Способ диагностики нарушений сперматогенеза путем определения его цитологического профиля



Способ диагностики нарушений сперматогенеза путем определения его цитологического профиля
Способ диагностики нарушений сперматогенеза путем определения его цитологического профиля
G01N2800/00 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2665162:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие. Способ диагностики нарушений сперматогенеза у человека путем определения его цитологического профиля включает проведение определения каждой из VI клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза, дифференцированный подсчет количества сперматогенных клеток, входящих в каждую ассоциацию, по отношению к количеству сустентоцитов данного сегмента канальца, сравнение результатов подсчета с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин и оценку результатов, констатируя нарушение на стадиях формирования, созревания, роста и размножения. Способ обеспечивает повышение достоверности и качества диагностики нарушений сперматогенеза на различных его стадиях. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие.

Нарушения сперматогенеза - до настоящего времени сложная проблема как для клиницистов-андрологов, так и для специалистов морфологического профиля.

Известен способ диагностики бесплодия, который включает исследование эякулята на содержание металлов [Поляков В.М., Лепехова С.А. Способ диагностики мужского бесплодия. Патент на изобретение №2247371]. При обнаружении наличия ртути или обнаружение свинца >3,15 мкг/л устанавливают интоксикационную форму бесплодия.

Наряду с этим известным также является способ диагностики ранних нарушений репродуктивной функции у мужчин [Тарасова М.Н, Чистякова Г.Н., Ремизова И.И., Газиева И.Л., 2011 г]. При обнаружении в сыворотке крови цитокинов IL-8, IL-10 и 1RA методом иммуноферментного анализа и вычисления диагностического индекса диагностируют ранние нарушения репродуктивной функции у мужчин. Использование способа позволяет повысить точность диагностики у мужчин с нормальными показателями сперматограммы. Недостатками перечисленных способов является то, что они базируются не на морфологических, а на биохимических показателях. эякулята, сыворотки крови и требуют специального оборудования.

Известен способ оценки фертильности у мужчин [Артефексов СБ., Сергеев М.Ю., Седышева И.В., 2007 г.], который заключается в изучении количества активно подвижных и морфологически сохранных сперматозоидов, после их предварительной сепарации методом всплытия и центрифугирования в градиенте концентрации. Недостатком данного метода является то, что в качестве индикатора фертильности используются особенности морфологического строения зрелых сперматозоидов, в то время как ранние фазы сперматогенеза а также процесс дифференцировки сперматогенных клеток остается вне поля зрения исследователя.

Работ посвященных морфометрическому анализу сперматогенеза крайне мало [Лысенко А.И., Кирпатовский И.Д., 1991; Дубова Е.А. и соавт., 2012;]

Известен способ диагностики гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка путем проведения морфометрического анализа биоптата путем определения индекса сперматогенеза, являющийся отношением числа всех сперматогенных клеток к числу сустентоцитов (клеток Сертоли) в 30 поперечных срезов извитых семенных канальцев [А.Ф.Астраханцев, Соловьев А.А., 2001].

Он включает в себя:

1. Биопсию яичка (по показаниям).

2. Морфометрическое изучение биоптата, включающее в себя подсчет сустентоцитов на 30 поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата. В тех же канальцах производят подсчет общего количества сперматогенных клеток.

3. Индекс сперматогенеза рассчитывают как соотношение сустентоциты/клетки сперматогенеза. Оценка результата производится по таким признакам как: снижение индекса сперматогенеза до 10-90%, снижение индекса сперматогенеза более 90%, при этом в 1 случае диагностируется гипосперматогенез, во 2 случае диагностируют атрофию сперматогенных клеток яичка.

Общим существенным признаком аналога и заявленного способа является выявление нарушения сперматогенеза у бесплодных мужчин.

Однако при аналоговом способе диагностики нарушений сперматогенеза учитывают суммарное количество клеток сперматогенеза, без учета их степени дифференцировки, и их отношение ко всем сустентоцитам подсчитанным на 30 поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата.

Общим существенным признаком прототипа и заявляемого способа является выполнение подсчета сперматогенных клеток на гистологическом срезе.

Однако прототипный метод неточен, т.к. не дает информации о количественном соотношении сперматогенных клеток различной степени дифференцировки в процессе различных фаз сперматогенеза: размножения, роста, созревания и формирования.

