Фосфатмобилизующий штамм почвенных бактерий lelliottia nimipressuralis ccm 32-3 и биопрепарат на его основе для оптимизации минерального питания растений, стимуляции их роста и повышения урожайности

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штамм Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 и биопрепарат на его основе. Указанный штамм депонирован в ВКПМ под регистрационным номером ВКПМ В-12783. Биопрепарат на основе штамма почвенных бактерий Lelliottia nimipressuralis ВКПМ В-12783 представляет собой производственную культуру этого штамма. Группа изобретений позволяет улучшить минеральное питание растений и повысить урожайность сельскохозяйственных культур. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, биотехнологии, микробиологической промышленности и сельскому хозяйству, а именно к микробиологическим средствам оптимизации минерального питания растений путем предпосевной обработки семян эффективными ростстимулирующими и фосфатмобилизующими бактериями, способными приживаться в ризосфере растений.

Известно, что современное аграрное производство, ввиду интенсивного применения минеральных удобрений и ядохимикатов для защиты растений от вредителей и болезней, является одним из источников загрязнения окружающей среды. В связи с этим возникает проблема их частичной замены альтернативными приемами, основанными на природных процессах самовозобновления. Одним из таких экологически безопасных и ресурсосберегающих элементов функционирования и устойчивого развития агроэкосистем является введение в современные технологии выращивания сельскохозяйственных культур микробных препаратов: как удобрительных, так и для защиты растений (Завалин А.А., Кожемяков А.П. Новые технологии производства и применение биопрепаратов комплексного действия / СПб: ХИМ-ИЗДАТ, 2010, 64 с.; Тихонович И.А., Проворов Н.А. Сельскохозяйственная микробиология как основа экологически устойчивого агропроизводства: фундаментальные и прикладные аспекты / Сельскохозяйственная биология, №3, 2011, С. 3-9).

Наибольшее распространение в последнее время получили препараты, созданные на основе азотфиксирующих микроорганизмов. Однако необходимо помнить, что плодородие почв тесно связано с наличием в них фосфора. Поэтому одной из наиболее важных задач агррномической науки является разработка путей повышения доступности почвенного фосфора и улучшения минерального питания растений. Выходом из этой ситуации является создание и применение биологических препаратов на основе эффективных штаммов бактерий, обладающих способностью к ферментативному или метаболическому превращению труднорастворимых почвенных фосфатов в доступные для растений формы. В настоящее время применяют ряд препаратов, созданных на основе фосфатмобилизующих бактерий (Суховицкая Л.А. Фосфатмобилизующие микроорганизмы, их свойства и использование в практике сельского хозяйства / Актуальные проблемы плодородия почв в современных условиях: матер. 2-го съезда белорусского общества почвоведов. Минск, 2001, Книга 2, с. 288-290; Мучкин Е.В. Применение новых бактериальных препаратов в технологии выращивания столовой свеклы / Агроэкологическая эффективность применения средств химизации в современных технологиях возделывания сельскохозяйственных культур: матер. 39-ой межд. науч. конф.: М., 2005, с. 263-266; P. Jain, D.S. Khichi. Phosphate solubilizing microorganisms (PSM): an ecofriendly biofertilizer and pollution manager // J. of Dynamics in Agricultural Research. 2014, V. 1(4), p. 23-28).

Известен штамм почвенных бактерий Bacillus megaterium AP-1, улучшающий фосфорное питание растений за счет использования труднорастворимых фосфатов железа, что способствует повышению урожайности овощных культур. Штамм был выделен из кремнеземистого сапропеля в Белоруссии и депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов ВНИИгенетика, коллекционный номер ВКПМ В-4440 (А.с. СССР №1645266 A1, C05F 11/08, C12N 1/20, опубл. 30.04.1991, бюл. №16).

Известен эффективный штамм почвенных фосфатрастворяющих бактерий Pseudomonas chlororaphis ssp chlororaphis Vsk-26a3, обладающий способностью подавлять фитопатогенные грибы и бактерии. Штамм Pseudomonas chlororaphis ssp chlororaphis Vsk-26a3 высвобождает фосфаты из нерастворимого минерального сырья, имеет широкий спектр действия против фитопатогенных грибов (подавляет 15 видов) и бактерий, а также стимулирует рост растений и повышает их урожайность. Штамм депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск» под номером В-7427 (Патент РФ №2603281 C1, C12N 1/20, A01N 63/00, опубл. 27.11.2016, бюл. №33).

