Способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда

Авторы патента:


Способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда
Способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда
G01N2223/00 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Изобретение относится к медицине, биотехнологии, регенеративной медицине, в частности к способам количественной оценки клеток в составе клеточно-инженерной конструкции (скаффолда). Раскрыт способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда, который включает окрашивание образцов флуорохромом, обладающим высокой специфичностью к двухцепочечной молекуле ДНК, и проведение флуоресцентной микроскопии. При этом исследуемые образцы скаффолдов не подвергают дополнительной предварительной пробоподготовке до окрашивания, цифровую флуоресцентную микроскопию проводят в 10 полях зрения с послойной съемкой по оси Z на заданную глубину с последующей сшивкой изображений, полученные снимки обрабатывают с применением фильтров по интенсивности флуоресцентного свечения и по площади объекта, проводят промежуточный статистический анализ с расчетом общего количества клеток в каждом снимке и среднего количества клеток в 10 снимках с последующим перерасчетом количества клеток в 1 мм3 скаффолда. Изобретение обеспечивает сокращение временных затрат, трудоемкости и повышение точности исследования количества клеток в составе скаффолда. 2 табл., 2 пр.

 

Предполагаемое изобретение относится к медицине, биотехнологии, регенеративной медицине, в частности к способам количественной оценки клеток в составе клеточно-инженерной конструкции (скаффолда).

Одним из основных направлений современной регенеративной медицины и биотехнологий является разработка тканезамещающих материалов для восстановления поврежденных тканей и органов. Развитие скаффолд-технологий связано, прежде всего, с культивированием клеток на трехмерных матрицах естественного или искусственного происхождения с целью пространственного формирования будущего органа или его фрагмента для трансплантата. Одной из актуальных проблем, возникающих при исследовании в области скаффолд-технологий, является объективный прямой количественный анализ клеток культивируемых в скаффолде позволяющий охарактеризовать цитотоксические свойства клеточной матрицы, жизнеспособность и пролиферативную активность клеток в клеточно-инженерной конструкции. Данная проблема связана с особенностями культивирования клеток на трехмерных матрицах, в том числе с ограничением возможности прямого подсчета клеток при использовании световой микроскопии, что обусловлено трехмерностью структуры матриц и распределением клеток по всей толще скаффолда. Так же большинство скаффолдов не прозрачны, что вообще исключает методы количественного анализа с использованием световой микроскопии.

Существуют методы количественного анализа клеточной составляющей скаффолдов основанные на оценке метаболической активности клеток, например МТТ-тест. Однако эти методы являются косвенными и имеют большую погрешность, что связано с различной метаболической активностью клеток, например, находящихся в различных фазах митоза. Так же высокой степенью погрешности характеризуются методы, основанные на прямом подсчете количества клеток выделенных из скаффолда, что связано с потерей клеток при разрушении матрицы.

В качестве прототипа выбран способ определения количества клеток (см. Rowe S.L., Lee S., Stegemann J.P. Influence of thrombin concentration on the mechanical and morphological properties of cell-seeded fibrin hydrogels // Acta Biomater. 2007. Vol. 3., N.1., P. 59-67), применяемый для фибриновых и коллагеновых скаффолдов, включающий дегидратацию и ферментирование скаффолда, разбавление и окрашивание полученных образцов флуорохромом Hoechst 33258, обладающим высокой специфичностью к двухцепочечной молекуле ДНК, проведение флуоресцентной микроскопии с количественным определением ДНК и последующим вычислением абсолютного количества клеток в скаффолде.

