Производные 2-тиоурацила, обладающие противоаденовирусной активностью

Изобретение относится к новым N-арилацетамидным производным 2-тиоурацила общей формулы указанной ниже, обладающим противовирусным действием в отношении аденовирусов человека. В общей формуле

X = связь или СН₂; R¹=Н, СН₃, СН₂С₆Н₅ или (СН₂)₂ОС₆Н₅; R²=Н, СН₃, С₂Н₅, С₃Н₇, СН(СН₃)₂, СН₂ОСН₂(п-СН₃С₆Н₄), СН₂ОСН(С₆Н₅)₂, CH₂O(СН₂)₂ОС₆Н₅ или CH₂N(CH₃)C₆H₅;

R¹+R²=СН=СН-СН=СН; R³=Н или СН₃; R⁴=Н, ОС₄Н₉, С₆Н₅, СН₂С₆Н₅, С(O)С₆Н₅ или OAr;

Ar=С₆Н₅, C₆H₄R⁵ или C₆H₃(R⁵)₂; R⁵=о-, м-, п-Cl, Br, СН₃, С(СН₃)₃ или 1-С₁₀Н₇. 1 ил., 3 табл., 39 пр.

 

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно, к новым N-арилацетамидным производным 2-тиоурацила, обладающим противовирусным действием в отношении аденовирусов человека (HAdV).

Уровень техники

Как правило, аденовирусы вызывают относительно легко протекающие инфекции верхних и нижних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта, конъюнктивы и роговицы, хотя также описаны и тяжелые формы аденовирусных инфекций, которые включают геморрагический цистит, гепатит, панкреатит, нефрит, пневмонию и энцефалит [Lynch J.P., Fishbein М., Echavarria М. // Semin. Respir. Crit. Care Med. - 2011. - Vol. 32. - P. 494-511; Dunn J.J., Miller M.B. // Clin. Lab. Med. - 2014. - Vol. 34. - P. 409-430; , Richard G., Kaulfers P.M., Gesser C. // Dtsch. Arztebl. Int. - 2011. - Bd. 108. - S. 475-480]. У пациентов с нарушениями иммунного статуса (например, реципиенты трансплантации органов, пациенты с синдромом приобретенного иммунодефицита или врожденным иммунодефицитом) аденовирусные инфекции протекают более тяжело и могут приводить к летальному исходу. Например, показатели смертности среди пациентов с аденовирусной пневмонией и диссеминированной формой аденовирусной инфекции составляют 73% и 61% соответственно [Hakim F.A., Tleyjeh I.M. // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect.

Dis. - 2008. - Vol. 27. - P. 153-158; Echavarria M. // Clin. Microbiol. Rev. - 2008. - Vol. 21. - P. 704-715; Florescu D.F., Kwon J.Y., Dumitru I. // Cardiol. Rev. - 2013. - Vol. 21. - P. 203-206].

В настоящее время для лечения аденовирусных инфекций используют такие противовирусные средства широкого спектра действия, как интерферон или индукторы интерферона. Из-за низкой специфичности препараты, относящиеся к этой группе, недостаточно эффективны при борьбе с осложненными формами заболеваний, вызываемых аденовирусами. [Qasim W., Gilmour К., Zhan Н., Derniame S., McNicol A.M., Ip W., Hiwarkar P., Veys P., Gaspar H.B. // Br. J. Haematol. - 2013. - Vol. 161. - P. 449-452].

В случае тяжелого, угрожающего жизни, течения заболевания предлагается использовать цидофовир - противовирусный препарат широкого спектра действия. Его действие неспецифично в отношении аденовирусов человека: соединение является предшественником субстрата ДНК-полимеразы ДНК-содержащих вирусов. Проникая в клетку, цидофовир фосфорилируется клеточными киназами и превращается в аналог нуклеозидтрифосфатов, и, конкурируя с природными 2'-дезоксинуклеозид-5'-трифосфатами, встраивается в растущую цепь ДНК, что приводит к невозможности ее дальнейшей элонгации [Lenaerts L, De Clercq Е., Naesens L. // Rev. Med. Virol. - 2008. - Vol. 18. - P. 357-374]. Применение данного лекарственного средства ограничено его низкой биодоступностью и высокой токсичностью, в том числе нефротоксичностью [Izzedine Н., Launay-Vacher V., Deray G. // Am. J. Kidney Dis. - 2005. - Vol. 45. - P. 804-817].

Также была продемонстрирована возможность использования ациклического нуклеозидного аналога ганцикловира, одобренного для клинического применения в РФ, для терапии инфекций, вызываемых аденовирусами. Трифосфатная форма ганцикловира является ингибитором ДНК-полимеразы вируса [Naesens L, Lenaerts L., Andrei G., Snoeck R., Van Beers D., Holy A., Balzarini J., De Clercq E. // Antimicrob. Agents Chemother. - 2005. - Vol. 49. - P. 1010-1016], однако эффективность данного препарата ограничивается отсутствием тимидинкиназы у аденовируса и низкой фосфорилирующей активностью клеточных киназ [Martinez-Aguado P., Serna-Gallego А., Marrugal-Lorenzo J.A., // Drug Discov. Today. - 2015. - Vol. 20. - P. 1235-1242]. Помимо этого, применение ганцикловира, как и цидофовира, является крайне затрудненным у пациентов, перенесших трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток, в связи с риском развития тяжелой нейтропении на фоне их приема [Bruno В., Gooley Т., Hackman R.C., Davis С, Corey L, Boeckh M. // Biol. Blood Marrow Transplant. - 2003. - Vol. 9. - P. 341-352].