Известен эффективный штамм фосфатмобилизующих бактерий Bacillus subtilis 5-RK, который выделен из чернозема и депонирован в Депозитарии микроорганизмов Института микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболотного, коллекционный номер В-7023. Штамм В. subtilis 5-RK характеризуется высокой активностью мобилизации фосфора из труднорастворимых неорганических и органических фосфатов (трикальцийфосфат, глицерофосфат, фитин), проявляет антагонистическую активность к фитопатогенным грибам и бактериям, стимулирует рост растений и повышает их урожайность (Патент Украины №54923A, C05F 11/08, C12N 1/20, опубл. 17.03.2003, бюл. «Промислова » №3).

Недостаточная эффективность существующих микробных препаратов объясняется тем, что они созданы на основе микроорганизмов, обитающих в почвах средней климатической зоны, имеющих нейтральную или кислую реакцию почвенного раствора. Такие условия не способствуют приживаемости штаммов-биоагентов в ризосфере и, соответственно, функционированию растительно-микробных ассоциаций в почвах южных регионов России.

В основу изобретения поставлена задача получения штамма почвенных бактерий, адаптированного к почвенно-климатическим условиям юга России, способного эффективно трансформировать труднорастворимые соединения фосфора в легкоусвояемые для растений формы, стимулировать рост и развитие растений, а также создания биопрепарата на его основе, что обеспечит оптимизацию минерального питания, улучшение развития и повышение урожайности сельскохозяйственных культур.

Поставленная задача решена путем выделения из чернозема южного нового эффективного штамма Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3, полученного в отделе сельскохозяйственной микробиологи ФГБУН «НИИСХ Крыма». Выделенный из чернозема южного эффективный штамм Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 используют для изготовления бактериального препарата, стимулирующего рост и повышающего урожайность сельскохозяйственных растений.

Новый штамм Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 получен микробиологическим выделением фосфатмобилизующих бактерий из чернозема южного в соответствии с общепринятыми методиками (Метод, указания по выделению микроорганизмов, растворяющих труднодоступные минеральные и органические соединения фосфора. Под ред. Г.С. Муромцева, Л.: ВНИИСХМ, 1981, 20 с.).

Выделение и идентификация штамма по морфологическим и биохимическим свойствам проведена Чайковской Л.А. и Мельничук Т.Н. согласно определителей Берги (1984, 1997) и методических рекомендаций (Возняковская Ю.М., Попова Ж.П., 1985). Генетическая идентификация проведена в 2016 г. Хапчаевой С.А. в ФИЦ биотехнологии РАН: в качестве таксономических маркеров выбраны гены 16S рРНК и ген гиразы субъединицы Б gyrB, амплифицируемые с праймерами RD1 - FD1 (Weisburg et al., 1991) и UP1 - UP2r (Yamamoto et al., 1995), соответственно. На основании проведенного анализа штамм идентифицирован как Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3.

Депонирование Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 осуществлено во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (Национальный Биоресурсный Центр ВКПМ ФГБУ ГосНИИгенетика) под регистрационным номером ВКПМ: В-12783.

Биотехнологическая характеристика. Штамм Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 трансформирует углеводы с образованием органических кислот. Отмеченные свойства штамма указывают на возможность трансформировать минеральные труднорастворимые фосфаты. Кроме того, L. nimipressuralis ССМ 32-3 обладает способностью к продуцированию фитогормонов. Ростстимулирующая активность штамма изучена Чайковской Л.А. и Баранской М.И. Активность синтеза фитогормонов (двусуточная культура на глюкозо-аспарагиновой среде) составляет: ИУК - 449 мкг/л, цитокинины (зеатин и зеатинрибозид) - 620 мкг/л, вещества гиббереллиновой природы - 18781 мкг/л.

