Средство, обладающее апоптоз-ингибирующей активностью

Изобретение относится к области медицины и биологии и представляет собой новое средство, обладающее апоптоз-ингибирующей (антиапоптотической) активностью. Средство может быть использовано для коррекции состояний, связанных с повышением уровня апоптоза клеток (окислительный стресс, ишемические повреждения), а также в качестве ингибитора апоптоза в культурах клеток in vitro. Средство представляет собой кристаллический пируват лития общей формулы C3H3O3Li. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих апоптозингибирующей активностью, и может быть использовано в медицине и биологии. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и биологии и представляет собой новое средство, обладающее апоптоз-ингибирующей (антиапоптотической) активностью. Средство может быть использовано для коррекции состояний связанных с повышением уровня апоптоза клеток (окислительный стресс, ишемические повреждения), а также в качестве ингибитора апоптоза в культурах клеток in vitro.

Апоптоз является вариантом программируемой гибели клетки, как правило, вызываемой неблагоприятными внешними факторами или внутренними нарушениями в работе клетки не совместимые с нормальным функционированием. Следствием апоптоза является фрагментация клетки, а также ее ядра и ее элиминация фагоцитами без развития воспалительной реакции.

В некоторых ситуациях активация апоптоза приводит к нежелательным последствиям, в частности повышению гибели клеток при работе с клеточными культурами In vitro. При некоторых патологических состояниях также возрастает уровень апоптоза, например, при окислительном стрессе (повышении уровня свободно-радикального окисления), вызванного химическими, физическими, воспалительными или ишемическими факторами.

В настоящее время, известно средство, способствующее экспрессии белка bcl-2, средство, ингибирующее апоптоз, и средство, предотвращающее повреждение ДНК эпидермальных клеток ультрафиолетом [1]. Данное средство содержит растворимый в воде и этаноле экстракт солодки в качестве активного ингредиента. Однако, использование растительного компонента значительно усложняет процедуру получения и стандартизации активного вещества.

Известны композиции, ингибирующие апоптоз, способы очистки композиций и их применение [2], где в качестве основного действующего компонента применяют растительный порошок из растений семейств leguminosae, solanum, allium, семян гороха и сои. Недостатком метода является сложный процесс многостадийной обработки и экстракции с использованием различных растворителей и последующей очистки.

Для ингибирования апоптоза в популяции клеток Т-лимфоцитов используется антагонист-лиганд RAR-γ или агонист-лиганд RAR-α [3]. Данное средство предназначено для лечения заболеваний, связанных с избыточной скоростью апоптоза, в том числе, синдрома иммунодефицита, вызванного вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или отторжения трансплантата. Также известны ингибиторы апоптоза и их применение (2247), на основе антиапоптозных фрагментов белка DAXX, которые получают из 17-24 последовательных аминокислот белка DAXX, включающих KKSRKEKKQTGSGPLG, а также их пептидомиметики и конъюгаты с проникающим в клетки пептидом. Однако, данный подход включает сложный процесс получения активного субстрата.

Целью заявленного изобретения является расширение арсенала средств, обладающих апоптоз-ингибирующей активностью.

Поставленная цель достигается применением соли лития и пировиноградной кислоты (пирувата лития) C3H3O3Li в качестве ингибитора апоптоза. Различные соли лития имеют широкое применение в психиатрии в качестве нормотимиков (стабилизаторов настроения) [4]. Ранее было известно применение пирувата лития для профилактики и лечения нейродегенеративной патологии и сосудистой деменции [5], где для лечения и профилактики нейродегенеративных заболеваний и сосудистой деменции предложены средства, содержащие органические соли лития.

Однако соли лития, в частности, пируват лития до настоящего времени не использовался в качестве ингибитора апоптоза. Антиапоптотические свойства пирувата лития впервые обнаружены и доказаны экспериментально. Сочетание психостабилизирующих, нейропротекторных, антиоксидантных свойств пирувата лития с его вновь выявленными антиапоптотическими свойствами перспективно для практического применения, в частности в клеточной биологии и медицине, включая, терапию ишемических повреждений, трансплантологию.

