Средство для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способ его получения



Средство для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способ его получения
Средство для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способ его получения
Средство для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способ его получения
Средство для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способ его получения
Средство для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способ его получения

Владельцы патента RU 2673537:

Суходоло Ирина Владимировна (RU)
Порохова Екатерина Даниловна (RU)
Решетов Ярослав Евгеньевич (RU)
Скороходова Марина Геннадьевна (RU)
Авдеева Елена Юрьевна (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Сибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СибГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению средства для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге. Применение экстракта листьев соссюреи спорной (Saussurea Controversa DC), полученного путем трехкратной экстракции измельченных до 3-6 мм листьев соссюреи спорной 40% водным этанолом в соотношении 1:15 при 80°С в течение 60 мин, удаление экстрагента, высушивания, для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге. Средство, полученное вышеописанным способом, эффективно для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге. 5 ил., 2 табл.

 

Изобретения относятся к фармацевтической промышленности, конкретно к средствам для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани и способам их получения.

Остеомиелит - инфекционный воспалительный процесс, поражающий все элементы кости, костный мозг и нередко характеризующееся генерализацией. К увеличению числа больных с хроническим остеомиелитом в последнее время приводят рост травматизма и широкое использование металлоостеосинтеза в лечении переломов. Несмотря на достигнутые успехи в лечении данного заболевания, частота рецидивов достигает от 10 до 40% и это сопряжено с повторными операциями. При этом наблюдается тенденция к смещению от ограниченных форм заболевания в сторону более тяжелых проявлений [9, 18, 19]. Известно, что развитие остеомиелита сопровождается как метаболическими нарушениями в органической основе костной ткани и костном мозге, так и сосудистыми и иммунными нарушениями [1, 8].

Современное лечение остеомиелита направлено по трем звеньям: воздействие на макроорганизм (консервативная терапия), на микроорганизм (антибиотикотерапия) и на местный очаг (хирургическое удаление инфицированной ткани). По последним двум направлениям исследования ведутся активно. Так, авторами описан ряд оптимальных способов антибиотикотерапии [3, 6, 15] и хирургической санации [10, 11]. Данные способы лечение направлены на устранение инфицирующего агента, либо дефектов костной ткани. В то же время, в патогенезе остеомиелита значение имеют следующие изменения: ослабление иммунной защиты (в том числе, вследствие нарушения функции костного мозга), нарастание воспалительного процесса, нарушение кровоснабжения и регенерации костной ткани в зоне поражения. Применение комплексных средств консервативной терапии остеомиелита мало исследовано, в то же время, их применение при остеомиелите является актуальным и необходимым [4, 5, 7, 17].

Предложены несколько лекарственных средств для лечения остеомиелита антиоксидантами. Так, авторами выявлено изменение показателей перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной системы в острой стадии заболевания и их нормализация в динамике комплексной патогенетической терапии синтетическими антиоксидантами [12, 13]. Экспериментально показана эффективность применения при остеомиелите иммуномодулирующих средств: трансфер фактора молозива [16] и средства на основе прополиса [2]. Исследовано влияние β-аланиламида бетулоновой кислоты при остеомиелите, действие которого ускоряет регенерацию костной ткани [14].

Согласно стандартам оказания медицинской помощи при хирургических инфекциях, терапия остеомиелита сопровождается длительным применением антибиотиков, негормональных противовоспалительных средств (НПВС), иммуномодуляторов, обладающих рядом побочных эффектов и обусловливающих высокую ксенобиотическую нагрузку на организм.

Поэтому, поиск лекарственных средств для лечения остеомиелита, является актуальной проблемой современной медицины. В этом плане перспективны лекарственные средства на основе природных биологически активных веществ, обладающие полимодальным фармакологическим действием, сочетанным с низкой токсичностью и редким индуцированием аллергических реакций.

Ранее для лечения остеомиелита на основе растительных экстрактов не были описаны.

Новый технический результат состоит в расширении арсенала средств консервативной терапии остеомиелита, обладающих высокой активностью и низкой токсичностью, а так же способов их получения.