Культурально-морфологические признаки. Клетки суточной культуры имеют палочковидную форму размером 1,6×0,9 мкм, грамнегативны, подвижны - латеральное прикрепление жгутиков, споры не образуют. При изучении ультратонкой структуры клеток установлено, что они имеют строение, характерное для грам(-) бактерий. По данным сканирующей электронной микроскопии на поверхности колоний выявлена мощная поверхностная пленка, сквозь которую просматриваются контуры клеток; их расположение в колониях хаотичное. Колонии клеток на плотных средах однотипные, мелкие, выпуклые, округлые, имеют ровный четкий контур, непрозрачные, 1,0-1,5 мм в диаметре, появляются на вторые сутки, цвет: желтовато-белый на глицериново-пептонном агаре и светло-бежевый на МПА. Штамм принадлежит к быстрорастущим бактериям. При росте на МПБ образует незначительный осадок; на картофельном ломтике - умеренный рост с образованием незначительного количества слизи, цвет штриха белесый, ломтик слегка побуревший; на среде с органическим источником азота (МПА) - рост хороший, на синтетической среде с минеральным азотом (Козера) - умеренный, менее интенсивный. Штамм L. nimipressuralis ССМ 32-3 не образует флюоресцирующих и феназиновых пигментов; способен к образованию протеолитического фермента желатиназы; амилолитические ферменты не выделяет - крахмал не гидролизирует; оксидазный тест положительный - выделяет каталазу; синтез уреазы отсутствует; органические кислоты, как единственный источник углерода, не использует; нитраты восстанавливает до нитритов -яркое проявление признака, реакция с реактивом Гриса позитивная, газообразование не выявлено. Штамм L. nimipressuralis ССМ 32-3 при использовании углеводов (глюкоза, сахароза, рамноза, лактоза) подкисляет среды с образованием пузырьков газа; имеет способность к бродильному характеру использования глюкозы - при постановке окислительно-восстановительного теста Хью-Лейфсона выявлено, что бактерии развиваются и подкисляют среду как в аэробных, так и в анаэробных (с разрывом столбика агара) условиях. Способен к хроматредукции. При росте на среде Эндо не образует индол, цвет колоний - светло-бежевый. Температурный интервал роста штамма на плотных и жидких средах составляет 15-37°С, отличия между ростом при 22°С и 37°С не выявлены. Рост бактерий наблюдается в диапазоне рН 5-8, оптимум рН - 7-7,5. Признаки штамма устойчивы. Он не является патогенным.

Культуру хранят на МПА с добавлением кукурузного экстракта или на гороховом агаре с добавлением сахарозы при температуре 4-5°С, пересев - один раз в 4 месяца.

Исследования, проведенные с целью изучения механизма действия штамма L. nimipressuralis ССМ 32-3, показали возможность продуцирования в процессе метаболизма органических кислот. При изучении физиолого-биохимических свойств штамма L. nimipressuralis ССМ 32-3 выявлено, что на средах, содержащих углеводы (глюкоза, сахароза, рамноза, лактоза), происходит подкисление среды. Таким образом, одним из аспектов механизма действия L. nimipressuralis ССМ 32-3 является способность к образованию в процессе метаболизма органических кислот, способствующих растворению труднорастворимых неорганических фосфатов и превращению их в доступные для растений формы.

Активность мобилизации штаммом 32-3 минеральных труднорастворимых фосфатов (ортофосфат кальция) в жидкой ГА среде исследована в условиях стерильных опытов. Способность штамма L. nimipressuralis ССМ 32-3 мобилизовать фосфор из труднорастворимых неорганических (Саз (POib) соединений подтверждается примером 1.

Пример 1. Готовили глюкозо-аспарагиновую (ГА) среду следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0, аспарагин - 1,0, K₂SO₄ - 0,2, Mg₂SO₄ - 0,2, кукурузный экстракт - 0,2, рН=6,5-7,0.

Источником фосфора служил Са₃(PO₄)₂, который вносили в среду из расчета 5 г/л до стерилизации. Исследования проводили в условиях стерильных опытов в трехкратной повторности. Среду разливали по 100 мл в колбы Эрленмейера (объем 250 мл) и стерилизовали в течение 20 минут при 0,5 атм. Посевной материал приготавливали, выращивая бактерии в течение 24 часов в пробирках на агаризованной ГА среде. Готовили водную суспензию бактерий и вносили в колбы с жидкой ГА средой (смыв одного косяка на колбу). Котроль - среда ГА без инокуляции.