Исследование влияния пирувата лития на процесс апоптоза в культуре мононуклеаров периферической крови было проведено с использованием набора реактивов «Annexin V & Dead Cell Assay Kit» (Merck Millipore, Германия) на проточном цитометре «Muse Cell Analyzer» (Merck Millipore, Германия). Уровень спонтанного апоптоза определяли на интактной культуре после 24 часов инкубации при 37°С, уровень индуцированного апоптоза определяли после 24 часов инкубации при 37°С при добавлении индуктора апоптоза (гидроперекиси трет-бутила в концентрации 50 мкмоль/л).

Метод определения уровня апоптоза в культуре заключается в дифференцировании живых клеток, клеток в состоянии апоптоза и клеток в состоянии некроза (мертвые клетки) по уровню флуоресценции и виду красителя. Клетки, экспрессирующие на внешней стороне мембраны фосфатидил-серин и связанный с ним аннексии V, меченный флуоресцентной меткой, определяются как апоптотические. При этом различают клетки в ранней стадии апоптоза (early apoptosis, аннексии V-положительные) и в поздней (late apoptosis, аннексии V-положительные/пропидий иодид положительные). Клетки, содержащие только интерколирующий флуоресцентный краситель пропидий иодид, определяются как мертвые (некротические).

На фиг. 1 представлены: (а) интактная культура, (б) культура в присутствии гидроперекиси трет-бутила, (в) культура в присутствии пирувата лития, (г) культура в присутствии пируваат лития и гидроперекиси трет-бутила

Пример 1

Для оценки уровня антиапоптотической активности готовили рабочий раствор для чего 100 мг пирувата лития растворяли в 10 мл дистиллированной воды. Полученный раствор исследовали in vitro на клеточной суспензии мононуклеаров периферической крови человека. Клеточную суспензию мононуклеаров выделяют из периферической крови здоровых доноров центрифугированием на градиенте фиколла. Далее отмывают и ресуспендируют в среде RPMI 1640 и вносят в соответствующие лунки планшета. Для оценки уровня спонтанного апоптоза добавляют раствор пирувата лития в суспензию мононуклеаров с расчетом на конечную концентрацию в лунке 1,2 ммоль/л. Для оценки уровня индуцированного апоптоза добавляют в лунки с пируватом лития раствор гидроперекиси трет-бутила с расчетом на конечную концентрацию в лунке 50 мкмоль/л. В качестве отрицательного контроля используют интактную суспензию клеток, в качестве положительного контроля суспензию клеток с добавлением гидроперекиси трет-бутила с расчетом на конечную концентрацию в лунке 50 мкмоль/л. Клетки инкубируют в течение 24 часов при 37°С в среде 5% углекислого газа. Уровень апоптоза в культуре рассчитывался как количество клеток в раннем апоптозе (early apoptosis) и в позднем (late apoptosis) в процентах к общему количеству клеток.

Результаты определения уровня апоптоза представлены в таблице 1 в процентах апоптотических клеток после 24 часов инкубации мононуклеаров при воздействии пируватом лития и без него.

*р<0,001 по сравнению с интакной культурой

**р=0,007 по сравнению с культурой в присутствии гидроперекиси трет-бутила

Как видно из таблицы 1 и фиг. 1, при добавлении пирувата лития достигалось выраженное ингибирование индуцированного апоптоза и сохранение основного пула живых клеток: процент индуцированного апоптоза мононуклеаров периферической крови при инкубации с пируватом лития был статистически значимо ниже по сравнению с культурой, инкубированной с гидроперекисью трет-бутила (t=2,944, df=24, р=0,007).

Список литературы

1. Пат. 2448723 Российская Федерация, МПК А61К, А61Р. Средство, способствующее экспрессии белка BCL-2, средство, ингибирующее апоптоз, и средство, предотвращающее повреждение ДНК эпидермальных клеток ультрафиолетом / Такита Macao (JP); заявитель и патентообладатель НИСИХАРА КО, ЛТД (JP). - №2010152636; заявл. 23.05.2008; опубл. 27.04.2012, Бюл. №12 - 6 с.

2. Заявка №96115127 (RU).

3. Пат. 2191008 Российская Федерация, МПК А61К, А61Р. Антагонист-лиганд RAR-γ или агонист-лиганд RAR-α в качестве ингибитора апоптоза / ФЕШУШ Ласло (HU), СОНДИ Жужа (HU), РАЙХЕРТ Уве (FR); заявитель и патентообладатель САНТР ЭНТЕРНАСЬОНАЛЬ ДЕ РЕШЕРШ ДЕРМАТОЛОДЖИК ГАЛДЕРМА (С.И.Р.Д. ГАЛДЕРМА) (FR). - №98108534; заявл. 08.10.1996; опубл. 20.10.202, Бюл. №29.

