Способ диагностики нарушений сперматогенеза путем определения его цитологического профиля

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие. Способ диагностики нарушений сперматогенеза у человека путем определения его цитологического профиля включает проведение определения каждой из VI клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза, дифференцированный подсчет количества сперматогенных клеток, входящих в каждую ассоциацию, по отношению к количеству сустентоцитов данного сегмента канальца, сравнение результатов подсчета с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин и оценку результатов, констатируя нарушение на стадиях формирования, созревания, роста и размножения. Способ обеспечивает повышение достоверности и качества диагностики нарушений сперматогенеза на различных его стадиях. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие.

Нарушения сперматогенеза - до настоящего времени сложная проблема как для клиницистов-андрологов, так и для специалистов морфологического профиля.

Известен способ диагностики бесплодия, который включает исследование эякулята на содержание металлов [Поляков В.М., Лепехова С.А. Способ диагностики мужского бесплодия. Патент на изобретение №2247371]. При обнаружении наличия ртути или обнаружение свинца >3,15 мкг/л устанавливают интоксикационную форму бесплодия.

Наряду с этим известным также является способ диагностики ранних нарушений репродуктивной функции у мужчин [Тарасова М.Н, Чистякова Г.Н., Ремизова И.И., Газиева И.Л., 2011 г]. При обнаружении в сыворотке крови цитокинов IL-8, IL-10 и 1RA методом иммуноферментного анализа и вычисления диагностического индекса диагностируют ранние нарушения репродуктивной функции у мужчин. Использование способа позволяет повысить точность диагностики у мужчин с нормальными показателями сперматограммы. Недостатками перечисленных способов является то, что они базируются не на морфологических, а на биохимических показателях. эякулята, сыворотки крови и требуют специального оборудования.

Известен способ оценки фертильности у мужчин [Артефексов СБ., Сергеев М.Ю., Седышева И.В., 2007 г.], который заключается в изучении количества активно подвижных и морфологически сохранных сперматозоидов, после их предварительной сепарации методом всплытия и центрифугирования в градиенте концентрации. Недостатком данного метода является то, что в качестве индикатора фертильности используются особенности морфологического строения зрелых сперматозоидов, в то время как ранние фазы сперматогенеза а также процесс дифференцировки сперматогенных клеток остается вне поля зрения исследователя.

Работ посвященных морфометрическому анализу сперматогенеза крайне мало [Лысенко А.И., Кирпатовский И.Д., 1991; Дубова Е.А. и соавт., 2012;]

Известен способ диагностики гипосперматогенеза и атрофии сперматогенных клеток яичка путем проведения морфометрического анализа биоптата путем определения индекса сперматогенеза, являющийся отношением числа всех сперматогенных клеток к числу сустентоцитов (клеток Сертоли) в 30 поперечных срезов извитых семенных канальцев [А.Ф.Астраханцев, Соловьев А.А., 2001].

Он включает в себя:

1. Биопсию яичка (по показаниям).

2. Морфометрическое изучение биоптата, включающее в себя подсчет сустентоцитов на 30 поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата. В тех же канальцах производят подсчет общего количества сперматогенных клеток.

3. Индекс сперматогенеза рассчитывают как соотношение сустентоциты/клетки сперматогенеза. Оценка результата производится по таким признакам как: снижение индекса сперматогенеза до 10-90%, снижение индекса сперматогенеза более 90%, при этом в 1 случае диагностируется гипосперматогенез, во 2 случае диагностируют атрофию сперматогенных клеток яичка.

Общим существенным признаком аналога и заявленного способа является выявление нарушения сперматогенеза у бесплодных мужчин.

Однако при аналоговом способе диагностики нарушений сперматогенеза учитывают суммарное количество клеток сперматогенеза, без учета их степени дифференцировки, и их отношение ко всем сустентоцитам подсчитанным на 30 поперечных срезах семенных канальцев гистологического препарата.

Общим существенным признаком прототипа и заявляемого способа является выполнение подсчета сперматогенных клеток на гистологическом срезе.

Однако прототипный метод неточен, т.к. не дает информации о количественном соотношении сперматогенных клеток различной степени дифференцировки в процессе различных фаз сперматогенеза: размножения, роста, созревания и формирования.

Техническим результатом изобретения является усовершенствование способа диагностики нарушений сперматогенеза путем введения дополнительных процедур цитоморфологического анализа и введения дополнительных критериев оценки результатов, что обеспечит повышение качества диагностики.

Поставленная задача решается тем, что в способе, включающем проведение системного цитоморфологического анализа, в основу положены современные представления о цикличности развития сперматогенных клеток. При этом под циклом развития сперматогенных клеток следует понимать полную серию морфологических изменений, наблюдающихся между появлением двух одинаковых сочетаний сперматогенных клеток в одном участке семенного канальца. Часть цикла, характеризующаяся определенным сочетанием сперматогенных клеток (клеточная ассоциация) и определенным этапом развития сперматид, носит название стадии цикла сперматогенеза. Количество стадий развития сперматогенных клеток у каждого биологического вида строго специфично и имеет свою неповторимость. У человека таких стадий 6 [Rupert P. Amann., 2008].