Бактерии L. nimipressuralis ССМ 32-3 культивировали в течение 3 суток при 28°С в периодических условиях на качалках (230 об/мин). После окончания культивирования опытные образцы центрифугировали в течение 10 минут при 6000 об/мин. Концентрацию растворимого фосфора (РО₄)^-3 в фугате культуральной жидкости определяли колориметрически с использованием молибденово-кислого аммония и аскорбиновой кислоты в качестве восстановителя. Содержание водорастворимого фосфора, накапливаемого штаммом 32-3, рассчитывали по разнице его концентрации в опытном (инокулированном) и контрольном (стерильном) вариантах.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что L. nimipressuralis ССМ 32-3 активно мобилизует фосфаты из труднорастворимых неорганических (Са₃(PO₄)₂) соединений. Выявлено, что в опытных образцах содержание растворимого фосфора колебалось в пределах 141-184 мг/л, а в контроле - 20,7-22,8 мг/л (таблица 1).

Расчет содержания растворимого фосфора, накапливаемого штаммом в течение 3 суток, показал, что его количество составляло 165,5 мг/л (среднее по трем вариантам), а при вычете показаний контроля - 143,7 мг/л. Таким образом установлено, что количество растворимого фосфора, освобожденного штаммом L. nimipressuralis ССМ 32-3 из Са₃(PO₄)₂, составляло 143,7 мг/л.

На следующем этапе исследований проведена проверка способности L. nimipressuralis ССМ 32-Зк мобилизации труднорастворимых фосфатов в условиях вегетационных опытов (тест-культуры: соя и яровой ячмень).

Пример 2. Растения выращивали в сосудах объемом 1000 мл, субстрат - простерилизованный песок, единственный источник фосфора - Са₃(PO₄)₂, внесенный в субстрат; подкормку растений осуществляли модифицированным раствором Прянишникова (без фосфата). Контроль - растения без инокуляции. В опытных вариантах проводили предпосевную инокуляцию семян бактериальной суспензией L. nimipressuralis ССМ 32-3. Продолжительность опыта 7 недель, повторность пятикратная.

Результаты изучения влияния штамма L. nimipressuralis ССМ 32-3 на рост, продуктивность и накопление минеральных фосфатов в фитомассе растений в условиях вегетационных опытов представлены в таблицах. Установлено, что инокуляция семян сои (расчетная доза инокулюма 1,6×10⁴ бактерий/семя) положительно повлияла на рост и продуктивность растений. Так, их высота возросла на 17%; накопление сухой массы - на 14% (таблица 2). Свидетельством более энергичного усвоения фосфора труднорастворимых соединений является увеличение содержания Р₂О₅ в биомассе инокулированных растений: на 39% по сравнению с контролем.

Подобные результаты получены и при инокуляции семян ярового ячменя (расчетная доза инокулюма 2,0×10³ бактерий/семя). Высота инокулированных растений увеличилась на 6%, масса побегов - на 9% против контроля (таблица 3). Предпосевная инокуляция семян положительно повлияла также и на накопление Р₂О₅ в побегах ячменя. Так, содержание Р₂О₅ возросло на 16% по сравнению с контролем.

Таким образом, предпосевная бактеризация семян способствует более энергичному усвоение фосфора из Са₃(PO₄)₂ инокулированными растениями: содержание Р₂О₅ в побегах возросло (в зависимости от вида растений) на 16-39% по сравнению с контролем.

В дальнейших исследованиях, проведенных с целью раскрытия механизма действия бактерии L. nimipressuralis ССМ 32-3, показана ее способность в процессе метаболизма продуцировать фитогормоны. Количественное определение фитогормонов в культуральной жидкости штамма 32-3 проведено методом количественной спектроденситометрической тонкослойной хроматографии.

Пример 3. Для анализа использована нативная культуральная жидкость L. nimipressuralis ССМ 32-3. Культивирование образцов проводили на глюкозо-аспарагиновой среде в колбах (объем 300-350 мл) на качалках (220 об/мин) при температуре 28°С в течение 48 часов. В качестве инокулюма использована суточная маточная культура, которую выращивали на ГА среде в колбе с рабочим объемом 100 мл.

После окончания культивирования образцы центрифугировали (20 минут при 6000 об/мин). Экстракцию фитогормонов проводили в делительных воронках: трижды по 15 минут при энергичном встряхивании смеси КЖ и растворителя. Объединенные экстракты высушивали Na₂SO₄ (безводным), фильтровали, упаривали насухо и смывали 3 мл 70%-ного этанола. Для экстракции β-индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) из КЖ применяли диэтиловый эфир (1:1 по объему) при рН 3, подкисление проводили 2н HCl. Экстракцию гиббереллинов проводили этилацетатом (1:3 по объему) при рН 2,5, подкисление - 1н HCl; цитокининов - н-бутанолом (1:1 при рН 8), подщелачивание - 1н NaOH.