Способ, представленный в прототипе, является косвенным и основан не на прямом подсчете клеток, а на количественном анализе ДНК в разрушенном скаффолде с последующим преобразованием количества ДНК в число клеток путем математического пересчета. Существенным недостатком представленного прототипа является необходимость дегидратации, разрушения скаффолда путем ферментации в протеиназе К и последующее разбавление полученных образцов, что может приводить к потере части клеточной составляющей скаффолда и вносить существенную погрешность в количественный анализ. Еще одним недостатком является длительность и трудоемкость способа, так только подготовительная часть анализа (ферментация) занимает от 16 до 20 часов, таким образом, для реализации всего способа необходимо более суток непрерывной работы. Так же крайне неудобен способ выражения результатов в виде абсолютного числа клеток в скаффолде. В связи с тем, что скаффолд может иметь значительные размеры и при этом достаточно малое количество клеток или наоборот небольшие размеры, но большое количество клеток способ не дает представления о плотности клеток в объеме скаффолда, а для получения последнего необходимы данные о размере скаффолда требующие проведения дополнительных измерений. Для корректного сравнения количества клеток в нескольких скаффолдах при использовании способа-прототипа по их абсолютному числу необходимы абсолютно идентичные образцы по размерам, что не всегда возможно реализовать в реальных условиях (например, клетки, растущие в скаффолде, могут изменять его структуру, что приводит к ретракции образцов и изменению их размеров). Таким образом, данный способ ограничивает возможность проведения последующего сравнительного анализа при работе с различными по размерам скаффолдами или их фрагментами.

Задача предполагаемого изобретения - усовершенствование способа.

Технический результат - объективизация, сокращение временных затрат и трудоемкости, повышение точности исследования количества клеток в составе скаффолда с относительно равномерным распределением клеток.

Технический результат осуществляется за счет того, что в способе, включающем окрашивание образцов флуорохромом Hoechst, обладающим высокой специфичностью к двухцепочечной молекуле ДНК и проведение флуоресцентной микроскопии, исследуемые образцы скаффолдов не подвергают предварительной подготовке, цифровую флуоресцентную микроскопию проводят в 10 полях зрения с послойной съемкой по оси Z на заданную глубину с последующей сшивкой изображений, полученные снимки обрабатывают с применением фильтров по интенсивности флуоресцентного свечения и по площади объекта, проводят промежуточный статистический анализ с расчетом общего количества клеток в каждом снимке и среднего количества клеток в 10 снимках, с последующим перерасчетом количества клеток в 1 мм3 скаффолда.

Способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда с относительно равномерным распределением клеток осуществляют следующим образом.

1. Фрагмент скаффолда помещают в 24-х луночный планшет для флуоресцентной микроскопии с непрозрачными боковыми стенками. Затем проводят прижизненное окрашивание ядер клеток в скаффолде с применением флуорохрома Hoechst 3334 обладающим высокой специфичностью к двухцепочечной молекуле ДНК. В лунку, содержащую фрагмент скаффолда и 2 мл культуральной среды (в зависимости от клеток, культивируемых в скаффолде DMEM или α-МЕМ содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки), добавляют 1 мкл раствора Hoechst 33342 в концентрации 10 мкг/мл. Планшет помещают в термостат и инкубируют в течение 30 мин. при 37°C. После инкубации фрагмент скаффолда дважды отмывают фосфатным буфером. Затем к фрагменту скаффолда добавляют 1 мл фосфатного буфера для предотвращения пересыхания образца.

2. Планшет с фрагментом скаффолда переносят на оборудование позволяющее проводить цифровую флуоресцентную микроскопию (например: фотометр-имиджер Cytation™ 5). В 10 полях зрения с использованием объектива с 4-х кратным увеличением проводят послойную съемку по оси Z на заданную глубину не более 500 μm с последующей сшивкой изображений (стекинг, Z-stack). При использовании функции Z-stack объектив перемещается вдоль оси Z, снимает несколько изображений, извлекает только те участки, которые находятся в фокусе, и синтезирует их в полностью сфокусированное изображение.