Поставленную задачу решают применением экстракта из листьев соссюреи спорной (Saussurea controversa DC сем. Asteraceae) для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге и регенерации костной ткани.

Способ получения экстракта соссюреи спорной заключается в экстракции листьев, измельченных до 3-6 мм 40% этанолом при температуре 80°C трехкратно в течение 60 мин при соотношении сырье-экстрагент 1:15 с последующим удалением экстрагента под вакуумом до получения сухого остатка.

Фармакологические испытания

В качестве объекта исследования использовали листья S.controversa, собранные в июле 2013 г в местах естественного произрастания в Иркутской области. Воздушно-сухой растительный материал с влажностью 6,3±0,1% измельчали и просеивали через сита с диаметром отверстий 2-6 мм. Экстракт получали путем обработки сырья 40% этанолом методом мацерации при нагревании. Извлечения концентрировали под вакуумом досуха при температуре не выше 50°C.

Эксперименты выполняли на белых крысах самцах линии Вистар массой 280-300 г, количество животных в каждой группе - 6. Животных содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. При проведении экспериментов руководствовались принципами, изложенными в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинской декларации. Экспериментальный остеомиелит развивали с применением ранее разработанной модели (Способ моделирования травматического остеомиелита, патент №2584402 от 21.04.2016). Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета программ статистического анализа Statistica 6,0. Для оценки значимости отличий между выборками использовали непараметрический критерий Манна-Уитни с вычислением среднего арифметического значения М и его стандартной ошибки т.

Первичную оценку эффективности экстракта при экспериментальном остеомиелите проводили с помощью метода трехфазной сцинтиграфии. Животных распределяли на три группы: интактные (1); с экспериментальным остеомиелитом, не леченные (2); с экспериментальным остеомиелитом, леченные экстрактом соссюреи спорной (3). У крыс 2 и 3 групп моделировали травматический остеомиелит правой бедренной кости. С 7-го дня эксперимента животным 3 группы внутрижелудочно вводили экстракт один раз в сутки в течение трех недель в виде водной суспензии в дозе 100 мг/кг. Трехфазную сцинтиграфию с 99mТс-технефор (ООО «Диамед», Россия, 18,5 МБк) выполняли на 7 и 28 сутки эксперимента на однофотонном эмиссионном компьютерном томографе Philips BrightView (США). Исследование включало в себя радионуклидную ангиографию, мягкотканную фазу (blood-pool) и костную фазу исследования (остеосцинтиграфию).

В результате исследования на 7 сутки в группе здоровых крыс определялось одновременное поступление индикатора в магистральные сосуды задних конечностей, отсутствие участков гиперфиксации препарата в мягкотканную и костные фазы исследования. В 2 и 3 группах регистрировалось ускоренное и повышенное поступление препарата в артерии на стороне поражения, а также определялись участки гиперфиксации индикатора в мягкотканую и костную фазы исследования, что расценивалось нами как проявление остеомиелита.

На 28-е сутки у крыс второй группы повышенное поступление препарата на стороне пораженной конечности сохранялось во все фазы сцинтиграфического исследования. В то же время у крыс 3 группы происходило уменьшение фиксации препарата в мягкотканую фазу на 44%, что свидетельствовало о положительной динамике воспалительного процесса в окружающих тканях пораженной конечности (фиг. 1). В костную фазу исследования у крыс 3 группы происходило снижение концентрации препарата, поступающего в правую конечность, на 64% в сравнении с группой 2 (фиг. 2). Полученный результат в виде уменьшения степени аккумуляции радиофармацевтического препарата в 3 группе животных указывает на снижение костного метаболизма и гиперемии мягких тканей, что отражает положительную динамику течения остеомиелита при применении экстракта S. controversa.

Влияние экстракта на состояние костного мозга и костной ткани исследовали на фоне антибиотикотерапии (Цефазолин), рекомендуемой стандартом лечения.