В дальнейшей работе в качестве экстрагента для освобождения физиологически активных веществ использовали 96%-й этанол. Кроме того, в этанольном экстракте при охлаждении осаждаются полисахариды. Грубый этанольный экстракт содержит большое количество сопутствующих веществ, поэтому проводили его предварительную очистку и концентрирование на пластинках с силикагелем марки Silufol UV₂₅₄ ("Chemapol", Чехия).

Экспресс-очистка включала в себя следующие этапы:

1 - хроматография в хлороформе (вымывание пигментов и жиров со стартовой точки). Для нанесения образца использовали микропипетку с отогнутым носиком. Экстракт с помощью пипетки наносили на пластинку в виде полоски шириной 2-4 см и длиной 16-18 см. По верхнему краю пластинки с образцом оставляли 4-5 см свободного пространства. Во время разгонки экстракта в хлороформе в эту зону вымывались пигменты и другие вещества. После разгонки эту часть пластинки отрезали, оставляя полоску шириной 1 см над стартовой полосой, которая необходима для погружения в следующую систему растворителей;

2 - хроматография в растворе 12,5%-ного аммиака. Аммиак выводит из стартовой зоны физиологически активные вещества и концентрирует их в виде тонкой полоски над стартовой точкой. Место нанесения образца, как и на предыдущем этапе, отрезали, оставляя место для погружения пластинки в следующую систему растворителей;

3 - хроматография в системе растворителей: этилацетат - уксусная кислота (20:1) - для ауксинов и цитокининов, хлороформ - этилацетат - уксусная кислота (5:4:1) - для гиббереллинов. Зоны, совпадающие с Rf нанесенных стандартных растворов, счищали и элюировали. Элюат ИУК рехроматографировали на пластинках с окисью кремния ("Merck" №5715) в системе растворителей хлороформ - этилацетат - уксусная кислота (100:100:1), а элюатцитокининов - на пластинках с окисью алюминия ("Merck" №5713) в системе растворителей хлороформ - уксусная кислота (19:1). Количественное детектирование фитогормонов осуществляли с помощью сканирующего спектросенситометра "Camag TLC Scanner" (Швейцария).

Результаты проведенных исследований по выявлению и идентификации фитогормонов в культуральной жидкости L. nimipressuralis ССМ 32-3 приведены в табл. 4.

Установлено, что L. nimipressuralis ССМ 32-3 продуцирует ауксины, которые представлены ИУК, ее количество в культуральной жидкости составило 449 мкг/л. Кроме того, в культуральной жидкости L. nimipressuralis ССМ 32-3 выявлены и идентифицированы вещества, относящиеся к цитокининам. Показано, что они представлены как в виде свободных (зеатин), так и связанных соединений (зеатинрибозид). Количество зеатина в культуральной жидкости составило 254 мкг/л, зеатинрибозида - 366 мкг/л, а общее количество цитокининов - 620 мкг/л. Выявлена также способность L. nimipressuralis ССМ 32-3 к синтезу гиббереллинов: в культуральной жидкости обнаружены не идентифицированные вещества гиббереллиновой природы в достаточно высоких количествах - 18781 мкг/л.

На основе штамма бактерий L. nimipressuralis ССМ 32-3 создан биопрепарат, применение которого позволяет стимулировать рост сельскохозяйственных культур и повысить их урожайность, а также снизить дозы внесения минеральных удобрений при их выращивании.

Биопрепарат получают следующим образом.

Готовят агаризованную среду для выращивания штамма, а также жидкие питательные среды для маточной и производственной культуры бактерий следующих составов, (мас. %):

Проводят проверку питательных сред на наличие посторонней микрофлоры с помощью контрольного высева одной капли среды на МПА с углеводами и инкубации при 28-37°С в течение двух суток. В производственной питательной среде обеспечивают соответствие уровню рН 6,8-7,3.

Получают посевную нативную культуру путем выращивания штамма фосфатмобилизующих бактерий L. nimipressuralis ССМ 32-3 на агаризованной среде в пробирках двое суток в термостате при температуре 25-30°С.