Предлагаемый способ диагностики осуществляется следующим образом. Биопсия яичка производится открытым способом по показаниям. Биоптат " размеров 0,5 см (или фрагмент ткани 1×1 см, полученный при секционном исследовании) фиксируется в жидкости Буэна, обезвоживается в спиртах восходящей крепости, заливается в парафин. Гистологические среза толщиной 5-7 мкм окрашиваются гематоксилином и эозином.

Микроскопическое исследование осуществляется с помощью микроскопа «Axioskop 40» при общем увеличении оптической системы × 400.

Методика диагностического определения цитологического профиля сперматогенеза проводится следующим образом.

1. На поперечном срезе извитого семенного канальца (или на его сегменте) проводится определение каждой из 6 типичных клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза.

2. Производится подсчет количества сустентоцитов, входящих в эту клеточную ассоциацию.

3. В этой же ассоциации производят дифференцированный подсчет сперматогенных клеток, соответствующей стадии цикла. Дифференцированный подсчет заключается в количественном определении сперматогенных клеток (сперматогоний, сперматоцитов I-II порядков и сперматид) в каждой клеточной ассоциации.

4. Рассчитывается соотношение каждого типа сперматогенных клеток по отношению к сустентоцитам.

5. Для каждой из 6 типов клеточных ассоциации производят подсчет не менее чем в 5 полях зрения.

6. Проводят статистическую обработку результатов: определяется взвешенное среднее (М) и ошибка взвешенного среднего (m) [Балинова B.C. Статистика в вопросах и ответах: Учеб пособие. - М.: ТК. Велби, Изд-во Проспект, 2004. - 344 с]. Результаты заносят в стандартную таблицу и сравнивают с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин (Таблица №1).

Оценка результатов осуществляется по следующим признакам.

1. Снижение количества ранних и поздних сперматид во всех 6 клеточных ассоциациях более 5% свидетельствует о нарушении стадии формирования.

2. Уменьшение количества сперматогенных клеток входящих в 6 клеточную ассоциацию указывает на нарушение сперматогенеза на стадии созревания.

3. Снижение числа первичных сперматоцитов на I-V стадиях цикла позволяет констатировать нарушение сперматогенеза на стадии роста.

4. Уменьшение количества сперматогоний определенное на всех VI стадиях цикла указывает на нарушении стадии размножения.

Определение цитологического профиля сперматогенеза в каждой из 6 клеточных ассоциаций, составляющих цикла развития сперматогенных клеток, обеспечивает комплексность оценки, объективизирует исследование, позволяет оценить цикл развития сперматогенных клеток в целом.

Количественные изменения сперматогенных клеток на различных этапах их дифференцировки позволяют определить нарушения сперматогенеза на различных его стадиях (размножения, роста, созревания и формирования), увеличивают информативность исследования, повышают достоверность и качество диагностики.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

Дубова Е.А., Овчинников Р.И., Попова А.Ю., Павлов К.А., Щеголев А.И. Морфологическая характеристика биоптатов яичка при бесплодии. Архив патологии. 2012. T. 74 - N 6. - С. 8-12.

Лысенко А.И., Кирпатовский И.Д. Анализ морфологических классификаций повреждения яичка при мужском бесплодии. // Арх. Патологии. - 1991. - Т. 53, 12. - С. 63-67.

Поляков В.М., Лепехова С.А. Способ диагностики мужского бесплодия. Патент на изобретение №2247371, 2005 г.

Тарасова М.Н., Чистякова Г.Н., Ремизова И.И., Газиева И.А. Способ диагностики ранних нарушений репродуктивной функции у мужчин. Патент на изобретение №2413949, 2011 г.

Артефексов С.Б., Сергеев М.Ю., Седышева И.В. Способ оценки фертильности мужчин. Патент на изобретение №2360247, 2007 г. Астраханцев А.Ф., Соловьев А.А. Способ диагностики гипосперматогенеза и атрофии яичка. Патент на изобретение №2199117, 2003 г. - прототип. Rupert P. Amann. The Cycle of the Seminiferous Epithelium in Humans: A Need to

Revisit ?// J. of Andrology. Vol. 29, No. 5. September/October 2008. p. 469-487. Балинова B.C. Статистика в вопросах и ответах: Учеб пособие. - М.: ТК. Велби, Изд-во Проспект, 2004. - 344 с).

Способ диагностики нарушений сперматогенеза у человека путем определения его цитологического профиля, отличающийся тем, что на гистологическом срезе поперечных сечений извитых семенных канальцев мужской половой железы проводят определение каждой из VI клеточных ассоциаций, составляющих цикл сперматогенеза, затем производят дифференцированный подсчет количества сперматогенных клеток, входящих в каждую ассоциацию, по отношению к количеству сустентоцитов данного сегмента канальца, сравнивают результаты подсчета с цитологическим профилем сперматогенеза в половых железах здоровых мужчин и оценивают результат, констатируя нарушение на стадии формирования при снижении количества ранних и поздних сперматид во всех VI клеточных ассоциациях более 5%; на стадии созревания при уменьшении количества сперматогенных клеток, входящих в VI клеточную ассоциацию; на стадии роста при снижении числа первичных сперматоцитов на стадиях I-V; на стадии размножения при уменьшении количества сперматогоний на всех VI стадиях.