3. Снимки в количестве 10 штук полученные по п. 2 обрабатывают с применением фильтров порога интенсивности флуоресцентного свечения (при анализе учитываются объекты с интенсивностью свечения более 7000 условных единиц) и площади объекта (при анализе учитываются объекты с площадью менее 30 μm). Применение данных фильтров позволяет снизить погрешность при количественном анализе. Так объекты с интенсивностью свечения ниже выбранного яркостного порога относят к объектам более светлым и исключаются из анализа (например: окрашенные клеточные ядра, залегающие в более глубоких слоях скаффолда, чем анализируемый слой). Применение фильтра порога интенсивности флуоресцентного свечения так же позволяет разделить ряд близкорасположенных клеточных ядер - в центре ядра имеют более интенсивное свечение, чем по периферии, таким образом, происходит разделение объектов по интенсивности свечения и при анализе учитываются объекты с яркостью выше пороговой - центральные части ядер. Применение фильтра по площади объекта позволяет не учитывать при анализе объекты с площадью более заданной, что дает возможность исключить объекты, не относящиеся к клеточным ядрам (например: остатки красителя) или скопления близкорасположенных клеток которые не удалось разделить при применении предыдущего фильтра.

4. Затем проводят промежуточный статистический анализ:

а) расчет общего количества клеток в каждом из 10 снимков (по п. 2-3);

б) расчет среднего количества клеток в 10 снимках (по п. 2-3).

5. Вычисляют количество клеток в 1 мм3 скаффолда по формуле:

K=N/B*C*500*10-9,

где K - количество клеток в 1 мм3;

N - среднее количество клеток на 10 снимках по п. 4б;

В - размер анализируемого поля зрения в μm по оси x при использовании объектива с 4-х кратным увеличением;

С - размер анализируемого поля зрения в μm по оси y при использовании объектива с 4-х кратным увеличением;

500 - размер анализируемого поля зрения в μm по оси z при использовании объектива с 4-х кратным увеличением;

10-9 - коэффициент, определяющий перевод μm3 в мм3.

Пример 1

Для исследования количества клеток взяты два фрагмента фибрин-коллагенового скаффолда с относительно равномерным распределением клеток (МСК крысы) и известной начальной концентрацией клеток (120 клеток/мм3). Скаффолд инкубировался в культуральной среде α-МЕМ содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки в клеточном инкубаторе с содержанием CO2 5% и температурой 37°C. Фрагмент скаффолда №1 был взят на исследование после 1 суток инкубации, фрагмент №2 был взят после 9 суток инкубации. Согласно представленного способа фрагменты скаффолдов были окрашены Hoechst 33342 и проведен последующий количественный анализ клеточной составляющей скаффолда. Цифровая флуоресцентная микроскопия проводилась на фотометр-имиджере Cytation™ 5 (BioTek), при длине волны возбуждения 377 нм и длине волны эмиссии 447 нм. В 10 полях зрения с использованием объектива с 4-х кратным увеличением проведена послойная съемка по оси Z на заданную глубину 500 μm с последующей сшивкой изображений с и использованием функции Z-stack. В=1968 μm, С=1455 μm.

Результат:

После первых суток инкубации скаффолда в культуральной среде количество клеток увеличилось в 1,2 раза (Табл. 1). После девяти суток инкубации скаффолда в культуральной среде количество клеток увеличилось в 3,8 раза. Можно заключить, что скаффолд не цитотоксичен, обладает свойствами обеспечивающими высокую жизнеспособность и пролиферативную активность клеток.

Пример 2.

Для исследования количества клеток взяты два фибрин-коллагеновых скаффолда содержащих дермальные фибробласты человека с разницей в концентрации клеток в 2 раза (скаффолд №1 - начальная концентрация клеток 90 клеток/мм3; скаффолд №2 - 180 клеток/мм3) и относительно равномерным распределением клеток по всему объему скаффолда. Скаффоды инкубировались в течении 3 суток в культуральной среде DMEM содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки в клеточном инкубаторе с содержанием СO2 5% и температурой 37°C. Затем согласно представленного способа фрагменты скаффолдов были окрашены Hoechst 33342 и проведен последующий количественный анализ клеточной составляющей скаффолда. Цифровая флуоресцентная микроскопия проводилась на фотометр-имиджере Cytation™ 5 (BioTek), при длине волны возбуждения 377 нм и длине волны эмиссии 447 нм. В 10 полях зрения с использованием объектива с 4-х кратным увеличением проведена послойная съемка по оси Z на заданную глубину 500 μm с последующей сшивкой изображений с и использованием функции Z-stack. В=1968 μm, С=1455 μm.