Близкими по химическому строению к предлагаемым соединениям являются соединения класса дигидроалкилтио-бензилокси-пиримидинов (S-DABO). Данные вещества проявляют активность в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-1) [Yu М., Liu X., Li Z., Liu S., Pannecouque C, De Clercq E. // Bioorg. Med. Chem. - 2009. - Vol. 17. P. - 7749-7754; Yu M., Li Z., Liu S., Fan E., Pannecouque C, De Clercq E., Liu X. // ChemMedChem. - 2011. - Vol. 6. -P. 826-833] и вируса гриппа типа A (H1N1 и H3N2) [Yu М., Liu A., Du G., Naesens L., Vanderlinden E., De Clercq E., Liu X. // Chem. Biol. Drug Des. - 2011. - Vol. 78. - P. 596-602].

Известен ряд пиримидиновых производных, активных в отношении аденовируса человека in vitro, однако селективность их антивирусного действия невысока [Пат. РФ № 2628456, заявл. 29.06.2016, опубл. 17.08.2018, Бюлл. № 23 // Новиков М.С., Никитенко H. А., Озеров А.А., Гуреева Е.С., Прасолов B.C., Прокофьева М.М., Джаруллаева А.Ш., Тухватулин А.И., Логунов Д.Ю. Новые пиримидиновые ингибиторы репликации аденовируса человека].

Таким образом, в настоящее время отсутствуют специфические противовирусные лекарственные средства для направленной терапии аденовирусных инфекций, а доступные неспецифические методы терапии не демонстрируют удовлетворительных результатов в аспектах эффективности и токсичности. В связи с этим, разработка эффективных и малотоксичных препаратов с прямым действием на репликацию аденовирусов сохраняет свою актуальность.

Раскрытие изобретения

Задачей предлагаемого изобретения является создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения аденовирусной инфекции.

Поставленная задача решается за счет того, что синтезированы новые N-арилацетамидные производные 2-тиоурацила, отвечающие общей формуле I:

где: X=связь или СН₂;

R¹=Н, СН₃, СН₂С₆Н₅ или (СН₂)₂OС₆Н₅;

R²=Н, СН₃, С₂Н₅, С₃Н₇, СН(СН₃)₂, СН₂ОСН₂(п-СН₃С₆Н₄),

СН₂ОСН(С₆Н₅)₂, СН₂O(СН₂)₂ОС₆Н₅ или CH₂N(CH₃)C₆H₅;

R¹+R²=СН=СН-СН=СН;

R³=Н или СН₃;

R⁴=H, OC₄H₉, C₆H₅, СН₂С₆Н₅, С(O)С₆Н₅ или ОАr;

Ar=С₆Н₅, С₆Н₄R⁵ или C₆H₃(R⁵)₂;

R⁵=о-, м-, п-Cl, Br, CH₃, С(СН₃)₃ или 1-С₁₀Н₇

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Оценка противоаденовирусной активности производных 2-тиоурацила. Различия между опытными и контрольными образцами статистически значимы при *р<0,05; ***р<0,001.

Реализация изобретения

Сущность изобретения заключается в синтезе новых N-арилацетамидных производных 2-тиоурацила, отвечающих указанной выше общей формуле I:

где: X=связь или СН₂;

R¹=Н, СН₃, СН₂С₆Н₅ или (СН₂)₂ОС₆Н₅;

R²=Н, СН₃, С₂Н₅, С₃Н₇, СН(СН₃)₂, СН₂ОСН₂(п-СН₃С₆Н₄),

СН₂ОСН(С₆Н₅)₂, СН₂O(СН₂)₂ОС₆Н₅ или CH₂N(CH₃)C₆H₅;

R¹+R²=СН=СН-СН=СН;

R³=Н или СН₃;

R⁴=Н, ОС₄Н₉, С₆Н₅, СН₂С₆Н₅, С(O)С₆Н₅ или ОАr;

Аr=С₆Н₅, C₆H₄R⁵ или C₆H₃(R⁵)₂;

R⁵=о-, м-, п-Сl, Вr, СН₃, С(СН₃)₃ или 1-C₁₀Н₇

Синтез этих соединений был осуществлен путем конденсации производных 2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Н)-она (2-тиоурацила) с замещенными 2-хлор-N-фенилацетамидами в среде безводного диметилформамида в присутствии карбоната калия в качестве основания. Химическое строение, выход и физико-химические свойства синтезированных соединений представлены в таблице 1. Структура соединений доказана методами ЯМР-спектроскопии, чистота и индивидуальность - методом тонкослойной хроматографии.

Следующие примеры иллюстрируют сущность изобретения.

