Антибактериальная композиция, содержащая белок adk в качестве активного ингредиента, для борьбы с карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены антибактериальная композиция, антибактериальное квазилекарственное средство, антибактериальная пищевая добавка, антибактериальная кормовая добавка против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, содержащие белок аденилаткиназу (ADK). Предложена фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, содержащая ADK. Предложена пищевая композиция для предупреждения или облегчения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, содержащая ADK. Группа изобретений позволяет применять белок ADK, обладающий превосходной антимикробной активностью против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, в виде антибактериальной композиции в различных областях. 6 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл., 5 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к антибактериальной композиции против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая включает в качестве активного ингредиента белок аденилаткиназу (ADK), выделенный из микобактерий туберкулеза Mycobacterium tuberculosis.

Сведения о предшествующем уровне техники

В целом, антибактериальные агенты относятся к антимикробным агентам, в частности, субстанциям, обладающим антимикробным действием, в частности, субстанциям, обладающим превосходным антимикробным действием посредством ингибирования систем, в которых бактерии синтезируют клеточные стенки, белки или т.п., или полученным из них агентам. Основные ингредиенты антибактериальных агентов экстрагируют главным образом из грибов, и такие антибактериальные агенты широко применяются в настоящее время для лечения заболеваний, вызванных бактериальной инфекцией, и т.п.

После открытия антибиотиков пенициллинов Флемингом в 20 веке было разработано большое количество антимикробных агентов и антибиотиков, чтобы избавиться от заболеваний, вызванных бактериальными инфекциями. Эти антибактериальные агенты занимают важное место в нашей жизни, и находят широкое применение, например, в лекарственных средствах, пищевых продуктах, консервантах косметических средств и т.п. Однако в случае антибактериальных агентов, использующих химические синтетические вещества, постепенно увеличивается число бактерий, обладающих к ним резистентностью, и поэтому их применение постепенно ограничивается.

Бактерии, резистентные к антимикробным средствам, относятся к бактериям, которые устойчивы к определенным антимикробным агентам и поэтому не реагируют на них. Например, к таким бактериям относятся пенициллин-резистентный золотистый стафилококк Staphylococcus aureus, который не реагирует на пенициллин. Кроме того, метициллин-резистентный Staphylococcus aureus (MRSA), сообщения о котором в научном мире впервые появились в 1961 году, после чего он стал основной патогенной инфекционной бактерией во всем мире, и ванкомицин-резистентный энтерококк Enterococcus (VRE), устойчивый к ванкомицину, впервые выявленный в Европе в 1988 году, являются известными, а в конце 1990-х годов в Японии, США, Франции и Корее появились сообщения о Staphylococcus aureus (VISA), обладающем промежуточной устойчивостью к ванкомицину. Кроме того, в 2002 году Центрами по контролю и профилактике заболеваний (Centers for Disease Control) сообщалось о ванкомицин-резистентном Staphylococcus aureus (VRSA), причем ванкомицин известен как последний терапевтический агент против Staphylococcus aureus, наиболее распространенной патогенной бактерии, вызывающей инфекции у человека, и, таким образом, вероятность распространения так называемых супербактерий значительно возрастает.

В то же время, β-лактамные антибиотики, которые считаются наиболее важными в области антибиотиков, включают пенамовые антибиотики, широко известные как пенициллин, цефемовые антибиотики, широко известные как цефалоспорин, пенемовые антибиотики, и карбаменемовые антибиотики. Среди них примеры карбаменемовых антибиотиков включают имипенем, панипенем, меропенем, эртапенем и т.п., которые являются коммерчески доступными.

Таким образом, авторы настоящего изобретения приложили усилия для разработки новых антимикробных агентов и в конечно итоге обнаружили, что белок аденилаткиназа или аденозинкиназа (ADK), выделенный из Mycobacterium tuberculosis, показал превосходную антимикробную активность против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, тем самым завершая настоящее изобретение.

