Средство, обладающее апоптоз-ингибирующей активностью

Авторы патента:

Плотников Евгений Владимирович (RU)

Бохан Николай Александрович (RU)

Епимахова Елена Викторовна (RU)

Лосенков Иннокентий Сергеевич (RU)

A61P9/10 - для лечения ишемических или атеросклеротических заболеваний, например антиангинозные средства, коронарные вазодилататоры, средства для лечения инфаркта миокарда, ретинопатии, цереброваскулярной недостаточности почечного артериосклероза

A61P37/04 - иммуностимуляторы

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K31/19 - карбоновые кислоты, например валилпролиновая кислота (салициловая кислота A61K 31/60)

Владельцы патента RU 2677877:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук" (Томский НИМЦ) (RU)

Изобретение относится к области медицины и биологии и представляет собой новое средство, обладающее апоптоз-ингибирующей (антиапоптотической) активностью. Средство может быть использовано для коррекции состояний, связанных с повышением уровня апоптоза клеток (окислительный стресс, ишемические повреждения), а также в качестве ингибитора апоптоза в культурах клеток in vitro. Средство представляет собой кристаллический пируват лития общей формулы C₃H₃O₃Li. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих апоптозингибирующей активностью, и может быть использовано в медицине и биологии. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Апоптоз является вариантом программируемой гибели клетки, как правило, вызываемой неблагоприятными внешними факторами или внутренними нарушениями в работе клетки не совместимые с нормальным функционированием. Следствием апоптоза является фрагментация клетки, а также ее ядра и ее элиминация фагоцитами без развития воспалительной реакции.

В некоторых ситуациях активация апоптоза приводит к нежелательным последствиям, в частности повышению гибели клеток при работе с клеточными культурами In vitro. При некоторых патологических состояниях также возрастает уровень апоптоза, например, при окислительном стрессе (повышении уровня свободно-радикального окисления), вызванного химическими, физическими, воспалительными или ишемическими факторами.

В настоящее время, известно средство, способствующее экспрессии белка bcl-2, средство, ингибирующее апоптоз, и средство, предотвращающее повреждение ДНК эпидермальных клеток ультрафиолетом [1]. Данное средство содержит растворимый в воде и этаноле экстракт солодки в качестве активного ингредиента. Однако, использование растительного компонента значительно усложняет процедуру получения и стандартизации активного вещества.

Известны композиции, ингибирующие апоптоз, способы очистки композиций и их применение [2], где в качестве основного действующего компонента применяют растительный порошок из растений семейств leguminosae, solanum, allium, семян гороха и сои. Недостатком метода является сложный процесс многостадийной обработки и экстракции с использованием различных растворителей и последующей очистки.

Для ингибирования апоптоза в популяции клеток Т-лимфоцитов используется антагонист-лиганд RAR-γ или агонист-лиганд RAR-α [3]. Данное средство предназначено для лечения заболеваний, связанных с избыточной скоростью апоптоза, в том числе, синдрома иммунодефицита, вызванного вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или отторжения трансплантата. Также известны ингибиторы апоптоза и их применение (2247), на основе антиапоптозных фрагментов белка DAXX, которые получают из 17-24 последовательных аминокислот белка DAXX, включающих KKSRKEKKQTGSGPLG, а также их пептидомиметики и конъюгаты с проникающим в клетки пептидом. Однако, данный подход включает сложный процесс получения активного субстрата.

Целью заявленного изобретения является расширение арсенала средств, обладающих апоптоз-ингибирующей активностью.

Поставленная цель достигается применением соли лития и пировиноградной кислоты (пирувата лития) C₃H₃O₃Li в качестве ингибитора апоптоза. Различные соли лития имеют широкое применение в психиатрии в качестве нормотимиков (стабилизаторов настроения) [4]. Ранее было известно применение пирувата лития для профилактики и лечения нейродегенеративной патологии и сосудистой деменции [5], где для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний и сосудистой деменции предложены средства, содержащие органические соли лития.

Однако соли лития, в частности, пируват лития до настоящего времени не использовался в качестве ингибитора апоптоза. Антиапоптотические свойства пирувата лития впервые обнаружены и доказаны экспериментально. Сочетание психостабилизирующих, нейропротекторных, антиоксидантных свойств пирувата лития с его вновь выявленными антиапоптотическими свойствами перспективно для практического применения, в частности в клеточной биологии и медицине, включая, терапию ишемических повреждений, трансплантологию.