Для этого крыс распределяли на четыре группы: интактные (1); с экспериментальным остеомиелитом, не леченные (2); с экспериментальным остеомиелитом, леченные антибиотиком широкого спектра цефазолином (3); с экспериментальным остеомиелитом, леченные экстрактом S.controversa и антибиотиком (4). Экстракт вводили в желудок в виде водной суспензии в дозе 100 мг/кг в течение 14 дней. Животным 3-5 групп внутримышечно вводили антибиотик цефалоспориновой группы Цефазолин («Рузфарма», Россия) в дозе 50 мг/кг в течение пяти дней. На 21 сутки животных выводили из эксперимента при использовании CO2-асфиксии.

Состояние костномозгового кроветворения у крыс оценивали путем подсчета общего количества миелокариоцитов (ОКК) на бедренную кость (106/бедро) и миелограмм на мазках. Для чего, костный мозг из канала левой бедренной кости вымывали 1 мл 5% раствора уксусной кислоты и ресуспендировали. Дополнительное разведение проводили с помощью лейкоцитарного меланжера (конечное разведение в 20000 раз). Вычисление ОКК проводили с помощью камеры Горяева. Миелограммы подсчитывали на мазках, приготовленных из гомогената фрагмента миелоидной ткани, взятой из сегмента грудины, и аутологичной сыворотки (1:1), комбинированно окрашенных фиксатором-красителем Май-Грюнвальда и азур II-эозином по Нохту. Процентное содержание отдельных клеточных форм при подсчете миелограмм переводили в абсолютные цифры - ×106 клеток на бедро.

Для гистологического исследования правую бедренную кость декальцинировали, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в парафин. Депарафинированные срезы толщиной 7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином.

При наблюдении клинической картины к 10 дню у всех крыс группы 2 появилась боль при пальпации, увеличение объема коленного сустава в 2-3 раза по сравнению со здоровой конечностью, а также наблюдали симптомы разлитого воспаления окружающих тканей. В группе 3 у 5-ти животных происходило расхождение краев раны и наблюдалось серозное, а затем гнойное отделяемое. В то же время, у 2-х животных в группе 4 воспаление локализовалось в виде инкапсулированных абсцессов в области правой бедренной кости, а у 4-х рана затягивалась. Таким образом, применение экстракта S.controversa способствовало локализации воспалительного процесса и положительной динамике при остеомиелите.

ОКК крыс с экспериментальным остеомиелитом (группа 2), в том числе леченных только антибиотиком (группа 3), снижалось на 46 и 58% соответственно в сравнении с ОКК интактных животных (табл.1). Введение экстракта S.controversa заболевшим крысам на фоне антибиотикотерапии (группа 4) способствовало достоверной нормализации общего количества ядросодержащих клеток костного мозга, что свидетельствует о большей эффективности сочетанной терапии в группе 4 по сравнению с монотерапией (группа 3).

В результате развития экспериментального остеомиелита в костном мозге экспериментальных животных (группа 2) наблюдали угнетение гранулоцитарного ростка, о чем свидетельствовало достоверное уменьшение количества молодых форм клеток в среднем на 70% и угнетение эритроидного ростка, вследствие чего общее число эритрокариоцитов уменьшалось на 40%. Кроме того, у крыс в группе 2 в четыре раза возрастало количество мегакариоцитов, а число лимфоцитов снижалось в три раза в сравнении с интактной группой животных. При этом в костном мозге крыс группы 2 наблюдали большое количество разрушенных лимфоцитов.

После монотерапии антибиотиком (группа 3), в костном мозге крыс с экспериментальным остеомиелитом сохранялись изменения со стороны гранулоцитарного ростка. Отмечено достоверное уменьшение количества молодых форм клеток: количество миелобластов уменьшалось на 88%, промиелоцитов - на 73%, миелоцитов - на 60%, сокращалось количество митозов на 83%. Лейкоэритробластическое отношение (ЛЭО) клеток костного мозга смещалось в сторону уменьшения клеток миелоидного ряда. Количество лимфоцитов в костном мозге экспериментальных животных после антибиотикотерапии еще более снижалось.

После курсового применения экстракта 5. controversa на фоне антибиотикотерапии значительно возрастало количество молодых и зрелых форм гранулоцитов и лимфоцитов до показателей в интактной группе. Кроме того, после терапии экстрактом S.controversa наблюдали достоверное увеличение количества зрелых форм эритрокариоцитов по сравнению с животными, получавшими только антибиотикотерапию.

