Способ одновременного выявления нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани



Способ одновременного выявления нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани
G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2666256:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Институт экспериментальной медицины" (ФГБНУ "ИЭМ") (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к области гистологических исследований нервной системы, в частности головного мозга, и может быть использовано в патологической анатомии, цитологии, судебной медицине и биологии. Предложенный способ обеспечивает одновременное выявление нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани путем сочетанной двойной окраски тигроидного вещества и телец Маринеско в нейронах, импрегнированных нитратом серебра, раствором N1, содержащим формальдегид, лимонную и концентрированную азотную кислоту и воду, с докраской крезилвиолетом. 1ил.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к области гистологических исследований нервной системы, в частности головного мозга, и может быть использовано в патологической анатомии, цитологии, судебной медицине и биологии.

Известны способы приготовления гистологического препарата нервной ткани, включающие фиксацию в формалине, приготовление целлоидиновых срезов и их окрашивание по Нисслю или импрегнацию азотнокислым серебром [ L и др. «Layers I and VI of the visual cortex in the rabbit. A correlated Golgi and у S1» 1989 г.; Отеллин B.A., Коржевский Д.Э. «Иммуноцитохимическое выявление астроцитов в срезах головного мозга в сочетании с окраской по Нисслю» 2004 г., Коржевский Д.Э., Гиляров А.В Основы гистологической техники. 2010 г.; Сапожников А.Г., Доросевич А.Е. «Гистологическая и микроскопическая техника»].

Известен быстрый способ комбинированной окраски препаратов по Гольджи и Нисслю, позволяющий выявлять нейрональную морфологию и цитоархитектонику [Pilati N. at al. «Rapid Method Combining Golgi and Nissl Staining to Study Neuronal Morphology and Cytoarchitecture», 2008 г.], который является прототипом предлагаемого способа.

Однако описанные способы не позволяют осуществлять одновременное окрашивание нервных клеток и выявление на этом же препарате астроцитов.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа выявления тигроидного вещества и телец Маринеско в нейронах, окрашенных крезилвиолетом (модифицированный метод Ниссля), а также импрегнированных нитратом серебра нейронов и астроцитов на одном срезе головного мозга.

Способ осуществляют следующим образом.

Фиксацию мозга лабораторных животных проводят либо методом прижизненной перфузии 10% раствором нейтрального формалина на фосфатно-солевом буфере через левый желудочек сердца, в случае исследования коры головного мозга образцы ткани либо методом погружения, в последнем случае мозг фиксируют в течение 10-14 дней в часто сменяемом 10% растворе нейтрального формалина.

Фиксированный препарат мозга переносят в 10% раствор нитрата серебра, в котором выдерживают в течение 3-4 дней в темном месте при комнатной температуре. Применяют стандартную процедуру обезвоживания ткани с последующим заключением в парафин. На микротоме изготавливают серийные гистологические срезы толщиной 5-30 микрометров и наносят на предметные стекла.

Предварительно приготавливают растворы №1 и №2 следующего состава:

раствор №1:

формальдегид 37-40% - 20 мл,
кислота лимонная - 500 мг,
кислота азотная концентрированная - 2 капли
вода дистиллированная - 100 мл;

раствор №2:

крезилвиолет - 100 мг,
вода дистиллированная - 100 мл,

После депарафинизации в ксилоле препараты проводят по спиртам понижающей концентрации, споласкивают в двух порциях дистиллированной воды и проводят повторную импрегнацию в 10% растворе нитрата серебра в течение 5-8 минут в термостате при 40°С в темноте.

В течение времени термостатирования приготавливают новый раствор для окраски путем растворения 8 капель раствора №1 и 8 капель концентрированного гидроксида аммония в 50 мл дистиллированной воды.

Вынутые из термостата препараты без промывки переносят в свежеприготовленный раствор на время от 40 с до 1 мин, затем, чтобы остановить реакцию, погружают их в 1% раствор гидроксида аммония на 1 минуту и промывают в трех сменах дистиллированной воды.

После промывки препараты помещают на 1 мин в 5% раствор тиосульфата натрия и снова промывают их дистиллированной водой в течение 5 мин. Затем производят докраску в предварительно подогретом растворе крезилвиолета (раствор №2) на ацетатном буфере в термостате при 60°С в течение 15-20 мин, после чего вновь промывают дистиллированной водой.

На завершающем этапе препараты последовательно погружают в 100% спирт на 5-8 мин, в карбол-ксилол на 1 мин и дважды по 5 мин в орто-ксилол, далее заключают срезы канадским бальзамом под покровные стекла.

На фиг. 1 представлена микрофотография 5-го слоя цингулярной коры головного мозга крысы при увеличении 40×. Препарат подготовлен и окрашен по вышеописанному способу. Белыми стрелками обозначены окрашенные и импрегнированные объекты: А - астроциты, М - тельца Маринеско, Н - нейроны.

Предложенный способ позволяет сохранить высокое качество структуры ткани, и с помощью сочетанной двойной окраски выявлять тигроидное вещество и тельца Маринеско в нейронах, окрашенных крезилвиолетом, а также импрегнированные нитратом серебра нейроны и астроциты при различных функциональных состояниях.

