Способ проведения пцр-пдрф-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену rps3a



Способ проведения пцр-пдрф-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену rps3a
Способ проведения пцр-пдрф-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену rps3a
Способ проведения пцр-пдрф-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену rps3a
Способ проведения пцр-пдрф-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену rps3a
Способ проведения пцр-пдрф-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену rps3a
G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2667124:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Брянский государственный аграрный университет" (RU)

Изобретение относится к области генетики и селекции сельскохозяйственных животных. Предложен способ проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A. Изобретение обеспечивает эффективную идентификацию искомых генотипов (NN, NF) по фрагментам с длинами 185 bp, 103 bp и 82 bp. 2 табл., 1 ил.

 

Изобретение относиться к области генетики и селекции сельскохозяйственных животных, в частности к оценке наследственного заболевания цитруллинемия (ВС) крупного рогатого скота молекулярно-генетическим методом исследования.

Существуют различные способы проведения ПЦР-ПДРФ (полимеразная цепная реакция - полиморфизм дины рестрикционных фрагментов) для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A.

Так в способе, предложенном R. и др. (2006) [ R., Georgescu S.E., Kevorkian Steliana, Manea Maria Adina, Rebedea Mariana, Dinischiotu Anca, Tesio C.D., Costache Marieta - "Citrullinemia diagnostication on cattle breed", Zootehnie Biotehnologii, Vol. 39(1), 2006, pp. 127-130.], используются праймеры:

F 5'-GGGCCAAAAAGGTGTTCATTGAGGACATC-3';

R 5'-CAAGTATGTGTCTCACGGCGCCGCCACAGGAA-3',

инициирующие амплификацию локуса RPS3A-гена длиной 200 bp, с последующим эндонуклеазным расщеплением рестриктазой Ava II, для генерации и интерпретации образующихся генотип-спецефических фрагментов (генотип NN=112/88 bp).

ПЦР-программа:

x1: 95°С - 5 мин

х35: 95°С - 30 сек, 57°С - 30 сек, 72°С - 1 мин

х1: 72°С - 10 мин

Цель изобретения - разработка эффективного способа генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A на основе ПЦР-ПДРФ-анализа.

Сущность способа проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A, отличающийся тем, что на этапе ПЦР используются праймеры:

Используется режим амплификации:

x1: 94°C - 5 мин

х30: 94°C - 30 сек, 55°C - 30 сек, 72°C - 30 сек

x1: 72°C - 10 мин

Условия проведения реакции

Экстракция нуклеиновой кислоты из ушных выщипов крупного рогатого скота, осуществлялась перхлоратным методом с двойной очисткой (Методические рекомендации по проведению ДНК-тестирования племенных животных субъектов племенного животноводства на устойчивость к наследственным заболеваниям, утвержденные на НТС Министерства сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь №22 от 20.02.2016 г.).

ПЦР-ПДРФ выполняли согласно протоколу, представленному в табл. №1.

Праймеры:

Режим амплификации

х1: 94°С - 5 мин

х30: 94°С - 30 сек, 55°С - 30 сек, 72°С - 30 сек

х1: 72°С - 10 мин

Хранение 4-8°С

ПЦР-продукт = 200 bp

Инкубация при 37°С в течение ночи

ПЦР-ПДРФ-фрагменты:

Генотип NN = 103/82 bp,

Генотип NF = 185/103/82 bp,

Электрофорез в 3% агарозном геле

Краткое описание графических материалов

Пояснение к фиг. 1. - Электрофореграмма технического результата предложенного способа проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A

Обозначения:

М - ДНК-маркер 50bp (ОДО «Праймтех», Беларусь)

1-5 - генотип NN,

PCR - амплификация локуса RPS3A-гена длиной 198 bp

Детекцию результатов ПЦР-ПДРФ осуществляли методом горизонтального электорофореза в 3% агарозном геле в ТВЕ буфере при УФ-свете с использованием бромистого этидия.

Размеры фрагментов ДНК оценивали по подвижности в сравнении со стандартными ДНК-маркерами (ОДО «Праймтех», Беларусь).

Заключение

По результатам практических исследований, направленных на апробацию разработанного нами способа проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A, нами получен обеспечиваемый заявленным способом технический результат, выраженный в эффективной идентификации искомых генотипов (NN, NF) ввиду корректной интерпретации генерируемых генотип-спецефических фрагментов (NN=103/82 bp, NF=185/103/82 bp), где ПЦР-ПДРФ-фрагменты с длинами 185 bp, 103 bp и 82 bp являются идентификационными.

Источник информации

1. R., Georgescu S.E., Kevorkian Steliana, Manea Maria Adina, Rebedea Mariana, Dinischiotu Anca, Tesio C.D., Costache Marieta - "Citrullinemia diagnostication on cattle breed", Zootehnie Biotehnologii, Vol. 39(1), 2006, pp. 127-130.

Способ проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A, отличающийся тем, что на этапе ПЦР используют праймеры:

RPS3A 1:5' - GGC CAG GGA CCG TGT TCA TTG AGG АСА ТС - 3'

RPS3A 2: 5' - ТТС CTG GGA ССС CGT GAG АСА CAT ACT TG - 3', и

режим амплификации:

x1: 94°C - 5 мин

х30: 94°C - 30 сек, 55°C - 30 сек, 72°C - 30 сек

x1: 72°C - 10 мин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, и предназначено для определения посттрансплантационного донорского химеризма при анализе точечных мутаций замены оснований в генах тромбофилии.

