислота : метилурацил, равном 1:4:2.

В предлагаемом техническом решении, так же как и в прототипе, активным веществом, обладающим антиаритмическими свойствами, является алкалоид лаппаконитин, используемый в прототипе в виде гидробромида, а в заявленном техническом решении в виде компонента в составе фармацевтической комбинации.

Известно, что оксидативный стресс играет важную роль в патогенезе различных нарушений ритмической активности сердца, вызывая нарушение метаболизма сократительных кардиомиоцитов и клеток проводящей системы сердца и, как следствие этого, развитие электрической нестабильности миокарда [Tse G. et al., Reactive Oxygen Species, Endoplasmic Reticulum Stress and Mitochondrial Dysfunction: The Link with Cardiac Arrhythmogenesis // Front Physiol. 2016 Aug 3; 7:313; 1-11; Joseph LC. et al., Mitochondrial oxidative stress during cardiac lipid overload causes intracellular calcium leak and arrhythmia //Heart Rhythm. 2016 Aug; 13(8): 1699-706], что и послужило основанием для рекомендаций об использовании в качестве компонента антиаритмической терапии соединений с антиоксидантной активностью [Sirish Р et al., Molecular Mechanisms and New Treatment Paradigm for Atrial Fibrillation // Circ Arrhythm Electrophysiol. 2016. May; 9(5). P ii: e003721].

Показано, что глицирризиновая кислота является растительным селективным ингибитором тромбина, перспективна для применения при патологических процессах в сердце, сопровождающихся воспалительными и некротическими изменениями миокарда, в частности при миокардитах и инфаркте миокарда; снижает повышение сывороточного уровня маркерных ферментов (креатинфосфаткиназы, лактатдегидрогеназы, аспартатаминотрансферазы) в сыворотке крови, препятствует снижению содержания в миокарде гликогена и повышению содержания общих липидов, активации перекисного окисления липидов и снижению антиоксидантной активности сыворотки крови [Толстиков Г.А., Балтина Л.А., Гранкина В.П. и др. Солодка: биоразнообразие, химия, применение в медицине. - Новосибирск: Гео, 2006. - 311 с.]. Самостоятельного терапевтического значения при лечении нарушений ритма сердца не имеет.

Метилурацил ускоряет процессы клеточной регенерации, стимулирует клеточные и гуморальные факторы защиты, оказывает иммуностимулирующее и противовоспалительное действие, является стимулятором лейкопоэза, обладает анаболической и антикатаболической активностью [Фтизиатрия. Национальное руководство / Под ред. М.И. Пепельмана. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 505 с.]. Метилурацил применяют при различных состояниях, связанных с нарушением обменных процессов. Он повышает устойчивость тканей к гипоксии, способствует усвоениию глюкозы, стимулирует обмен нуклеиновых кислот, активирует холинергическую передачу и т.д. Как монопрепарат не имеет терапевтического значения при лечении нарушений ритма сердца.

В рамках доклинических исследований заявляемой фармацевтической комбинации (далее заявляемая комбинация) изучали:

1. Острую токсичность изучали на лабораторных животных по стандартной методике. В экспериментах на мышах было установлено, что LD50 заявляемой комбинации у самцов составила 260,7 мг/кг при внутрижелудочном способе введения и 71 мг/кг при внутрибрюшинном пути поступления. В отношении самок мышей установленная LD50 при внутрижелудочном способе введения составила 365 мг/кг и 94 мг/кг при внутрибрюшинном пути поступления.

Исследования острой токсичности, выполненное на крысах, показало, что LD50 у самцов составила 500 мг/кг при внутрижелудочном способе введения и 70 мг/кг при внутрибрюшинном пути поступления. У самок установленная LD50 при внутрижелудочном способе введения соответствует 610 мг/кг и при внутрибрюшинном пути поступления - 86 мг/кг (таблица 1).

Исследование острой токсичности и клинической картины интоксикации показало, что заявленная комбинация относится к группе соединений 3-го класса опасности по ГОСТу 12.1.007-76.

2. Изучение антиаритмической активности заявляемой комбинации и лаппаконитин гидробромида проводили на модели аконитиновой аритмии.

Эксперименты выполнены на беспородных белых крысах-самцах массой 160-180 г, Животные были рандомизированы на 7 групп: 1-я (n-13) - контроль, 2-я (n-6) - получала лаппаконитин гидробромид (0,5 мг/кг, в/в), 3-я (n-6) - получала лаппаконитин гидробромид (0,25 мг/кг, в/в), 4-я (n-6) - получала лаппаконитин гидробромид (0,125 мг/кг, в/в), 5-я (n-6) - заявляемая комбинация (0,5 мг/кг, в/в), 6-я (n-6) - заявляемая комбинация (0,25 мг/кг, в/в), а 7-я (n-6) - заявляемая комбинация (0,125 мг/кг, в/в).