Полученные данные позволяют говорить о стимуляции гранулопоэза и коррекции клеточных показателей костного мозга, измененных в результате антибиотикотерапии экспериментального остеомиелита, при курсовом применении экстракта S. controversa.

При морфологическом исследовании в диафизе бедренной кости крыс, на 21 сутки после моделирования остеомиелита без лечения (группа 2), отмечались признаки выраженного воспаления. В костномозговых пространствах - лейкоцитарная инфильтрация и гиперемия сосудов. Выявлялся некроз и аутолиз костных пластинок кортикального и трабекулярного слоев с образованием секвестров. Нормальное строение остеонов было нарушено, гаверсовы каналы частично запустевали. Наряду с признаками воспаления в кости отмечались не резко выраженные признаки регенерации: разрастание грануляционной ткани и активация остеобластов в области костных дефектов (Фиг. 3).

В группе крыс, получавших антибиотикотерапию цефазолином (группа 3), воспаление имело разлитой характер, однако, его интенсивность была ниже, чем у крыс группы 2. Сохранялась дискомплексация костных пластинок. Процесс резорбции некротизированной костной ткани преобладал над процессом остеогенеза (Фиг. 4).

В группах крыс, получавших терапию антибиотиком в комплексе с экстрактом S. controversa (группа 4) отмечали снижение интенсивности воспалительных процессов. Признаки регенераторных процессов: активация эндооста, периоста, появление остеобластических "почек", формирование грануляционной ткани, были повсеместно видны на протяжении бедренной кости, но более выражены в эпифизарном отделе. Большинство костных пластин имели нормальное строение и равномерную минерализацию (Фиг. 5).

Таким образом, при курсовом применении экстракта S. controversa снижается интенсивность воспалительных процессов в костной ткани и костном мозге, усиливаются гранулопоэз и регенерация костной ткани.

Обоснование способа получения экстракта соссюреи спорной.

Экстракцию сырья осуществляли методом многократной мацерации при нагревании, моделируя технологический процесс в лабораторном реакторе (Radley's, Великобритания), снабженном обогревающейся водяной рубашкой и мешалкой RZR 2020 (Heidolph, Германия) при скорости 300 об/мин. Экстракты, полученные после каждого приема мацерации, объединяли, экстрагент удаляли в роторном испарителе при температуре не выше 50°C, сконцентрированный густой экстракт высушивали методом конвективной сушки до содержания влаги не более 5%. Выбор оптимальных параметров экстракции (соотношение сырья и экстрагента, степень измельченности сырья, время, температура, кратность экстракции) осуществляли после определения выхода экстрактивных веществ (ЭВ).

Опыт 1. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 30 мин. Общий выход ЭВ составил 19,70 г (39,40%, табл. 2).

Опыт 2. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 21,56 г (45,10%).

Опыт 3. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 90 мин. Общий выход ЭВ составил 21,18 г (42,37%).

Опыт 4. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Экстракцию проводили дважды, второй раз в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 19,58 г (39,20%).

Опыт 5. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Экстракцию проводили 3 раза при температуре 80°C, 60 мин. Общий выход ЭВ составил 22,85 г (45,70%).

Опыт 6. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:20. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:15. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 22,47 г (44,95%).

Опыт 7. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:10. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:8. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 17,21 г (34,40%).

Опыт 8. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 90°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 21,80 г (43,60%).

Опыт 9. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 70°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 20,71 г (41,42%).

Опыт 10. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 60°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 19,43 г (38,86%).

Опыт 11. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Второй и третий раз экстракцию проводили в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 23,15 г (46,30%).

Опыт 12. В экстрактор помещали 50,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3-6 мм, заливали 40% этанолом в соотношении 1:15. Экстракцию проводили еще три раза в соотношении сырье-экстрагент 1:10. Температура экстракции 80°C, время 60 мин. Общий выход ЭВ составил 20,03 г (40,06%).