Исследование влияния пирувата лития на процесс апоптоза в культуре мононуклеаров периферической крови было проведено с использованием набора реактивов «Annexin V & Dead Cell Assay Kit» (Merck Millipore, Германия) на проточном цитометре «Muse Cell Analyzer» (Merck Millipore, Германия). Уровень спонтанного апоптоза определяли на интактной культуре после 24 часов инкубации при 37°С, уровень индуцированного апоптоза определяли после 24 часов инкубации при 37°С при добавлении индуктора апоптоза (гидроперекиси трет-бутила в концентрации 50 мкмоль/л).

Метод определения уровня апоптоза в культуре заключается в дифференцировании живых клеток, клеток в состоянии апоптоза и клеток в состоянии некроза (мертвые клетки) по уровню флуоресценции и виду красителя. Клетки, экспрессирующие на внешней стороне мембраны фосфатидил-серин и связанный с ним аннексии V, меченный флуоресцентной меткой, определяются как апоптотические. При этом различают клетки в ранней стадии апоптоза (early apoptosis, аннексии V-положительные) и в поздней (late apoptosis, аннексии V-положительные/пропидий иодид положительные). Клетки, содержащие только интерколирующий флуоресцентный краситель пропидий иодид, определяются как мертвые (некротические).

На фиг. 1 представлены: (а) интактная культура, (б) культура в присутствии гидроперекиси трет-бутила, (в) культура в присутствии пирувата лития, (г) культура в присутствии пируваат лития и гидроперекиси трет-бутила

Пример 1

Для оценки уровня антиапоптотической активности готовили рабочий раствор для чего 100 мг пирувата лития растворяли в 10 мл дистиллированной воды. Полученный раствор исследовали in vitro на клеточной суспензии мононуклеаров периферической крови человека. Клеточную суспензию мононуклеаров выделяют из периферической крови здоровых доноров центрифугированием на градиенте фиколла. Далее отмывают и ресуспендируют в среде RPMI 1640 и вносят в соответствующие лунки планшета. Для оценки уровня спонтанного апоптоза добавляют раствор пирувата лития в суспензию мононуклеаров с расчетом на конечную концентрацию в лунке 1,2 ммоль/л. Для оценки уровня индуцированного апоптоза добавляют в лунки с пируватом лития раствор гидроперекиси трет-бутила с расчетом на конечную концентрацию в лунке 50 мкмоль/л. В качестве отрицательного контроля используют интактную суспензию клеток, в качестве положительного контроля суспензию клеток с добавлением гидроперекиси трет-бутила с расчетом на конечную концентрацию в лунке 50 мкмоль/л. Клетки инкубируют в течение 24 часов при 37°С в среде 5% углекислого газа. Уровень апоптоза в культуре рассчитывался как количество клеток в раннем апоптозе (early apoptosis) и в позднем (late apoptosis) в процентах к общему количеству клеток.

Результаты определения уровня апоптоза представлены в таблице 1 в процентах апоптотических клеток после 24 часов инкубации мононуклеаров при воздействии пируватом лития и без него.

*р<0,001 по сравнению с интакной культурой

**р=0,007 по сравнению с культурой в присутствии гидроперекиси трет-бутила

Как видно из таблицы 1 и фиг. 1, при добавлении пирувата лития достигалось выраженное ингибирование индуцированного апоптоза и сохранение основного пула живых клеток: процент индуцированного апоптоза мононуклеаров периферической крови при инкубации с пируватом лития был статистически значимо ниже по сравнению с культурой, инкубированной с гидроперекисью трет-бутила (t=2,944, df=24, р=0,007).

Список литературы

1. Пат. 2448723 Российская Федерация, МПК А61К, А61Р. Средство, способствующее экспрессии белка BCL-2, средство, ингибирующее апоптоз, и средство, предотвращающее повреждение ДНК эпидермальных клеток ультрафиолетом / Такита Macao (JP); заявитель и патентообладатель НИСИХАРА КО, ЛТД (JP). - №2010152636; заявл. 23.05.2008; опубл. 27.04.2012, Бюл. №12 - 6 с.

2. Заявка №96115127 (RU).

3. Пат. 2191008 Российская Федерация, МПК А61К, А61Р. Антагонист-лиганд RAR-γ или агонист-лиганд RAR-α в качестве ингибитора апоптоза / ФЕШУШ Ласло (HU), СОНДИ Жужа (HU), РАЙХЕРТ Уве (FR); заявитель и патентообладатель САНТР ЭНТЕРНАСЬОНАЛЬ ДЕ РЕШЕРШ ДЕРМАТОЛОДЖИК ГАЛДЕРМА (С.И.Р.Д. ГАЛДЕРМА) (FR). - №98108534; заявл. 08.10.1996; опубл. 20.10.202, Бюл. №29.

4. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в двух частях. Ч1. - 12 изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1986. - С. 127-129).