Изучаемые соединения вводили в/в (в 0,2-0,3 мл апирогенной воды для инъекций) за 2 минуты до введения аконитина (30 мкг/кг). Непрерывную регистрацию ЭКГ начинали за 2 минуты до начала введения аконитина или исследуемых соединений и продолжали в течение 20 минут от момента окончания в/в введения аконитина.

В каждой экспериментальной группе подсчитывали количество животных, у которых возникала политопная экстрасистолия (ПЭС), и количество крыс с нарушениями ритма сердца (ПЭС+бигемения). Оценивали время возникновения нарушений ритма и на основе этого показателя проводили балльное шкалирование антиаритмической активности веществ: аритмии возникали в первые 5 минут после введения аконитина гидрохлорида в подобранной дозе - 0 баллов; нарушения ритма появлялись с 6-й по 10-ю минуту - 1 балл; аритмии возникали с 11-й по 15-ю минуту - 2 балла; нарушения ритма возникали с 16-й по 20-ю минуту наблюдения - 3 балла; аритмии не возникали в течение всего периода наблюдения (20 мин) - 4 балла.

Статистическую обработку данных, измеренных в бинарной шкале, проводили с помощью метода точной вероятности Фишера с учетом множественности сравнений. Результаты, полученные с использованием балльного шкалирования, обрабатывали с помощью непараметрического аналога дисперсионного анализа по Крускалу-Уоллесу с дальнейшим анализом методом множественных сравнений по Данну.

Результаты представлены в виде медиан и нижнего и верхнего квартилей. Различия считали значимыми при р≤0,05.

Результаты оценки антиаритмической активности заявляемой комбинации и прототипа - лаппаконитин гидробромида на модели аконитиновой аритмии приведены в таблице 2. Здесь и далее дозы заявляемой комбинации указаны в пересчете на содержание лаппаконитина.

Данные таблицы 2 по сравнительному изучению антиаритмической активности лаппаконитин гидробромида и заявляемой комбинации на модели аконитиновой аритмии, патогномоничной для антиаритмических средств 1 класса по классификации Vaughan Williams свидетельствуют о том, заявляемая комбинация реализует свое антиаритмическое действие в существенно меньшей дозе.

Примечание: р указано по отношению к контролю

3. Изучение противофибрилляторной активности заявляемой комбинации и прототипа - лаппаконитина гидробромида проводили на модели реперфузионной фибрилляции сердца у крыс.

Эксперименты выполнены на беспородных белых крысах-самцах массой 350-450 г, Наркотизированных (уретан 1300 мг/кг, в/б) животных переводили на искусственное дыхание при помощи аппарата искусственной вентиляции легких для мелких животных (Ugo Basele, Италия), после чего производили тороко- и перикардотомию и под левую нисходящую коронарную артерию сразу же после ее выхода из-под ушка подводили лавсановую лигатуру. Ишемию миокарда вызывали одномоментной перевязкой коронарной артерии. Через 8 минут лигатуру снимали. Оценивали наличие/отсутствие фибрилляции желудочков сердца в течение 3-х минут от момента начала реперфузии. Исследуемые соединения (в/в, в 0,2-0,3 мл апирогенной воды для инъекций), а в контрольной серии - апирогеннню воду для инъекций вводили за 5 минут до начала реперфузии. Регистрацию ЭКГ (II стандартное отведение) начинали за минуту до перевязки коронарного сосуда и продолжали в течение всего эксперимента. В работе использовали цифровой электрокардиограф Поли-Спектр-8В (Нейрософт, Россия).

Для оценки противофибрилляторного и антиаритмического действия в каждой группе подсчитывали количество животных, у которых возникала: необратимая фибрилляция желудочков сердца (ФЖ), опасные для жизни аритмии - обратимая фибрилляция желудочков сердца (ОФЖ) или желудочковая тахикардия, экстрасистолия. С помощью балльного шкалирования оценивали тяжесть аритмогенеза: отсутствие аритмий - 0 баллов; экстрасистолия - 1 балл; желудочковая тахикардия - 2 балла; ФЖ с последующим восстановлением ритма - 3 балла; ФЖ, приводящая к остановке сердца, - 4 балла.

Статистическую обработку данных, измеренных в бинарной шкале, проводили с помощью метода точной вероятности Фишера с учетом множественности сравнений. Результаты, полученные с использованием балльного шкалирования, обрабатывали с помощью непараметрического аналога дисперсионного анализа по Крускалу-Уоллесу с дальнейшим анализом методом множественных сравнений по Данну.

