Питательная среда для культивирования pseudomonas fluorescens ap-33

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33 содержит мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводный, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту, лапрол для жидкой среды и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов. В твердую питательную среду вносится агар в заданном количестве. Изобретение позволяет повысить выход биомассы Pseudomonas fluorescens АР-33. 8 табл., 6 пр.

 

Область техники: Изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, а также к сельскому хозяйству и может быть использовано для получения высоко эффективных препаратов - средств защиты растений.

Известна питательная среда LB (являющаяся одной из основных для культивирования бактерий рода Pseudomonas) [1] состоящая, г/л:

Пептон - 10.0

Дрожжевой экстракт - 5.0

Натрий хлористый - 10.0

Вода водопроводная до 1 л.

Недостатком питательной среды является высокая стоимость, связанная с наличием в ее составе такого дорогостоящего ингредиента, каким является пептон.

Известна питательная среда Кинг В [2], принятая за прототип, также применяемая для культивирования бактерий рода Pseudomonas. В нее входят пептон, глицерин, различные минеральные соли, г/л:

Пептон - 20.0

Глицерин - 10.0

K2НРO4 - 1.5

MgSO4⋅7H2O - 1,5

Вода дистиллированная до 1 л.

Ее недостатком также является высокая стоимость, связанная с наличием в ее составе такого дорогостоящего ингредиента, каким является пептон. В процессе культивирования штамма Pseudomonas fluorescens АР-33 на среде Кинг В количество микроорганизмов составило 2×109 КОЕ/ мл.

Целью настоящего исследования является создание недорогой универсальной питательной среды для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33 с целью увеличения количества Pseudomonas fluorescens АР-33 выше 2×109 КОЕ/ мл, увеличения срока хранения на жидкой питательной среде и увеличение срока хранения на твердой питательной среде.

Поставленная цель решается тем, что в среду для культивирования в качестве дополнительно вносят горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту [3], лапрол для жидкой питательной среды или агар для твердой питательной среды.

Сущность технического решения поясняется следующим.

Технология приготовления питательной среды. Для использования гороха шлифованного требуется его предварительная обработка. Горох шлифованный, в количестве 250 г/л промыть водопроводной водой, помесить во флакон емкостью 1 литр, и довести до литра дистиллированной водой. Закрыть флакон пробкой герметично. Затем автоклавировать в течение 1 часа при 2 Bar. После автоклавирования остудить до комнатной температуры и дважды процедить через два слоя марли. Полученный после обработки горох соединить с остальными компонентами среды и довести до 1 л дистиллированной водой. Значение рН должно соответствовать 7,5-7,6 ед. рН. Затем стерилизовать в автоклаве 40 минут 1,2-1,4 Bar. Полученная среда имеет светло-желтый цвет, «чистый» запах и незначительный осадок. Культивирование микроорганизмов производиться 20-24 часа, температура - 28±2°С, принудительная аэрация со скоростью вращения 250 об/мин. Для сохранения посевного материала на твердой питательной среда инкубирование производиться 24-48 ч, температура - 28±2°С в термостате. Затем хранение посевного материала Pseudomonas fluorescens АР-33 в течение 6 месяцев при температуре 4-8°С.

Контроль за численностью микроорганизмов осуществляют стандартным методом десятикратных разведений.

Культивирование Pseudomonas fluorescens АР-33 в жидкой среде.

Пример 1.

Предлагаемая жидкая питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33 содержащая в качестве питательной основы мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводный, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту и лапрол в следующем соотношении компонентов, г/л (табл. 1).

Предлагаемая жидкая питательная среда для культивирования бактерий позволяет получить количество микроорганизмов Pseudomonas fluorescens АР-33 1.0×1011 KOE/см3, которая сохраняется в течение 45 дней, при хранении в жидкой среде.

Пример 2.

Предлагаемая жидкая питательная среда для культивирования бактерий позволяет получить количество 1.6×108 KOE/см3, которая сохраняется в течение 15 дней.

Пример 3.

Предлагаемая жидкая питательная среда для культивирования бактерий позволяет получить количество микроорганизмов Pseudomonas fluorescens АР-33 - 8×109 KOE/см3, которая сохраняется в течение 45 дней.

Однако, среда становиться менее прозрачной, процесс мойки биореактора занимает длительное время, т.к. необходимо очистить барботер и шланги от осадка. Таким образом, в результате сравнения эффективности использования сред с рецептурами из примеров 1, 2 и 3 выявлено, что самая высокое количество микроорганизмом Pseudomonas fluorescens АР-33, длительный срок хранения на жидкой среде и хорошее качество среды достигается при использовании рецептуры жидкой среды из примера 1 (табл. 4).

