Штамм "вн-3" вируса гепатита утят типа i рода avihepatovirus семейства picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов

Настоящее изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Предложен штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae, выделенный от клинически больных утят, адаптированный к утиным эмбрионам и культуре клеток и аттенуированный в отношении утят. Полученный штамм депонирован в Государственную коллекцию вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под № 2859. Охарактеризованный штамм обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, найдет широкое применение в промышленном утководстве в качестве основного компонента инактивированных эмульгированных вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и в изготовлении диагностических наборов иммуноферментного анализа. 4 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а точнее к производству вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и может быть применено для изготовления диагностических наборов.

Вирусный гепатит утят типа I (ВГУ-I) - малоизученная сверхострая контагиозная болезнь утят до 6-недельного возраста и латентно протекающая у уток, характеризующаяся преимущественным поражением печени и высокой смертностью среди молодняка от 30 до 95% [1, 3, 4, 5, 6, 7]. Экономический ущерб, причиняемый ВГУ-I, складывается из убытков гибели и выбраковки птицы, потери мясной продуктивности, нарушения племенной работы и затрат на проведение оздоровительных мероприятий. В настоящее время болезнь распространена по всему миру и включена МЭБ в перечень особо опасных болезней Санитарного кодекса наземных животных (2010).

Возбудитель ВГУ-I - РНК - содержащий вирус, принадлежащий к роду Avihepatovirus семейства Picornaviridae [8].

Важным средством борьбы против вирусного гепатита утят типа I, заболевания причиняющего значительный ущерб промышленному утководству, является вакцинопрофилактика. Технология производства вакцин предусматривает лиофилизацию препарата, воздействие химического агента, поэтому штамм вируса должен обладать выраженной устойчивостью к действию температурных факторов и процессу инактивации, не изменяя при этом антигенную структуру вируса.

В качестве прототипа выбран штамм «КМИЭВ-16» вируса гепатита утят [2]. Штамм выделен от утят 10 - суточного возраста при остром течении вирусного гепатита утят на 11-12 - суточных утиных эмбрионах при инокуляции суспензии в аллантоисную полость. Штамм вызывает гибель утиных эмбрионов, отставание в росте и развитии зародыша, нарушение его гемодинамики, воспалительно-дегенеративные изменения в печени и сердечной мышце. Штамм индуцирует цитопатический эффект литического типа в культуре клеток утиных эмбрионов. Физико-химические, биологические и морфологические маркеры прототипа представлены в табл.1.

В Республике Беларусь указанный штамм используется для производства аттенуированной вакцины против вирусного гепатита утят типа I [4]. Однако, штамм приведенного прототипа уступает по биологической и антигенной активности.

Задачей изобретения является получение вакцинного штамма вируса гепатита утят типа I, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью, как до и после инактивации, в сочетании со способностью к высокому уровню репродукции в культуре клеток и утиных эмбрионах, отсутствием реактогенности для утят и сохранением термоустойчивости.

Поставленная задача достигается штаммом «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства вакцинных препаратов и диагностических наборов, депонированным в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского, ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф.Гамалеи» Минздрава России под №2859.

Вакцинный штамм адаптирован к утиным эмбрионам и культуре клеток утиных фибробластов, при этом сохраняет патогенность для эмбрионов и иммуногенность для утят.Штамм «ВН-3» соответствует по антигенной специфичности в 98% случаев эталонному и эпизоотическим изолятам вируса гепатита, циркулирующим в РФ.

Характеристика штамма «ВН-3»

Морфологическая характеристика

Вирионы сферической формы, размером 30-40 нм, нуклеокапсид содержит РНК.

Патогенные свойства

В опытах по определению патогенности заявляемого штамма использовали 11-12 - суточные утиные эмбрионы и утят 2 - суточного возраста. Утиные эмбрионы инфицировали в аллантоисную полость в дозе 3,0 lg ЭЛД50/0,2 см3, а утят внутримышечно, подкожно и интранозально в дозе 3,0 lg ЭЛД50/0,2 см3. Эмбрионы инкубировали в течение 72 часов при температуре (37±0,5)°С и относительной влажности 60-70%. За утятами наблюдали в течение 30 сут.

Результаты изучения патогенности штамма «ВН-3» для утиных эмбрионов представлены в табл. 2, а утят в табл. 3.

Данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что при инокуляции в аллантоисную полость вируса гепатита штамма «ВН-3» вызывает 70-80% гибели утиных эмбрионов.

Данные, представленные в таблице 3, свидетельствуют о том, что штамм «ВН-3» не вызывает гибель и клиническое проявление болезни у утят.