Техническая проблема

Целью настоящего изобретения является обеспечение антибактериальной композиции против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Другой целью настоящего изобретения является обеспечение композиции для предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, при этом композиция включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Техническое решение

Настоящее изобретение обеспечивает антибактериальную композицию, квазилекарственное средство, пищевую добавку или кормовую добавку против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию или пищевую композицию для предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, при этом композиция включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Благоприятные эффекты

В соответствии с настоящим изобретением белок ADK, выделенный из Mycobacterium tuberculosis, обладает превосходной антибактериальной активностью против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий и поэтому может эффективно применяться в различных областях в виде антибактериальной композиции.

Описание чертежей

На фигуре 1 показаны результаты анализа рекомбинантного белка ADK методом электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия.

Лучший вариант осуществления изобретения

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно.

В настоящем изобретении предлагается антибактериальная композиция против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Термин «антибактериальная» или «антибактериальная активность», используемый здесь, относится к свойству резистентных микроорганизмов, таких как бактерии или грибы, в частности, относится к свойствам антибиотиков и т.п., которые ингибирую рост или размножение бактерий.

Термин «антибактериальная композиция», используемый здесь, относится к композиции, обладающей активностью в отношении ингибирования роста и развития микроорганизмов, таких как бактерии или грибы, и может включать все формы, используемые в различных областях, требующих антимикробных эффектов, например, в лекарственных средствах, квазилекарственных средствах, пищевых добавках, кормовых добавках и т.п. В частности, антибактериальную композицию можно применять в продуктах, напрямую связанных с микроорганизмами, таких как: антибиотики или ингибиторы заражения в медицинской области; пищевые продукты в антисептических или антимикробных целях; в сельском хозяйстве в антимикробных, бактерицидных или антисептических целях; в косметических средствах или средствах ежедневного ухода для подавления образования перхоти, предотвращения микоза или подавления запаха подмышек, или против угрей; и т.п., или в детергентах для очистки, детергентах для мытья посуды или т.п. в антисептических, антимикробных или бактерицидных целях, но настоящее изобретение не ограничивается вышеуказанными целями.

Белок ADK согласно настоящему изобретению выделен из микобактерий туберкулеза Mycobacterium tuberculosis, предпочтительно имеет аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, может быть кодирован последовательностью оснований, представленной SEQ ID NO: 2, и включает функциональные эквиваленты белка ADK. Термин «функциональные эквиваленты», используемый здесь, относится к белкам, которые обладают гомологией последовательности, составляющей по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 95%, с аминокислотной последовательностью, представленной SEQ ID NO: 1, полученной в результате добавления, замены или делеции аминокислот, и проявляют по существу такую же физиологическую активность, что и белок, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, или белок, кодируемый последовательностью оснований, представленной SEQ ID NO: 2.

Белок ADK согласно настоящему изобретению включает как белки, имеющие аминокислотные последовательности природного белка ADK, так и аминокислотные последовательности его вариантов. Варианты белка ADK относятся к белкам, которые имеют изменения в последовательности, а именно делеции, вставки, или неконсервативные или консервативные замены природной аминокислотной последовательности ADK и одного или нескольких аминокислотных остатков, или их комбинацию. Аминокислотные замены в белках и пептидах, которые, как правило, не изменяют активность молекул, известны в данной области. Белок ADK или его варианты могут быть экстрагированы из природного материала или синтезированы (Merrifield, J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2156, 1963), или получены путем генной рекомбинации на основе последовательности ДНК (Sambrook et al, Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA, 2^nd Edition, 1989).

Белок ADK согласно настоящему изобретению может быть кодирован последовательностью оснований, представленной SEQ ID NO: 2, и варианты, способные выполнять такую же функцию, что и нуклеотид, включены в объем настоящего изобретения.