Пример 1.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (1, X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅). К раствору 1,00 г (7,00 ммоль) 6-метил-2-тиоксо-2,3-дигидропиримидин-4(1Н)-она в 15 мл диметилформамида добавляют 1,16 г (8,40 ммоль) безводного калия карбоната и перемешивают при температуре 80°С в течение 1 ч. Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 1,92 г (7,35 ммоль) 2-хлор-N-(4-феноксифенил)ацетамида, перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч, фильтруют и фильтрат упаривают в вакууме. К полученному остатку добавляют 50 мл воды и 5 мл ледяной уксусной кислоты, образовавшийся осадок отфильтровывают и кристаллизуют из смеси изопропиловый спирт-диметилформамид. Получают 1,95 г (выход 76%) белого кристаллического вещества, Т. пл. 218-220°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 5,99 с (1Н, Н-5), 6,94-7,00 м (4Н, Н-3', Н-5' Н-2'', Н-6''), 7,07-7,11 м (1Н, Н-4''), 7,33-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,58-7,60 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,31 с (1Н, CO-NH).

Остальные соединения получают аналогично.

Пример 2.

2-{[4-Метил-6-оксо-5-(2-феноксиэтил)-1,6-дигидропиримидин-2-ил]сульфанил}-N-(4-феноксифенил)ацетамид (2), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=(СН₂)₂ОС₆Н₅, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅). Выход 63%, Т. пл. 212-213°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,24 с (3Н, СН₃), 2,82 т (2Н, J=6,80, СН₂-С⁵), 4,01 т (2Н, J=7,00, СН₂O), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 6,87-7,01 м (7Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6'', Н-2''', Н-4''', Н-6'''), 7,09 т (1Н, J=7,34, Н-4''), 7,24 т (2Н, J=7,83, Н-3''', Н-5'''), 7,35 т (2Н, J=7,95, Н-3'', Н-5''), 7,58-7,61 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,30 с (1Н, CO-NH), 12,73 уш. с (1Н, N³H).

Пример 3.

2-[(4,5-Диметил-6-оксо-1,6-дигидропиримдин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (3), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 67%, Т. пл. 239-241°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 1,86 с (3Н, СН₃-С⁵), 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 4,03 с (2Н, СН₂СО), 6,93-7,01 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,07-7,11 м (1Н, Н-4''), 7,33-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,56-7,60 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,28 с (1Н, CO-NH), 12,54 уш. с (1Н, N³H).

Пример 4.

2-[(4-Пропил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (4), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=С₃Н₇, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 73%, Т. пл. 218-220°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 0,75 т (3Н, J=7,34, СН₃), 1,50-1,55 м (2Н, СН₂-СН₃), 2,32 т (2Н, J=7,34, СН₂-С⁶), 4,04 с (2Н, СН₂СО), 5,95 уш. с (1Н, Н-5), 6,92-7,01 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,09 т (1Н, J=7,34, Н-4''), 7,32-7,38 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,57-7,61 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,26 с (1Н, CO-NH), 12,56 уш. с (1Н, N³H).

Пример 5.

2-[(4-Метил-5-бензил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (5), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=СН₂С₆Н₅, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 64%, Т. пл. 220-221°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,15 (3Н, СН₃-С⁶), 3,73 с (2Н, СН₂-С₆Н₅), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 6,93-7,00 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,07-7,17 м (4Н, Н-4'', Н-2''', Н-4''', Н-6'''), 7,22-7,25 м (2Н, Н-3''', Н-5'''), 7,33-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,56-7,60 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,29 уш. с (1Н, CO-NH), 12,73 уш. с (1Н, N³H).

Пример 6.

2-[(4-{[(4-Метилбензил)окси]метил}-6-оксо-1,6-дигидро-пиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (6), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₂ОСН₂(п-СН₃С₆Н₄), R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 68%, Т. пл. 220-221°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,26 с (3Н, СН₃), 4,04 с (2Н, СН₂СО), 4,24 с (2Н, СН₂-С⁶), 4,50 с (2Н, СН₂-С^1'''), 6,13 уш. с (1Н, Н-5), 6,94-6,98 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,08-7,14 м (3Н, Н-4'', Н-3''', Н-5'''), 7,20-7,22 м (2Н, Н-2''', Н-6'''), 7,33-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,54-7,56 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,24 с (1Н, CO-NH), 12,70 уш. с (1Н, N³H).

Пример 7.

2-({[4-(Дифенилметокси)метил]-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил}сульфанил)-N-(4-феноксифенил)ацетамид (7), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₂ОСН(С₆Н₅)₂, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 75%, Т. пл. 194-195°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 4,00 с (2Н, СН₂СО), 4,23 с (2Н, СН₂-С⁶), 5,59 с (1Н, СН), 6,21 уш. с (1Н, Н-5), 6,94-6,98 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,09-7,13 м (1Н, Н-4''), 7,21-7,25 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,30-7,40 м (10 Н, ароматические Н), 7,47-7,50 м (2Н, J=8,80, Н-2', Н-6'), 10,18 с (1Н, CO-NH), 12,77 уш. с (1Н, N³H).

Пример 8.

