Способы лечения эозинофильного эзофагита с помощью ингибитора ил-4р

Изобретение относится к медицине и предназначено для уменьшения степени тяжести эозинофильного эзофагита. Субъекту вводят терапевтически эффективное количество терапевтической композиции, содержащей ингибитор рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4Р), а именно антитело к ИЛ-4Р или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с ИЛ-4Р. Способ позволяет расширить арсенал терапевтических средств. 16 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет в соответствии с разделом 35 Свода законов США, § 119 (е), согласно предварительной заявке на патент США № 61/844,978, поданной 11 июля 2013 г., содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Настоящее изобретение касается применения ингибиторов рецептора интерлейкина-4 для лечения или профилактики эозинофильного эзофагита у нуждающегося в этом субъекта.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] Эозинофильный эзофагит (ЭЭ) является новым заболеванием, которое характеризуется дисфункцией пищевода и его патологическим эозинофильным воспалением. К типичным симптомам ЭЭ относятся отказ от пищи, рвота, изжога, дисфагия и застревание пищи в пищеводе, что может привести к нарушению качества жизни. Установлено, что у многих пациентов ЭЭ ассоциируется с пищевой аллергией. У некоторых пациентов также может одновременно отмечаться бронхиальная астма или атопическое заболевание, такое как атопический дерматит или аллергический ринит. В настоящее время ЭЭ диагностируют с помощью эндоскопии пищевода и биопсии ткани пищевода для выявления эозинофильной инфильтрации. Варианты лечения в настоящее время ограничены исключением воздействия аллергена, изменением диеты и применением кортикостероидов. В связи с этим существует неудовлетворенная медицинская потребность в эффективных терапевтических методах без нежелательных побочных эффектов для профилактики или лечения эозинофильного эзофагита и предотвращении его рецидива.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0004] Согласно одному аспекту настоящего изобретения, представлены способы лечения, профилактики или уменьшения выраженности у субъекта по меньшей мере одного симптома или признака эозинофильного эзофагита (ЭЭ). Способы согласно этому аспекту настоящего изобретения включают введение нуждающемуся в этом субъекту фармацевтической композиции, содержащей ингибитор рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4Р), в терапевтически эффективном количестве. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, у нуждающегося в лечении субъекта наблюдается аллергическая реакция на пищевой аллерген или на непищевой аллерген.

[0005] Согласно другому аспекту настоящего изобретения, представлены способы снижения уровня связанного с ЭЭ биомаркера у субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, связанный с ЭЭ биомаркер выбирают из группы, состоящей из, например, эозинофилов в крови или в ткани пищевода, эотаксина-3, периостина, сывороточного IgE (общего и аллерген-специфического), ИЛ-13, ИЛ-5, сывороточного регулируемого тимусом и активацией хемокина (TARC; CCL17), тимического стромального лимфопопоэтина (TSLP), сывороточного эозинофильного катионного белка (ECP) и эозинофильного нейротоксина (EDN). Способы включают введение фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве.

[0006] Согласно другому аспекту настоящего изобретения, представлены способы уменьшения выраженности эозинофильной инфильтрации пищевода у нуждающегося в этом субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, представлены способы уменьшения выраженности воспаления пищевода. Способы включают введение фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, эозинофильная инфильтрация пищевода определяется как наличие приблизительно 15 или более эозинофилов в поле зрения в ткани пищевода у нуждающегося в лечении субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, количество эозинофилов снижается приблизительно на 50% к 10-му дню после введения ингибитора ИЛ-4Р.

[0007] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, ингибитор ИЛ-4Р применяют в комбинации со вторым терапевтическим средством или методом лечения.

[0008] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, у нуждающегося в лечении субъекта имеется сопутствующее заболевание или расстройство, которое выбирают из группы, состоящей из пищевой аллергии, атопического дерматита, бронхиальной астмы, аллергического ринита, аллергического конъюнктивита и наследственных заболеваний соединительной ткани.

