Питательная среда для культивирования bacillus subtilis

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 40%-ный спиртовой экстракт кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы бактерий Bacillus subtilis. 3 табл, 3 пр.

 

Область техники

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается питательной среды для культивирования бактерии Bacillus subtilis.

Составы питательных сред для культивирования Bacillus subtilis хорошо изучены на лабораторном и промышленном уровнях.

Известна питательная среда для стационарного культивирования Bacillus subtilis - мясопептонный бульон (МПБ). Мясопептонный бульон готовится из мясной воды, к которой добавляют 1% пептона и 0,5% натрия хлористого. Мясную воду получают путем проварки в 2-4-кратном объеме водопроводной воды мяса или фарша крупного рогатого скота или лошадей в течение 1 ч с последующей фильтрацией [1].

Недостатком данной среды является дороговизна используемых компонентов и сложная технология приготовления. Применение данной среды для промышленного производства трудновыполнимо.

В качестве прототипа для культивирования Bacillus subtilis к заявляемой питательной среде является L-бульон. Он готовится следующим образом: состав (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон ферментативный - 15, хлорид натрия - 5, дистиллированная вода - до 1 л (рН 6,8-7,0). Стерилизацию проводили при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут.[2].

Недостатком данной среды является то, при культивировании Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 максимальное количество организмов не выше 5×109 КОЕ/мл.

Цель работы, состоит в создании питательной среды, содержащей доступное и дешевое сырье и обеспечивающей количество Bacillus subtilis выше 5×109 КОЕ/мл.

Технический результат, который может быть получен при осуществлении изобретения, состоит в повышении количества Bacillus subtilis выше 5×109 КОЕ/мл.

Описание изобретения

Для достижения указанного технического результата для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, Bacillus subtilis В-2896, Bacillus subtilis В-2895 Bacillus subtilis B-4828 Bacillus subtilis В-1323 Bacillus subtilis B-5449 предложено использовать питательную среду, состоящую из (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон ферментативный - 15, хлорид натрия - 5, 40% спиртовой экстракт кровохлебки лекарственной - 20 мл/л и дистиллированная вода, доведенная до объема 1 л. (рН 6,8-7,0). Стерилизацию среды проводили после внесения экстракта при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут.

Приготовление экстракта включает в себя экстрагирование растительного сырья. Растительное сырье должно быть высокого качества (сбор кровохлебки лекарственной (Sanguisorba officinalis L.) осуществлялся в июне 2017 в Алтайском крае).

В данной работе использовали аппарат Сокслета. На 1 г воздушно-сухого вещества использовали 15 мл растворителя. В качестве растворителей выбрали 96%-ый и 40%-ый растворы этанола. В патрон из белой фильтровальной бумаги добавляли по 10 г воздушно-сухого растительного сырья, после чего закрывали с обеих сторон и помещали в экстрактор Сокслета. В колбу добавляли 150 мл 96%-ного растворителя и начинали экстрагирование на водяной бане. Для 40%-ного раствора этанола экстрагирование проводили на воздушной бане. Продолжительность экстрагирования - 3 часа, количество циклов -10. На выходе получали спиртовой или водно-спиртовой экстракт растительного сырья. Опыт поясняется следующими примерами.

Пример 1.

Для приготовления жидкой питательной среды в колбу Эрленмейера (объем 50 мл) добавляли компоненты среды, при соотношении г/л: дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, определенные объемы 96%-ного спиртового экстракта кровохлебки лекарственной, дистиллированная вода -до 1 л. (рН 6,8-7,0). Закрывали ватно-марлевой пробкой и стерилизовали при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут. Затем, в остывшую жидкую питательную среду (объем 50 мл) в стерильных условиях вносили навеску 0,5 г лиофилизированно высушенных спор Bacillus subtilis ВКПМ В-12079.

Культивирование производили в шейкер-инкубаторе "Innova 44" (New Brunswick, США) при вращении со скоростью 250 об/мин (эксцентриситет 5 см), при температуре 37°С в течение 24 часов.