Культивирование Pseudomonas fluorescens АР-33 на твердой среде

Посев микроорганизмов на твердую среду осуществляется методом простого штриха или по методу Дригальского.

Пример 4.

Предлагаемая твердая питательная среда для культивирования бактерий позволяет сохранять Pseudomonas fluorescens АР-33 на питательном агаре в течение 6 месяцев при температуре 4-8°С без пересева.

Пример 5.

Предлагаемая питательная среда для культивирования бактерий позволяет сохранять Pseudomonas fluorescens АР-33 на питательном агаре в течение 4 месяцев при температуре 4-8°С без пересева.

Пример 6.

Предлагаемая твердая питательная среда для культивирования бактерий позволяет сохранять Pseudomonas fluorescens АР-33 на питательном агаре в течение 6 месяцев при температуре 4-8°С без пересева. Однако, среда не прозрачная, что создает сложности для просмотра колоний. Таким образом, в результате сравнений эффективности использования сред, с рецептурами из примеров 4, 5 и 6 выявлено, что самое длительное время микроорганизмы Pseudomonas fluorescens АР-33, сохраняются на среде из примера 4, которая характеризуется хорошим качеством (табл. 8).

Следовательно, использование предлагаемой универсальной питательной среды для культивирования бактерий Pseudomonas fluorescens АР-33 позволяет:

- повысить количество Pseudomonas fluorescens АР-33 в процессе культивирования на жидкой среде до 1.0×1011 (культивировании на среде Кинга дает количество 2×109 KOE/ мл);

- сохранить количество Pseudomonas fluorescens АР-33 в жидкой среде течение 45 дней;

- сохранить количество Pseudomonas fluorescens АР-33 на твердой среде в течение 6 месяцев при температуре 4-8°С;

- компоненты среды доступные и недорогие.

Литература

1. Дашкевич В.С, Дашкевич Н.Ю., Ашмарина Л.Ф., Шушаро А.И. Способ борьбы с возбудителями заболеваний растений // Патент РФ №2130265, заявлено 29.12.97; опубл. 20.05.99. Бюл.14.

2. King Е.О., Ward М.К., Raney D.Е. Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescin // J. Lab and Clin. Med. - 1954. - Vol. 44 (2). - P. 301-307.

3. Котляров В.В., Сединина Н.В. Использование янтарной кислоты в биотехнологическом процессе получения препаратов Pseudomonas fluorescens // Научный журнал КубГАУ. - 2014. - №101 (07). - С. 2327-2336.

Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33, содержащая мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводного и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что питательная среда дополнительно содержит горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту, лапрол для жидкой питательной среды или агар для твердой питательной среды при следующем соотношении компонентов, г/л:

Меласса 15
Калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный 0,5
Сульфат магния семиводный 0,2
Горох шлифованный, предварительно
обработанный автоклавированием 250
Янтарная кислота 0,05
Лапрол или агар соответственно 5 или 18
Дистиллированная вода До 1 л



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для мониторинга стадии глубинного культивирования клеток в технологии чумной вакцины. Способ мониторинга стадии культивирования в технологии живой чумной вакцины предусматривает тестовое 5-минутное воздействие на клетки чумного микроба додецилсульфата натрия с последующей фотометрической регистрацией литического эффекта и определением показателя резистентности клеток.

Группа изобретений относится к фармакологии, а именно к штамму лактобактерий, выделенному из свиньи, для лечения кишечного расстройства. Штамм лактобактерий, выделенный из свиньи, который выбран из: NCIMB 41846: Lactobacillus reuteri GGDK31; NCIMB 41847: Lactobacillus paraplantarum и Lactobacillus reuteri GGDK161; NCIMB 41848: Lactobacillus reuteri GGDK255; NCIMB41849: Lactobacillus plantarum/pentosus/helveticus/paraplantarum GGDK258; NCIMB 41850: Lactobacillus johnsonii и Lactobacillus reuteri GGDK2 66; NCIMB 42008 Lactobacillus johnsonii; NCIMB 42009 Lactobacillus reuteri; NCIMB 42010 Lactobacillus plantarum; NCIMB 42011 Lactobacillus reuteri; NCIMB 42012 Lactobacillus reuteri; штамма, составляющего по крайней мере 99,5% идентичность по 16S рРНК со штаммом, выбираемым из тех, которые были депонированы под номером доступа, указанным выше; и любой комбинации из двух или более указанных штаммов, где указанный штамм характеризуется: способностью к демонстрации противомикробной активности, направленной против Е.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штамм Lactobacillus helveticus D75, депонированный в коллекции ФНБУ ВНИИСХМБ под номером RCAM04483, и штамм Lactobacillus helveticus D76, депонированный в коллекции ФНБУ ВНИИСХМБ под номером RCAM04484, предназначенные для использования в составе пробиотических препаратов.

