Способ выделения биологически активных проантоцианидинов

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики (Vaccinium uliginosum) экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 1/10 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29. Изобретение позволяет усовершенствовать метод выделения определенной фракции проантоцианидинов, обладающих биологической активностью. 1 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к способам выделения биологически активных веществ из растительного сырья, конкретно для получения проантоцианидинов, обладающих различной биологической активностью, и может быть использовано в медицинской, косметической и пищевой промышленности.

Проантоцианидины, известные так же, как процианидины, олигомерные проантоцианидины, лейкоцианидины, лейкоантоцианидины и конденсированные танины принадлежат к семейству флавоноидов и представляют собой олигомеры флаван-3-олов и/или флаван-3,4-диолов. В порядке возрастания степени полимеризации проантоцианидины представляют собой мономеры (катехин, эпикатехин), а также их эфиры по положению 3, олигомеры со степенью полимеризации от двух до пяти и полимеры со степенью полимеризации более шести. Проантоцианидины могут содержать в среднем от двух до 30 флаваноидных мономеров, так называемых полигидроксифлаван-3-олов, которые включают катехин, эпикатехин, галлокатехин, эпигаллокатехин и им подобные, связанные интерфлаваноидными связями между C4 и C6 или между C4 и C8. Полимеры включают димеры, тримеры, тетрамеры, пентамеры, олигомеры и длинные полимеры из флавоноидных мономерных единиц до тех пор, пока эти полимеры проявляют указанную активность.

Известно большое количество растений, содержащих проантоцианидины, и любое из этих растений может быть использовано для их получения. Проантоцианидин-содержащие растения входят в класс Coniferiae, включая растения из разряда Coniferales из семейства Pinacea (включая сосны); члены семейства Filices (включая пальмы); однодольные растения, образующие класс Arecales, включая членов семейств Pandanales, Arales, Najadales, Restonales, Poales (включая зерновые, такие как сорго, ячмень и др.), Juncalaes, Cyperales (включая кипарис), Typhales, Zingiverales, Liliales (включая лилии); двудольные растения из отрядов Laurales (включая лавровый лист, корицу), Fagales (включая дуб), Casual-males, Dilleniales, Malviales (включая хлопок), Salicales, Ericales (включая клюкву, голубику, рододендрон), Ebenales, Resales (включая розы, боярышник, шиповник, черемуху, ежевику и другие аналогичные ягоды, яблоки, персики, сливы), Fabales (включая бобовые), Myrtales, Proteales, Rhamnales (включая виноград), Sapindales, Caprifoliaceae (включая калину, жимолость и другие аналогичные ягоды). В настоящее время в качестве растительного источника для получения проантоцианидинов используют, как правило, Caprifoliaceae, включающие виды Viburnum, Rosaceae и Vitaceae, которые включают виды Vitis и хвойные семейства Pinaceae, как содержащие наибольшее количество проантоцианидинов.

В основном олигомерные проантоцианидины применяют как природные антиоксиданты, обладающие широким спектром биологической активности. Они являются не только мощными антиоксидантами и ловушками свободных радикалов (US 4797421), но еще и обладают антибактериальной (US 6210681), противоопухолевой, антивоспалительной, антиаллергенной и сосудорасслабляющей активностью. Доказана противовирусная активность проантоцианидинов, выделенных из сабельника болотного Comarum palustre L. и туи западной Thuja occidentalis L. (Вестник ВГМУ 2015, т. 14, №2, с. 107-112). Проантоцианидины ингибируют процессы перекисного окисления липидов, агрегацию тромбоцитов, снижают хрупкость и проницаемость капилляров (US 6294190), а также влияют на активность ряда ферментных систем, способствуя предотвращению или уменьшению стресс-индуцированного повреждения желудка (US 6291517). Показано, что такими свойствами обладают как индивидуальные проантоцианидины, так и их смеси, а также экстракты их содержащие, при этом использование проантоцианидинов осуществляют в различной форме в виде фармацевтической композиции, пищевых добавок и пищевых продуктов, а также напитков.

Обычно получение проантоцианидинов основано на процессе их экстракции из растительного сырья, хотя возможно получение олигомерных проантоцианидинов и путем синтеза входящих в их состав органических соединений (RU 2281943). Экстракция проантоцианидинов из растительного материала проводится различными известными методами. Например, исходный растительный материал измельчается и экстрагируется растворителем, одним или несколькими. Гидрофильные или липофильные растворители могут быть использованы отдельно, последовательно или в комбинации. Предпочтительными из таких растворителей являются вода, спирты (этанол, метанол, изопропанол), кетоны (ацетон, метилэтилкетон) и эфиры (метилацетат и этилацетат). Температура экстракции в общем от 0 до 100°C, предпочтительнее от 10 до 55°C (СА 2302743, US 5912363, US 6440471, RU 2435579, RU 2375070).