Исходя из полученных результатов оптимальное для выхода ЭВ соотношение сырья и экстрагента 1:15 при трехкратной экстракции в течение 60 мин (опыт 5). Дальнейшее уменьшение кратности экстракции, соотношения сырья и экстрагента при одновременном повышении или понижении времени экстракции приводит к снижению выхода ЭВ. Так же влияет снижение температуры экстракции до 60-70°C или ее повышение до 90°C. Максимальный выход ЭВ наблюдали при экстракции фракции сырья, проходящего через отверстия с диаметром 1 мм, отсеянное от пыли (опыт 11). Это явление можно объяснить особенностью строения листа соссюреи спорной: нижний эпидермис листа обильно покрыт нитевидными трихомами, образующими как бы войлочное покрытие. Поэтому даже при измельчении сырья, его частицы посредством волосков слипаются, образуя более крупные. Основная масса сырья (около 98%) просеивается лишь через сита с отверстиями диаметром 3-6 мм. Через отверстия с диаметром 1 мм проходят частицы сырья, свободные от волосков, вследствие чего, содержащие большее количество биологически активных веществ.

Таким образом оптимальным способом получения комплексного средства консервативной терапии остеомиелита является трехкратная экстракция 40% этанолом листьев соссюреи спорной, измельченных до 3-6 мм в соотношении 1:15 при 80°C в течение 60 мин. Этанол из жидкого экстракта удаляют под вакуумом, экстракт высушивают до содержания влаги не более 5%.

Источники информации

1. Акжигитов Г.Н. Гематогенный остеомиелит / Г.Н. Акжигитов, Я.Б. Юдин. - М.: Медицина, 1998. 288 с.

2. Амиров Н.Х., Мубаракова Л.Н., Захаров Ю.А. Способ лечения одонтогенного остеомиелита, осложненного флегмоной. Патент №2232029 от 27.08.2001.

3. Афиногенов Г.Е. Антимикробная биодеградируемая композиция на основе высокомолекулярного поливинилпирролидона для профилактики экспериментального остеомиелита/ Г.Е. Афиногенов, P.M. Тихилов, А.Г. Афиногенова и др. // Травматология и ортопедия России. 2010. №3. С. 47-54.

4. Батаков Е.А. Современные аспекты диагностики и лечения хронического остеомиелита / Е.А. Батаков, Д.Г. Алексеев, В.Е. Батаков. - Самара: Медицина. 2008. 117 с.

5. Белохвостикова Т.С. Коррекция вторичных нарушений иммунной системы при хроническом посттравматическом остеомиелите / Т.С. Белохвостикова, Л.Е. Кирдей, Е.Ю. Гаврилова и др. // Медицинская иммунология. 2002. №4 (2). С. 228-229.

6. Дзюба Г.Г. Опыт использования локальных антибактериальных носителей при лечении хронического гнойного остеомиелита длинных трубчатых костей / Г.Г. Дзюба, С.А. Ерофеев, Д.И. Одарченко // Современные проблемы науки и образования. 2013. №4. С. 111.

7. Кирдей Е.Г. Иммунный статус больных с различными формами остеомиелитов / Е.Г. Кирдей, А.П. Барабаш, Д.Г. Данилов и др. // Сибирский медицинский журнал. 1977. №9 (1-2). С. 19-21.

8. Корженевский А.А. Обоснование выбора препарата для иммунотерапии хронического остеомиелита // Аллергология и иммунология. 2008. №9 (2). С. 227-230.

9. Кутин А.А. Гематогенный остеомиелит у взрослых / А.А. Кутин, Н.И. Мосиенко. - М.: Медицина и жизнь. 2000. 224 с.

10. Ладонин С.В. Экспериментальное обоснование использования аллогенного деминерализованного костного имплантата в комплексном лечении хронического остеомиелита / С.В. Ладонин, Е.А. Белозерцева // Морфологические ведомости. 2011. №1. С. 101-107.

11. Линник С.А. Способ пластики костных дефектов у больных с остеомиелитом предплечья мышечным лоскутом, сфомированным из musculus pronator qvadratus / С.А. Линник, Н.Ф. Фомин, Ш.Л. Динаев и др. // Травматология и ортопедия России.2011. №3. С. 97-100.

12. Матузов С.А. Лечение хронического травматического остеомиелита с применением антиоксидантов: автореф. дисс.… к.м.н. Иркутск, 1997. 27 с.