2-({6-Оксо-4-[(2-феноксиэтокси)метил]-1,6-дигидропиримидин-2-ил}сульфанил)-N-(4-феноксифенил)ацетамид (8), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₂O(СН₂)₂ОС₆Н₅, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 66%, Т. пл. 198-199°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 3,81 дд (2Н, J=5,38 и 3,67, С⁶-СН₂-O-СН₂), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 4,09 дд (2Н, J=5,38 и 3,42, С₆Н₅-O-СН₂), 4,33 с (2Н, СН₂-С⁶), 6,17 уш. с (1Н, Н-5), 6,90-7,00 м (7Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6'', Н-2''', Н-4''', Н-6'''), 7,07-7,11 м (1Н, Н-4''), 7,24-7,28 м (2Н, Н-3''', Н-5'''), 7,33-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,57-7,61 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,27 с (1Н, CO-NH), 12,74 уш. с (1Н, N³H).

Пример 9.

2-[(4-{[Метил(фенил)амино]метил}-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (9), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=CH₂N(CH₃)C₆H₅, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 70%, Т. пл. 192-193°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 3,02 с (3Н, N-CH₃), 4,08 с (2Н, СН₂СО), 4,28 с (CH₂-N), 5,79 с (1Н, Н-5), 6,58-6,63 м (3Н, Н-2''', Н-4''', Н-6'''), 6,94 дд (2Н, J=8,66 и 0,87, Н-2'', Н-6''), 6,99-7,01 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,07-7,13 м (3Н, Н-4'', Н-3''', Н-5''), 7,32-7,36 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,61-7,63 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,27 с (1Н, CO-NH), 12,66 уш. с (1Н, N³H).

Пример 10.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(3-метилфенокси)фенил]ацетамид (10), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₄(3-СН₃). Выход 62%, Т. пл. 212,5-214°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 2,26 с (3Н, СН₃-С^3'') 4,07 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 6,73-6,77 м (2Н, Н-2'', Н-6''), 6,90 д (1Н, J=7,47, Н-4''), 6,97 д (2Н, J=8,90, Н-3', Н-5'), 7,22 т (1Н, J=7,79, Н-5''), 7,59 д (2Н, J=8,74, Н-2', Н-6'), 10,29 с (1Н, CO-NH), 12,52 уш. с (1Н, N³H).

Пример 11.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[2-(2-метилфенокси)фенил]ацетамид (11), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₄(2-СН₃). Выход 61%, Т. пл. 225-227°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 2,17 с (3Н, СН₃-С^2''), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 6,82-6,88 м (3Н, Н-3', Н-5', Н-6''), 7,03-7,07 м (1Н, Н-4''), 7,17 тд (1Н, J=7,67 и 1,35, Н-5''), 7,27 д (1Н, J=7,47, Н-3''), 7,55 д (2Н, J=9,06, Н-2', Н-6'), 10,21 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 12.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(4-метилфенокси)фенил]ацетамид (12), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₄(4-СН₃). Выход 67%, Т. пл. 223-224°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 2,26 с (3Н, СН₃-С^4''), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 6,86 д (2Н, J=8,42, Н-2'', Н-6''), 6,93-6,95 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,15 д (2Н, J=8,27, Н-3'', Н-5''), 7,55-7,57 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,24 с (1Н, CO-NH), 12,52 уш. с (1Н, N³H).

Пример 13.

N-[4-(3,4-Диметилфенокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (13), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₃(3,4-

СН₃)₂. Выход 62%, Т. пл. 212,5-214°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 2,17 с (6Н, СН₃-С^3'', СН₃-С^4''), 4,08 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 6,69 дд (1Н, J=8,19 и 2,62, Н-6''), 6,78 д (1Н, J=2,54, Н-2''), 6,92-6,94 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,09 д (1Н, J=8,27, Н-5''), 7,54-7,56 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,23 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с(1Н, N³H).

Пример 14.

N-[4-(3,4-Дихлорфенокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (14), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-OC₆H₃(3,4-Cl₂. Выход 60%, Т. пл. 219,5-222°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 4,08 с (2Н, СН₂СО), 5,99 уш. с (1Н, Н-5), 6,94 дд (1Н, J=8,90 и 2,62, Н-6''), 7,05-7,07 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,19 д (1Н, J=2,86, Н-2''), 7,56 д (1Н, J=8,90, Н-5''), 7,63 д (2Н, J=8,90, Н-2', Н-6'), 10,32 с (1Н, CO-NH), 12,51 уш. с (1Н, N³H).

Пример 15.

N-[4-(4-трет-Бутилфенокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (15), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₄(4-С(СН₃)₃. Выход 60%, Т. пл. 220-222°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 1,26 с (9Н, С(СН₃)₃), 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 6,87-6,89 м (2Н, Н-2'', Н-6''), 6,95-6,97 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,34-7,36 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,56-7,58 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,24 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 16.

N-[4-(4-Бромфенокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (16), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₄(4-Вr). Выход 61%, Т. пл. 229-231°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃), 4,07 с (2Н, СН₂СО), 6,00 с (1Н, Н-5), 6,90-6,94 м (2Н, Н-2'', Н-6''), 7,00-7,04 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,49-7,51 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,58-7,61 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,29 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 17.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(3-метил-4-хлорфенокси)фенил]ацетамид (17), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₃(3-СН₃, 4-Cl. Выход 63%, Т. пл. 224-226°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 2,28 с (3Н, СН₃-С^3''), 4,07 с (2Н, СН₂СО), 6,01 уш. с (1Н, Н-5), 6,80 дд (1Н, J=8,74 и 3,02, Н-6''), 6,96-7,01 м (3Н, Н-3', Н-5', Н-2''), 7,36 д (1Н, J=8,74, Н-5''), 7,59 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,27 с (1Н, CO-NH), 12,51 уш. с (1Н, N³H).