4. Машковский М.Д. Лекарственные средства: в двух частях. Ч1. - 12 изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 1986. - С. 127-129).

5. Пат. 2587617 Российская Федерация, МПК А61К, А61Р. Способ профилактики и лечения нейродегенеративной патологии и сосудистой деменции / Громова О.А., Торшин И.Ю.; заявитель и патентообладатель Громова Ольга Алексеевна (RU), Трошин Иван Юрьевич (RU). - №2014152190; заявл. 23.12.2014; опубл. 20.06.2016, Бюл. №17-5 с.

Применение пирувата лития общей формулы C3H3O3Li в качестве средства, обладающего апоптоз-ингибирующей активностью.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и предназначено для клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта. Терапевтическую эффективную дозу генетического материала, состоящего из гена сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF, гена глиального нейротрофического фактора GDNF и гена нейрональной молекулы адгезии NCAM, непосредственно вводят путем интратекальной инъекции в течение 4-х часов после наступления ишемического инсульта головного мозга.

Изобретение относится к кристаллу 2-[4-(2,2-диметилпропокси)-3-(1H-1,2,3,4-тетразол-1-ил)фенил]-4-метил-1,3-тиазол-5-карбоновой кислоты (кристаллическая форма A), характеризующемуся по меньшей мере одним из (i)-(iii): (i) его спектр порошковой рентгеновской дифракции имеет характерные пики с дифракционными углами 2θ (±0,5°) = 7,2°, 11,3°, 15,9°, 17,9°, 20,8°, 22,3°, 23,1°, 23,8°, 24,3° и 28,6°; (ii) его спектр порошковой рентгеновской дифракции имеет структуру, изображенную на фиг.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к лекарственному веществу, обладающему противоинсультным действием. Применение аскорбата лития дигидрата в качестве средства, обладающего противоинсультным действием.

В настоящем изобретении предложены октагидро конденсированные азадекалиновые соединения общей формулы (I) или их стереоизомеры и фармацевтически приемлемые соли. В формуле (I) R1 представляет собой гетероарильное кольцо, выбранное из пиридина и тиазола, необязательно замещенное 1-4 группами, каждая из которых независимо выбрана из R1a; каждый R1a независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, C1-6 галогеналкила; кольцо J выбрано из группы, состоящей из фенила, пиридина, пиразола и триазола; каждый из R2 независимо выбран из группы, состоящей из водорода, C1-6 алкила, галогена, C1-6 галогеналкила и -CN; или в качестве альтернативы две группы R2 на соседних атомах кольца объединены с образованием морфолинового кольца, каждый R3a независимо представляет собой галоген; нижний индекс n представляет собой целое число от 1 до 3.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, а именно к применению терапевтически эффективного количества соли 2-этил-6-метил-3-гидроксипиридина с фумаровой кислотой формулы: для лечения заболевания, обусловленного окислительным стрессом и выбранного из группы, включающей болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, хорею Хантингтона, пигментный ретинит, митохондриальную энцефаломиопатию, рассеянный склероз, инсульт, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, ревматоидный артрит, псориаз.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для предотвращения или лечения сердечно-сосудистых и цереброваскулярных заболеваний и/или деменции.

Изобретение относится к соединению, представленному общей формулой (I), или к его фармакологически приемлемой соли, в которой радикалы и символы имеют значения, приведенные в формуле изобретения.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для комплексной терапии при сочетанной ишемии центральной гемодинамической системы, нижних конечностей, сердца и головного мозга.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I), его (R)-изомеру или (S)-изомеру, или его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают свойствами ингибиторов PDE2 или TNF-α и могут найти применение для лечения таких заболеваний, как например, легочная гипертензия.

Изобретение относится к новому соединению формулы (1) и его фармацевтически приемлемой соли. Предложено лекарственное средство, содержащее соединение, представленное общей формулой (1), его фармацевтически приемлемая соль или его сольват.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для применения в качестве поддерживающей терапии при противоопухолевых химиотерапевтических лечениях, где указанная композиция содержит эффективное количество бактериального штамма Lactobacillus pentosus LPS01 с номером депонирования DSM 21980, депонированного Probiotical SpA 14.11.2008.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в животноводстве для стимуляции пищеварения, метаболизма, системы иммунитета, профилактики диарейного синдрома новорожденных телят.