Результат:

После трех суток инкубации скаффолдов в культуральной среде в скаффолде №1 количество клеток увеличилось в 3,2 раза, в скаффолде №2 количество клеток увеличилось в 3,4 раза (Табл. 2). При этом концентрация клеток в скаффолде №2 была больше, чем в скаффолде №1 в 2,2 раза. Можно заключить, что в обоих скаффолдах дермальные фибробласты человека имели высокую пролиферативную активность, при этом в скаффолде №2 она была выше, чем в сокаффолде №1.

Преимуществами представленного способа количественного анализа клеточной составляющей скаффолда являются:

- прямой, а не косвенный анализ количества клеток в скаффолде по подсчету количества ядер;

- возможность проведения исследования без разрушения структуры скаффолда, что позволяет повысить точность исследований;

- возможность проведения исследования без дополнительной предварительной подготовки образцов до окрашивания, что снижает трудоемкость и существенно сокращает временные затраты на проведение количественного анализа клеточной составляющей скаффолда;

- возможность проведения исследований на скаффолдах или их фрагментах различных размеров, что существенно расширяет сферу применения способа и возможности при проведении научно-исследовательских работ с клеточно-инженерными конструкциями;

- выражение конечного результата в количестве клеток на единицу объема скаффолда, что дает представление о плотности клеток в скаффолде и возможность последующего корректного сопоставления количества клеток в независимости от размера анализируемых скаффолдов или их фрагментов.

Способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда, включающий окрашивание образцов флуорохромом, обладающим высокой специфичностью к двухцепочечной молекуле ДНК, и проведение флуоресцентной микроскопии, отличающийся тем, что исследуемые образцы скаффолдов не подвергают дополнительной предварительной пробоподготовке до окрашивания, цифровую флуоресцентную микроскопию проводят в 10 полях зрения с послойной съемкой по оси Z на заданную глубину с последующей сшивкой изображений, полученные снимки обрабатывают с применением фильтров по интенсивности флуоресцентного свечения и по площади объекта, проводят промежуточный статистический анализ с расчетом общего количества клеток в каждом снимке и среднего количества клеток в 10 снимках с последующим перерасчетом количества клеток в 1 мм3 скаффолда.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к области диагностики амилоидозов при помощи окрашивания гистологических образцов, и может быть использовано в патологической анатомии, цитологии, клинической лабораторной диагностике и биологии.
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и оториноларингологии, и может быть использовано для отбора пациентов в группу риска по развитию фолликулярной ангины, ассоциированной с недифтерийными коринебактериями.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмохирургии, и может быть использовано для экспресс-оценки витального красителя для контрастирования внутриглазных структур заднего сегмента глаза.

Группа изобретений относится к области органической и аналитической химии, а именно к реагенту для обнаружения катионов Zn2+, представляющему собой 2-(1-(пиридин-2-ил)4-фенил-изохинолин-3-ил)-25,26,27,28-тетраметоксикаликс[4]арен, а также к способу его получения, включающему проведение реакции аза-Дильса-Альдера при температуре 105-110°С в атмосфере инертного газа 2-(6-фенил-3-(2-пиридин-2-ил)-1,2,4-триазин-5-ил)-25,26,27,28-тетраметоксикаликс[4]арена с 1,2-дегидробензолом, который генерируется in situ путем взаимодействия антраниловой кислоты с изоамилнитритом: .Группа изобретений обеспечивает повышение эффективности обнаружения и/или супрамолекулярной экстракции катионов Zn2+, а также расширение арсенала способов получения реагентов для обнаружения и/или супрамолекулярной экстракции катионов Zn2+.