[0009] Примерами ингибиторов ИЛ-4Р, которые можно использовать в контексте способов настоящего изобретения, являются, например, химические ингибиторы ИЛ-4Р или его лигандов в виде малых молекул (ИЛ-4 и (или) ИЛ-13) или биологические вещества, которые взаимодействуют с ИЛ-4Р или его лигандами. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, ингибитором ИЛ-4Р является антитело или антигенсвязывающий белок, который связывается с цепью ИЛ-4Rα и блокирует сигналинг, опосредованный ИЛ-4, ИЛ-13 либо и ИЛ-4, и ИЛ-13. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, антитело к ИЛ-4Р или антигенсвязывающий белок включают определяющие комплементарность участки тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO: 1 и CDR вариабельной области легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO: 2. Одним таким типом антигенсвязывающего белка, который можно использовать в контексте способов настоящего изобретения, является антитело к ИЛ-4Рα, например дупилумаб.

[0010] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, настоящее изобретение предлагает использование антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению для производства лекарственного средства для лечения или уменьшения выраженности эозинофильного эзофагита у субъекта, включая людей.

[0011] Другие варианты осуществления настоящего изобретения станут очевидны после ознакомления с последующим подробным описанием.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0012] На фиг. 1 показаны уровни IgE в сыворотке крови у мышей, получавших инъекционно ДНК ИЛ-25 с помощью метода гидродинамической доставки ДНК (HDD), и затем получавших изотип контрольного антитела, моноклональное антитело анти-м-ИЛ-4Р или ИЛ-13Рa2-мFc, как описано в примере 1 в этом документе.

[0013] На фиг. 2 показаны степени гистологических изменений пищевода в баллах у мышей, получавших инъекционно ДНК ИЛ-25 с помощью метода HDD, и получавших в последующем изотип контрольного антитела, моноклональное антитело анти-м-ИЛ-4Р или ИЛ-13Рa2-мFc, как описано в примере 1 этого документа.

[0014] На фиг. 3 показаны степени гистологических изменений пищевода в баллах (как указано в другом месте этого документа) у мышей, сенсибилизированных фосфатно-солевым буфером (ФСБ) или экстрактом аллергенов арахиса (PAE), которым в последующем были выполнены провокационные пробы с ФСБ или PAE. Мыши получали терапию моноклональным антителом анти-м-ИЛ-4Р или изотипом контрольного антитела.

[0015] На фиг. 4 показаны уровни (А) в сыворотке крови специфических к аллергену арахиса IgG1 и (Б) IgE у мышей, сенсибилизированных ФСБ или экстрактом аллергенов арахиса (PAE), которым в последующем была выполнена провокационная проба с ФСБ или PAE. Мыши получали терапию моноклональным антителом анти-м-ИЛ-4Р или изотипом контрольного антитела.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0016] При интерпретации описания настоящего изобретения следует понимать, что его применение не ограничено описанными конкретными способами и экспериментальными условиям, поскольку эти способы и условия могу различаться. Следует также понимать и то, что терминология, используемая в этом документе, предназначена для описания только конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения и не является ограничительной, поскольку объем настоящего изобретения будет ограничен только прилагаемой формулой изобретения.

[0017] Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в этом документе, имеют то же значение, что и значение, которое обычно понимается средним специалистом в области, к которой принадлежит настоящее изобретение. В этом документе термин «приблизительно», в случае применения к конкретному указанному числовому значению, означает, что это значение может отличаться от указанного значения не более чем на 1%. Например, в этом документе выражение «приблизительно 100» включает значения 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т.д.).

[0018] Хотя любые способы и материалы, схожие со способами и материалами, описанными в этом документе, или эквивалентные им, могут применяться при реализации на практике настоящего изобретения, ниже рассматриваются предпочтительные способы и материалы. Все публикации, упомянутые в этом документе, полностью включены в данный документ посредством ссылок.

Способы лечения, профилактики или уменьшение выраженности эозинофильного эзофагита

[0019] Настоящее изобретение включает способы лечения, профилактики или уменьшение выраженности у субъекта по меньшей мере одного симптома или признака эозинофильного эзофагита (ЭЭ). Способы согласно этому аспекту настоящего изобретения включают введение нуждающемуся в этом субъекту фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве. В этом документе термины «лечить», «лечение» и подобные им означают ослабление симптомов, временное или полное устранение причин симптомов, а также предупреждение либо замедление появления симптомов эозинофильного воспаления в пищеводе. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, настоящие способы также полезны для лечения или уменьшение выраженности по меньшей мере одного симптома или признака ЭЭ, включая, помимо прочего, эозинофильную инфильтрацию пищевода, утолщение стенки пищевода, воспаление пищевода, появление в пищеводе колец или гребешков, напоминающих трахеальные, боль в грудной клетке и животе, отказ от пищи, рвоту, дисфагию и застревание пищи в пищеводе.