Техническим результатом изобретения является усовершенствование способа диагностики нарушений сперматогенеза путем введения дополнительных процедур цитоморфологического анализа и введения дополнительных критериев оценки результатов, что обеспечит повышение качества диагностики.

Поставленная задача решается тем, что в способе, включающем проведение системного цитоморфологического анализа, в основу положены современные представления о цикличности развития сперматогенных клеток. При этом под циклом развития сперматогенных клеток следует понимать полную серию морфологических изменений, наблюдающихся между появлением двух одинаковых сочетаний сперматогенных клеток в одном участке семенного канальца. Часть цикла, характеризующаяся определенным сочетанием сперматогенных клеток (клеточная ассоциация) и определенным этапом развития сперматид, носит название стадии цикла сперматогенеза. Количество стадий развития сперматогенных клеток у каждого биологического вида строго специфично и имеет свою неповторимость. У человека таких стадий 6 [Rupert P. Amann., 2008].

Предлагаемый способ диагностики осуществляется следующим образом. Биопсия яичка производится открытым способом по показаниям. Биоптат " размеров 0,5 см (или фрагмент ткани 1×1 см, полученный при секционном исследовании) фиксируется в жидкости Буэна, обезвоживается в спиртах восходящей крепости, заливается в парафин. Гистологические среза толщиной 5-7 мкм окрашиваются гематоксилином и эозином.

Микроскопическое исследование осуществляется с помощью микроскопа «Axioskop 40» при общем увеличении оптической системы × 400.

Методика диагностического определения цитологического профиля сперматогенеза проводится следующим образом.

1. На поперечном срезе извитого семенного канальца (или на его сегменте) проводится определение каждой из 6 типичных клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза.

2. Производится подсчет количества сустентоцитов, входящих в эту клеточную ассоциацию.

3. В этой же ассоциации производят дифференцированный подсчет сперматогенных клеток, соответствующей стадии цикла. Дифференцированный подсчет заключается в количественном определении сперматогенных клеток (сперматогоний, сперматоцитов I-II порядков и сперматид) в каждой клеточной ассоциации.

4. Рассчитывается соотношение каждого типа сперматогенных клеток по отношению к сустентоцитам.

5. Для каждой из 6 типов клеточных ассоциации производят подсчет не менее чем в 5 полях зрения.

6. Проводят статистическую обработку результатов: определяется взвешенное среднее (М) и ошибка взвешенного среднего (m) [Балинова B.C. Статистика в вопросах и ответах: Учеб пособие. - М.: ТК. Велби, Изд-во Проспект, 2004. - 344 с]. Результаты заносят в стандартную таблицу и сравнивают с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин (Таблица №1).

Оценка результатов осуществляется по следующим признакам.

1. Снижение количества ранних и поздних сперматид во всех 6 клеточных ассоциациях более 5% свидетельствует о нарушении стадии формирования.

2. Уменьшение количества сперматогенных клеток входящих в 6 клеточную ассоциацию указывает на нарушение сперматогенеза на стадии созревания.

3. Снижение числа первичных сперматоцитов на I-V стадиях цикла позволяет констатировать нарушение сперматогенеза на стадии роста.

4. Уменьшение количества сперматогоний определенное на всех VI стадиях цикла указывает на нарушении стадии размножения.

Определение цитологического профиля сперматогенеза в каждой из 6 клеточных ассоциаций, составляющих цикла развития сперматогенных клеток, обеспечивает комплексность оценки, объективизирует исследование, позволяет оценить цикл развития сперматогенных клеток в целом.

Количественные изменения сперматогенных клеток на различных этапах их дифференцировки позволяют определить нарушения сперматогенеза на различных его стадиях (размножения, роста, созревания и формирования), увеличивают информативность исследования, повышают достоверность и качество диагностики.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

Дубова Е.А., Овчинников Р.И., Попова А.Ю., Павлов К.А., Щеголев А.И. Морфологическая характеристика биоптатов яичка при бесплодии. Архив патологии. 2012. T. 74 - N 6. - С. 8-12.

Лысенко А.И., Кирпатовский И.Д. Анализ морфологических классификаций повреждения яичка при мужском бесплодии. // Арх. Патологии. - 1991. - Т. 53, 12. - С. 63-67.

Поляков В.М., Лепехова С.А. Способ диагностики мужского бесплодия. Патент на изобретение №2247371, 2005 г.

Тарасова М.Н., Чистякова Г.Н., Ремизова И.И., Газиева И.А. Способ диагностики ранних нарушений репродуктивной функции у мужчин. Патент на изобретение №2413949, 2011 г.