Для выделения более узких фракций олигомерных проантоцианидинов используют метод флэш-хроматографии и ВЭЖХ (US 2006073220, JAgricFoodChem, 55(17), 2007, 6970) или, например, ультрафильтрацию через поры определенного размера (US 20150313267).

В работе Takeshita М. et al. (JBiolChem, 284(3.2), 2009, 21165-21176) на примере выделения проантоцианидинов из листьев голубики показано, что методом ВЭЖХ при трехкратной последовательной хроматографии можно добиться увеличения эффективности вытяжек проантоцианидинов.

Задачей данного изобретения является усовершенствование метода выделения определенных фракций проантоцианидинов, обладающих биологической активностью. Данная задача решена применением дополнительной экстракции спиртовой вытяжки помимо хлороформа так же этилацетатом и эфиром, и подбором элюента для хроматографировании на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм.

Пример 1.

В круглодонную колбу на 1 литр загружают 50 г сухих листьев голубики измельченных до размера частиц 1-3 мм, заливают 500 мл метанола и перемешивают при температуре 30-35°C в течение 3 часов. Отфильтровывают от осадка, маточник концентрируют на РВИ до объема 50 мл, и разбавляют 200 мл воды. Полученную суспензию экстрагируют последовательно 100 мл хлороформа, 50 мл этилового эфира и 50 мл этилацетата. Отделяют взвесь на центрифуге и маточник упаривают на РВИ. Получают 9.1 г коричневого осадка, который хроматографируют на колонке 300 г силикагеля с размером частиц 0,040-0,063 мм, например, выпускаемом фирмой Merck. Выбор данного сорбента объясняется как его высокими хроматографическими свойствами, так и экономичностью использования за счет возможности его эффективной регенерации. В качестве элюента используют смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1 (схема).

Получают 4,53 г фракции с Rf 0,29 (пластинки Merck TLC Silica gel 60 F254, элюент хлористый метилен-метанол 1:1).

Выделенная фракция идентична по Rf биологически активной фракции LC3, полученной по методике из работы Takeshita М. et al. (JBiolChem, 284(32), 2009, 21165-21176).

Подтверждением того, что выделены именно проантоцианидины, является характерная для них реакция образования антоцианидинов. Нагревание проантоцианидинов в кислых растворах (этиловый спирт, содержащий 4-7% соляной кислоты) приводит к образованию цианидина, продельфинидины соответственно образуют дельфинидин (М.Н. Запрометов. Фенольные соединения. Распространение, метаболизм и функции в растениях. Москва. «Наука», 1993. - 272 с.).

Таким образом, предложенный способ выделения проантоцианидинов позволяет получать определенную биологически активную фракцию проантоцианидинов.

Способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики (Vaccinium uliginosum) экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 1/10 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к производству сухих экстрактов из растительного сырья, обладающих высокой пищевой ценностью и высокой биологической активностью, предназначенных для использования в пищевой, фармацевтической, косметической и других отраслях промышленности.
Изобретение относится к производству сухих экстрактов из растительного сырья, обладающих высокой пищевой ценностью и высокой биологической активностью, предназначенных для использования в пищевой, фармацевтической, косметической и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к фармацевтической, косметической и пищевой промышленности и касается способа переработки морских водорослей. Способ переработки морских бурых водорослей, включающий дробление сырья, гомогенизацию смеси сырья в растворе с последующим извлечением водорастворимых биологически активных веществ за счет фильтрации и сушки, при этом сырье предварительно промывают водой, насыщенной озоном, гомогенизацию сырья проводят в растворе, представляющем собой воду с хлористым кальцием в концентрации его в растворе от 0,25 до 1%, дополнительное измельчение дробленых водорослей проводят в смеси сырья в растворе при оборотах роторно-пульсационного гомогенизатора, составляющих от 10 до 50% максимальных оборотов двигателя, при этом в ходе предварительной гомогенизации осуществляют порционную загрузку в гомогенизатор в пределах от 10 до 30% от общего количества смеси, после завершения загрузки и предварительной гомогенизации увеличивают частоту вращения роторно-пульсационного гомогенизатора и гомогенизируют смесь до 5 часов при температуре смеси не выше 75°С, при этом после стадии гомогенизации проводят криодеструкцию гомогената при температуре от минус 18 до минус 20 градусов в течение 20-48 часов, для чего гомогенат размещают в емкости от 0,5 до 10 л, после криодеструкции замороженный гомогенат оттаивают, после расслоения гомогената отделяют жидкость от осадка, осадок фильтруют под давлением и полученную жидкость смешивают с жидкостью, полученной на предыдущей стадии, жидкую фазу концентрируют на мембранной ячейке, удаляют хлористый кальций, осадок и жидкость сушат.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу разделения каротиноидов и хлорофиллов. Способ разделения каротиноидов и хлорофиллов из экстракта растительного сырья путем последовательного использования двух экстрагентов, при этом липофильную вытяжку листьев крапивы двудомной, упаренную до 1-2 мл, растворяют в 25 мл петролейного эфира и встряхивают до полного растворения пигментов, далее к раствору пигментов в петролейном эфире прибавляют 25 мл спирта этилового 95%, встряхивают 30 минут, после этого разделяют спиртовую фазу, содержащую ксантофиллы и хлорофиллы, и фазу петролейного эфира, содержащую каротины и следы хлорофиллов; для отделения хлорофиллов к спиртовой фазе, содержащей хлорофиллы и ксантофиллы, приливают 25 мл петролейного эфира, раствор встряхивают в течение 30 минут, менее полярные хлорофиллы экстрагируются в петролейный эфир, фазы разделяют; для удаления следов хлорофиллов из фазы петролейного эфира их отделяют омылением путем добавления к фазе петролейного эфира, содержащей каротины и следы хлорофиллов, 10 мл раствора натрия гидрохлорида 20% и 25 мл спирта этилового 95%, встряхивания в течение 30 минут, отделения спиртовой фазы, содержащей омыленные хлорофиллы.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к антиметастатическому средству. Применение жидкого экстракта рябины обыкновенной (Sorbus aucuparia L.), полученного экстрагированием листьев рябины, измельченных до размера частиц диаметром 0,3-0,5 см, 40% этиловым спиртом при температуре 75°С в течение 60 минут, в качестве антиметастатического и повышающего противометастатическое действие циклофосфана средства.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему противогрибковым действием. Средство, обладающее противогрибковым действием в отношении грибов рода Candida, представляющее собой сухой экстракт, полученный путем измельчения кроющих листьев початков антоциановой диплоидной формы кукурузы, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению средства, обладающего антиметастатической активностью и повышающего противометастатическое действие циклофосфана.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения фармакопейного экстракта из тканей рыб. Способ получения фармакопейного экстракта из тканей рыб, включающий группировку рыб по механизмам старения, полу и возрасту, причем выбирают рыб с отсутствием паразитов из среды обитания, в которой проводят экологический мониторинг, сбор от рыб образцов мышечной ткани или икры, далее образцы замораживают, измельчают мышечную ткань, пропуская через мясорубку, а икру раздавливают в ступке и заливают полученное сырье охлажденным экстрагентом - дистиллированной водой или 90%-ным водным раствором этанола, гомогенизируют в блендере, экстрагируют, экстракционную смесь переливают в центрифужные пробирки, которые уравновешивают и центрифугируют, надосадочную жидкость фильтруют от жира, для экстрактов, экстрагируемых водой, фильтрат собирают в сосуд для лиофильной сушки с последними фармакопейными требованиями - методом волюмометрического титрования при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту для стимуляции пролиферации нейронов и/или лечения заболеваний головного мозга и/или нейродегенеративных заболеваний.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активных веществ из грибов. Способ получения биологически активных веществ из грибов включает измельчение грибного сырья до частиц размером не более 0,2 мм, далее измельченное сырье замораживают при температуре 15-20˚С в течение не менее 2-х часов, замороженное сырье облучают потоком ускоренных электронов с энергией 2,5-5 МэВ и дозе 16-20 Мрад, полученных в импульсном линейном ускорителе, после смешивают обработанное грибное сырье с жидким экстрагентом и выдерживают смеси в течение времени, при температуре и давлении, достаточных для наибольшего выхода целевых биологически активных веществ из сырья и растворения их в жидком экстрагенте с последующим отделением целевого продукта от экстрагента.

Изобретение касается способа диагностики респираторной инфекции, связанной с бактериальной инфекцией; способа выбора пациентов с респираторной инфекцией для приема антибиотика; способа определения времени для прекращения введения антибиотика пациенту с респираторной инфекцией, получающему антибиотик; способа выбора пациентов, которым будет прекращено введение антибиотика из пациентов с респираторной инфекцией, принимающих антибиотик; способа лечения респираторной инфекции, связанной с бактериальной инфекцией, основанных на выявлении повышения уровня sCD14-ST в моче, используемого в качестве индикатора, относительно порогового значения, составляющего 3338–5758 пг/мл.