[0020] Термин «эозинофильный эзофагит» (ЭЭ), используемый в этом документе, относится к воспалительному заболеванию, которое характеризуется патологическим эозинофильным воспалением пищевода и дисфункцией пищевода. Основными симптомами ЭЭ являются, помимо прочего, боль в грудной клетке и животе, дисфагия, изжога, отказ от пищи, рвота и застревание пищи в пищеводе. Клинико-морфологически ЭЭ характеризуется изменением стенки пищевода с формированием гребешков или колец, напоминающих трахеальные кольца, и эозинофильной инфильтрацией слизистой оболочки пищевода. В настоящее время ЭЭ диагностируется с помощью эндоскопии пищевода с последующим микроскопическим или биохимическим исследованием его слизистой оболочки. ЭЭ можно разделить на аллергический или неаллергический в зависимости от аллергического статуса субъекта. Настоящее изобретение включает способы лечения как аллергических, так и неаллергических форм ЭЭ

[0021] В этом документе выражение «нуждающийся в этом субъект» означает человека или другого млекопитающего, у которого наблюдается один или более симптомов или признаков эозинофильного эзофагита, и (или) у которого был диагностирован эозинофильный эзофагит (ЭЭ). Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, способы настоящего изобретения могут применяться для лечения пациентов с повышенным уровнем одного или более связанных с ЭЭ биомаркеров (описано в другом месте этого документа). Например, способы настоящего изобретения включают введение ингибитора ИЛ-4Р пациентам с повышенными уровнями IgE или эотаксина-3. Термин «нуждающийся в этом субъект» также может относиться, например, к субъекту, у которого до лечения наблюдается (или наблюдался) один или более признаков ЭЭ, такие как, например, гиперэкспрессия в пищеводе провоспалительных медиаторов, например медиаторов тучных клеток, эозинофильная инфильтрация пищевода, утолщение стенки пищевода, дисфагия, застревание пищи в пищеводе, боль в грудной клетке и животе и (или) повышенный уровень связанного с ЭЭ биомаркера. Данный термин также относится к субъектам, у которых обнаруживается ≥ 15 эозинофилов в поле зрения в ткани пищевода, и к субъектам с увеличенным количеством эозинофилов в крови (> 300 клеток/мкл) или повышенным уровнем сывороточного IgE (> 150 тыс. ед./л).

[0022] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, настоящие способы можно использовать для лечения субъектов с морфологическими изменениями и симптомами, которые наблюдаются у субъектов с хроническим эзофагитом, включая гастроэзофагеальную рефлюксную болезнь (ГЭРБ). Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, термин «нуждающийся в этом субъект» относится к субъектам с отсутствием ответа ГЭРБ на терапию или с устойчивостью этого заболевания к такой терапии. Например, настоящие способы можно использовать для лечения субъектов с устойчивостью заболевания к терапии ингибиторами протонной помпы (ИПП).

[0023] В контексте настоящего изобретения к «нуждающемуся в этом субъекту» могут относиться субъекты из подгруппы популяции с большей предрасположенностью к ЭЭ или с повышенным уровнем связанного с ЭЭ биомаркера. Например, к «нуждающемуся в этом субъекту» могут относиться субъекты с атопическим заболеванием или расстройством, таким как пищевая аллергия, атопический дерматит, бронхиальная астма, аллергический ринит и аллергический конъюнктивит. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, термин «нуждающийся в этом субъект» относится к субъекту, у которого до или на момент введения ингибитора ИЛ-4Р имеется или диагностируется заболевание или расстройство, выбранное из группы, включающей атопический дерматит, бронхиальную астму, аллергический ринит и аллергический конъюнктивит. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, термин «нуждающийся в этом субъект» может относиться к пациентам с наследственными заболеваниями соединительной ткани. У субъектов такой популяции может наблюдаться повышенный уровень связанных с ЭЭ биомаркеров, таких как, например, IgE, эотаксин-3, периостин, ИЛ-5 или ИЛ-13.

[0024] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, к «нуждающемуся в этом субъекту» относится субъект с чувствительностью к аллергену. Например, к «нуждающемуся в этом субъекту» относится субъект с одной из следующих особенностей: (а) предрасположенность к аллергическим реакциям или ответам при контакте с одним или более аллергенами; (б) наличие в прошлом аллергического ответа или реакции на один или более аллергенов; (в) наличие в анамнезе аллергии; и (или) (д) наличие признака или симптома аллергического ответа или анафилаксии. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, у субъекта имеется аллергия на связанный с ЭЭ аллерген или субъект имеет склонность и (или) предрасположенность к развитию ЭЭ.