Артефексов С.Б., Сергеев М.Ю., Седышева И.В. Способ оценки фертильности мужчин. Патент на изобретение №2360247, 2007 г. Астраханцев А.Ф., Соловьев А.А. Способ диагностики гипосперматогенеза и атрофии яичка. Патент на изобретение №2199117, 2003 г. - прототип. Rupert P. Amann. The Cycle of the Seminiferous Epithelium in Humans: A Need to

Revisit ?// J. of Andrology. Vol. 29, No. 5. September/October 2008. p. 469-487. Балинова B.C. Статистика в вопросах и ответах: Учеб пособие. - М.: ТК. Велби, Изд-во Проспект, 2004. - 344 с).

Способ диагностики нарушений сперматогенеза у человека путем определения его цитологического профиля, отличающийся тем, что на гистологическом срезе поперечных сечений извитых семенных канальцев мужской половой железы проводят определение каждой из VI клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза, затем производят дифференцированный подсчет количества сперматогенных клеток, входящих в каждую ассоциацию, по отношению к количеству сустентоцитов данного сегмента канальца, сравнивают результаты подсчета с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин и оценивают результат, констатируя нарушение на стадии формирования при снижении количества ранних и поздних сперматид во всех VI клеточных ассоциациях более 5%; на стадии созревания при уменьшении количества сперматогенных клеток, входящих в VI клеточную ассоциацию; на стадии роста при снижении числа первичных сперматоцитов на стадиях I-V; на стадии размножения при уменьшении количества сперматогоний на всех VI стадиях.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии и касается способов определения ионов хрома (III) и железа (III) в растворе при совместном присутствии. Способ определения концентрации ионов хрома (III) и железа (III) при совместном присутствии в растворе включает добавление к анализируемому раствору, содержащему ионы хрома (III) и железа (III), 4 мл раствора трилона Б (концентрацией 80 г/л), нагревание полученной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждение смеси до комнатной температуры, добавление к охлажденной смеси 0,5 мл водного раствора аммиака, доведение дистиллированной водой до 25 мл, определение оптической плотности раствора и вычисление концентрации ионов по калибровочным зависимостям, при этом измерение оптической плотности производят при 660 нм для ионов хрома (III) и при 315 нм для ионов железа (III).

Изобретение относится к геологии и может быть использовано при определении генезиса морских осадочных отложений, а именно мелкозернистых песчаников, алевролитов, алевроаргиллитов и аргиллитов.

Изобретение относится к медицине, в частности, возможно использование в здравоохранении, медицинской и спортивной диагностике. Способ определения уровня стрессоустойчивости человека включает определение величины максимальной интенсивности свечения проб со слюной I0 и величины максимальной интенсивности свечения контрольных проб без слюны Ik, вычисление люциферазного индекас LI0 пробы со слюной и люциферазного индекса LIk контрольной пробы без слюны, вычисление люциферазного индекса стресса по формуле LIstress=LI0-LIk, при этом LIstress 18-30% соответствует среднему уровню стрессоустойчивости; LIstress более 30% - высокому; LIstress менее 18% - низкому уровню стрессоустойчивости.

Изобретение относится к способу анализа и/или обработки оплодотворенного яйца. Способ обработки и/или анализа оплодотворенного яйца, включающий размещение яйца горизонтально зародышем вверх, выполнение отверстия в скорлупе сбоку со стороны зародыша, проведение анализа и/или обработки зародыша и закрытие отверстия в скорлупе, отличается тем, что по изобразительной информации с использованием методов компьютерной графики формируют трехмерную модель фрагмента скорлупы на 8-15% больше размера будущего отверстия, по трехмерной модели изготавливают форму, в которой из двухкомпонентного силикона для литьевых форм отливают крышку для закрытия будущего отверстия, после выполнения отверстия в скорлупе и проведения анализа и/или обработки зародыша закрывают отверстие в скорлупе путем наложения на отверстие силиконовой крышки и ее разглаживания от отверстия к краям.

Группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для исследования на присутствие цитомегаловируса (CMV), вируса простого герпеса I (HSV I), вируса простого герпеса II (HSV II), вируса Эпштейна-Барра (EBV), HHV6, HHV7, HHV8, парвовируса 19, вируса гепатита В (HBV), вируса гепатита С (HCV), коксаки-вируса, вирусов иммунодефицита человека (HIV-1, HIV-2), аденоассоциированного вируса (AAV), вируса краснухи, HPV, хламидий, токсоплазмы и норовируса внутри сперматозоидов.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогноза рака молочной железы с использованием цифрового изображения гистологического препарата, приготовленного из образца опухолевой ткани.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике путем исследования биологической жидкости с помощью физических и химических методов исследования.