Результаты представлены в виде медиан и нижнего и верхнего квартилей. Различия считали значимыми при р≤0,05.

Результаты оценки антифибрилляторной активности заявляемой комбинации и лаппаконитин гидробромида на модели реперфузионных аритмий приведены в таблице 3.

Анализ полученных результатов свидетельствует о том, что в контрольной серии экспериментов (n=16) в условиях окклюзии и последующей реперфузии коронарной артерии нарушения ритма сердца наблюдались во всех случаях, в том числе обратимая фибрилляция желудочков сердца или желудочковая тахикардия возникали у 13 животных, у 12 из которых желудочковая тахикардия переходила в необратимую фибрилляцию желудочков сердца. Следует отметить, что во всех случаях необратимая фибрилляция желудочков сердца возникала в условиях реперфузии. Заявляемая комбинация в дозах 1,0; 0,5 и 0,25 мг/кг статистически значимо уменьшала частоту возникновения различных нарушений ритма сердца (табл. 3). Так, например, в группе крыс (n=15), получавших заявляемую комбинацию в дозе 0,5 мг/кг, аритмии возникли только в 7 случаях (р=0,004), в том числе обратимая фибрилляция желудочков сердца или желудочковая тахикардия наблюдались лишь у 2 животных (р=0,001), из которых только у одного тахикардия перешла в необратимую фибрилляцию желудочков сердца (р=0,001). Лаппаконитин гидробромид, в отличие от заявляемой комбинации, был эффективен лишь в дозе 0,5 мг/кг.

Примечание: р указано по отношению к контролю.

Таким образом, как следует из полученных данных, на модели реперфузионных аритмий у крыс лаппаконитин гидробромид и заявляемая комбинация проявляют антиаритмическую и противофибрилляторную активность, однако последняя реализует свои эффекты в значительно меньших дозах.

4. Изучение продолжительности противоаритмического действия заявляемой комбинации и лаппаконитин гидробромида при введении внутривенно и per os проводили на беспородных белых крысах-самцах массой 160-180 г, Животные были рандомизированы на 6 групп: 1-я (n=6) получала лаппаконитин гидробромид (0,5 мг/кг, в/в), 2-я (n=6) получала лаппаконитин гидробромид (1,5 мг/кг, per os), 3-я (n=6) - заявляемая комбинация (0,5 мг/кг, в/в), 4-я (n=6) - заявляемая комбинация (1,5 мг/кг, per os), 5-я (n=8) - контроль, в/в, 6-я (n=18) - контроль, per os.

Величина подобранной дозы аконитина 30 мкг/кг (n=27, в/в, болюсом), которая во всех экспериментах в пределах 1-2 минут после окончания его введения вызывает политопную предсердно-желудочковую экстрасистолию; 1-й и 3-й группам животных изучаемые соединения вводили в/в (в 0,2-0,3 мл апирогенной воды для инъекций). Подобранную дозу аконитина вводили в/в через 2 часа после введения изучаемых соединений - 1а (n=6) и 3а (n=6) подгруппы; через 3 часа после введения изучаемых соединений - 1б (n=6) и 3б (n=6) подгруппы и т.д. Непрерывную регистрацию ЭКГ начинали за 2 минуты до начала введения аконитина и продолжали в течение 20 минут от момента окончания в/в введения аконитина. Аналогичным образом эксперимент был построен и в 2-й и 4-й группах, за исключением того, что изучаемые соединения вводили не в/в, a per os. Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью метода точной вероятности Фишера с учетом множественности сравнений. Различия считали значимыми при р≤0,05.

Как следует из результатов исследования, заявляемая комбинация по своей продолжительности действия не уступает эталонному препарату лаппаконитин гидробромиду.

5. Изучение механизма действия заявляемой комбинации проводили, используя смешанную нейроглиальную культуру клеток гиппокампа, выделенную из мозга новорожденных (Р1-3) крыс линии Вистар.

Электрическую активность нейронов регистрировали методом patch-clamp в конфигурации whole cell, с помощью усилителя Axopatch 200 В (Axon Instruments), ЦАП-АЦП конвертера DigiData 1440А и пакета лицензионных программ pClamp 10.2 (Axon Instruments). Все эксперименты выполнялись при 24-27°С. В качестве внеклеточного раствора использовали среду Хенкса (мМ): NaCl - 139, NaНСО3 - 4.17, NaH2PO4 - 0.4, KСl - 2.1, KН2РO4, СаСl2 - 1.25, MgSO4 - 1.25, HEPES - 8, D-глюкоза - 8, рН=7.4 (для доведения рН использовался раствор NaOH). Внутриклеточный раствор для заполнения микроэлектродов имел следующий состав в мМ: метансульфонат калия - 145, KСl - 20, Hepes - 10 EGTA - 0.5, MgCl2 - 1, рН=7.2 (для доведения рН использовался раствор KОН). Сопротивление кончика пипетки 4.5-6 МОм. Рассматривались лишь клетки со значением сопротивления доступа не более 25 МОм.