Пример 18.

N-[4-(Бензилокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигид-ропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (18), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОСН₂С₆Н₅. Выход 72%, Т. пл. 246-247°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 4,03 с (2Н, СН₂СО), 5,06 с (2Н, ОСН₂), 6,01 с (1Н, Н-5), 6,95-6,97 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,29-7,48 м (7Н, Н-2', Н-6', Н-2''-Н-6''), 10,09 с (1Н, CO-NH), 12,53 уш. с (1Н, N³H).

Пример 19.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-фенилацетамид (19), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹⁼Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=Н. Выход 71%, Т. пл. 232-234°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,13 с (3Н, СН₃), 4,07 с (2Н, СН₂СО), 5,99 уш. с (1Н, Н-5), 7,05 т (1Н, J=7,31, Н-4'), 7,30 т (2Н, J=7,87, Н-3', Н-5'), 7,57 д (2Н, J=7,95, Н-2', Н-6'), 10,22 с (1Н, CO-NH), 12,51 с (1Н, N³H).

Пример 20.

N-(4-Бутоксифенил)-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (20), соответствующий общей формуле I, где, X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₄Н₉. Выход 75%, Т. пл. 218-220°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 0,91 т (3Н, J=7,39, СН₃-CН₂), 1,37-1,46 м (2Н, СН₃-СН₂СН₂,-СН₂O), 1,62-1,69 м (2Н, СН₃-СН₂-СН₂-СН₂O), 2,14 с (3Н, СН₃-С⁶), 3,91 т (2Н, J=6,44, СН₃-СН₂-СН₂-СН₂О) 4,03 с (2Н, СН₂СО), 5,99 с (1Н, Н-5), 6,85-6,87 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,45-7,47 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,08 с (1Н, CO-NH), 12,47 уш. с (1Н, N³H).

Пример 21.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(нафт-1-илокси)фенил]ацетамид (21), соответствующий общей формуле I, где, X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₁₀Н₇. Выход 69%, Т. пл. 232,5-234,5°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,15 с (3Н, СН₃), 4,09 с (2Н, СН₂СО), 6,01 уш. с (1Н, Н-5), 6,90 д (1Н, J=7,63, Н-2''), 7,05 д (2Н, J=8,90, Н-3', Н-5'), 7,42 т (1Н, J=7,95, Н-3''), 7,51-7,68 м (5Н, Н-2', Н-6', Н-4'', Н-6'', Н-7''), 7,95 д (1Н, J=7,63, Н-5''), 8,12 д (1Н, J=7,79, Н-8''), 10,29 с (1Н, CO-NH), 12,56 уш. с (1Н, N³H).

Пример 22.

N-Бифенил-4-ил-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (22), соответствующий общей формуле I, где, X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-С₆Н₅. Выход 75%, Т. пл. 267-268,5°С.¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,15 с (3Н, СН₃), 4,09 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 7,30-7,34 м (1Н, Н-4''), 7,44 т (2Н, J=7,63, Н-3'', Н-5''), 7,62-7,68 м (6Н, Н-2', Н-3', Н-5', Н-6', Н-2'', Н-6''), 10,34 с (1Н, CO-NH), 12,52 уш. с (1Н, N³H).

Пример 23.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(3-феноксифенил)ацетамид (23), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=3-ОС₆Н₅. Выход 61%, Т. пл. 224-225°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,11 с (3Н, СН₃), 4,04 с (2Н, СН₂СО), 5,99 уш. с (1Н, Н-5), 6,72 дт (1Н, J=5,64 и 2,90, Н-4'), 7,02 д (2Н, J=7,63, Н-2'', Н-6''), 7,14 т (1Н, J=7,39, Н-4''), 7,28-7,32 м (3Н, Н-2', Н-5', Н-6'), 7,39 т (2Н, J=8,03, Н-3'', Н-5''), 10,31 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 24.

2-[(6-Оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (24), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=Н, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 79%, Т. пл. 209,5-211,5°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 4,11 с (2Н, СН₂СО), 6,14 уш. с (1Н, Н-5), 6,95-7,01 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,09 т (1Н, J=7,31, Н-4''), 7,33-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,59 д (2Н, J=9,06, Н-2', Н-6'), 7,87 уш. с (1Н, Н-6), 10,27 с (1Н, CO-NH), 12,73 уш. с (1Н, N³H).

Пример 25.