Термин «грамотрицательные бактерии», используемый здесь, относится к бактериям, которые окрашиваются в красный цвет при окрашивании по Граму и, как правило, эти бактерии обладают высокой стойкостью к пигментам и поверхностно-активным веществам. Грамотрицательные бактерии согласно настоящему изобретению включают все типы грамотрицательных бактерий, содержащих эндотоксины, и их примеры включают, но без ограничения, бактерии, принадлежащие роду Escherichia, роду Pseudomonas, роду Acinetobacter, роду Salmonella, роду Klebsiella, роду Neisseria, роду Enterobacter, роду Shigella, роду Moraxella, роду Helicobacter, роду Stenotrophomonas, роду Bdellovibri и роду Legionella. В частности, примеры этих грамотрицательных бактерий включают, но без ограничения, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida, Pseudomonas chlororaphis, Pseudomonas pertucinogena, Pseudomonas stutzeri, Pseudomonas syringae, Acinetobacter baumannii, Acinetobacter lwoffii, Acinetobacter calcoaceticus, Acinetobacter haemolyticus, Salmonella enterica, Salmonella bongori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium, Salmonella gallinarum, Salmonella pullorum, Salmonella mbandaka, Salmonella choleraesuls, Salmonella thompson, Salmonella infantis, Salmonella derby, Klebsiella pneumonia, Klebsiella granulomatis, Klebsiella oxytoca, Klebsiella terrigena, Neisseria gonorrhoeae, Neisseria meningitidis, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Shigella boydii, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Moraxella catarrhalis, Moraxella lacunata, Moraxella bovis, Helicobacter pylori, Helicobacter heilmannii, Helicobacter felis, Helicobacter mustelae, Helicobacter fenelliae, Helicobacter rappini, Helicobacter hepaticus, Helicobacter bilis, Helicobacter pullorum, Stenotrophomonas maltophilia, Stenotrophomonas nitritireducens, Bdellovibrio bacteriovorus, Legionella pneumophila, Legionella anisa, Legionella birminghamensis, Legionella bozemanii, Legionella cincinnatiensis, Legionella dumoffii, Legionella feeleii, Legionella gormanii, Legionella hackeliae, Legionella israelensis, Legionella jordanis, Legionella lansingensis, Legionella longbeachae, Legionella maceachernii, Legionella micdadei, Legionella oakridgensis, Legionella sainthelensi, Legionella tucsonensis и Legionella wadsworthii.

Термин «карбапенем», используемый здесь, относится к одному типу β-лактамного антибиотика, который имеет структуру, представленную формулой 1 ниже:

Формула 1

,

в которой каждый из R₁ и R₂ независимо представляет собой H, (C₁-C₁₀)алкил или (C₁-C₁₀)алкил, замещенный гидроксильной группой, и

R₃ представляет собой H, -O-R₄ или -S-R₄,

где R₄ представляет собой N-замещенный или С-замещенный амин или пирролидин.

Примеры карбапенемовых антибиотиков включают, но без ограничения, имипенем, меропенем, эртапенем, дорипенем, панипенем/бетамипрон, биапенем, разупенем, тебипенем, ленапенем и томопенем.

Структуры имипенема, панипенема, меропенема, эртапенема и дорипенема, которые являются репрезентативными карбапенемовыми антибиотиками, показаны в формулах 2, 3, 4, 5 и 6, соответственно:

Формула 2

Формула 3

Формула 4

Формула 5

Формула 6

Белок ADK, выделенный из Mycobacterium tuberculosis, в соответствии с настоящим изобретением обладает превосходной антимикробной активностью против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, и поэтому может эффективно применяться в виде антибактериальной композиции в различных областях, то есть квазилекарственных средствах, пищевых добавках, кормовых добавках, и т.п.

В настоящем изобретении также предлагается антибактериальное квазилекарственное средство, антибактериальная пищевая добавка или антибактериальная кормовая добавка против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Также в настоящем изобретении предлагается композиция для предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, которая включает белок ADK в качестве активного ингредиента.

Композиция представляет собой фармацевтическую композицию или пищевую композицию.

Также в настоящем изобретении предлагается способ предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, при этом способ включает введение белка ADK индивидууму.

Белок ADK согласно настоящему изобретению селективно проявляет превосходную антимикробную активность против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий и поэтому содержащую его композицию можно эффективно применять для предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями.