Для исследования натриевых токов использовалась культура нейронов гиппокампа возрастом 1-3 дня. Для записи натриевых токов использовался внутриклеточный раствор, в котором все соли калия были заменены на соли цезия с целью ингибирования калиевых токов (для доведения рН использовался раствор CsOH). Записи производились в режиме фиксации потенциала. После добавки вещества на клетку подавались ступеньки напряжения -30 mV (ток достигал максимальных значений у большинства клеток при этом стимуле) продолжительностью 50 мс, с интервалом 5 с на протяжении 5 минут. Для стандартизации значений токов результаты записи с каждой клетки делились на емкость данной клетки.

Для исследования влияния веществ на вызванные потенциалы действия и интервалы между ними были использованы культуры возрастом 9-10 дней. Записи производились в режиме фиксации тока. На клетки подавались токовые стимулы различных значений (от 10 до 200 рА с шагом 5 рА), продолжительность стимуляции составляла 500 мс, интервалы между стимулами 5с. Регистрацию напряжения производили до и после 5-минутной стимуляции, аналогично опытам по регистрации тока. Эксперименты с каждой концентрацией веществ были повторены не менее чем на 3 культурах. Растворы исследуемых веществ каждый раз готовились непосредственно перед экспериментом.

Изучение механизма действия заявляемой комбинации показало, что

- заявляемая комбинации эффективно ингибирует быстрый входящий натриевый ток, протекающий через клеточную мембрану;

- обнаруженный эффект постепенного ингибирования Na+канала характерен для обоих соединений (лаппаконитин гидробромида и заявляемой комбинации) и указывает на то, что их ингибирующий эффект реализуется на уровне открытого натриевого канала;

- выявленные концентрационные зависимости действия (доза-эффект) лаппаконитин гидробромида и заявляемой комбинации на натриевый ток свидетельствуют о том, что эффективная доза заявляемой комбинации во всех случаях в 3-4 раза ниже, чем у лаппаконитин гидробромида;

- заявляемая комбинация более эффективно, чем лаппаконитин гидробромид, ингибирует медленную фазу деполяризации клеток, что приводит к уменьшению частоты потенциалов действия в пачке;

- в отличие от лаппаконитин гидробромида, заявляемая комбинация блокирует не только натриевые каналы, но частично и калиевые каналы, в силу чего ее можно отнести к антиаритмическим лекарственным средствам, потенциально обладающим свойствами антиаритмиков IA класса по классификации Vaughan Williams.

Таким образом, инновационными свойствами заявляемой в качестве антиаритмического лекарственного средства фармацевтической комбинации являются:

снижение эффективной антиаритмической дозы (по сравнению с лаппаконитин гидробромидом), при сохраненной длительности действия, как при энтеральном, так и парентеральном способе введения, что позволит расширить область клинического применения препарата и повысить комплайнс (приверженность) пациентов к лечению;

появление нового, не свойственного лаппаконитин гидробромиду, механизма антиаритмического действия - в отличие от прототипа заявляемая комбинация блокирует не только натриевые каналы, но и калиевые каналы, в силу чего ее можно отнести к антиаритмическим лекарственным средствам, потенциально обладающим свойствами антиаритмиков IA класса по классификации Vaughan Williams.

Информация о результатах доклинических исследований механизма действия заявляемой фармацевтической комбинации (Изымаемый при публикации сведений о выдаче патента материал (см. Требования к документам заявки на выдачу патента на изобретения, раздел III. Приказ Минэкономразвития РФ от 25 мая 2016 г №316))

5. Изучение механизма действия заявляемой комбинации проводили, используя смешанную нейроглиальную культуру клеток гиппокампа, выделенную из мозга новорожденных (Р1-3) крыс линии Вистар.