13. Султонов Ш.Р. Динамика процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты при хроническом гематогенном остеомиелите у детей / Ш.Р. Султонов, А.А. Азизов, A.M. Сабурова // Докл. Акад. наук Респ.Таджикистан. 2009. Т. 52. №9. С. 723-727.

14. Толстикова Т.Г., Сорокина И.В., Жукова Н.А. Средство для лечения остеомиелита. Патент №2604124 от 28.10.2015.

15. Федянин С.Д. Рациональная антибиотикотерапия у пациентов с гематогенным и посттравматическим остеомиелитом // Вестник Витебского государственного медицинского университета. 2004. №2. С. 61-68.

16. Хеннен У.Дж. Трансфер фактор Плюс: идеальная комбинация биологически активных веществ для оптимального иммунитета / У.Дж. Хеннен, Ю.П. Гичева, Э.А. Оганова. - Новосибирск, 2001.

17. Шалыгин А.В. Коррекция реологических свойств крови в лечении острого гематогенного остеомиелиае у детей / А.В. Шалыгин, А.А. Солнышко, А.П. Скударнова // Науки о человеке. Томск, 2003. С. 112.

18. Bohndorf К. Osteomyelitis / К. Bohndorf, // Handbuch diagnostische Radiologic 2005. S. 80.

19. Davis J.S. Menagement of bone and joint infections due to Staphilococcus aureus // Intern. Medicine J. 2005. №35. P. 79-96.

Приложение

Фиг. 1. Содержание 99mТс-технефор (%) в мягкотканую фазу сцинтиграфического исследования пораженной конечности крыс с экспериментальным остеомиелитом.

Фиг. 2. Содержание 99mТс-технефор в костную фазу сцинтиграфического исследования пораженной конечности крыс с экспериментальным остеомиелитом.

*p≤0.05 в сравнении с группой-2.

Фиг. 3. Участок диафиза бедренной кости крысы на 21 сутки после моделирования остеомиелита без лечения. Признаки воспаления без видимой активации остеогенеза. Окрашивание гематоксилином и эозином, ×200.

Фиг. 4. Участок диафиза бедренной кости крысы на 21 сутки после моделирования остеомиелита при лечении антибиотиком. Сохранение признаков воспаления, незначительная активация остеогенеза. Окрашивание гематоксилином и эозином, ×200.

Фиг. 5. Участок диафиза бедренной кости крысы вблизи костно-мозгового канала, на 21 сутки после моделирования остеомиелита при терапии антибиотиком в комплексе с экстрактом S. controversa. Активация остеобластических процессов на месте погибших остеонов. Окрашивание гематоксилином и эозином, ×200.

Примечание. 1,2,3 - p≤0,05 в сравнении с группами 1,2 и 3 соответственно.