Изобретение относится к клинической иммунологии и касается способа определения функциональной активности С3-конвертазы альтернативного пути активации системы комплемента (АПАК).

Группа изобретений относится к in vitro диагностике и определению эффективности лечения болезни Гоше. Способ in vitro для диагностики болезни Гоше у индивидуума включает выявление биомаркера в образце от индивидуума, определение уровня биомаркера, присутствующего в образце, и сравнение уровня биомаркера с пороговым уровнем.

Изобретение относится к медицине. Выделяют территорию с постоянным присутствием алюминия и устанавливают перечень наиболее вероятных негативных эффектов - нарушений здоровья у детей, ассоциированных с повышенной аэрогенной экспозицией алюминия.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы определения и выбора терапии для пациента и набор для определения, может ли пациент получать пользу от лечения с помощью антагониста VEGF.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использована для оценки кислотно-щелочного состояния женских половых органов. Для этого осуществляют введение влагалищного зеркала и рН-метрического зонда во влагалище.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и касается способа определения вероятности наличия нестабильных атеросклеротических бляшек в коронарных артериях у пациентов с коронарным атеросклерозом.

Группа изобретений относится к медицине и биотехнологии, и может быть использована для проведения направленной эволюции белков. Для этого проводят (a) получение данных о последовательности и данных об активности для каждого из множества вариантов белков; (b) генерацию мультипликативной модели последовательность-активность по данным о последовательности и данным об активности, где модель последовательность-активность связывает аминокислоты варианта белка или нуклеотидов, кодирующих вариант белка, с активностью варианта белка, и мультипликативная модель последовательность-активность содержит: произведение множественных невзаимодействующих мультипликативных членов, причем каждый невзаимодействующий мультипликативный член содержит произведение независимой переменной и коэффициента, где: (i) независимая переменная представляет определенную аминокислоту варианта белка или определенный нуклеотид, кодирующий вариант белка, и (ii) коэффициент представляет вклад в активность варианта бека только определенной аминокислотой или определенным нуклеотидом (c) использование модели последовательность-активность для осуществления цикла направленной эволюции одного или нескольких вариантов белка.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота.

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и представляет собой способ прогнозирования развития тромбоэмболии легочной артерии у онкологических больных с флеботромбозом нижних конечностей, заключающийся в том, что при развитии венозного тромбоза в системе нижней полой вены до начала антикоагулянтной терапии определяют исходный количественный показатель D-димера и при уровне D-димера выше 2,88 нг/мл прогнозируют развитие тромбоэмболии легочной артерии.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, и предназначено для определения посттрансплантационного донорского химеризма при анализе точечных мутаций замены оснований в генах тромбофилии.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана композиция для амплификации нуклеиновой кислоты, представляющей интерес, включающая смесь деоксинуклеотидов (dNTP), двухвалентных катионов, фермента, способного к амплификации ДНК, и праймеров, пригодных для амплификации нуклеиновой кислоты, представляющей интерес, в том числе ДНК, представляющей интерес, отличающаяся тем, что смесь содержит соль, содержащую аммоний в качестве катиона, и анион слабой кислоты, где указанная соль представляет собой аммоний пентаборат, и дикарбоновую кислоту.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к оценке терапевтической эффективности химиотерапии с использованием противоопухолевого средства, и может быть использовано в медицине.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы определения и выбора терапии для пациента и набор для определения, может ли пациент получать пользу от лечения с помощью антагониста VEGF.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии и эпигенетике, и предназначено для скрининга злокачественных новообразований у человека. Осуществляют забор периферической крови.

Предложенная группа изобретений относится к области молекулярной биологии и медицины. Предложены способ и набор для специфической идентификации по меньшей мере одной последовательности ДНК в образце путем проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР), включающие одну пару праймеров, специфичных для этой последовательности ДНК, и пару зондов, в которой один представляет собой олигонуклеотидный мишень-специфичный зонд, имеющий 3'-сегмент, комплементарный идентифицируемому участку последовательности ДНК и содержащий метку, и 5'-сегмент, некомплементарный идентифицируемой последовательности ДНК и содержащий метку, а другой - олигонуклеотидный сигнальный зонд, комплементарный 5'-сегменту мишень-специфичного зонда и содержащий метку.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота.

Изобретение относится к области биологии и экспериментальной медицины. Предложен способ оценки фармакологических и токсических свойств веществ - потенциальных лигандов AHR человека - с использованием линии мух Drosophila melanogaster.
Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и тестовый набор для определения предрасположенности пациента к тяжелому периодонтальному заболеванию и/или к высокому риску прогрессирования периодонтального заболевания.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития инсульта у мужчин русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, и предназначено для определения посттрансплантационного донорского химеризма при анализе точечных мутаций замены оснований в генах тромбофилии.

Изобретение относится к области генетики и селекции сельскохозяйственных животных. Предложен способ проведения ПЦР-ПДРФ-анализа для генотипирования крупного рогатого скота по гену RPS3A. Изобретение обеспечивает эффективную идентификацию искомых генотипов по фрагментам с длинами 185 bp, 103 bp и 82 bp. 2 табл., 1 ил.

Наверх