Используемый здесь термин «инфекционное заболевание» относится к болезненному состоянию, вызванному патогенными микроорганизмами, такими как вирусы, бактерии, грибы и паразиты, путем распространения и проникновения в животных или человека, и относится ко всем инфекционным заболеваниям, вызванным карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями в соответствии с целями настоящего изобретения. Например, инфекционные заболевания согласно настоящему изобретению могут представлять собой респираторные заболевания, заболевания желудочно-кишечного тракта, воспалительные заболевания и т.д. В частности, примеры инфекционных заболеваний включают, но без ограничения, пневмонию, перитонит, менингит, инфекции ран, остеоартрит, холецистит, инфекции мочевых путей, цереброминингит, эндокардит, миокардит, перикардит, артрит, фарингит, гонорею, бактериальную дизентерию, энтерит, конъюнктивит, гастрит, тимпанит, цистит, лимфангит и септицемию.

Используемый здесь термин «предупреждение» означает все действия, которые ингибируют инфекционные заболевания или замедляют их развитие путем введения композиции. Используемый здесь термин «лечение» означает все действия, которые облегчают или благоприятным образом изменяют симптомы инфекционных заболеваний путем введения композиции.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может, кроме того, включать обычно используемый подходящий носитель, вспомогательное вещество или разбавитель. Примеры носителя, вспомогательного вещества или разбавителя, которые могут быть включены в фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению, включают, но без ограничения, лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, аравийскую камедь, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральное масло.

Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить в виде пероральных или парентеральных форм в соответствии с общим способом, и составлять с использованием типичных разбавителей или вспомогательных веществ, таких как наполнители, объемообразующие агенты, связывающие агенты, смачивающие агенты, дезинтегрирующие агенты, поверхностно-активные вещества и т.п. Твердые препараты для перорального введения включают таблетки, драже, порошки, гранулы, капсулы и т.п., и такие твердые препараты составляют путем смешивания композиции по меньшей мере с одним вспомогательным веществом, например, крахмалом, карбонатом кальция, сахарозой, лактозой, желатином и т.п. В дополнение к простым вспомогательным веществам можно также использовать скользящие вещества, такие как стеарат магния и тальк. Примеры жидких препаратов для перорального введения включат суспензии, жидкости для внутреннего применения, эмульсии, сиропы и т.п., и эти жидкие препараты могут включать, в дополнение к простым, обычно используемым разбавителям, таким как вода и жидкий парафин, различные типы вспомогательных веществ, например, смачивающий агент, подсластитель, вкусовой агент, консервант и т.п. Препараты для парентерального введения включают водный стерильный раствор, неводный раствор, суспензию, эмульсию, лиофилизированный препарат и суппозиторий. Неограничивающие примеры неводного растворителя и суспензии включают пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительное масло, такое как оливковое масло, и инъекционный сложный эфир, такой как этилолеат. Примеры суппозиторных основ включают Witepsol, Macrogol, Tween 61, масло какао, лаурин, глицерожелатин и т.п.

Используемый здесь термин «введение» относится к доставке фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению индивидууму с использованием подходящего способа.

Подходящая доза фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению может изменяться в зависимости от патологических состояний и массы тела пациентов, тяжести заболевания, типов лекарственных средств, пути введения и времени введения, но может быть подходящим образом выбрана специалистом в данной области. Для получения желаемых эффектов фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить в количестве от 0,001 мг/кг до 1000 мг/кг ежедневно. Фармацевтическую композицию можно вводить один раз или множество раз в день. Не предполагается, что доза будет ограничивать объем настоящего изобретения каким-либо образом.

Фармацевтическую композицию согласно настоящему изобретению можно вводить индивидууму различными путями. Можно использовать любые способы введения, например, пероральное введение, инъекцию, ректальное введение или внутривенную инъекцию, мышечную инъекцию, подкожную инъекцию, внутриматочное введение, эпидуральное введение и интрацеребровентикулярное введение. Однако для перорального введения, так как белок расщепляется, пероральная композиция может быть составлена таким образом, чтобы активные ингредиенты содержали покрытие, или таким образом, чтобы защитить от разложения в желудке. Композицию согласно настоящему изобретению предпочтительно вводить путем инъекции.

Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением, кроме того, может содержать одну или несколько известных субстанций, обладающих антимикробной активностью, в дополнение к белку ADK.

В настоящем изобретении пищевая композиция предпочтительно представлена в форме функциональной оздоровительной продукции.

В настоящем изобретении функциональная оздоровительная продукция относится к группе пищевых продуктов, имеющих добавленную пищевую ценность, которая обеспечена физическим, биохимическим или биотехнологическим способом, таким образом, что соответствующий пищевой продукт наделяет или проявляет предназначенные для него функции, подходящие для конкретных применений; или к обработанному пищевому продукту, разработанному таким образом, что состав пищевого продукта в достаточной мере наделяет организм модулирующими организм функциями, связанными с контролем ритма биологической защиты, предупреждением заболевания и восстановлением после заболевания, и т.п.

Функциональный оздоровительный продукт может включать ситологически приемлемые пищевые добавки и может, кроме того, включать подходящие носители, вспомогательные вещества и разбавители, обычно используемые для изготовления функционального оздоровительного продукта.

Когда пищевую композицию согласно настоящему изобретению используют в качестве пищевой добавки, композицию можно подходящим образом применять отдельно или в комбинации с другими пищевыми продуктами, или пищевыми ингредиентами в соответствии с обычно используемым способом. Смешиваемое количество активных ингредиентов может быть подходящим образом определено в соответствии с целью применения (предупреждение, оздоровление или терапевтическое лечение). Как правило, при изготовлении пищевых продуктов или напитков композицию согласно настоящему изобретению можно добавлять в количестве, составляющем 15 масс.% или менее, предпочтительно 10 масс.% или менее относительно сырьевых материалов. Однако в случае длительного приема в оздоровительных и гигиенических целях или в целях контроля состояния здоровья, пищевая композиция может быть включена в количестве в указанных выше диапазонах или в меньшем количестве. Композиция не имеет проблем с точки зрения безопасности и поэтому ее можно применять в количестве в указанных выше диапазонах или в большем количестве.

В дополнение к вышеуказанным ингредиентам пищевая композиция согласно настоящему изобретению может включать различные питательные добавки, витамины, электролиты, вкусовые добавки, красители, пектиновую кислоту и ее соли, альгиновую кислоту и ее соли, органические кислоты, защитные коллоидные загустители, регулирующие рН агенты, стабилизатор, консервант, глицерин, спирты, карбонизирующее вещество, используемое в газированных напитках, и т.п. Кроме того, пищевая композиция согласно настоящему изобретению может включать мякоть при изготовлении натурального фруктового сока, фруктовых напитков и овощных напитков. Эти ингредиенты можно использовать отдельно или в комбинации. Соотношение этих добавок не имеет существенного значения, но их количество обычно выбирают в диапазоне от 0,01 частей по массе до 0,1 частей по массе из расчета на 100 частей по массе композиции согласно настоящему изобретению.

Далее в настоящем документе описаны иллюстративные примеры для содействия пониманию настоящего изобретения. Однако эти примеры представлены только для облегчения понимания настоящего изобретения и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения.

Пример 1. Клонирование рекомбинантного ADK (Rv0733)

Область ADK (Rv0733) амплифицировали с помощью PCR с использованием геномной DNA Mycobacterium tuberculosis H37Rv (ATCC 27294) в качестве темплата (праймер: 5'-CATATGAGAGTTTTGTTGCTGGGACCG-3' (SEQ ID NO: 3) и 5'- AAGCTTCTTTCCCAGAGCCCGCAACGC-3' (SEQ ID NO: 4)). Выделенный продукт PCR расщепляли ферментами NdeI и HindIII и вставляли в экспрессионный вектор pET22b. Штамм E. coli BL21, трансформированный вектором pET22b, в который был вставлен ген ADK, культивировали в среде LB (содержащей 100 мкг/мл ампициллина) при 37 °С в течение 12 часов. Затем в него добавляли 1 мМ изопропил-D-тиогалактопиранозида (IPTG) с последующим культивированием в течение 6 часов, и клетки лизировали в лизирующем буфере (содержащим 1M DTT, лизозим и PMSF). Рекомбинантный белок очищали с использованием агарозы, модифицированной никель-нитрилотриуксусной кислотой (Ni-NTA, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) в соответствии с инструкцией изготовителя. В заключение очищенный рекомбинантный белок ADK идентифицировали с помощью SDS-PAGE. Результаты показаны на фигуре 1.