Электрическую активность нейронов регистрировали методом patch-clamp в конфигурации whole cell, с помощью усилителя Axopatch 200 В (Axon Instruments), ЦАП-АЦП конвертера DigiData 1440А и пакета лицензионных программ pClamp 10.2 (Axon Instruments). Все эксперименты выполнялись при 24-27°С. В качестве внеклеточного раствора использовали среду Хенкса (мМ): NaCl - 139, NaHCO3 - 4.17, NaH2PO4 - 0.4, KCl - 2.1, KН2РO4, СаСl2 - 1.25, MgSO4 - 1.25, HEPES - 8, D-глюкоза - 8, рН=7.4 (для доведения рН использовался раствор NaOH). Внутриклеточный раствор для заполнения микроэлектродов имел следующий состав в мМ: метансульфонат калия - 145, KCl - 20, Hepes - 10 EGTA - 0.5, MgCl2 - 1, рН=7.2 (для доведения рН использовался раствор KОН). Сопротивление кончика пипетки 4.5-6 МОм. Рассматривались лишь клетки со значением сопротивления доступа не более 25 МОм.

Для исследования натриевых токов использовалась культура нейронов гиппокампа возрастом 1-3 дня. Для записи натриевых токов использовался внутриклеточный раствор, в котором все соли калия были заменены на соли цезия с целью ингибирования калиевых токов (для доведения рН использовался раствор CsOH). Записи производились в режиме фиксации потенциала. После добавки вещества на клетку подавались ступеньки напряжения -30 mV (ток достигал максимальных значений у большинства клеток при этом стимуле) продолжительностью 50 мс, с интервалом 5 с на протяжении 5 минут. Для стандартизации значений токов результаты записи с каждой клетки делились на емкость данной клетки.

Для исследования влияния веществ на вызванные потенциалы действия и интервалы между ними были использованы культуры возрастом 9-10 дней. Записи производились в режиме фиксации тока. На клетки подавались токовые стимулы различных значений (от 10 до 200 рА с шагом 5 рА), продолжительность стимуляции составляла 500 мс, интервалы между стимулами 5с. Регистрацию напряжения производили до и после 5-минутной стимуляции, аналогично опытам по регистрации тока. Эксперименты с каждой концентрацией веществ были повторены не менее чем на 3 культурах. Растворы исследуемых веществ каждый раз готовились непосредственно перед экспериментом.

Для получения концентрационных зависимостей действия лаппаконитина гидробромида и заявляемой комибинации (здесь и далее LMG-124) на натриевый ток, клетки предварительно инкубировали с исследуемыми соединениями от 0 до 20 мин. Для увеличения времени нахождения натриевых каналов в открытом состоянии клетки подвергались стимуляции с различной частотой на протяжении 5 минут. Концентрации изучаемых соединений изменяли от 50 до 500 мкМ. На рисунке 1 показаны изменения Na+ тока после 5 минут стимуляции (деполяризация -30 mV) с частотой 0,2 Гц в контроле и в присутствии 250 и 500 мкМ лаппаконитина гидробромида или 125 и 150 мкМ заявляемой комбинации.

Как видно из рисунка 1, оба соединения ингибируют амплитуду быстрого натриевого тока. Полное ингибирование натриевого тока в этих условиях наблюдалось при 500 μМ лаппаконитина гидробромида и при 150 μМ заявляемая комбинация.

Кинетику увеличения степени ингибирования регистрировали в течение 20 мин в присутствии различных концентраций соединений. На рисунке 2А показано изменение амплитуды Na+ тока во времени, в течение 20 мин, при измерении каждые 5 мин в присутствии различных концентраций соединений. Показано, что ингибирование увеличивается в течение 20 мин после аппликации исследуемых соединений. Исходная амплитуда Na+ тока в каждом эксперименте была принята за 1. Полное ингибирование натриевого тока за 20 мин достигалось для лаппаконитина гидробромида при концентрации 500 μМ, а для заявляемой комбинации - при 150 μМ.

Рисунок 2 демонстрирует постепенное нарастание степени ингибирования натриевого тока в течение 20 мин при стимуляции 1 раз в 5 мин в присутствии различных концентраций лаппаконитина гидробромида (рис. 2А) или заявляемой комбинации (рис. 2В). Нарастание ингибирования во времени объясняется тем, что лаппаконитина гидробромид и заявляемая комбинация связывается с натриевым каналом, когда тот находится в открытом состоянии, т.е. ингибирование происходит, главным образом, в момент стимуляции клетки.

Для изменения времени нахождения канала в открытом состоянии в следующем эксперименте оценивали степень ингибирования канала при увеличенной частоте стимуляции. Рисунок 3 демонстрирует постепенное нарастание степени ингибирования натриевого тока в течение 5 мин при стимуляции с частотой 0,2 Гц в присутствии различных концентраций лаппаконитина гидробромида (рис. 3А) или заявляемой комбинации (рис. 3В). И что важно, как следует из рисунка 3, заявляемая комбинация гораздо эффективней подавляет натриевый ток, чем лаппаконитина гидробромид.