R,S-2-[(4-Meтил-6-oкco-1,6-дигидpoпиpимидин-2-ил)cyльфaнил]-N-(4-феноксифенил)пропанамид (25), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=R³=СН₃, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 70%, Т. пл. 206-207,5°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 1,57 д (3Н, J=7,15, СН₃-СН), 2,18 с (3Н, СН₃-С⁶), 4,62 к (1Н, J=6,99, СН₃-СН), 6,02 уш. с (1Н, Н-5), 6,94-7,01 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,07-7,11 м (1Н, Н-4''), 7,32-7,37 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,59-7,63 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,31 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 26.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(фенилкарбонил)фенил]ацетамид (26), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-С(O)С₆Н₅. Выход 62%, Т. пл. 209-210°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,18 с (3Н, СН₃), 4,13 с (2Н, СН₂СО), 6,01 уш. с (1Н, Н-5), 7,52-7,79 м (9Н, ароматические Н), 10,64 с (1Н, CO-NH), 12,53 уш. с (1Н, N³H).

Пример 27.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксибензил)ацетамид (27), соответствующий общей формуле I, где, X=СН₂, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 74%, Т. пл. 214-216°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,12 с (3Н, СН₃), 3,91 с (2Н, СН₂СО), 4,29 д (2Н, J=5,87, CH₂NH), 5,99 уш. с (1Н, Н-5), 6,93-6,99 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,10-7,15 м (1Н, Н-4''), 7,27 д (2Н, J=8,62, Н-2', Н-6'), 7,36-7,41 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 8,62 т (1Н, J=5,78, CH₂NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 28.

2-[(4-Оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (28), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹+R²=СН=СН-СН=СН, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 68%, Т. пл. 247-248,5°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДMCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 4,18 с (2Н, СН₂СО), 6,94-7,00 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,08 т (1Н, J=7,49, Н-4''), 7,32-7,36 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,39-7,42 м (1Н, Н-6), 7,49 д (1Н, J=8,11, H-8), 7,72-7,76 м (1Н, Н-7), 7,62 д (2Н, J=9,06, Н-2', Н-6'), 8,04 дд (1Н, J=7,79 и 1,27, Н-5), 10,37 с (1Н, CO-NH), 12,67 уш. с (1Н, N³H).

Пример 29.

2-[(4-Этил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (29), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=С₂Н₅, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 60%, Т. пл. 211-212°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 1,06 т (3Н, J=7,55, СН₃), 2,40 к (2Н, J=7,47, СН₂), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 5,96 уш. с.(1Н, Н-5), 6,94-7,00 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,09 т (1Н, J=7,39, Н-4''), 7,35 т (2Н, J=7,95, Н-3'', Н-5''), 7,58 д (2Н, J=8,90, Н-2', Н-6'), 10,24 с (1Н, CO-NH), 12,51 уш. с (1Н, N³H).

Пример 30.

2-{[4-Изопропил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (30), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН(СН₃)₂, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 65%, Т. пл. 220-221°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 1,06 с (3Н, СН₃), 1,08 с (3Н, СН₃), 2,61 септ (1Н, J=6,81, СН), 4,05 с (2Н, СН₂СО), 5,93 уш. с (1Н, Н-5), 6,93-6,99 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,08 т (1Н, J=7,39, Н-4''), 7,35 т (2Н, J=7,95, Н-3'', Н-5''), 7,59 д (2Н, J=8,90, Н-2¹, Н-6'), 10,23 с (1Н, CO-NH), 12,49 уш. с (1Н, N³H).

Пример 31.

N-(4-Бензилфенил)-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (31), соответствующий общей формуле I, где, X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-СН₂С₆Н₅. Выход 79%, Т. пл. 220-222°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,13 с (3Н, СН₃), 3,87 с (2Н, СН₂), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 5,99 уш. с (1Н, Н-5), 7,14-

7,20 м (5Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-4'', Н-6''), 7,24-7,28 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,49 д (2Н, J=8,42, Н-2', Н-6'), 10,18 с (1Н, CO-NH), 12,51 уш. с (1Н, N³H).

Пример 32.

2-[(4-Амино-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-(4-феноксифенил)ацетамид (32), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=NH₂, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₅. Выход 69%, Т. пл. 251-253°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д., J, Гц: 3,95 с (2Н, СН₂СО), 5,06 с (1Н, Н-5), 6,53 уш. с (2Н, NH₂), 6,94-7,00 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,09 т (1Н, J=7,39, Н-4''), 7,35 т (2Н, J=7,95, Н-3'', Н-5''), 7,60 д (2Н, J=8,90, Н-2¹, Н-6'), 10,12 с (1Н, CO-NH), 11,51 уш. с (1Н, N³H).

Пример 33.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(4-хлорфенокси)фенил]ацетамид (33), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-OC₆H₄(4-Cl). Выход 73%, Т. пл. 216-218°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДMCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,15 с (3Н, СН₃), 4,07 с (2Н, СН₂СО), 5,99 с (1Н, Н-5), 6,95-7,05 м (4Н, Н-3', Н-5', Н-2'', Н-6''), 7,37-7,42 м (2Н, Н-3'', Н-5''), 7,58-7,63 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,30 с (1Н, CO-NH), 12,50 уш. с (1Н, N³H).

Пример 34.