Пример 2. Идентификация карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий

Штаммы Acinetobacter baumannii KUMC.2014.90 и KUMC.2014.91 выделяли из образцов крови пациентов Отделения инфекционных заболеваний Университета Корё (Division of Infectious Diseases of Korea University). Для идентификации резистентности штаммов к антибиотикам вначале использовали систему VITEK II, которая представляет собой автоматизированное устройство, и в результате получили подтверждение того, что штаммы обладают резистентностью ко всем антибиотикам на основе карбапенема, то есть имипенему, меропенему, эртапенему и т.п. (согласно подтвержденным результатам R>32). Затем резистентность штаммов к имипенему и меропенему, которые представляют собой антибиотики на основе карбапенема, повторно подтверждали с использованием способа микроразведения в жидкой среде (подтвержденные результаты составляют более 128 мкг/мл).

Экспериментальный пример 1. Подтверждение антибактериальной активности белка ADK против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий

Для подтверждения антибактериальной активности рекомбинантного белка ADK, полученного в примере 1, против карбапенем-резистентных Acinetobacter baumannii (штаммы KUMC.2014.90 и KUMC.2014.91), полученных в примере 2, выполняли анализ с использованием резазурина в соответствии с общепринятым способом измерения минимальной ингибирующей концентрации (MIC) и минимальной бактерицидной концентрации (MBC) для карбапенем-резистентных штаммов Acinetobacter baumannii. В качестве контроля использовали Acinetobacter baumannii, который является нормальным штаммом. Результаты эксперимента показаны в таблице 1 ниже.

Таблица 1

Организмы и антимикробный агент	MIC (мкг/мл)	MBC (мкг/мл)
Диапазон тестирования	50%	80%
Acinetobacter baumannii
Ампициллин	0,45 ~ 500	< 31,3	< 62,5	< 62,5
Rukasyn	0,45 ~ 500	< 1	< 2	< 3,9
Cravit	0,45 ~ 500	< 0,5	< 1	< 1
Препенем	0,45 ~ 500	< 0,5	< 1	< 1
Adk	0,45 ~ 500	< 3,9	< 7,8	< 7,8
Acinetobacter baumannii (KUMC.2014.90)
Ампициллин	0,45 ~ 500	Нет эффекта	Нет эффекта	Нет эффекта
Rukasyn	0,45 ~ 500	< 15,6	< 31,3	< 31,3
Cravit	0,45 ~ 500	< 7,8	< 15,6	< 15,6
Препенем	0,45 ~ 500	< 31,3	< 62,5	< 62,5
Adk	0,45 ~ 500	< 1	< 2	< 2
Acinetobacter baumannii (KUMC.2014.91)
Ампициллин	0,45 ~ 500	Нет эффекта	Нет эффекта	Нет эффекта
Rukasyn	0,45 ~ 500	< 15,6	< 31,3	< 31,3
Cravit	0,45 ~ 500	< 7,8	< 15,6	< 15,6
Препенем	0,45 ~ 500	< 31,3	< 62,5	< 62,5
Adk	0,45 ~ 500	< 3,9	< 7,8	< 7,8

Как показано в таблице 1, после расчета 50% и 80% ингибирующих концентраций, принимая за 100% данные от лунок, не обработанных антибиотиками и белком ADK, получили подтверждение того, что антибиотики (то есть ампициллин, rukasyn, cravat и препенем) ингибируют рост Acinetobacter baumannii, которые являются нормальным штаммом, но не ингибируют рост карбапенем-резистентных Acinetobacter baumannii (штаммы KUMC.2014.90 и KUMC.2014.91). Напротив, получили подтверждение того, что белок ADK значительно ингибирует рост Acinetobacter baumannii, которые являются нормальным штаммом, и двух типов карбапенем-резистентных Acinetobacter baumannii (штаммы KUMC.2014.90 и KUMC.2014.91).