На рисунке 4А, В суммированы данные зависимости эффекта ингибирования от концентрации для лаппаконитина гидробромида и заявляемой комбинации при низкой частоте стимуляции (4А). На рисунке 4В эти же данные сравниваются с данными титровки при высокой частоте стимуляции. Как следует из полученных данных (рис.4), максимальное ингибирование натриевого канала достигается тем быстрее, чем чаще производится стимуляция.

Для исследования влияния заявляемой комбинации на частоту и различные фазы потенциалов действия были использованы культуры нейронов гиппокампа возрастом 9-10 дней, в режиме фиксации тока. Производилась контрольная запись вызванных потенциалов действия, после чего на «запэтченный» нейрон проводилась аппликация препарата, затем клетка подвергалась стимуляции на протяжении 5 минут (как в предыдущих экспериментах), далее запись вызванных потенциалов действия повторялась.

Как лаппаконитина гидробромид, так и заявляемая комбинация вызывают увеличение времени до генерации первого потенциала действия по сравнению с контролем. Это связано с замедлением медленной фазы деполяризации из-за блокировки натриевых каналов. Как видно из рисунка 5, заявляемая комбинация увеличивает время до генерации первого потенциала действия значительно сильнее. Таким образом, для деполяризации клетки до порогового уровня в присутствии соединений требуется больший токовый стимул, нежели в контроле (рисунки 5, 6).

Это связано с тем, что в присутствии заявляемой комбинации уменьшается число функционирующих натриевых каналов и снижается проводимость мембраны клетки. На рисунке 7 приведены зависимости значений тока, необходимых для генерации клеткой первого потенциала действия, от концентрации лаппаконитина гидробромида и заявляемой комбинации. Показано, что эффект наблюдается для всех концентраций соединений.

Заявляемая комбинация, так же как и лаппаконитина гидробромид, вызывает уменьшение частоты потенциалов действия в пачке. Как видно из рисунков 5 и 8, уменьшение частоты связано, в основном, с увеличением продолжительности фазы медленной деполяризации.

Необходимо отметить, что, в отличие от лаппаконитина гидробромида, заявляемая комбинация вызывает более выраженное увеличение продолжительности потенциала действия, связанное с замедлением фазы реполяризации, за которую отвечают и калиевые каналы (рис. 9). Для доказательства этого предположения мы измерили калиевый ток в контроле и в присутствии соединений. На рисунке 10 показано изменение калиевых токов в присутствии 100 μМ лаппаконитина гидробромида и 25 μМ заявляемой комбинации через 5 минут стимуляции. Заявляемая комбинация вызывает заметное снижение амплитуды калиевого тока, в то время как лаппаконитина гидробромид практически не влияет на калиевый ток.

Изучение механизма действия заявляемой комбинации показало, что

- заявляемая комбинации эффективно ингибирует быстрый входящий натриевый ток, протекающий через клеточную мембрану;

- обнаруженный эффект постепенного ингибирования Na+ канала характерен для обоих соединений (лаппаконитин гидробромида и заявляемой комбинации) и указывает на то, что их ингибирующий эффект реализуется на уровне открытого натриевого канала;

- выявленные концентрационные зависимости действия (доза-эффект) лаппаконитин гидробромида и заявляемой комбинации на натриевый ток свидетельствуют о том, что эффективная доза заявляемой комбинации во всех случаях в 3-4 раза ниже, чем у лаппаконитин гидробромида;

- заявляемая комбинация более эффективно, чем лаппаконитин гидробромид, ингибирует медленную фазу деполяризации клеток, что приводит к уменьшению частоты потенциалов действия в пачке;

- в отличие от лаппаконитин гидробромида, заявляемая комбинация блокирует не только натриевые каналы, но частично и калиевые каналы, в силу чего ее можно отнести к антиаритмическим лекарственным средствам, потенциально обладающим свойствами антиаритмиков IA класса по классификации Vaughan Williams.