Изобретение относится к медицине и предназначено для профилактики несостоятельности межкишечного анастомоза. Производят орошение поверхности межкишечного анастомоза пептидом структурной формулы Tyr-D-Ala-Gly-Phe-Leu-Glu.

Заявлена дезодорирующая косметическая композиция, содержащая в косметически приемлемой среде липофильное производное салициловой кислоты или его соль, одну антиперспирантную соль или комплекс алюминия и секвестрант, выбранный из солей аминокислота-N,N-диуксусной кислоты.

Изобретение относится ветеринарии, а именно к лекарственному средству для ветеринарии, обладающему противовоспалительным и анальгетическим действием в послеоперационный период, а также при лечении воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата и воспалительных заболеваний ЖКТ.

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для лечения ревматоидного артрита (РА). Для этого пациенту вводят эффективное количество антитела и метотрексата, где указанное антитело включает вариабельный участок тяжелой цепи последовательности SEQ ID NO: 2 и вариабельный участок легкой цепи последовательности SEQ ID NO: 3 и указанное антитело вводят в дозе от 100 мг до 200 мг раз в две недели и где указанного пациента ранее лечили от ревматоидного артрита путем введения метотрексата и ранее неэффективно лечили от РА путем введения антагониста TNF-α, выбранного из группы, состоящей из этанерцепта, инфликсимаба, адалимумаба, голимумаба и/или сертолизумаба пегол.

Изобретения относится к фармацевтической промышленности и представляет собой применение (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольного стеатогепатита, где неалкогольный стеатогепатит вызван накоплением жира в печени и оксидативным стрессом или воспалительными цитокинами, полученными из жировой печени.

Изобретение относится к области медицины и химико-фармацевтической промышленности, а именно к композиции для лечения признаков старения кожи, которые включают наличие борозд, морщин, утрату эластичности, неровности кожи и наличие пигментных пятен, причем композиция содержит 70 мас.% воды, от 0,1 до 0,4 мас.% 4-гексилрезорцина, от 1 до 3 мас.% октилдодециланеопентаноата, кроссполимер акрилатов/С 10-30 алкилакрилатов, менее 5 мас.% масел и менее чем 1 мас.% эмульгаторов.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для предоперационной подготовки пациентов к офтальмологическим операциям. Для предоперационной подготовки пациентов к офтальмологическим операциям накануне вечером и утром в день операции осуществляют прием неопиоидного анальгетика центрального действия флупиртина в дозе 0,001 г на один прием и противосудорожного препарата габапентина в дозе 0,003 г на один прием.

Изобретение относится к фармакологии и касается антиаритмического лекарственного средства на основе алкалоида лаппаконитина, представляющего собой фармацевтическую комбинацию, включающую в себя лаппаконитин, глицирризиновую кислоту и метилурацил при определенном мольном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к области косметической промышленности, а именно к косметической композиции, содержащей в физиологически приемлемой среде: воду; этилцеллюлозу; по меньшей мере одно первое нелетучее масло на основе углеводородов, жидкое при комнатной температуре и атмосферном давлении, выбираемое из С10-С26-спиртов, необязательно гидроксилированных моноэфиров, диэфиров или триэфиров необязательно гидроксилированной одноосновной или многоосновной карбоновой С2-С8-кислоты и С2-С8-спирта, эфиров С2-С8-полиола и одной или более карбоновых С2-С8-кислот; второе нелетучее масло, выбираемое из силиконовых и/или фторированных масел и/или масел на основе углеводородов (другое, чем первое масло); по меньшей мере один воск; по меньшей мере одно димерное ПАВ формулы (I), а также к вариантам косметического способа для макияжа и/или ухода за кожей и/или губами путем нанесения предложенной композиции на кожу и/или губы.
Изобретение относится к биомедицине, а именно к повышению температурной стабильности желатина при изготовлении клеточных продуктов. Способ повышения термостойкости желатина при модификации его дигидрокверцетином, включающий смешивание 20% раствора желатина с 10% раствором дигидрокверцетина, приготовленных на изотоническом растворе NaCl, взятые в объемном соотношении растворов 9:1, далее смесь помещают в чашку Петри на 30 минут при температуре 4°С.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 110 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29. Изобретение позволяет усовершенствовать метод выделения определенной фракции проантоцианидинов, обладающих биологической активностью. 1 ил., 1 пр.

Наверх