На основании описанных выше экспериментальных результатов было подтверждено, что белок ADK, выделенный из Mycobacterium tuberculosis, в соответствии с настоящим изобретением обладает великолепной антимикробной активностью против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий.

Далее в настоящем документе фармацевтическая композиция и пищевая композиция согласно настоящему изобретению будут описаны с обращением на следующие примеры изготовления. Однако эти примеры представлены только в иллюстративных целях и не предполагают ограничивать объем настоящего изобретения.

Пример изготовления 1. Изготовление фармацевтической композиции

1-1. Изготовление порошка

Белок ADK 2 г

Лактоза 1 г

Указанные выше ингредиенты смешивали и заполняли ими герметичную упаковку, завершая тем самым изготовление порошка.

1-2. Изготовление таблеток

Белок ADK 100 мг

Кукурузный крахмал 100 мг

Лактоза 100 мг

Стеарат магния 2 мг

Указанные выше ингредиенты смешивали, а затем таблетки изготавливали в соответствии с общим способом изготовления таблеток.

1-3. Изготовление капсул

Белок ADK 100 мг

Кукурузный крахмал 100 мг

Лактоза 100 мг

Стеарат магния 2 мг

Указанные выше ингредиенты смешивали, а затем заполняли ими желатиновые капсулы в соответствии с общим способом изготовления капсул, завершая тем самым изготовление капсул.

Пример изготовления 2. Изготовление пищевой композиции

2-1. Изготовление оздоровительного продукта

Белок ADK 100 мг

Смесь витаминов соответствующее количество

Витамин А ацетат 70 г

Витамин Е 1,0 мг

Витамин В1 0,13 мг

Витамин В2 0,15 мг

Витамин В6 0,5 мг

Витамин В12 0,2 г

Витамин С 10 мг

Биотин 10 г

Никотинамид 1,7 мг

Фолевая кислота 50 г

Пантотенат кальция 0,5 мг

Минеральная смесь соответствующее количество

Сульфат железа 1,75 мг

Оксид цинка 0,82 мг

Карбонат магния 25,3 мг

Монокалия фосфат 15 мг

Дикальция фосфат 55 мг

Цитрат калия 90 мг

Карбонат кальция 100 мг

Хлорид магния 24,8 мг

Витаминная смесь и минеральная смесь состоят из смеси относительно подходящих для диетических продуктов ингредиентов в качестве иллюстративного варианта осуществления, при этом соотношение компонентов в смеси может варьировать, и указанные выше ингредиенты смешаны в соответствии с общим способом изготовления диетических продуктов и изготовлены в виде гранул, и могут быть использованы для изготовления композиций диетических продуктов в соответствии с общим способом.

1. Антибактериальная композиция против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, содержащая белок аденилаткиназу (ADK) в качестве активного ингредиента.

2. Антибактериальная композиция по п. 1, в которой белок ADK выделен из Mycobacterium tuberculosis.

3. Антибактериальная композиция по п. 1, в которой белок ADK включает последовательность SEQ ID NO: 1.

4. Антибактериальная композиция по п. 1, в которой белок ADK кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 2.

5. Антибактериальное квазилекарственное средство против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которое содержит белок аденилаткиназу (ADK) в качестве активного ингредиента.

6. Антибактериальная пищевая добавка против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая содержит белок аденилаткиназу (ADK) в качестве активного ингредиента.

7. Антибактериальная кормовая добавка против карбапенем-резистентных грамотрицательных бактерий, которая содержит белок аденилаткиназу (ADK) в качестве активного ингредиента.

8. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, которая содержит белок аденилаткиназу (ADK) в качестве активного ингредиента.

9. Пищевая композиция для предупреждения или облегчения инфекционных заболеваний, вызванных карбапенем-резистентными грамотрицательными бактериями, которая содержит белок аденилаткиназу (ADK) в качестве активного ингредиента.