Антиаритмическое лекарственное средство на основе растительного алкалоида лаппаконитина, отличающееся тем, что представляет собой фармацевтическую комбинацию, включающую лаппаконитин, глицирризиновую кислоту и метилурацил при мольном соотношении компонентов лаппаконитин : глицирризиновая кислота : метилурацил, равном 1:4:2.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической композиции, содержащей валсартан и розувастатин кальция, применению композиции для получения препарата для профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания и гиперлипидемического заболевания, к способу ее изготовления и способу профилактики или лечения сердечно-сосудистого заболевания и гиперлипидемического заболевания.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии, и касается лечения желудочковых нарушений ритма сердца. Для этого в очаги эктопического возбуждения миокарда желудочка вводят фармацевтический состав, содержащий ботулинический нейротоксин типа А.
Изобретение относится к конденсированным пирролдикарбоксамидам формулы I Технический результат: получены новые соединения формулы I, которые являются ингибиторами кислоточувствительных калиевых каналов TASK-1 и подходят для лечения опосредуемых каналами TASK-1 заболеваний, например, таких как аритмии, в частности предсердные аритмии, такие как фибрилляция предсердий или трепетание предсердий, и респираторные нарушения, в частности связанные со сном респираторные нарушения, такие как приступы апноэ во сне.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой N,N-бис(2-(диалкиламино)этил)карбоксамидам и их дигидрохлориды общей формулы: , гдекогда R=С6Н5ОСН2, a R1=СН3, то NR22=N(CH3)2 или NC5H10;когда R=С6Н5ОСН2, a R1=С2Н5, то NR22=N(C2H5)2, NC4H8, NC5H10 или NC4H8O; когда R=2,4-Cl2C6H3OCH2, a R1=CH3, то NR22=N(CH3)2, NC4H8 или NC5H10; когда R=2,4-Cl2C6H3OCH2, a R1=C2H5, то NR22=N(C2H5)2, NC4H8, NC5H10 или NC4H8O, при этом NC4H8 - пирролидино, NC5H10 - пиперидино, NC4H8O - морфолино.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему антиаритмическим действием. Средство, обладающее антиаритмическим действием, представляет собой субстанцию, выделенную из растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые), содержащее алкалоиды лаппаконитин, N-ацетилсепаконитин.

Группа изобретений относится к кардиологии. Предложено применение 4-[(2-{(2R)-2-((1E,3S)-4-(4-фторфенил)-3-гидрокси-1-бутен-1-ил]-5-оксо-1-пирролидинил}этил)тио]бутановой кислоты, или её соли, её клатратного комплекса с циклодекстрином для получения средства 1) для лечения диастолической сердечной недостаточности и/или облегчения симптома; 2) для лечения сердечной недостаточности, при которой ослабляется диастолическая функция; 3) для улучшения диастолической функции левого желудочка; 4) для улучшения расширения левого желудочка; 5) для селективного улучшения диастолической функции левого желудочка; 6) для лечения или улучшения диастолической функциональной недостаточности; 7) для лечения или улучшения диастолической дисфункции.

Изобретение относится к 4-арил(гетарил)метил-замещенным 8-циклопентиламино-5,7-дифтор-3,4-дигидро-2H-бензо[1,4]тиазин-1,1-диоксидам 1 Технический результат: получены новые соединения формулы 1, которые могут быть использованы в качестве мягких гипертензивных препаратов.1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к новым фторированным 4-фурил-3,4-дигидро-2Н-бензо[1,4]тиазин-1,1-диоксидам общей формулы 1 . Технический результат: получены новые соединения формулы 1, обладающие высокой антиаритмической активностью.
Изобретение относится к способу получения средства, обладающего антиаритмическим действием. Указанный способ предусматривает выделение технической суммы алкалоидов - технического продукта из растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые) и его очистку, при которой выполняют растворение технического продукта в одном из одноатомных алифатических насыщенных спиртов из группы: метанол, этанол, затем добавляют к полученному раствору спирт из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5 в количестве 4-20 об.% от полученного раствора, упаривают полученный раствор до полного удаления спирта из группы: метанол, этанол и проводят окончательную кристаллизацию целевого продукта в спирте из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5, после чего проводят фильтрацию, промывку и сушку с получением целевого очищенного продукта.

Настоящее изобретение относится к кристаллическим формам I и II соединения 2-хлор-4-[(3S,3aR)-3-циклопентил-7-(4-гидроксипиперидин-1-карбонил)-3,3a,4,5-тетрагидро-2H-пиразоло[3,4-f]хинолин-2-ил]бензонитрила формулы (I), используемого в качестве антагониста минералокортикоидного рецептора.