5. Пат. 2587617 Российская Федерация, МПК А61К, А61Р. Способ профилактики и лечения нейродегенеративной патологии и сосудистой деменции / Громова О.А., Торшин И.Ю.; заявитель и патентообладатель Громова Ольга Алексеевна (RU), Трошин Иван Юрьевич (RU). - №2014152190; заявл. 23.12.2014; опубл. 20.06.2016, Бюл. №17-5 с.

Применение пирувата лития общей формулы C₃H₃O₃Li в качестве средства, обладающего апоптоз-ингибирующей активностью.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта. Терапевтическую эффективную дозу генетического материала, состоящего из гена сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF, гена глиального нейротрофического фактора GDNF и гена нейрональной молекулы адгезии NCAM, непосредственно вводят путем интратекальной инъекции в течение 4-х часов после наступления ишемического инсульта головного мозга.

Кристаллическая форма азолбензольного производного // 2675854

Изобретение относится к кристаллу 2-[4-(2,2-диметилпропокси)-3-(1H-1,2,3,4-тетразол-1-ил)фенил]-4-метил-1,3-тиазол-5-карбоновой кислоты (кристаллическая форма A), характеризующемуся по меньшей мере одним из (i)-(iii): (i) его спектр порошковой рентгеновской дифракции имеет характерные пики с дифракционными углами 2θ (±0,5°) = 7,2°, 11,3°, 15,9°, 17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° и 28,6°; (ii) его спектр порошковой рентгеновской дифракции имеет структуру, изображенную на фиг.

Средство, обладающее противоинсультным действием // 2675601

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к лекарственному веществу, обладающему противоинсультным действием. Применение аскорбата лития дигидрата в качестве средства, обладающего противоинсультным действием.

Октагидро конденсированные азадекалиновые модуляторы глюкокортикоидного рецептора // 2674983

В настоящем изобретении предложены октагидро конденсированные азадекалиновые соединения общей формулы (I) или их стереоизомеры и фармацевтически приемлемые соли. В формуле (I) R1 представляет собой гетероарильное кольцо, выбранное из пиридина и тиазола, необязательно замещенное 1-4 группами, каждая из которых независимо выбрана из R1a; каждый R1a независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, C1-6 галогеналкила; кольцо J выбрано из группы, состоящей из фенила, пиридина, пиразола и триазола; каждый из R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, галогена, C1-6 галогеналкила и -CN; или в качестве альтернативы две группы R2 на соседних атомах кольца объединены с образованием морфолинового кольца, каждый R3a независимо представляет собой галоген; нижний индекс n представляет собой целое число от 1 до 3.

Средство для лечения заболевания, обусловленного нарушением окислительного стресса // 2674286

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, а именно к применению терапевтически эффективного количества соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с фумаровой кислотой формулы: для лечения заболевания, обусловленного окислительным стрессом и выбранного из группы, включающей болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, хорею Хантингтона, пигментный ретинит, митохондриальную энцефаломиопатию, рассеянный склероз, инсульт, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, ревматоидный артрит, псориаз.

Китайская лекарственная композиция для предотвращения или лечения сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний или деменции и способ ее получения и применение // 2674264

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для предотвращения или лечения сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний и/или деменции.

5-гидрокси-4-(трифторметил)пиразолопиридиновое производное // 2673810

Изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (I), или к его фармакологически приемлемой соли, в которой радикалы и символы имеют значения, приведенные в формуле изобретения.

Способ комплексной терапии при сочетанной ишемии центральной гемодинамической системы, нижних конечностей, сердца и головного мозга // 2673481

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для комплексной терапии при сочетанной ишемии центральной гемодинамической системы, нижних конечностей, сердца и головного мозга.

Гидроксипуриновые соединения и пути их применения // 2673458

Изобретение относится к новому соединению формулы (I), его (R)-изомеру или (S)-изомеру, или его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают свойствами ингибиторов PDE2 или TNF-α и могут найти применение для лечения таких заболеваний, как например, легочная гипертензия.

Производные 4-аминометилбензойной кислоты // 2673245

Изобретение относится к новому соединению формулы (1) и его фармацевтически приемлемой соли. Предложено лекарственное средство, содержащее соединение, представленное общей формулой (1), его фармацевтически приемлемая соль или его сольват.

Композиция для применения в качестве поддерживающей терапии при лечении опухолей, синдрома приобретенного иммунодефицита и лейкемии // 2674658

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для применения в качестве поддерживающей терапии при противоопухолевых химиотерапевтических лечениях, где указанная композиция содержит эффективное количество бактериального штамма Lactobacillus pentosus LPS01 с номером депонирования DSM 21980, депонированного Probiotical SpA 14.11.2008.