Репликация в культуре клеток

Штамм репродуцируется в культуре утиных фибробластов и клетках почки утиного эмбриона, вызывая острую форму инфекции с выраженным цитопатическим эффектом через 72 - 96 часов и 48 - 72 часа соответственно и накапливается в титрах 4,5±0,25 и 5,75±0,3 lg ТЦД50/СМ3.

Терморезистентность

Штамм «ВН-3» термостабилен. Константа скорости инактивации (lgK=2,3Vt/VO:t) при температуре 56°С в течение 60 мин равняется 2,8 10-2lg.

Устойчивость к химическим агентам

Штамм «ВН-3» вируса гепатита не чувствителен к инактивирующему действию (20% конечная концентрация) эфира и хлороформа. Формальдегид в 0,1% концентрации при 37°С в течение 24 часов инактивировал инфекционную активность штамма с кинетической скоростью равной 5,9×10-4lg/ч.

Стерильность

Штамм «ВН-3» вируса гепатита свободен от контаминации бактериями, микоплазмами, грибами и другими вирусами.

Антигенная активность

Штамм «ВН-3» вируса гепатита индуцирует у утят выработку штаммспецифических вируснейтрализующих антител, а инактивированный вируссодержащий материал в адъювантной форме, введенный парентерально утятам, инициирует синтез антител в высоких титрах, регистрируемых в реакции нейтрализации (РН) и иммуноферментном анализе (ИФА), табл. 4.

Стабильность

Штамм «ВН-3» стабилен, его свойства сохраняются неизменными в течение 10 пассажей в культуре клеток и на утиных эмбрионах.

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования:

Пример 1. Получение антигена.

Вируссодержащий материал разводили до оптимальной заражающей дозы, равной 3,0 lg ЭЛД50/0,2 см3. Инокулировали 11-12 - суточные утиные эмбрионы в аллантоисную полость в оъеме 0,2 см3. Инфицированные эмбрионы инкубировали в термостате при температуре (37,0±0,5)°С и относительной влажности 60-70% в течение 72 ч. Овоскопирование проводили два раза в сутки. Эмбрионы, погибшие в течение 24 часов после заражения, выбраковывали, а павшие эмбрионы в последующие сутки хранили в холодильнике при температуре 4-6°C.Охлажденные эмбрионы вскрывали в асептических условиях, а хориоаллантоисную жидкость и зародышей собирали во флаконы емкостью 250-450 см3. Вируссодержащий материал гомогенизировали при 3000-5000 об/мин и центрифугировали при 3000 оборотов в течение 30 минут. Надосадочную жидкость проверяли наотсутствие контаминации высевами на среды: МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом и бульон Сабуро, а также на биологическую активность штамма вируса. Вируссодержащий материал с активностью не ниже 6,5-7,0 lg ЭЛД50/СМ3 хранили при температуре минус 20°С и использовали для изготовления вакцинных и диагностических препаратов.

Пример 2. Изготовление инактивированной вакцины.

Для приготовления инактивированной эмульгированной вакцины против вирусного гепатита утят типа I использовали штамм «ВН-3», полученный по методике, указанной в примере 1. Инактивацию вируссодержащего материала проводили теотропином (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) в конечной концентрации 0,15% в течение 24 ч при температуре (37,0±0,5)°Си постоянном перемешивании. Контроль полноты инактивации вируса проводили методом трех последовательных пассажей на развивающихся утиных эмбрионах.

Эмульсию получали методом гомогенизации водного и масляного компонентов в соотношении 30:70 с помощью гомогенизатора Ultraturrax-T-25. В качестве масляной фазы использовали адъювант MontanidISA 70 фирмы «SEPPIC». Полученную вакцину контролировали на стерильность, стабильность эмульсии, безвредность и антигенную активность.

Пример 3. Определение антигенной активности вакцины.

Для изготовления инактивированной вакцины использовали вируссодержащий материал с биологической активностью равной 6,5 lg ЭЛД50/СМ3, определенной до инактивации. Утки взрослые в количестве 20 голов были разделены на 2 группы по 10 голов в каждой. Подопытные утки в количестве 10 голов вакцинировали подкожно в среднюю треть шеи в объеме 0,5 см3. Утки - 10 голов оставили в качестве контроля. Титр антител к вирусу гепатита в сыворотках крови определяли через 28 суток после вакцинации методом ИФА. Вакцину считали антигенно активной, если титры специфических антител к вирусу гепатита утят типа I были не ниже 10log2 при отсутствии антител в сыворотках крови у уток в контрольной группе.