Группа изобретений относится к области косметической промышленности, а именно к косметической композиции, содержащей в физиологически приемлемой среде: воду; этилцеллюлозу; по меньшей мере одно первое нелетучее масло на основе углеводородов, жидкое при комнатной температуре и атмосферном давлении, выбираемое из С10-С26-спиртов, необязательно гидроксилированных моноэфиров, диэфиров или триэфиров необязательно гидроксилированной одноосновной или многоосновной карбоновой С2-С8-кислоты и С2-С8-спирта, эфиров С2-С8-полиола и одной или более карбоновых С2-С8-кислот; второе нелетучее масло, выбираемое из силиконовых и/или фторированных масел и/или масел на основе углеводородов (другое, чем первое масло); по меньшей мере один воск; по меньшей мере одно димерное ПАВ формулы (I), а также к вариантам косметического способа для макияжа и/или ухода за кожей и/или губами путем нанесения предложенной композиции на кожу и/или губы.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу снижения прооксидантного воздействия ультрафиолетового облучения на организм. В способе снижения прооксидантного воздействия ультрафиолетового облучения на организм, включающем ежедневное применение средства на основе вьюнка полевого в течение 6 дней за 20 минут до воздействия ультрафиолетовых лучей, согласно изобретению крысам наружно наносят мазь один раз в сутки на облучаемую поверхность слоем 0,5 мм, которая получена путем смешивания 10 г измельченной травы вьюнка полевого и расплавленного на водяной бане вазелина, добавленного до 100 г.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для превентивной терапии йоддефицитных состояний и коррекции патобиохимических процессов у коров, протекающих по типу метаболического ацидоза.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и может быть использовано в разработке препаратов, предназначенных для угнетения половой охоты у мелких домашних животных, преимущественно у кошек и собак.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу повышения адаптивных возможностей организма спортсменов. Способ повышения адаптивных возможностей организма спортсменов, заключающийся в том, что в восстановительный период тренировочного процесса вводят средство «Мелонелла плюс», а также маточное молочко и нектар из ягод облепихи «Олимп» по определенной схеме введения и дозировках.

Группа изобретений относится к медицине. Предложены: фармацевтическая композиция для лечения гипертриглицеридемии и смешанных дислипидемий, содержащая ЕРА (эйкозапентаеновую кислоту) в массовом процентном количестве от 50 до 60%; DHA (докозагексаеновую кислоту) в массовом процентном количестве от 17 до 23%; DPA (докозапентаеновую кислоту, 22:5 n-3) в массовом процентном количестве от 1 до 8%, где по меньшей мере 90% по массе полиненасыщенной кислоты в композиции присутствует в форме свободной кислоты; стандартная лекарственная форма – капсула для перорального введения указанной композиции и способы лечения гипертриглицеридемии с её использованием (варианты).

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой препарат для лечения гнойного пододерматита у коров, включающий действующее вещество и антисептические средства, отличающийся тем, что действующим веществом является диатомит - сорбент на основе высокодисперсного кремнезема, равномерно смешанный с сульфатом меди, перманганатом калия и фурациллином соответственно в соотношении 1,5:0,5:1:1 в мелкодисперсный порошок.

Изобретение относится к спортивной фармацевтике, физиологии спорта, а именно к напитку для повышения работоспособности у спортсменов. Средство, повышающее работоспособность у спортсменов, в виде напитка, содержащее водный экстракт листьев Джинура Прокумбенс, стевиол, концентрат фруктового сока, яблочную кислоту, подсластитель, сорбат калия и воду, при определенном соотношении ингредиентов.

Группа изобретений относится к двухслойному комбинированному препарату для лечения диабета, содержащему слой гемиглиптина и слой метформина, и к способу его получения.

Настоящее изобретение относится к рентгенологическим исследованиям и к улучшению безопасности пациента во время таких исследований, и касается изотоничной рентгеновской композиции, используемой в виде болюсной инъекции, для новорожденных, детей и взрослых пациентов, а также для субъектов с недоразвитой/слабой функцией почек, содержащей йоформинол и фармацевтически приемлемый носитель или эксципиент, где композиция содержит йод в концентрации 160-200 мг I/мл и ионы натрия в концентрации 70-120 мМ и ионы кальция в концентрации 0,5-1,3 мМ.

Изобретение относится к дигидронафтиридинам и родственным соединениям. В настоящем изобретении предложено применение соединений, ингибирующих cKIT киназу с широким диапазоном мутаций с-KIT, включая комплексные проявления первичных мутаций (эксоны KIT 9 или 11) и вторичных мутаций KIT (эксоны 13, 14, 17 и 18), которые могут возникать в клеточной линии опухолей с резистентными GIST.

Изобретение относится к фармакологии и касается антиаритмического лекарственного средства на основе алкалоида лаппаконитина, представляющего собой фармацевтическую комбинацию, включающую в себя лаппаконитин, глицирризиновую кислоту и метилурацил при определенном мольном соотношении компонентов. Вышеописанное средство является эффективным антиаритмическим средством, может применяться для профилактики и лечения предсердных и желудочковых, в том числе и злокачественных, нарушений сердечного ритма. 10 ил., 3 табл.

Наверх