Группа изобретений относится к области органической и аналитической химии, а именно к реагенту для обнаружения катионов Zn2+ и Сd2+ в виде 2-(5-фенил-2,2'-бипиридин-6-ил)-25,26,27,28-тетраметоксикаликс[4]арена, а также к способу его получения, включающему проведение реакции аза-Дильса-Альдера между 2-(6-фенил-3-(2-пиридил)-1,2,4-триазин-5-ил)-25,26,27,28-тетраметоксикаликс[4]ареном и 2,5-норборнадиеном при температуре 130-150°C и в атмосфере инертного газа: .Группа изобретений обеспечивает повышение эффективности обнаружения и/или супрамолекулярной экстракции катионов Zn2+ и Сd2+, а также расширение арсенала способов получения реагентов для обнаружения и/или супрамолекулярной экстракции катионов Zn2+ и Сd2+.

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно способу получения и аттестации стандартного образца гликопротеина Е вируса клещевого энцефалита.

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии, а именно способу получения и аттестации стандартного образца гликопротеина Е вируса клещевого энцефалита.

Изобретение относится к медицине и касается способа оценки агрегационной способности эритроцитов. Способ включает выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегационной способности, где в качестве индуктора агрегации используют трихлорид железа, при этом эритроциты помещают в кювету агрегометра, добавляют трихлорид железа в финальной концентрации 200-400 мкМ и регистрируют степень агрегации фотометрическим методом.

Изобретение относится к области медицины, а именно к профилактической медицине. Способ прогнозирования значений относительной концентрации гамма-глутамилтрансферазы в сыворотке крови через 4-5 лет у стажированных работающих в условиях экспозиции винилхлоридом без признаков патологии заключается в том, что определяют уровень гамма-глутамилтрансферазы, альбумина и относительного содержания липопротеидов высокой плотности, рассчитывают прогнозируемое значение относительного содержания концентрации гамма-глутамилтрансферазы в сыворотке крови по формуле: У=620,9241+0,5718×ГГТ1-16,832×АЛЬБ1-05181×ЛПВП1+0,1195×АЛЬБ12, где У - прогнозируемое значение относительной концентрации ГГТ в сыворотке крови, 620,9241 - константа; 0,5718; -16,832; -0,5181; 0,1195 - коэффициенты предикторов; ГГТ1 - уровень гамма-глутамилтрансферазы на момент обследования (Е/мл); АЛЬБ1 - содержание альбумина в сыворотке крови на момент обследования (%), ЛПВП1 - содержание липопротеидов высокой плотности в сыворотке крови на момент обследования (%).

Группа изобретений относится к области медицины и медицинской техники. Офтальмологическое устройство содержит: источник энергии; источник света; биомаркерный датчик, выполненный с возможностью обнаруживать изменения в биомолекулах слезной жидкости и генерировать сигналы; а также процессор, находящийся в логической связи с биомаркерным датчиком, выполненный с возможностью получения и обработки данных сигналов и преобразования их в выходные данные.

Группа изобретений относится к модуляции уровней белков сыворотки для лечения пациентов с синдромом хрупкой X-хромосомы (FXS) и нарушениями аутистического спектра (ASD).

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии. Изобретение представляет собой способ прогнозирования риска развития приобретенной кардиомиопатии перед занятиями спортом, включающий определение в сыворотке крови у детей за 1 месяц до начала занятий спортом концентрации тропонина-Т, N-концевого натрийуретического пептида, интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-6 (ИЛ-6), при этом прогнозируют высокий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,37 до 0,48 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 66,2 до 77,1 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 2,6 до 3,1 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 7,3 до 9,7 пг/мл и прогнозируют низкий риск развития вторичной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,21 до 0,36 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 35,3 до 43,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 3,4 до 4,58 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 5,6 до 6,9 пг/мл.