Изобретение относится к области биотехнологии и биохимии, в частности к рекомбинантному штамму мицелиального гриба Aspergillus nidulans 031/pDHG25-SgrDI (pyrG-). Указанный штамм обладает стероид-11α-гидроксилирующей активностью, способностью конвертировать прогестерон в 11α-ацетоксипрогестерон, ацетилирующей активностью и способностью этерифицировать 11α-гидроксипрогестерон.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения уровня биосовместимости штаммов бифидобактерий и/или лактобактерий.

Изобретение относится к области микробиологии. Штамм бактерий Lisinibacillus sp.ELA – 10к, обладающий способностью утилизировать нефть и нефтепродукты, депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ИБФМ им.

Изобретение относится к области биотехнологии и биохимии, в частности к рекомбинантной клетке-хозяину для получения диальдегида кроцетина, кроцетина и гидроксил-β-циклоцитраля.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена плазмида pPICZαA-PhoA2-StV, определяющая синтез фосфолипазы А2, имеющая размер 3862 п.

Изобретение относится к области микробиологии. Штамм бактерий Bacillus simplex LER-11, обладающий способностью утилизировать нефть и нефтепродукты, депонирован во Всероссийской Коллекции Микроорганизмов ИБФМ им.

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для восстановления численности анаэробных бактерий после низкотемпературного хранения содержит гидролизат казеина, бактопептон, дрожжевой экстракт, глюкозу, натрия хлорид, калия гидрофосфат, трис (гидроксиметиламинометан), цистеина - L гидрохлорид, агар-агар, 4-метилрезорцин и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ дифференциального учета молочнокислых бактерий в молочном продукте.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и предназначено для дифференциации штаммов V. cholerae биовара Эль Тор.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ оценки антагонистической активности лактобактерий толстокишечного биотопа пациента относительно разнообразных бактерий двухэтапным культивированием микроорганизма-антагониста и тестируемой культуры в условиях комбинированной системы.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для первичного посева биоматериала, выделенного из нижних дыхательных путей пациентов с муковисцидозом, при проведении микробиологического исследования.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ калибровки и измерения сигнала, а также устройство для обнаружения и/или идентификации целевых бактерий.

Изобретение относится к области медицинской и ветеринарной паразитологии и микробиологии. Способ подавления роста микроорганизмов предусматривает приготовление антигенов-экстрактов из гельминтов Anisakis simplex и Dirofilaria immitis и получение чистой культуры микроорганизмов, в качестве которых использовали Escherichia coli, Proteus vulgaris, Micrococcus sp., путем смыва суточной культуры с поверхности плотной агаризованной среды с последующей стандартизацией на основе коммерческих стандартов мутности №5 и №10, утвержденных ВОЗ как первичный эталон мутности для оптической стандартизации бактериальных взвесей.

Группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для исследования на присутствие цитомегаловируса (CMV), вируса простого герпеса I (HSV I), вируса простого герпеса II (HSV II), вируса Эпштейна-Барра (EBV), HHV6, HHV7, HHV8, парвовируса 19, вируса гепатита В (HBV), вируса гепатита С (HCV), коксаки-вируса, вирусов иммунодефицита человека (HIV-1, HIV-2), аденоассоциированного вируса (AAV), вируса краснухи, HPV, хламидий, токсоплазмы и норовируса внутри сперматозоидов.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен способ идентификации сероваров бактерий рода Leptospira с помощью масс-спектрометрии.

Изобретение относится к биохимии и вирусологии и касается способов и системы для упаковки репортерных молекул нуклеиновых кислот в нерепликативные трансдукторные частицы для использования в качестве репортерных молекул.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен фотобиореактор для биосеквестрации СО2 с иммобилизованной биомассой водорослей или цианобактерий.

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33 содержит мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводный, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту, лапрол для жидкой среды и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов. В твердую питательную среду вносится агар в заданном количестве. Изобретение позволяет повысить выход биомассы Pseudomonas fluorescens АР-33. 8 табл., 6 пр.

Наверх