Способ оценки степени образования везикул эритроцитов

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и касается оценки степени образования везикул эритроцитов. Для этого проводят выделение эритроцитов из крови, их промывание и прогревание. Эритроциты прогревают при 49°С в течение 8 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, к супернатанту добавляют хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, в осадке везикул определяют содержание общего белка, по содержанию белка судят о степени образования везикул эритроцитов. Изобретение обеспечивает простоту, доступность, отсутствие необходимости в сложном оборудовании. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторным методам исследований, и может использоваться для оценки степени образования везикул эритроцитов.

Известно, что везикуляция эритроцитарных мембран происходит при апоптозе, хранении крови и многих заболеваниях человека (Зубаиров Д.М., Зубаирова Л.Д. Микровезикулы в крови, функции и их роль в тромбообразовании. М.:ГЭОТАР-МЕДИЯ, 2009, 167 с).

Однако до настоящего времени не существует методов, с помощью которых можно было бы определить степень образования везикул эритроцитов in vitro.

Наиболее известным и простым является метод получение везикул после истощения эритроцитов по АТФ. Однако везикулы, полученные после истощения эритроцитов по АТФ, не имеют на своей поверхности отрицательно заряженного фосфолипида - фосфатидилсерина (Willekens F.L.A. Erythrocyte vesiculation a survival strategy. Laboratory of Medical Immunology // Radbout Universiteit, Nijmegen. 2010.189). Поэтому они не обладают прокоагулянтной активностью. Этим они отличаются от везикул, образующихся при патологии различного генеза.

Известно, что прогревание суспензии эритроцитов при 49°С приводит к образованию везикул (Wagner G.M. et al. Red cell vesiculation - a common membrane physiologic event. J. Lab. Clin. Med. 1986. V. 108. P. 315-324). При этом показано, что образующие везикулы обладают прокоагулянтной активностью.

Известно, что количество образующихся везикул определяют путем измерения активности ацетилхолинэстеразы (Greenwalt T.J. The how and why of exocytic vesicles. Transfusion.-2006. V.46. 143-152) или определения их общего белка (Vader P. et al. Taxol- induced phosphatidylserine exposure and microvesicle formation in red blood cells is mediated by its vehicle cremophor. Nanomedicine. 2013. V. 8. P. 1127-1133).

Задача - создание нового, несложного, не требующего специального оборудования способа оценки степени образования везикул эритроцитов, является актуальной.

Задача достигается способом, который заключается в том, что эритроциты выделяют из крови, помещают на водяную баню и прогревают при 49°С в течение 8 мин. После этого суспензию эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. К супернатанту добавляют хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке, содержащем везикулы, определяют количество общего белка. По содержанию общего белка везикул судят о степени образования везикул эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь забирают в вакуумные пробирки, содержащие 3.8% цитрата натрия (9:1). Пробирки центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Плазму и клетки белой крови убирают, после чего эритроциты трижды промывают физиологическим раствором. 0.05 мл промытых эритроцитов добавляют к 10 мл забуференного физиологического раствора (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), суспензию клеток помещают на водяную баню и прогревают при 49°С в течение 8 мин. После этого суспензию эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. К супернатанту добавляют хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке определяют содержание общего белка. По содержанию общего белка везикул судят о степени образования везикул эритроцитов.

Пример 1. Отмытые эритроциты здорового донора помещали на водяную баню и прогревали при 49°С в течение 8 мин. После этого суспензию эритроцитов центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. К супернатанту добавляли хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке определяли содержание общего белка. Содержание белка везикул составило 20 мкг/мл.

Пример 2. Отмытые эритроциты больного болезнью Крона помещали на водяную баню и прогревали при 49°С в течение 8 мин. После этого суспензию эритроцитов центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. К супернатанту добавляли хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. В осадке определяли содержание общего белка. Содержание белка везикул составило 53 мкг/мл.

Таким образом, с помощью предлагаемого способа можно выяснить степень образования везикул. Так, наибольшая степень образования везикул эритроцитов наблюдается у больного болезнью Крона.

Преимуществом предлагаемого способа является быстрота, простота, доступность, отсутствие необходимости в сложном дорогостоящем оборудовании.

Способ оценки степени образования везикул эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови, их промывание и прогревание, отличающийся тем, что эритроциты прогревают при 49°С в течение 8 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, к супернатанту добавляют хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, в осадке везикул определяют содержание общего белка, по содержанию белка судят о степени образования везикул эритроцитов.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицинской технике. Мундштук содержит впускную трубку; корпус окислительного фильтра, имеющий впуск и выпуск, имеющий внутренний диаметр между 9,6 мм и 18 мм; первый фильтр, расположенный вблизи с впуском корпуса окислительного фильтра, и второй фильтр, расположенный вблизи с выпуском корпуса окислительного фильтра.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для прогнозирования возникновения диспропорций фигуры после липосакции. Для этого производят фотографирование липоаспирата, расположенного на предметном стекле, с помощью микроскопа с увеличением ×10.

Изобретение относится к технике анализа запахов газовых смесей, содержащих обладающие запахом компоненты, и может быть использовано для определения качественного и количественного анализа запаха таких смесей.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, педиатрии, травматологии и ортопедии, к лабораторной и лучевой диагностике, и может быть использовано для диагностики дисплазии соединительной ткани (ДСТ).

Изобретение относится к области биотехнологии и предназначено для очистки сыворотки крови крупного рогатого скота от контаминирующих агентов. Способ включает использование замороженной крови, поставляемой с боенских предприятий.

Изобретение относится к медицине, в частности к онкоурологии, и касается прогнозирования клинического статуса рака предстательной железы. Для этого проводят определение в сыворотке крови больного до начала лечения уровней общего простатического антигена (общПСА) с калибровкой Hybritech.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для оценки риска развития осложнений в отдаленном послеоперационном периоде у больных, имеющих признаки дисплазии соединительной ткани.

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике путем исследования биологической жидкости с помощью физических и химических методов исследования.

Изобретение относится к медицине, а именно к определению гемоглобина и его производных в крови для применения в лабораторной практике. Для этого с помощью цифрового спектрофотометра в диапазоне длин волн λ=500-700 нм, с точностью 0,5-1 нм измеряют спектр поглощения суспенции эритроцитов в буфере PBS при рН 7,4.

Изобретение относится к медицине, а именно способу анализа сыворотки крови (СК) пациентов и может быть использовано в клинической лабораторной диагностике для определения продуктов метаболизма бактерий.
Изобретение относится к медицине и касается оценки влияния лекарственных веществ на степень дестабилизации мембран эритроцитов. Для этого проводят забор крови, выделение и хранение промытых эритроцитов при 4°С. При этом эритроциты хранят в присутствии лекарственных веществ в течение 7 суток при 4°С, после чего в надосадочной жидкости определяют уровень гемолиза и степень дестабилизации мембран эритроцитов. Изобретение обеспечивает упрощение процесса определения влияния лекарственных веществ на степень дестабилизации мембран эритроцитов. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и касается оценки степени образования везикул эритроцитов. Для этого проводят выделение эритроцитов из крови, их промывание и прогревание. Эритроциты прогревают при 49°С в течение 8 мин, центрифугируют 5 мин при 3000 обмин, к супернатанту добавляют хлористый гадолиний до финальной концентрации 400-600 мкМ, центрифугируют 5 мин при 3000 обмин, в осадке везикул определяют содержание общего белка, по содержанию белка судят о степени образования везикул эритроцитов. Изобретение обеспечивает простоту, доступность, отсутствие необходимости в сложном оборудовании. 2 пр.

Наверх