Изобретение относится к области биологии и экспериментальной медицины. Предложен способ оценки фармакологических и токсических свойств веществ - потенциальных лигандов AHR человека - с использованием линии мух Drosophila melanogaster.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития инсульта у мужчин русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ экспресс-оценки жизнеспособности клеток в тканеинженерных конструкциях.

Изобретение относится к медицинской биотехнологии и может быть использовано в системах водообеспечения длительно функционирующих автономных гермозамкнутых космических и наземных обитаемых объектов.
Изобретение относится к медицине, а именно к профболезням, и может быть использовано для предотвращения заболевания шахтера антракосиликозом. Для этого в забое проводят отбор углепородных проб по сечению забоя бороздами, измеряют запыленность рудничного воздуха во время работы горной машины по разрушению углепородного массива, дополнительно отбирают пробы воздуха в рабочей зоне машины и устанавливают в нем дисперсный состав кремниевой пыли, при этом опасность заболевания шахтера антракосиликозом устанавливают по стажу работы в запыленном кремниевыми частицами воздухе и количеству поглощенной его легкими опасной для здоровья тонкодисперсной кремниевой пыли.
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования безопасности хирургических вмешательств в отношении прогрессирования аниридийной кератопатии (АК) у пациентов с врожденной аниридией в зависимости от молекулярных механизмов повреждения гена РАХ6.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано при оптимизации процессов, связанных с производством живых сухих вакцин, содержащих остаточную влажность.

Изобретение относится к биохимии, а именно к использованию готового субстратного раствора для иммуноферментного анализа. Для этого используют стабильный водный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида и пероксида.

Изобретение относится к биологии, экологии, сельскому хозяйству, в частности к исследованиям биоматериалов и учету животных при изучении миграционной активности. Способ детекции системной родаминовой метки в мелких млекопитающих включает использование кормовых приманок с препаратом родамин B в количестве от 0,05 до 0,10 мас.% и выявление флуоресцирующей метки родамина B путем облучения мелких млекопитающих лучом портативного зеленого лазера с длиной волны 532±20 нм.

Изобретение относится к биологии, экологии, сельскому хозяйству, в частности к исследованиям биоматериалов и учету животных при изучении миграционной активности. Способ детекции системной родаминовой метки в мелких млекопитающих включает использование кормовых приманок с препаратом родамин B в количестве от 0,05 до 0,10 мас.% и выявление флуоресцирующей метки родамина B путем облучения мелких млекопитающих лучом портативного зеленого лазера с длиной волны 532±20 нм.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной диагностики состояния и организации внутриклеточного хроматина в GV-ооците млекопитающих.
Изобретение относится к биомедицине и может быть использовано для определения цитотоксичности веществ путем обработки клетки веществом с последующим определением токсичности вещества по изменению уровня внутриклеточных активных форм кислорода.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способов определения ионов хрома (III) и железа (III) в растворе при совместном присутствии. Способ определения концентрации ионов хрома (III) и железа (III) при совместном присутствии в растворе включает добавление к анализируемому раствору, содержащему ионы хрома (III) и железа (III), 4 мл раствора трилона Б (концентрацией 80 г/л), нагревание полученной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждение смеси до комнатной температуры, добавление к охлажденной смеси 0,5 мл водного раствора аммиака, доведение дистиллированной водой до 25 мл, определение оптической плотности раствора и вычисление концентрации ионов по калибровочным зависимостям, при этом измерение оптической плотности производят при 660 нм для ионов хрома (III) и при 315 нм для ионов железа (III).

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие. Способ диагностики нарушений сперматогенеза у человека путем определения его цитологического профиля включает проведение определения каждой из VI клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза, дифференцированный подсчет количества сперматогенных клеток, входящих в каждую ассоциацию, по отношению к количеству сустентоцитов данного сегмента канальца, сравнение результатов подсчета с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин и оценку результатов, констатируя нарушение на стадиях формирования, созревания, роста и размножения. Способ обеспечивает повышение достоверности и качества диагностики нарушений сперматогенеза на различных его стадиях. 1 табл.

Наверх