Заявленный штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, найдет широкое применение в промышленном утководстве в качестве основного компонента вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и в изготовлении диагностических наборов ИФА для контроля напряженности иммунитета.

Источники информации

1. Бубашко О.А. Вирусный гепатит утят в Республике Беларусь и его профилактика / О.А. Бубашко // Эпизоотология, иммунология, фармакология и санитария. - 2005 а. - №1. - С.25-28.

2. Бубашко О.А. Физико-химические, антигенные и иммуногенные свойства штамма КМИЭВ-16 вируса гепатита утят: Автореф. дис... канд. вет.наук: спец. 16.00.03 /О. А. Бубашко/ Ин-т экспер.вет.им. С.Н. Вышелесского. - Минск, 2005. - 19 с.

3. Князев В.П. Болезни водоплавающих птиц: монография / В.П. Князев // Владимир, 2010. - 160 с.

4. Курилович A.M. Иммуноморфогенез у утят, вакцинированных против вирусного гепатита, и влияние на него натрия тиосульфата: автореферат дис... канд. ветеринар, наук. / А. М. Курилович. - Витебск, 2003. -20 с.

5. Паникар И.И. Вирусный гепатит утят: эпизоотология, диагностика и специфическая профилактика / И.И. Паникар // Пробл. зооинженерии и вет.мед.: сб. науч. статей, повящ. 150-летию со дня основания Харьковского зооветеринарного ин-та. - Харьков, 2001. -Вып.9 (33). - Ч. 1. - С.24-27.

6. Kim М.С.Differential diagnosis between type-specific duck hepatitis virus type 1 (DHV-1) and multiplex polymerase chain reaction / M.C. Kim, Y. K. Kwon, S.J. Joh [et al.] // Avian Pathology. - 2008. - V. 37. - P. 171-177.

7. Kim M.C. Development of duck hepatitis A virus type 3 vaccine and it's use to protect ducklings against infections / M.C. Kim, M.J. Kim, Y.K. Kwon [et al.] // Vaccine. - 2009. - V. 27. - P. 6688-6694.

8. Tseng C.H, Knowles N.J., Tsai H.J. Molecular analysis of duck hepatitis virus type I indicates that it should be assigned to a new genus/C. H. Tseng, N.J. Knowles, H.J. Tsai// Virus Research. - 2007, - V. 123. - 190-203.

Штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae для производства инактивированных эмульгированных вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и диагностических наборов, депонированый в Государственной коллекции вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под №2859.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ борьбы с личинками колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata), включающий использование инсектицидов на основе нуклеиновой кислоты, избирательно действующих на личинок насекомых определенного вида, где предварительно проводят листовую обработку картофеля препаратом-инсектицидом «АКТАРА» на основе действующего вещества тиаметоксама, после чего на третий день проводят контактную обработку пульверизатором личинок насекомого водным раствором короткого 17 нуклеотидов длиной антисмыслового фрагмента ДНК гена СР450 (цитохром Р450-зависимая монооксигеназа) колорадского жука с последовательностью 5'-TGAGAATACTAACGAGA-3' в концентрации 150 пмоль/мкл таким образом, чтобы на личинку I-II возраста попало не менее 1 мкл раствора.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается нового штамма вируса африканской чумы свиней African swine fever virus генотипа 2 серотипа VIII сем. Asfarviridae, рода Asfivirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером штамм вируса африканской чумы свиней АЧС/ВНИИЗЖ/CV-1 (Д).

Изобретение относится к области биотехнологии и производству противоящурных вакцин, а именно к способу определения титра инфекционной активности вируса ящура в неинактивированном сырье для производства вакцины с применением метода ОТ-ПЦР-РВ и разработанной регрессионной моделью зависимости титра инфекционной активности вируса ящура от величины порогового цикла амплификации.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы доставки защитной изоформы ApoE и кодирующей ее нуклеиновой кислоты в центральную нервную систему млекопитающего.

Изобретение относится к биотехнологии. В частности, настоящее изобретение относится к новым бактериофагам F1245/05, F168/08, F170/08, F770/05, F197/08, F86/06, F87s/06 и F91a/06, выделенным из них полипептидам, композициям, включающим один или несколько новых бактериофагов и/или выделенных полипептидов, способу лечения или профилактики бактериальных инфекций, относящихся к Acinetobacter baumannii.