Применение экстракта листьев соссюреи спорной (Saussurea Controversa DC), полученного путем трехкратной экстракции измельченных до 3-6 мм листьев соссюреи спорной 40% водным этанолом в соотношении 1:15 при 80°С в течение 60 мин, удаление экстрагента, высушивания, для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения коллагенно-пептидного комплекса из рогов. Способ получения коллагенно-пептидного комплекса из рогов, включающий отделение с рогов кожного и волосяного покрова и измельчение полученного сырья, экстракцию сырья этиловым спиртом, подкисленным уксусной кислотой, при нагревании, после первой экстракции производят повторную экстракцию этиловым спиртом, подкисленным уксусной кислотой, при нагревании, после каждой экстракции полученную жидкость сливают и охлаждают, полученный после экстракции жмых промывают от остатков спирта и подвергают ферментации в водном растворе с папаином, далее производят инактивирование ферментов в смеси, полученную смесь охлаждают, отделяют от смеси жидкий гидролизат путем фильтрования и сепарирования, полученные экстракт и гидролизат смешивают, выпаривают, подвергают лиофильной сушке, полученный концентрат размалывают в мелкодисперсный порошок при определенных условиях.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу получения средства, обладающего диуретической активностью. Способ заключается в том, что листья толокнянки обыкновенной экстрагируют 70% этиловым спиртом, осуществляя вначале две экстракции при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем при нагревании на кипящей водяной бане в течение 30 мин; объединенное извлечение упаривают под вакуумом, смешивают с силикагелем в соотношении исходной массы сырья и сорбента 3:1 и высушивают на воздухе; высушенный порошок наносят на слой силикагеля, сформированный в виде взвеси в хлороформе, и подвергают хроматографическому разделению с использованием смесей хлороформа и этилового спирта в градиентном режиме с последующим выделением из фракций, полученных при элюировании смесью растворителей хлороформ-спирт этиловый -75:25 и 70:30, 1,3,6-тригаллоилглюкозы - вещества с диуретической активностью.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему антимикотическим действием. Средство, обладающее антимикотическим действием, содержащее компоненты, извлеченные экстракцией из воздушно-высушенных цветков трехреберника продырявленного в соотношении сырье:экстрагент - 1:10, с использованием в качестве экстрагента водно-спиртового раствора с концентрацией этанола 70-95% путем экстрагирования с обратным холодильником.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего антигипоксической активностью. Способ получения средства, обладающего антигипоксической активностью, для этого измельченный растительный материал, состоящий из серпухи васильковой травы, девясила высокого корневищ с корнями, эхинацеи пурпурной травы, шиповника плодов, бадана толстолистного листьев черных, взятые в определенном соотношении, экстрагируют трехкратно при определенных условиях, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате.

Изобретение относится к способу переработки природного мумиесодержащего сырья, а именно к способу получения пропиленгликолевого экстракта мумие. Способ получения пропиленгликолевого экстракта мумие, включающий экстракцию очищенного мумиесодержащего сырья экстрагентом, представляющим собой пропиленгликоль или смесь пропиленгликоля с водой, при определенных условиях, с последующей фильтрацией экстракта.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего желчегонной, противовоспалительной и антиоксидантной активностью.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения меланиновых веществ, получаемых из отходов маслоэкстракционного производства - лузги подсолнечника.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики (Vaccinium uliginosum) экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 1/10 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29.
Изобретение относится к производству сухих экстрактов из растительного сырья, обладающих высокой пищевой ценностью и высокой биологической активностью, предназначенных для использования в пищевой, фармацевтической, косметической и других отраслях промышленности.
Изобретение относится к медицине. Описано лекарственное средство для лечения остеомиелита, в том числе, осложненного свищевой формой и гнойно-воспалительными процессами окружающих мягких тканей, выполненное в виде порошка, состоящего из трех компонентов: порошкообразного хлорида рубидия и полусинтетического антибиотика амикацина (C22H43N5O13) в форме сульфата, взятых в массовом соотношении (1-10):3 (с учетом максимально допустимой дозы амикацина сульфата) и синтетического неорганического кальция гидроксиапатита в виде порошка с размером частиц 50-150 мкм в количестве, необходимом для полного заполнения костной полости предлагаемым средством.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для получения биорезорбируемого биологического матрикса для замещения дефектов костной ткани из ксеногенной или аллогенной костной ткани.

Изобретение относится ветеринарии, а именно к лекарственному средству для ветеринарии, обладающему противовоспалительным и анальгетическим действием в послеоперационный период, а также при лечении воспалительных заболеваний опорно-двигательного аппарата и воспалительных заболеваний ЖКТ.