Группа изобретений относится к области ветеринарии, в частности к средствам повышения колострального иммунитета и неспецифической резистентности у новорожденных телят.

Изобретение относится к пирролидиновому производному формулы [1], где цикл А представляет собой необязательно замещенную арильную группу и т.п.; R1 представляет собой необязательно замещенную алкильную группу и т.п.; R2 представляет собой атом галогена и т.п.; R3 представляет собой алкильную группу, замещенную необязательно замещенной арильной группой, и т.п., и R4 представляет собой атом водорода и т.п.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения комплекса биологически активных пептидов. Способ получения комплекса биологически активных пептидов, обладающего иммуностимулирующей активностью, из вилочковой железы крупного рогатого скота, включающий измельчение и гомогенизацию ткани, экстракцию гомогената раствором кислоты уксусной, содержащей цинк хлористый и раствор уксусной кислоты, обработку надосадочной жидкости ацетоном, промывку образовавшегося осадка ацетоном, высушивание осадка, экстракцию пептидов из высушенного порошка водой для инъекций и добавление фермента - сериновой эндопротеазы, далее экстракт выдерживают при нагревании и постоянном перемешивании, инактивируют фермент, охлаждают, сепарируют или фильтруют и лиофилизируют, при определенных условиях.

Изобретение относится к новому производному сульфонамида общей формулы (1) и его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают ингибирующим действием в отношении α4-интегрина с высокой селективностью при слабом воздействии на α4β1 и сильном воздействии на α4β7.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу повышения адаптивных возможностей организма спортсменов. Способ повышения адаптивных возможностей организма спортсменов, заключающийся в том, что в восстановительный период тренировочного процесса вводят средство «Мелонелла плюс», а также маточное молочко и нектар из ягод облепихи «Олимп» по определенной схеме введения и дозировках.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложена стабильная эмульсия масло-в-воде для доставки молекулы РНК в клетку, где указанная эмульсия содержит масло и катионный липид DOTAP.

Изобретение относится к ветеринарии и касается способа получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных, включающего промывание селезенки проточной водой, очищение от соединительнотканных и жировых элементов, выдержку селезенки в асептических условиях, гомогенизацию с добавлением дистиллированной воды, дальнейшую выдержку, ультрафильтрацию полученной смеси.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине, в частности иммунологии, и представляет собой композицию, обладающую иммуностимулирующим действием для сублингвального применения, состоящую из двуспиральной РНК бактериофага Ф6 в количестве 0,5±0,1 мг, одноцепочечной дрожжевой РНК в количестве 4,5±0,5 мг, пектина в количестве 21±3 мг, лактата кальция в количестве 15±3 мг, декстрана в количестве 100±10 мг, хлорида натрия в количестве 9±1 мг и воды очищенной до 1 мл.

Изобретение относится к соединению, имеющему формулу (I) ,включая фармацевтически приемлемые соли указанного соединения. В формуле (I): М выбран из группы, состоящей из железа, рутения и осмия, X выбран из группы, состоящей из Cl-, PF6-, Br-, BF4-, ClO4-, CF3SO3- и SO4-2, n=0, 1, 2, 3, 4 или 5, у=1, 2 или 3, z=0, 1 или 2, Lig в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из R1 выбран из группы, состоящей из и u представляет собой целое число, каждый из R2a, R2b, R2c, R2d, R2e и R2f представляет собой водород, R3a, R3b, R3c, R3d, R3e, R3f, R3g, R3h и R3i в каждом случае каждый независимо выбран из группы, состоящей из водорода и С1-6 алкила, R4a R4b и R4c в каждом случае представляет собой водород; или R4a и R4b в каждом случае, когда они присутствуют на кольце тиофена, вместе с атомом, с которым они связаны, образуют необязательно замещенное кольцо, содержащее 6 атомов кольца, включая два атома кислорода.

Изобретение относится к области медицины и биологии и представляет собой новое средство, обладающее апоптоз-ингибирующей активностью. Средство может быть использовано для коррекции состояний, связанных с повышением уровня апоптоза клеток, а также в качестве ингибитора апоптоза в культурах клеток in vitro. Средство представляет собой кристаллический пируват лития общей формулы C3H3O3Li. Изобретение расширяет арсенал средств, обладающих апоптозингибирующей активностью, и может быть использовано в медицине и биологии. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Наверх