Для определения количества микроорганизмов использовали стандартный метод десятикратных разведений с пересевом на питательный агар, приготовленный при следующем соотношении компонентов (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, агар-агар - 18, дистиллированная вода - до 1 л. (рН 6,8-7,0). Стерилизацию проводили при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут. После чего термостатировали при температуре 37°С в течение 24 часов. В качестве контрольной пробы использовали среду, без внесения экстракта кровохлебки лекарственной. Эксперименты проведены семь раз.

Из приведенных статистических данных видно (табл. 1), что максимальное увеличение количества бактерий достигается при добавлении 20 мл 96%-ного спиртового экстракта кровохлебки в L-бульон.

Пример 2

Для приготовления жидкой питательной среды в колбу Эрленмейера (объем 50 мл) добавляли компоненты среды, при соотношении г/л: дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, определенные объемы 40%-ного спиртового экстракта кровохлебки лекарственной, дистиллированная вода -до 1 л. (рН 6,8-7,0). Закрывали ватно-марлевой пробкой и стерилизовали при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут. Затем, в остывшую жидкую питательную среду (объем 50 мл) в стерильных условиях вносили навеску 0,5 г лиофилизированно высушенных спор Bacillus subtilis ВКПМ В-12079.

Культивирование производили в шейкер-инкубаторе "Innova 44" (New Brunswick, США) при вращении со скоростью 250 оборотов в минуту (эксцентриситет 5 см), температуре 37°С в течение 24 часов.

Для определения количества микроорганизмов использовали стандартный метод десятикратных разведений с пересевом на питательный агар, приготовленный при следующем соотношении компонентов (г/л): дрожжевой экстракт - 5, пептон - 15, хлорид натрия - 5, агар-агар - 18, дистиллированная вода - до 1 л. (рН 6,8-7,0). Стерилизацию проводили при давлении 1,1 атм. в течение 40 минут. Затем термостатировали при температуре 37°С в течение 24 часов. В качестве контрольной пробы использовали среду, без внесения экстракта кровохлебки лекарственной. Эксперименты проведены в семикратной повторности.

Из приведенных статистических данных (табл. 2) видно, что максимальное увеличение количество бактерий достигается при добавлении 20 мл 40%-ного спиртового экстракта кровохлебки лекарственной в L-бульон. При сравнении статистиках данных стимулирующей активности экстрактов кровохлебки лекарственной выявлено, что добавление 20 мл 40%-ного спиртового экстракта кровохлебки эффективней в два раза (1210±30 КОЕ × 1010/мл и 2600±130 КОЕ × 1010/мл соответственно).

Пример 3

Из приведенных данных видно (табл. 3), что стимулирование роста количества различных штаммов бактерии Bacillus subtilis при внесении 20 мл/л в питательную среду 40%-ного спиртового экстракта кровохлебки от 2 до 8 раз.

Таким образом, предлагаемая питательная среда для культивирования различных штаммов бактерии Bacillus subtilis содержит не дорогое и доступное сырье, а его использование позволяет повысить количество микроорганизмов от 2 до 8 раз, относительно контроля.

Литература.

1. Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований. / Под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. - М: Медицина, 2005. - С. 480.

2. Бойко С.С., Яценко Е.С. Влияние ультразвука на Bacillus subtilis в процессе стационарного культивирования // Технологии и оборудование химической, биотехнологический и пищевой промышленности. Материалы X Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием. - Бийск, 2017. - С. 321-324.

Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis, содержащая дрожжевой экстракт, пептон, хлорид натрия, дистиллированную воду - до 1 л (рН 6,8-7,0), отличающаяся тем, что включает 40% спиртовой экстракт кровохлебки (Sanguisorba officinalis L.) при следующем соотношении компонентов, г/л:

Пептон 15
Дрожжевой экстракт 5
Хлорид натрия 5
40% спиртовой раствор
кровохлебки 20 мл
вода водопроводная до 1л



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен модифицированный полипептид, обладающий активностью сигма-фактора А РНК-полимеразы, где по меньшей мере одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в следующих положениях полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2, заменена, и аминокислотная замена представляет собой по меньшей мере одну из следующих аминокислотных замен: 136G, 254N, 268S, 281S, 381R, 429R, 447H, 451I, 455V, 479R, 483R, 488T и 491R.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 96%-ный спиртовой экстракт кофе арабика и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выращивания факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ стимуляции активности грибов-биодеструкторов полимерных отходов.