Представленное изобретение относится к способу получения аттенуированных штаммов вируса гриппа А-кандидатов в живые гриппозные вакцины. Способ заключается в том, что в консервативный участок СООН - домена РА-гена эпидемического вирулентного штамма A/WSN/33 вируса гриппа А включают аттенуирующую аминокислотную замену F658A одновременно с включением сайт-специфических мутаций в РВ1-ген и РВ2-ген, при этом в РВ1-ген штамма A/WSN/33 включают комплекс ts-мутаций из генома ХА штамма-донора аттенуации А/Энн Арбор/6/60 (H2N2) : K391Е, E581G, E457D или одну ts-мутацию I147Т из генома ХА штамма-донора аттенуации А/Краснодар/101/35/59 (H2N2), а в качестве сайт-специфических мутаций, включаемых в РВ2-ген штамма A/WSN/33, используют ts-мутацию V290L из генома ХА штамма-донора аттенуации А/Краснодар/101/35/59 (H2N2).

Изобретение относится к области биохимии. Предложен условно-дефектный по репликации цитомегаловирус (CMV) для профилактики против CMV с дестабилизированными белками IE1/2 и UL51, а также способ его получения, применение и композиция.

Группа изобретений касается стабилизации биологически активного материала. Предложены: сухая композиция в аморфном стеклообразном состоянии для стабилизации биологически активного материала, содержащая указанный биологически активный материал, от 10% до 50% по меньшей мере одного дисахарида, от более чем 10% до 80% по меньшей мере одного олигосахарида, от 0,1% до 10% по меньшей мере одного полисахарида, от 0,5% до 40% по меньшей мере одного гидролизованного белка и по меньшей мере одну соль карбоновой кислоты в количестве 0,5-20%, при этом проценты указаны относительно общей массы композиции, при этом указанный биологически активный материал представляет собой: живую бактерию, гриб, фаг, фермент, белок или пестицид (варианты).

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой вакцину инактивированную эмульсионную против ящура типа А.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой вакцину инактивированную эмульсионную против ящура типа О.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса ящура. Представлен штамм вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Получен штамм Эшли вируса калицивироза кошек, депонированный в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» под номером V-697, обладающий стабильной инфекционной активностью, адаптированный к перевиваемым культурам клеток.

Изобретения касаются вакцины и способа ее использования. Охарактеризованная вакцина включает: (i) живой аттенуированный QX-подобный вирус инфекционного бронхита (IB), полученный посредством пассирования на яйцах домашней птицы с развивающимися эмбрионами от 25 до 80 раз) и имеющий белок S1, кодируемый нуклеотидной последовательностью, которая по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO.

Предложен штамм энтеровируса человека А71 типа субгенотипа С4. Штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора под регистрационным номером V-670.

Изобретение относится к области биотехнологии, генной инженерии и вирусологии. Раскрыта конструкция, которая, при экспрессии в клетке-хозяине, является способной продуцировать пустые вирусные капсиды.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для профилактики псевдомоноза и вирусной геморрагической болезни кроликов. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя псевдомоноза Pseudomonas aeruginosa и вируса геморрагической болезни кроликов, полученных путем отбора пораженных органов от павших кроликов из местного эпизоотического очага.
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. .

Изобретение относится к ветеринарной медицине. .

Изобретение относится к ветеринарной медицине. .

Изобретение относится к биотехнологии, а именно генной инженерии. Предложен штамм дрожжей Hansenula polymorpha - продуцент рекомбинантного белка L1 вируса папилломы человека (HPV) типа 11. Штамм был получен путем введения в геном клетки дрожжей одной копии последовательности ДНК, кодирующей капсидный белок L1 HPV типа 11, под контролем промотора ДАК, и одной копии последовательности ДНК, кодирующей капсидный белок L1 HPV типа 11, под контролем промотора МОХ. Штамм обеспечивает высокий выход рекомбинантного белка L1 HPV, обладающего антигенными и иммуногенными свойствами природного антигена. Изобретение может быть использовано для микробиологического получения рекомбинантного белка L1 HPV типа 11. 2 ил., 1 табл., 9 пр.

Настоящее изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии. Предложен штамм «ВН-3» вируса гепатита утят типа I рода Avihepatovirus семейства Picornaviridae, выделенный от клинически больных утят, адаптированный к утиным эмбрионам и культуре клеток и аттенуированный в отношении утят. Полученный штамм депонирован в Государственную коллекцию вирусов в НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского ФГБНУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России под № 2859. Охарактеризованный штамм обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью, найдет широкое применение в промышленном утководстве в качестве основного компонента инактивированных эмульгированных вакцинных препаратов против вирусного гепатита утят типа I и в изготовлении диагностических наборов иммуноферментного анализа. 4 табл., 3 пр.

Наверх