Изобретение относится к 4-алкинилимидазольному производному, представленному общей формулой (1), или к его фармацевтически приемлемой соли. В формуле (1) кольцо A представляет собой С4-С8циклоалкил, фенил, необязательно замещенный С1-С4алкильной группой или 6-членный гетероарил, содержащий один атом азота в качестве кольцевого атома; кольцо B представляет собой фенил или 6-членный гетероарил, содержащий один атом азота в качестве кольцевого атома; m представляет собой целое число, имеющее любое значение из 0-1; n представляет собой целое число, имеющее любое значение из 1-3; R1 представляет собой C1-C4 алкильную группу, атом галогена, С3-С8циклоалкил или C1-C4 галогеналкильную группу; R2 и R3, каждый независимо, представляют собой атом водорода, атом галогена или C1-C4 алкильную группу, или, взятые вместе с атомом углерода, с которым R2 и R3 являются смежными, могут образовывать C3-C6 углеродное кольцо; R4 и R5, каждый независимо, представляют собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу, или, взятые вместе с атомом углерода, с которым R4 и R5 являются смежными, могут образовывать C3-C6 углеродное кольцо, и R6 и R7, каждый независимо, представляют собой атом водорода, C1-C4 алкильную группу, C1-C4 алкокси группу, атом галогена, C1-C4 галогеналкильную группу или C1-C4 галогеналкокси группу; X представляет собой -OR8, или атом галогена; R8 представляет собой атом водорода или C1-C4 алкильную группу; Y представляет собой простую связь или атом кислорода; и E представляет собой -CO2H, -CO2P, который представляет собой сложный алкиловый эфир или биоизостеру карбоксильной группы, выбранную из тетразолила или оксадиазолонила.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, рефлексотерапии, восстановительной медицине, может быть использовано для профилактики и лечения хронической боли в нижней части спины, вызванной различными причинами.

Группа изобретений относится к медицине и касается средства для коррекции состояний клеток различных органов и тканей, а также собственно органов и тканей человека, связанных с количественным снижением белка альфа-2 цепи коллагена I типа, на основе генно-терапевтических субстанций с геном COL1A2, где клетки органов и тканей выбраны из фибробластов, кератоцитов, хондробластов и эпителиальных клеток роговицы глаза, органы и ткани выбраны из кожи, хрящевой ткани или мышечной ткани человека, представляющего собой по крайней мере одну генно-терапевтическую субстанцию, выбранную из группы генно-терапевтических субстанций, каждая из которых представляет собой генетическую конструкцию на основе векторной плазмиды, содержащей нативную кДНК гена COL1A2 SEQ ID No: 1 или модифицированной кДНК гена COL1A2, при этом в качестве модифицированной кДНК гена COL1A2 используют SEQ ID No: 2, или SEQ ID No: 3, или SEQ ID No: 4, или SEQ ID No: 5, или SEQ ID No: 6, или SEQ ID No: 7, или сочетание этих генетических конструкций, каждая из которых содержит также регуляторные элементы в сочетании с транспортной молекулой или без нее.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и фармацевтики, в частности к конъюгатам антитела для лечения ревматоидного артрита у пациента. Антитело, входящее в состав указанных конъюгатов, специфически связывает Экстра-Домен-A (ED-A) фибронектина и конъюгировано с интерлейкином-10.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ профилактики нарушения метаболизма кальция в костной ткани, вызванного длительным приемом глюкокортикоидов, путем перорального употребления средства, обладающего антирадикальной активностью, отличающийся тем, что в качестве средства антирадикальной защиты используют масляный раствор серосодержащего антиоксиданта тио-фан-бис-[(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфид на фоне глюкокортикоидной терапии.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для улучшения насыщенности клетками и архитектуры дегенерированного диска у пациента с дегенеративными изменениями межпозвоночного диска.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для регенерации поврежденной ткани или органа у пациента. Способ включает введение указанному пациенту, имеющему активные зародышевые центры в лимфоидной ткани, стволовых клеток для доставки или хоуминга в поврежденную ткань или орган, нуждающиеся в регенерации; и иммунодепрессанта, ингибирующего связывание стволовых клеток с указанными активными зародышевыми центрами, до или в сочетании с введением стволовых клеток.

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано для профилактики хронической фтористой интоксикации (ХФИ). Способ профилактики хронической фтористой интоксикации при моделировании в эксперименте включает воздействие на экспериментальных животных водного раствора фторида натрия и профилактического препарата Родиолы розовой экстракт-ВИС.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению средства для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге. Применение экстракта листьев соссюреи спорной, полученного путем трехкратной экстракции измельченных до 3-6 мм листьев соссюреи спорной 40 водным этанолом в соотношении 1:15 при 80°С в течение 60 мин, удаление экстрагента, высушивания, для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге. Средство, полученное вышеописанным способом, эффективно для стимуляции роста клеток гранулоцитарного и лимфоидного ряда в костном мозге. 5 ил., 2 табл.

Наверх