Группа изобретений относится к бактериальным штаммам Clostridium ghonii, способным подавлять рост солидной злокачественной опухоли, вызывать регрессию и разрушение солидной злокачественной опухоли, а также их применению.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к рекомбинантной плазмидной ДНК pET31b-pHLIP. Указанная плазмидная ДНК кодирует аминокислотную последовательность рекомбинантного рН-зависимого встраивающегося пептида и обеспечивает его синтез в составе белка-слияния с кетостероидизомеразой.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в спиртовой промышленности. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, обладающий способностью продуцировать этанол, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Y-4280.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штаммы молочнокислых бактерий, обладающие антимикробной активностью (варианты); применение одного или более штаммов бактерий; композиция для лечения или предотвращения диареи у новорожденного млекопитающего, не являющегося человеком.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в спиртовой промышленности. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, обладающий способностью продуцировать этанол, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Y-4281.

Группа изобретений включает: способ лечения бактериальной инфекции у ребенка, включающий пероральное введение эффективного количества композиции, содержащей пищевой продукт, матери указанного ребенка, в котором пищевой продукт был ферментирован посредством пробиотической бактерии Lactobacillus paracasei СВА L74, регистрационный номер в международном депозитарии LMG Р-24778, соответствующий способ профилактики или снижения тяжести бактериальной инфекции у ребенка; применение указанной пробиотической бактерии для получения пищевого продукта для лечения бактериальной инфекции у ребенка и применение указанной пробиотической бактерии для получения пищевого продукта для профилактики или снижения тяжести бактериальной инфекции у ребенка.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен модифицированный полипептид, обладающий активностью сигма-фактора А РНК-полимеразы, где по меньшей мере одна аминокислота, выбранная из группы, состоящей из аминокислот в следующих положениях полипептида, имеющего аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2, заменена, и аминокислотная замена представляет собой по меньшей мере одну из следующих аминокислотных замен: 136G, 254N, 268S, 281S, 381R, 429R, 447H, 451I, 455V, 479R, 483R, 488T и 491R.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 96%-ный спиртовой экстракт кофе арабика и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ выращивания факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Группа изобретений относится к бактериальным штаммам Clostridium ghonii, способным подавлять рост солидной злокачественной опухоли, вызывать регрессию и разрушение солидной злокачественной опухоли, а также их применению.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен микроорганизм рода Corynebacterium, продуцирующий L-лизин, с улучшенной экспрессией полинуклеотида, кодирующего ген NCgl0862 Corynebacterium glutamicum.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ получения молочной кислоты из сахаросодержащих продуктов и отходов их переработки.

Изобретение относится к клинической микробиологии. Предложен способ оценки эффективности конъюгативного переноса в полимикробных сообществах.

Предложена группа изобретений: мутантные штаммы Corynebacterium glutamicum КССМ11553Р, Corynebacterium glutamicum КССМ11554Р, продуцирующие L-глутамин и способ получения L-глутамина. Способ получения L-глутамина предусматривает культивирование мутантного штамма Corynebacterium glutamicum КССМ11553Р или Corynebacterium glutamicum КССМ11554Р на питательной среде с последующим выделением L-глутамина из мутантного штамма или среды.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в спиртовой промышленности. Штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae, обладающий способностью продуцировать этанол, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Y-4280.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штаммы молочнокислых бактерий, обладающие антимикробной активностью (варианты); применение одного или более штаммов бактерий; композиция для лечения или предотвращения диареи у новорожденного млекопитающего, не являющегося человеком.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ активации спор бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 перед определением количества жизнеспособных клеток. Способ включает активацию сухих спор Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 ультразвуком в течение 15-20 секунд при температуре 32-34°С, частоте колебаний 35-37 кГц и мощности 140 Вт. Изобретение обеспечивает уменьшение времени активации, повышение безопасности работ и точности результатов. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, 40-ный спиртовой экстракт кровохлебки лекарственной и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы бактерий Bacillus subtilis. 3 табл, 3 пр.

Наверх