Состав для стимуляции иммунометаболических процессов и профилактики диарейного синдрома новорожденных телят // 2671635

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в животноводстве для стимуляции пищеварения, метаболизма, системы иммунитета, профилактики диарейного синдрома новорожденных телят.

Стимулятор повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности - "синэстрол 2%" и способ повышения клострального иммунитета и неспецифической резистентности // 2671634

Группа изобретений относится к области ветеринарии, в частности к средствам повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у новорожденных телят.

Новое пирролидиновое соединение и его применение в качестве агониста рецептора меланокортина // 2669938

Изобретение относится к пирролидиновому производному формулы [1], где цикл А представляет собой необязательно замещенную арильную группу и т.п.; R1 представляет собой необязательно замещенную алкильную группу и т.п.; R2 представляет собой атом галогена и т.п.; R3 представляет собой алкильную группу, замещенную необязательно замещенной арильной группой, и т.п., и R4 представляет собой атом водорода и т.п.

Способ получения комплекса биологически активных пептидов, обладающих иммуностимулирующей активностью // 2669691

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения комплекса биологически активных пептидов. Способ получения комплекса биологически активных пептидов, обладающего иммуностимулирующей активностью, из вилочковой железы крупного рогатого скота, включающий измельчение и гомогенизацию ткани, экстракцию гомогената раствором кислоты уксусной, содержащей цинк хлористый и раствор уксусной кислоты, обработку надосадочной жидкости ацетоном, промывку образовавшегося осадка ацетоном, высушивание осадка, экстракцию пептидов из высушенного порошка водой для инъекций и добавление фермента - сериновой эндопротеазы, далее экстракт выдерживают при нагревании и постоянном перемешивании, инактивируют фермент, охлаждают, сепарируют или фильтруют и лиофилизируют, при определенных условиях.

Производное сульфонамида и его применение в медицине // 2667520

Изобретение относится к новому производному сульфонамида общей формулы (1) и его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают ингибирующим действием в отношении α4-интегрина с высокой селективностью при слабом воздействии на α4β1 и сильном воздействии на α4β7.

Способ повышения адаптивных возможностей организма спортсменов в восстановительный период тренировочного процесса // 2664436

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу повышения адаптивных возможностей организма спортсменов. Способ повышения адаптивных возможностей организма спортсменов, заключающийся в том, что в восстановительный период тренировочного процесса вводят средство «Мелонелла плюс», а также маточное молочко и нектар из ягод облепихи «Олимп» по определенной схеме введения и дозировках.

Катионные эмульсии масло-в-воде // 2649133

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложена стабильная эмульсия масло-в-воде для доставки молекулы РНК в клетку, где указанная эмульсия содержит масло и катионный липид DOTAP.

Способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных // 2648466

Изобретение относится к ветеринарии и касается способа получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных, включающего промывание селезенки проточной водой, очищение от соединительнотканных и жировых элементов, выдержку селезенки в асептических условиях, гомогенизацию с добавлением дистиллированной воды, дальнейшую выдержку, ультрафильтрацию полученной смеси.

Композиция, обладающая иммуностимулирующим действием для сублингвального применения // 2647455

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, в частности иммунологии, и представляет собой композицию, обладающую иммуностимулирующим действием для сублингвального применения, состоящую из двуспиральной РНК бактериофага Ф6 в количестве 0,5±0,1 мг, одноцепочечной дрожжевой РНК в количестве 4,5±0,5 мг, пектина в количестве 21±3 мг, лактата кальция в количестве 15±3 мг, декстрана в количестве 100±10 мг, хлорида натрия в количестве 9±1 мг и воды очищенной до 1 мл.

Фотодинамические тиофены на основе металла и их применение // 2677855

Изобретение относится к соединению, имеющему формулу (I) ,включая фармацевтически приемлемые соли указанного соединения. В формуле (I): М выбран из группы, состоящей из железа, рутения и осмия, X выбран из группы, состоящей из Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3- и SO4-2, n=0, 1, 2, 3, 4 или 5, у=1, 2 или 3, z=0, 1 или 2, Lig в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из R1 выбран из группы, состоящей из и u представляет собой целое число, каждый из R2a, R2b, R2c, R2d, R2e и R2f представляет собой водород, R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h и R3i в каждом случае каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С1-6 алкила, R4a R4b и R4c в каждом случае представляет собой водород; или R4a и R4b в каждом случае, когда они присутствуют на кольце тиофена, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют необязательно замещенное кольцо, содержащее 6 атомов кольца, включая два атома кислорода.