Изобретение относится к области генетики, молекулярной биологии и медицины. Предложен способ выявления соматических мутаций Q209P (с.
Изобретение относится к ветеринарно-санитарной экспертизе, а именно к определению качества рыбы при диплостомозе. Для этого в качестве биологического объекта используют хрусталик глаза рыбы, который раздавливают между стеклами и берут пробу для посева.

Изобретение относится к области метеорологии, а более конкретно к способам определения оптических характеристик атмосферы, и может использоваться, например, для определения оптических параметров аэрозольных частиц в атмосфере.

Изобретение относится к усовершенствованию систем для отбора и кондиционирования проб, позволяющему отбирать и кондиционировать пробы, содержащие тяжелые углеводороды, в частности, к тепловому кондиционированию проб из трубопровода от источника газоконденсатной жидкости.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской кардиологии. Изобретение представляет собой способ прогнозирования риска развития приобретенной кардиомиопатии у спортсменов, включающий определение у детей, занимающихся спортом в течение 2-3 лет, в сыворотке крови концентрации тропонина-Т, N-концевого натрийуретического пептида, интерлейкина-4 (ИЛ-4) и интерлейкина-6 (ИЛ-6), при этом прогнозируют высокий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,76 до 0,91 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 78,2 до 92,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 1,8 до 2,5 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 8,3 до 10,1 пг/мл; прогнозируют низкий риск развития приобретенной кардиомиопатии при концентрации тропонина-Т от 0,48 до 0,72 нг/мл, при концентрации N-концевого натрийуретического пептида от 44,3 до 71,5 пг/мл, при концентрации ИЛ-4 от 3,2 до 4,0 пг/мл и при концентрации ИЛ-6 от 7,1 до 8,1 пг/мл.

Изобретение относится к области генетики, молекулярной биологии и медицины. Предложен способ выявления соматических мутаций в генах BRAF, NRAS и KIT.

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа приготовления газовых смесей, аттестованных по содержанию фтороводорода и предназначенных для градуировки ИК-Фурье-спектрометра.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для выявления предраковых изменений в молочной железе. В супернатанте пробы клеток крови пациента, инкубированных с раково-эмбриональным антигеном (РЭА) и без РЭА, определяют концентрацию IL-1β.

Изобретение относится к области аналитической химии и может найти применение в лабораториях, осуществляющих аналитический контроль технологических производств, связанных с получением полистирола. Описан способ подготовки проб полистирола для определения содержания цинка методом атомно-эмиссионной спектроскопии, включающий пробоподготовку анализируемых образцов путем озоления в муфельной печи до углеродистого остатка, отличающийся тем, что углеродистый остаток получают нагреванием образца полимера в муфельной печи до 450-550°С со скоростью 1-7°С/мин и выдерживанием в диапазоне указанных температур в течение 10-30 минут. Техническим результатом заявляемого изобретения является снижение длительности пробоподготовки и повышение точности определения цинка. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к медицине, биотехнологии, регенеративной медицине, в частности к способам количественной оценки клеток в составе клеточно-инженерной конструкции. Раскрыт способ количественного анализа клеточной составляющей скаффолда, который включает окрашивание образцов флуорохромом, обладающим высокой специфичностью к двухцепочечной молекуле ДНК, и проведение флуоресцентной микроскопии. При этом исследуемые образцы скаффолдов не подвергают дополнительной предварительной пробоподготовке до окрашивания, цифровую флуоресцентную микроскопию проводят в 10 полях зрения с послойной съемкой по оси Z на заданную глубину с последующей сшивкой изображений, полученные снимки обрабатывают с применением фильтров по интенсивности флуоресцентного свечения и по площади объекта, проводят промежуточный статистический анализ с расчетом общего количества клеток в каждом снимке и среднего количества клеток в 10 снимках с последующим перерасчетом количества клеток в 1 мм3 скаффолда. Изобретение обеспечивает сокращение временных затрат, трудоемкости и повышение точности исследования количества клеток в составе скаффолда. 2 табл., 2 пр.

Наверх