Получают маточную культуру штамма фосфатмобилизующих бактерий L. nimipressuralis ССМ 32-3 после смыва двухсуточной культуры бактерий с агарового косяка в жидкую питательную среду для маточной культуры и выращивания трое суток в бутылях объемом три литра на качалке при оборотах 200-220 в минуту и температуре 27-30°С и достижения титра 15-24 млрд клеток в 1 мл.

Получают производственную культуру в ферментере путем инокуляции маточной культурой штамма L. nimipressuralis ССМ 32-3 в количестве 5-10% от общего объема производственной питательной среды и культивирования ее в течение двух-трех суток при температуре 27-30°С и 200-220 оборотах в минуту до титра 10-20 млрд клеток в 1 мл, обеспечивающего высокое качество и эффективность удобрительного биопрепарата.

Полученный удобрительный биопрепарат на основе штамма фосфатмобилизующих бактерий L. nimipressuralis ССМ 32-3 используется для предпосевной обработки семян сельскохозяйственных культур (злаковых, технических, овощных), корневой системы саженцев плодовых и рассады овощных растений для улучшения минерального питания, стимуляции их роста и повышения продуктивности. Хранят биопрепарат при температуре 10-15°С - до двух недель, а в холодильнике при 4-8°С (без замораживания) - до шести месяцев.

При обработке биопрепаратом на основе штамма Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 получены следующие результаты.

В 2016 году в Республике Крым (Симферопольский район, село Маленькое, учебно-опытное поле Агропромышленного колледжа ФГАОУ ВО КФУ) была проведена предпосевная инокуляция семян озимой пшеницы сорта Находка биопрепаратом на основе штамма Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3. Посевы, выросшие из семян, обработанных данным удобрением, при уборке (2017 г.) показали урожайность 3,31 т/га. На участке, где были высеяны семена озимой пшеницы без инокуляции (контроль), зерновая продуктивность составила 2,63 т/га. Прибавка урожая составила 0,68 т/га (26%).

В 2017 году в Республике Крым (Симферопольский район, село Маленькое, учебно-опытное поле Агропромышленного колледжа ФГАОУ ВО КФУ) были проведены испытания биопрепарата на основе бактерии Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 при выращивании томатов в условиях открытого и защищенного грунта. Установлено, что при использовании биопрепарата на основе почвенной бактерии Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 (предпосевная обработка семян и корневой системы рассады) урожай томатов (сорт Шанс) по сравнению с контролем составил: открытый грунт - 16,8 т/га, контроль 15,0 т/га; защищенный грунт - 9,6 кг/м², контроль - 8,5 кг/м². Прибавка урожая по сравнению с контролем составила: открытый грунт - 1,8 т/га (12%), защищенный грунт - 1,1 кг/м² (13%).

В 2014-2016 гг. в Республике Крым (Симферопольский район, село Маленькое, учебно-опытное поле Агропромышленного колледжа ФГАОУ ВО КФУ) были проведены испытания биопрепарата на основе бактерии Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 при выращивании саженцев семечковых плодовых культур (яблоня). При использовании биопрепарата для обработки слаборослого подвоя М9 семечковых плодовых культур (яблони) увеличился выход стандартных саженцев (на 28%) по сравнению с контролем. Применение биопрепарата вызвало повышение приживаемости подвоев на 12%, улучшение роста корневой системы и развития слаборослого подвоя М9 на 18%, сохранность глазков после перезимовки увеличились на 24% по сравнению с контролем.

Приведенные примеры не отражают всего спектра возможностей положительного использования биопрепарата для повышения продуктивности и стимуляции роста сельскохозяйственных культур, однако наглядно показывают преимущества заявляемого препарата.

Таким образом, предлагаемый штамм почвенных бактерий Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 обладает способностью продуцировать фитогормоны и трансформировать труднорастворимые минеральные фосфаты в усвояемые для растений формы, а биопрепарат на его основе позволяет оптимизировать минеральное питание растений, стимулировать их рост и повысить урожайность сельскохозяйственных культур.

1. Фосфатмобилизующий штамм почвенных бактерий Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3, продуцент фитогормонов, депонированный во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ФГБУ ГосНИИгенетика под регистрационным номером ВКПМ В-12783, используемый для получения биопрепарата для оптимизации минерального питания растений, стимуляции их роста и повышения урожайности.

2. Биопрепарат для оптимизации минерального питания растений, стимуляции их роста и повышения урожайности на основе фосфатмобилизующего штамма почвенных бактерий Lelliottia nimipressuralis ССМ 32-3 ВПКМ В-12783.