[0025] Термин «аллерген», используемый в этом документе, относится к любому веществу, химическому соединению, частице или композиции, которые способны стимулировать аллергический ответ у восприимчивого к ним лица. Аллергены могут содержаться в пищевых продуктах или происходить из пищевых продуктов, таких как, например, молочные продукты (например коровье молоко), яйца, пшеница, соя, кукуруза, рожь, рыба, морепродукты, арахис и орехи. Кроме того, аллергены могут содержаться в непищевых продуктах или происходить из непищевых продуктов, таких как, например, пыль (например пыль, содержащая продукты жизнедеятельности пылевого клеща), пыльца, яд насекомых (например яд пчел, ос, комаров и т.д.), плесень, перхоть животных, латекс, лекарственные средства, лекарственные препараты, амброзия, трава и береза.

[0026] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, термин «нуждающийся в этом субъект» относится к субъектам подгруппы популяции с аллергической реакцией на пищевой аллерген. Например, к «нуждающемуся в этом субъекту» может относиться субъект с аллергией на аллерген, содержащийся в пищевом продукте, включая, помимо прочего, молочные продукты, яйца, пшеницу, сою, кукурузу, рожь, рыбу, морепродукты, арахис, орехи, говядину, курицу, овес, ячмень, свинину, стручковую фасоль и фрукты, такие как яблоки и ананасы.

[0027] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, рассматриваемый термин относится к субъекту с аллергией на непищевой аллерген, например на аллергены пыли, плесени, насекомых, растений, включая пыльцу, и животных, таких как кошки и собаки. Примерами непищевых аллергенов (также известных как аллергены окружающей среды или воздушные аллергены) являются, помимо прочего, аллергены продуктов жизнедеятельности домашнего пылевого клеща, аллергены пыльцы, аллергены перхоти животных, аллергены яда насекомых, аллергены травы и латекса.

[0028] В этом документе фразы «аллергический ответ», «аллергическая реакция», «симптом аллергии» и им подобные относятся к одному или более признакам или симптомам, выбранным из группы, состоящей из аллергической сыпи (например крапивницы), ангионевротического отека, ринита, бронхиальной астмы, рвоты, чихания, насморка, воспаления околоносовых пазух, слезотечения, свистящего дыхания, бронхоспазмы, снижения пиковой скорости выдоха (ПСВ), нарушения функции желудочно-кишечного тракта, приливов крови, отека губ, отека языка, снижения артериального давления, анафилаксии и органной дисфункции/недостаточности. Термины «аллергический ответ», «аллергическая реакция», «симптом аллергии» и т.д. также относятся к иммунологическим ответам и реакциям, таким как, например, усиление образования IgE, усиление образования аллерген-специфического иммуноглобулина и (или) эозинофилия.

[0029] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, способы, указанные в этом документе, могут применяться для лечения ЭЭ у детей в возрасте ≤3 года. Например, настоящие способы можно использовать для лечения младенцев в возрасте младше 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев или в возрасте младше 12 месяцев. Согласно другим вариантам осуществления настоящего изобретения, настоящие способы можно использовать для лечения детей в возрасте младше 3 лет, 4 лет, 5 лет, 6 лет, 7 лет, 8 лет, 9 лет, 10 лет, 11 лет, 12 лет, 13 лет, 14 лет или в возрасте младше 15 лет.

[0030] Настоящее изобретение также включает способы уменьшения выраженности эозинофильной инфильтрации. Способы согласно этому аспекту настоящего изобретения включают введение субъекту одной или более доз фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, с целью уменьшения или сведению к нулю количества эозинофилов, например в слизистой оболочке пищевода.