2-[(4-Метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]-N-[4-(3-хлорфенокси)фенил]ацетамид (34), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-OC₆H₄(3-Cl). Выход 74%, Т. пл. 226-228°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДMCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,15 с (3Н, СН₃), 4,08 с (2Н, СН₂СО), 6,01 с (1Н, Н-5), 6,92 ддд (1Н, J=8,25, 2,38 и 0,83, Н-6''), 6,98 т (1Н, J=2,15, Н-2''), 7,03-7,08 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,14 ддд (1Н, J=8,00, 1,99 и 0,83, Н-4''), 7,37 т (1Н, J=8,16, Н-5''), 7,60-7,66 м (2Н, Н-2', Н-6'), 10,32 с (1Н, CO-NH), 12,53 уш. с (1Н, N³H).

Пример 35.

N-[4-(3-Бромфенокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (35), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₄(3-Вr). Выход 70%, Т. пл. 226-228°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДMCO-d₆), δ, м.д., J, Гц: 2,15 с (3Н, СН₃), 4,07 с (2Н, СН₂СО), 6,01 с (1Н, Н-5), 6,96 ддд (1Н, J=7,98, 2,34 и 1,05, Н-6''), 7,04-7,06 м (2Н, Н-3', Н-5'), 7,11 т (1Н, J=2,02, Н-2''), 7,27-7,33 м (2Н, Н-4'', Н-5''), 7,62 д (2Н, J=8,99, Н-2', Н-6'), 10,30 с (1Н, CO-NH), 12,52 уш. с (1Н, N³H)

Пример 36.

N-[4-(3,5-Диметилфенокси)фенил]-2-[(4-метил-6-оксо-1,6-дигидропиримидин-2-ил)сульфанил]ацетамид (36), соответствующий общей формуле I, где X=связь, R¹=Н, R²=СН₃, R³=Н, R⁴=4-ОС₆Н₃(3,5-(СН₃)₂. Выход 80%, Т. пл. 241-243°С. ¹Н ЯМР-спектр (400 МГц, ДМСО-d6), δ, м.д., J, Гц: 2,15 с (3Н, СН₃-С⁶), 2,22 с (6Н, СН₃-С^3'', СН₃-С^5''), 4,06 с (2Н, СН₂СО), 6,00 уш. с (1Н, Н-5), 6,56 с (2Н, Н-2'', Н-6''), 6,73 с (1Н, Н-4''), 6,97 д (2Н, J=8,99, Н-3', Н-5'), 7,57 д (2Н, J=8,99, Н-2', Н-6'), 10,24 с (1Н, CO-NH), 12,53 уш. с (1Н, N³H).

Физико-химические свойства синтезированных соединений 1-36 представлены в Таблице 1.

M_r - относительная молекулярная масса

Пример 37.

Методы анализа синтезированных соединений.

¹Н ЯМР-спектры соединений регистрировали на спектрометре Bruker Avance 400 (400 МГц) в DMSO-d6 с использованием тетраметилсилана в качестве внутреннего стандарта. В описании спектров использованы следующие стандартные сокращения: м.д., миллионные доли; уш., уширенный; с, синглет; д, дублет; дд, дублет дублетов; ддд, дублет дублет дублетов; т, триплет; к, квартет; м, мультиплет). Температуры плавления веществ определяли в стеклянных капиллярах на приборе Mel-Temp 3.0 (Laboratory Devices Inc., US). Тонкослойную хроматографию выполняли на пластинах Merck TLC Silica gel 60 F₂₅₄ с проявлением в ультрафиолетовом свете с использованием УФ-лампы VL-6.LC (Франция) при длине волны 254 нм.

Пример 38.

Определение цитотоксичности соединений.

Цитотоксичность соединений для клеток линии НЕК293 (клетки почки эмбриона мыши) [Graham F. L., Smiley J., Russell W. С, Nairn R. // J. Gen. Virol. - 1977. - Vol. 36. - P. 59-74] оценивали с помощью методов прижизненного окрашивания данных клеток бромидом 3-[4,5-диметилтиазолил-2]-2,5-дифенилтетразолия (МТТ) [Mosmann Т. // J. Immunol. Methods. - 1983. - Vol. 65. - P. 55-63] или трипановым синим [Strober W. // Curr. Prot. Immunol. - 2001. - App.3В].

Клетки линии HEK293 культивировали на среде DMEM, содержащей 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 4 мМ L-глутамина, 1 мМ пирувата натрия, стрептомицин и пенициллин в концентрации 100 мкг/мл и 100 ед/мл, соответственно. К клеткам НЕК293 добавляли исследуемые соединения, растворенные в диметилсульфоксиде (ДМСО) в диапазоне концентраций 2,5-200 мкМ.

Контролем служили клетки, к которым вместо исследуемых соединений добавляли соответствующее количество ДМСО.

Прижизненное окрашивание клеток НЕК293 МТТ для оценки их жизнеспособности проводили через 48 ч после внесения веществ. Токсичность различных доз препарата определяли по жизнеспособности клеток относительно контроля. Таким образом, для исследуемых соединений была определена концентрация, при которой количество живых клеток сокращается на 50% (ЦТД₅₀). ЦТД₅₀ исследуемых производных 2-тиоурацила приведены в Таблице 2.

Пример 39.

Определение противоаденовирусной активности in vitro.

Было изучено влияние исследуемых соединений на репликацию аденовирусов в культуре клеток НЕК293.