Метод прост для воспроизведения, не требует использования дорогостоящих и опасных для здоровья веществ, возможен для исследования архивного материала, хранящегося в парафиновых блоках, обработки тонких срезов.

Литература

1. Layers I and VI of the visual cortex in the rabbit. A correlated Golgi and у S1, L, Ramo C, Contamina-Gonzalvo P, de Carlos JA. J Hirnforsch. 1989; 30(2):163-73.

2. Основы гистологической техники - Коржевский Д.Э., Гиляров А.В. - Практическое руководство. 2010 г.

3. "Гистологическая и микроскопическая техника. Руководство. А.Г. Сапожников, А.Е. Доросевич. Смоленск. "САУ" 2000 год.

4. A. Nadia, Matthew Barker, Sofoklis Panteleimonitis, Revers Donga, and Martine Hamann. // Journal of Histochemistry & Cytochemistry, 2008, Volume 56(6): 539-550.

Способ одновременного выявления нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани, включающий фиксацию препарата в 10% растворе нитрата серебра в течение 3-4 дней в темноте при комнатной температуре, стандартную процедуру обезвоживания, заключение в парафин, приготовление гистологических срезов толщиной от 5 до 30 микрометров, нанесение на предметные стекла, депарафинизацию в ксилоле, отличающийся тем, что предварительно приготавливают растворы №1 и №2 следующего состава:

раствор №1:

формальдегид 37-40% 20 мл
кислота лимонная 500 мг
кислота азотная концентрированная 2 капли
вода дистиллированная 100 мл

раствор №2:

крезилвиолет 100 мг
вода дистиллированная 100 мл,

затем после депарафинизации препараты проводят по спиртам понижающей концентрации, споласкивают в двух порциях дистиллированной воды, проводят повторную импрегнацию в 10% растворе нитрата серебра в течение 5-8 минут в термостате при 40°C в темноте, в течение этого времени приготавливают раствор для окраски путем растворения 8 капель раствора №1 и 8 капель концентрированного гидроксида аммония в 50 мл дистиллированной воды, после чего препараты без промывки переносят в свежеприготовленный раствор на время от 40 с до 1 мин, затем погружают их в 1% раствор гидроксида аммония на 1 минуту и промывают в трех сменах дистиллированной воды, после чего препараты помещают на 1 мин в 5% раствор тиосульфата натрия, промывают их дистиллированной водой в течение 5 мин и производят докраску в растворе №2 на ацетатном буфере в термостате при 60°C в течение 15-20 мин, затем вновь промывают дистиллированной водой, после чего последовательно погружают препараты в 100% спирт на 5-8 мин, в карбол-ксилол на 1 мин и дважды по 5 мин в орто-ксилол, далее заключают срезы канадским бальзамом под покровные стекла.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ раннего обнаружения и диагностирования злокачественной опухоли в биологических образцах внеклеточных текучих веществ у субъектов без диабета, включающий стадии: a) определение уровня образования метилглиоксаля (МГ) в биологическом образце субъекта из внеклеточного текучего вещества; b) сравнение указанного уровня с уровнем МГ у субъектов без злокачественных опухолей (контрольное значение); где, если уровень образования МГ в указанных биологических образцах выше, чем указанное контрольное значение, то указанных субъектов считают страдающими злокачественной опухолью.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ раннего обнаружения и диагностирования злокачественной опухоли в биологических образцах внеклеточных текучих веществ у субъектов без диабета, включающий стадии: a) определение уровня образования метилглиоксаля (МГ) в биологическом образце субъекта из внеклеточного текучего вещества; b) сравнение указанного уровня с уровнем МГ у субъектов без злокачественных опухолей (контрольное значение); где, если уровень образования МГ в указанных биологических образцах выше, чем указанное контрольное значение, то указанных субъектов считают страдающими злокачественной опухолью.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии, и может применяться в диагностике пищевой аллергии у детей. Сущность способа: исследуют общий и специфический IgE сыворотки крови, определяют содержание суммарных свободных легких каппа- и лямбда-цепей иммуноглобулинов, специфичных к аллергену (св.
Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования эффективности антиретровирусной терапии у больных ко-инфекцией туберкулез и ВИЧ-инфекция, включающего оценку клинических данных, где определяют в плазме или сыворотке крови соотношение содержания общего холестерина к триглицеридам и при его цифровых значениях ниже 5,0 прогнозируют эффективность антиретровирусной терапии.

Изобретение относится к приборам для качественного и количественного анализа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК). В устройстве использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени.

Изобретение относится к области медицины, а именно к геронтологии и гериатрии, и может использоваться для диагностики саркопении у лиц пожилого и старческого возраста.
Изобретение относится к медицине, а именно к профболезням, и может быть использовано для предотвращения заболевания шахтера пылевым бронхитом. Для этого проводят отбор из пласта углепородных проб, определение содержания в угле летучих веществ и материнской пыли, измерение запыленности рудничного воздуха и содержания в нем кислорода.