[0031] В этом документе термин «эозинофильная инфильтрация» относится к наличию эозинофилов в органе или ткани, включая кровь, пищевод, желудок, двенадцатиперстную кишку и подвздошной кишку субъекта. В контексте настоящего изобретения термин «эозинофильная инфильтрация» относится к наличию эозинофилов в слизистой оболочке участка желудочно-кишечного тракта, включая, помимо прочего, пищевод и желудок. У субъекта с ЭЭ эозинофильную инфильтрацию определяют, например, путем биопсии ткани пищевода. Согласно определенным вариантам осуществления настоящего изобретения, термин «эозинофильная инфильтрация» относится к наличию ≥15 эозинофилов в поле зрения в ткани пищевода. Термин «в поле зрения» относится к стандартному 400-кратному увеличению при микроскопии для обнаружения эозинофилов в ткани, например в ткани пищевода субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, термин «эозинофильная инфильтрация» относится к инфильтрации ткани лейкоцитами, например лимфоцитами, нейтрофилами и тучными клетками. Лейкоцитарную инфильтрацию, например в ткани пищевода, можно выявить с помощью поверхностных клеточных маркеров, таких как специфические для эозинофилов маркеры (например CD11cLow/Neg, SiglecF+, F4/80+, EMR1+, Siglec 8+ и MBP2+), специфические для макрофагов маркеры (например CD11b+, F4/80+, CD14+, EMR1+ и CD68+), специфические для нейтрофилов маркеры (например CD11b+, Ly6G+, Ly6C+, CD11b+ и CD66b+) и специфические для T-клеток маркеры (например CD3+ CD4+ CD8+ ).

[0032] В этом документе под уменьшением количества эозинофилов в ткани пищевода понимается то, что количество эозинофилов и других лейкоцитов в ткани пищевода субъекта с ЭЭ, получавшего лечение ингибитором ИЛ-4Р, ниже по меньшей мере на 5%, 10%, 20%, 50%, 70%, 80% или 90%, чем количество эозинофилов в ткани пищевода у этого же или эквивалентного субъекта, не получавшего ингибитор ИЛ-4Р. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, под уменьшением выраженности эозинофильной инфильтрации понимается обнаружение менее 15 эозинофилов в поле зрения, предпочтительнее менее 10 эозинофилов, менее 9 эозинофилов, менее 8 эозинофилов, менее 7 эозинофилов, менее 6 эозинофилов или менее 5 эозинофилов в поле зрения в биоптате слизистой оболочки пищевода. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, уменьшение количества эозинофилов в ткани пищевода означает, что эозинофилы не обнаруживаются в слизистой оболочке субъекта.

[0033] Настоящее изобретение включает способы лечения, профилактики или уменьшения степени тяжести эозинофильного эзофагита, предполагающие введение нуждающемуся в этом субъекту фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве, где фармацевтическую композицию вводят субъекту многократно, например в рамках специфического терапевтического режима дозирования. Например, терапевтический режим дозирования может включать многократное введение субъекту фармацевтической композиции с частотой приблизительно один раз в день, один раз в два дня, один раз в три дня, один раз в четыре дня, один раз в пять дней, один раз в шесть дней, один раз в неделю, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в два месяца, один раз в три месяца, один раз в четыре месяца или менее часто.

[0034] Способы настоящего изобретения, согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, включают введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве в комбинации со вторым терапевтическим средством. Вторым терапевтическим средством может быть средство, выбранное из группы, включающей, например, ингибитор ИЛ-1-бета, ингибитор ИЛ-5, ингибитор ИЛ-9, ингибитор ИЛ-13, ингибитор ИЛ-17 и ингибитор ИЛ-25, ингибитор ФНО-альфа, ингибитор эотаксина-3, ингибитор IgE, ингибитор простагландина D2, иммунносупрессант, кортикостероид, глюкокортикоид, ингибитор протонной помпы, деконгестант, антигистаминное средство и нестероидное противовоспалительное средство (НПВС). Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, ингибитор ИЛ-4Р настоящего изобретения можно применять в комбинации с другими методами лечения, в том числе с устранением воздействия аллергена и изменением диеты. В этом документе фраза «в комбинации с» означает, что фармацевтическую композицию, содержащую ингибитор ИЛ-4Р, применяют у субъекта в одно и то же время с вторым терапевтическим средством, непосредственно перед или сразу после применения второго терапевтического средства. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, второе терапевтическое средство применяют в виде средства, содержащего в своем составе также и ингибитор ИЛ-4Р. Согласно родственному варианту осуществления настоящего изобретения, настоящее изобретение включает способы, предполагающие введение субъекту, получающему фоновую противоаллергическую терапию, фармацевтической композиции, содержащей ингибитор ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве. Фоновая противоаллергическая терапия может включать курс применения, например, стероидов, антигистаминных средств, деконгестантов, анти-IgE средств, и др. Ингибитор ИЛ-4Р можно добавлять к фоновой противоаллергической терапии. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, ингибитор ИЛ-4Р добавляют к схеме «фоновой терапии с постепенным снижением дозы препарата», причем препарат фоновой противоаллергической терапии отменяют у субъекта постепенно с течением времени (например пошагово), а ингибитор ИЛ-4Р вводят субъекту в постоянной дозе, а также с повышением дозы или с понижением дозы с течением времени.