В ходе оценки противоваденовирусной активности N-арилацетамидных производных 2-тиоурацила клетки линии НЕК293 заражали рекомбинантным аденовирусом типа 5 человека, экспрессирующим усиленный зеленый флуоресцентный белок (HAdV 5-eGFP) [Шмаров М.М., Черенова Л.В., Шашкова Е.В., Логунов Д.Ю., Верховская Л.В., Капитонов А.В., Неугодова Г.Л., Доронин К.К., Народицкий Б.С.// Мол. ген. микробиол. вирусол. - 2002. - № 2. - С.30-35; Logunov D.Y., Zubkova O.V., Karyagina-Zhulina A.S., Shuvalova E.A., Karpov A.P., Shmarov M.M., Tutykhina I.L., Alyapkina Y.S., Grezina N.M., Zinovieva N.A., Ernst L.K., Gintsburg A.L., Naroditsky B.S. //J. Virol. - 2007. - Vol. 8. - P. 9641-9652] с множественностью инфекции 1 ФОЕ/клетку. Через 3 ч после инфицирования добавляли исследуемые соединения в концентрации 25 мкМ. В качестве отрицательного контроля использовали ДМСО. Концентрация ДМСО во всех образцах не превышала 0,1%. Через 24 ч ингибиторную активность соединений оценивали по определению количества копий генома HAdV 5-eGFP методом количественной ПЦР [Heim A., Ebnet С, Harste G., Pring-Akerblom P. // J. Med. Virol. - 2003. - Vol. 70. - P. 228-239]. Было выявлено, что соединения 3, 14, 15, 17, 21 и 34 проявляют выраженную ингибиторную активность в отношении репликации HAdV 5-eGFP (фиг.1).

Для соединений 3, 14, 15, 17, 21 и 34, проявляющих ингибиторную активность в отношении аденовирусов человека, была определена концентрация полумаксимального ингибирования (ИД₅₀), при которой наблюдается снижение относительного количества копий генома HAdV 5-eGFP на 50% по сравнению с контролем. Клетки линии НЕК293 заражали HAdV 5-eGFP с множественностью инфекции 1 ФОЕ/клетку. Через 3 ч после инфицирования добавляли исследуемые соединения в концентрации 0,5, 2,5, 5, 10, 15 и 25 мкМ. Концентрация ДМСО во всех образцах не превышала 0,1%. Через 24 ч ингибиторную активность соединений оценивали по определению количества копий генома HAdV 5-eGFP методом количественной ПЦР и построению по полученным результатам дозозависимой кривой. Индекс селективности (ИС) рассчитывали как отношение ЦТД₅₀ соединения к его ИД₅₀. Данные по противоаденовирусной активности N-арилацетамидных производных 2-тиоурацила in vitro приведены в Таблице 3. На основании количественных показателей ингибирования можно судить об эффективности противовирусного действия ряда заявляемых соединений, заключающейся в высокой степени подавления репликации HAdV 5-eGFP в культуре клеток НЕК293.

В результате проведенных исследований открыт новый класс ненуклеозидных ингибиторов вирусной репродукции, демонстрирующий высокую активность в отношении аденовирусов человека in vitro.

Приведенные примеры подтверждают выполнение поставленной задачи, а именно, создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения аденовирусной инфекции.

Промышленная применимость Приведенные примеры также подтверждают промышленную применимость заявляемого изобретения.

Перечень сокращений

HAdV - аденовирус человека

HAdV 5-eGFP - рекомбинантный аденовирус типа 5 человека, экспрессирующий усиленный зеленый флуоресцентный белок

НЕК293 - линия клеток почки эмбриона мыши

ВИЧ-1 - вируса иммунодефицита человека

ДМСО - диметилсульфоксид

ДМФА - N, N-диметилформамид

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИД₅₀- концентрация полумаксимального ингибирования

ИС - индекс селективности

МТТ - бромид 3-[4,5-диметилтиазолил-2]-2,5-дифенилтетразолия

ПЦР - полимеразная цепная реакция

УФ - ультрафиолетовый

ФОЕ - фокус-образующая единица

ЦТД₅₀ - концентрация, при которой количество живых клеток сокращается на 50%

ЯМР - ядерный магнитный резонанс.

Производные 2-тиоурацила, обладающие активностью в отношении аденовирусов человека общей формулы:

где: X = связь или СН₂;

R¹=Н, СН₃, СН₂С₆Н₅ или (СН₂)₂ОС₆Н₅;

R²=Н, СН₃, С₂Н₅, С₃Н₇, СН(СН₃)₂, СН₂ОСН₂(п-СН₃С₆Н₄),

СН₂ОСН(С₆Н₅)₂, CH₂O(СН₂)₂ОС₆Н₅ или CH₂N(CH₃)C₆H₅;

R¹+R²=СН=СН-СН=СН;

R³=Н или СН₃;

R⁴=Н, ОС₄Н₉, С₆Н₅, СН₂С₆Н₅, С(O)С₆Н₅ или OAr;

Ar=С₆Н₅, C₆H₄R⁵ или C₆H₃(R⁵)₂;

R⁵=о-, м-, п-Cl, Br, СН₃, С(СН₃)₃ или 1-С₁₀Н₇.