Изобретение относится к медицине, неврологии и реабилитологии, может быть использовано для оценки эффективности реабилитации когнитивных нарушений при хронической ишемии мозга.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки интенсивности тканевого дыхания. Для этого проводят анализ крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ раннего обнаружения и диагностирования злокачественной опухоли в биологических образцах внеклеточных текучих веществ у субъектов без диабета, включающий стадии: a) определение уровня образования метилглиоксаля (МГ) в биологическом образце субъекта из внеклеточного текучего вещества; b) сравнение указанного уровня с уровнем МГ у субъектов без злокачественных опухолей (контрольное значение); где, если уровень образования МГ в указанных биологических образцах выше, чем указанное контрольное значение, то указанных субъектов считают страдающими злокачественной опухолью.

Изобретение относится к приборам для качественного и количественного анализа нуклеиновых кислот (ДНК и РНК). В устройстве использован метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени.

Группа изобретений относится к испытаниям трубных сталей на склонность к коррозионному растрескиванию под напряжением. В способе испытания трубных сталей на КРН вырезают образец из стенки трубы магистрального газопровода и/или из неэксплуатировавшейся трубы.

Изобретение относится к биомедицине, а более конкретно к устройствам для спектрально-флуоресцентного исследования содержания экзогенных флуорохромов (в частности, флуоресцирующих препаратов, например фотосенсибилизаторов) в биоткани, в частности в органах и тканях экспериментальных животных при исследованиях фармакокинетики и биораспределения.

Изобретение относится к металлургии, в частности к области анализа и определения водорода в алюминиевых сплавах. Предложен способ определения содержания водорода в алюминиевых сплавах, включающий отбор расплава, его последующую кристаллизацию сразу в двух подогреваемых тиглях: один под атмосферным давлением, а другой под низким давлением, и измерение разности плотностей полученных слитков.

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Изобретение представляет собой способ оценки присутствия фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов, включающий фиксацию эритроцитов глутаровым альдегидом, отличающийся тем, что для оценки присутствия фосфатидилсерина эритроциты фиксируют глутаровым альдегидом в течение 30 минут, затем один раз отмывают забуференным физиологическим раствором с pH 7.4, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, добавляют хлористый лантан до финальной концентрации 20 мкМ, перемешивают и по появлению агрегатов судят о присутствии фосфатидилсерина на поверхности мембран эритроцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие.

Изобретение относится к аналитической химии и касается способов определения ионов хрома (III) и железа (III) в растворе при совместном присутствии. Способ определения концентрации ионов хрома (III) и железа (III) при совместном присутствии в растворе включает добавление к анализируемому раствору, содержащему ионы хрома (III) и железа (III), 4 мл раствора трилона Б (концентрацией 80 г/л), нагревание полученной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждение смеси до комнатной температуры, добавление к охлажденной смеси 0,5 мл водного раствора аммиака, доведение дистиллированной водой до 25 мл, определение оптической плотности раствора и вычисление концентрации ионов по калибровочным зависимостям, при этом измерение оптической плотности производят при 660 нм для ионов хрома (III) и при 315 нм для ионов железа (III).

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования скорости прогрессии глаукомной оптической нейропатии. В слезной жидкости определяют концентрации ММР-9 и TIMP-1 методом иммуноферментного анализа и затем рассчитывают величину их отношения.

Изобретение относится к области автоматизации отбора проб высокоабразивных жидкотекучих промпродуктов в трубах, желобах, сосудах и других потоках горно-обогатительных, химико-металлургических и других производств.

Узел пробоотборной камеры для расплавленного металла содержит закрывающую пластину и корпус. Первая поверхность корпуса имеет углубление в непосредственной связи по текучей среде с первым отверстием, образованным на погружном конце корпуса. Закрывающая пластина и корпус собираются вместе вдоль первой плоскости для образования пробоотборной полости, включающей в себя углубление. Поверхность для анализа затвердевшей пробы металла лежит в первой плоскости. Пробоотборная полость и первое отверстие выровнены вдоль общей продольной оси. Первое отверстие разнесено от первой плоскости. Отношение температуропроводностей затвердевшей пробы металла и материала корпуса составляет от 0,1 до 0,5. Корпус неотделим от затвердевшей пробы металла. Участок корпуса непосредственно смежен затвердевшей пробе металла и лежит в первой плоскости. Изобретение обеспечивает предотвращение вступления пробы в реакцию с окружающим воздухом. 2 н. и 12 з.п. ф-лы, 12 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к области гистологических исследований нервной системы, в частности головного мозга, и может быть использовано в патологической анатомии, цитологии, судебной медицине и биологии. Предложенный способ обеспечивает одновременное выявление нейронов и астроцитов на гистологических препаратах нервной ткани путем сочетанной двойной окраски тигроидного вещества и телец Маринеско в нейронах, импрегнированных нитратом серебра, раствором N1, содержащим формальдегид, лимонную и концентрированную азотную кислоту и воду, с докраской крезилвиолетом. 1ил.

Наверх