Связанные с эозинофильным эзофагитом биомаркеры

[0035] Настоящее изобретение также включает способы использования, количественного определения и анализа связанных с ЭЭ биомаркеров. В этом документе термин «связанный с ЭЭ биомаркер» означает любого рода биологический ответ, тип клетки, параметр, белок, полипептид, фермент, ферментную активность, метаболит, нуклеиновую кислоту, углевод или другую биологическую молекулу, которые присутствуют или определяются у пациента с ЭЭ на уровне или в количестве, которое отличается (например больше или меньше) от уровня или количества маркера, присутствующего или определяемого у пациента без ЭЭ. Примерами связанных с ЭЭ биомаркеров являются, помимо прочего, эозинофилы в крови или в ткани пищевода, эотаксин-3 (CCL26), периостин, сывороточный IgE (общий и аллерген-специфический), ИЛ-13, ИЛ-5, сывороточный регулируемый тимусом и активацией хемокин (TARC; CCL17), тимический стромальный лимфопопоэтин (TSLP), сывороточный эозинофильный катионный белок (ECP) и эозинофильный нейротоксин (EDN). Термин «связанный с ЭЭ биомаркер» также включает ген или, генетический зонд, известный в рассматриваемой области, который дифференциально экспрессируется у субъекта с ЭЭ в сравнении с субъектом без ЭЭ. Например, к генам с выраженной повышенной экспрессией у субъекта с ЭЭ, относятся, помимо прочего, гены, кодирующие связанные с T-хелперами 2 (Th2) хемокины, такие как CCL8, CCL23 и CCL26, периостин, кадгериноподобный белок 26 и ФНОα-индуцированный белок 6 (Blanchard с соавт. 2006, J. Clin. Invest. 116: 536-547). В качестве альтернативы, к «связанному с ЭЭ биомаркеру» также относятся гены с пониженной экспрессией вследствие ЭЭ, кодирующие, например, белки терминальной дифференцировки (например филаггрин) (Blanchard с соавт. 2006, J. Clin. Invest. 116: 536-547). Некоторые варианты осуществления настоящего изобретения касаются применения этих биомаркеров для мониторинга обратного развития заболевания при введении антагониста ИЛ-4Р. Способы обнаружения и (или) количественного определения таких связанных с ЭЭ биомаркеров известны в рассматриваемой области; наборы для определения уровня таких связанных с ЭЭ биомаркеров доступны из разных коммерческих источников, и разные коммерческие диагностические лаборатории также предлагают услуги по определению этих биомаркеров.

[0036] Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения, представлены способы лечения ЭЭ, включающие: (а) отбор субъекта с повышенным уровнем по меньшей мере одного связанного с ЭЭ биомаркера до или во время лечения, что означает наличие заболевания; и (б) введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, субъекта отбирают на основании повышенного уровня IgE или эотаксина-3.

[0037] Согласно другим аспектам настоящего изобретения, предложены способы лечения ЭЭ, включающие введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р, в терапевтически эффективном количестве, в которых введение фармацевтической композиции субъекту приводит к уменьшению уровня по меньшей мере одного связанного с ЭЭ биомаркера (например эозинофилы в ткани пищевода, эотаксин-3, IgE и др.) после введения фармацевтической композиции в сравнении с уровнем этого биомаркера у субъекта до ее введения.

[0038] Специалистам в данной области будет ясно, что повышение уровня связанного с ЭЭ биомаркера можно определить путем сравнения (i) уровня биомаркера у субъекта в определенный момент времени после введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р, с (ii) уровнем биомаркера, у пациента до введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р (т.е. «измерение на исходном уровне»). Определенными моментами времени, в которые определяют уровень биомаркера, могут быть, моменты времени приблизительно 4 часа, 8 часов, 12 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 4 дня, 5 дней, 6 дней, 7 дней, 8 дней, 9 дней, 10 дней, 15 дней, 20 дней, 35 дней, 40 дней, 50 дней, 55 дней, 60 дней, 65 дней, 70 дней, 75 дней, 80 дней, 85 дней или более после введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р.

[0039] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, у субъекта может наблюдаться снижение уровня одного или более биомаркеров IgE и (или) эотаксина-3 после введения фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р (например антитело к ИЛ-4Р). Например, приблизительно на день 1, день 4, день 8, день 15, день 22, день 25, день 29, день 36, день 43, день 50, день 57, день 64, день 71 или день 85 после введения первой, второй, третьей или четвертой дозы фармацевтической композиции, содержащей приблизительно от 75 до 600 мг антитела к ИЛ-4Р (например дупилумаба), у субъекта, согласно настоящему изобретению, может наблюдаться снижение уровня эотаксина-3 приблизительно на 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более от исходного уровня (где под «исходным уровнем» понимается уровень эотаксина-3 у субъекта до первого введения фармацевтической композиции). Аналогично, приблизительно на день 1, день 4, день 8, день 15, день 22, день 25, день 29, день 36, день 43, день 50, день 57, день 64, день 71 или день 85 после введения первой, второй, третьей или четвертой дозы фармацевтической композиции, содержащей приблизительно от 75 до 600 мг антитела к ИЛ-4Р (например дупилумаба), у субъекта, согласно настоящему изобретению, может наблюдаться снижение уровня IgE приблизительно на 1%, 2%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или более от исходного уровня (где под «исходным уровнем» понимается уровень IgE у субъекта до первого введения фармацевтической композиции).

[0040] Настоящее изобретение также включает способы, позволяющие выявлять субъектов, которым принесет пользу введение фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р. Например, если у пациента до получения фармацевтической композиции, содержащей антагонист ИЛ-4Р, наблюдается уровень связанного с ЭЭ биомаркера, который указывает на наличие заболевания, считают, что этому пациенту введение фармацевтической композиции настоящего изобретения (композиция, содержащая антитело к ИЛ-4Р) принесет пользу. Согласно родственным вариантам осуществления настоящего изобретения, настоящее изобретение включает способы лечения подходящих субъектов, в которых у подходящего субъекта может наблюдаться предрасположенность к более тяжелому течению ЭЭ, например вследствие пищевой аллергии или атопического заболевания. Например, настоящее изобретение включает способы, предполагающие введение антагониста ИЛ-4Р субъекту с пищевой аллергией, атопическим дерматитом, бронхиальной астмой, аллергическим ринитом или аллергическим конъюнктивитом. Согласно другому примеру, настоящее изобретение включает способы, предполагающие введение антагониста ИЛ-4Р субъекту с Менделевским наследственным заболеванием соединительной ткани, например с синдромом Марфана, синдромом Лойса - Дитца, гипермобильным типом синдрома Элерса - Данлоса (СЭД) или синдромом гипермобильности суставов (ГМС). У таких субъектов может наблюдаться повышенный уровень связанного с ЭЭ биомаркера.

[0041] Согласно некоторым примерам вариантов осуществления настоящего изобретения, пациент может считаться подходящим кандидатом для терапии антителом к ИЛ-4Р, если у этого пациента наблюдается одно или более из следующих явлений: (i) уровень эотаксина-3 выше приблизительно 30 пг/мл, выше приблизительно 40 пг/мл, выше приблизительно 50 пг/мл, выше приблизительно 100 пг/мл, выше приблизительно 1500 пг/мл, выше приблизительно 200 пг/мл, выше приблизительно 250 пг/мл, выше приблизительно 300 пг/мл, выше приблизительно 350 пг/мл, выше приблизительно 400 пг/мл, выше приблизительно 450 пг/мл или выше приблизительно 500 пг/мл; или (ii) уровень IgE выше приблизительно 114 тыс. ед./л, выше приблизительно 150 тыс. ед./л, выше приблизительно 500 тыс. ед./л, выше приблизительно 1000 тыс. ед./л, выше приблизительно 1500 тыс. ед./л, выше приблизительно 2000 тыс. ед./л, выше приблизительно 2500 тыс. ед./л, выше приблизительно 3000 тыс. ед./л, выше приблизительно 3500 тыс. ед./л, выше приблизительно 4000 тыс. ед./л, выше приблизительно 4500 тыс. ед./л или выше приблизительно 5000 тыс. ед./л; или (iii) или ≥15 эозинофилов в поле зрения в ткани пищевода у субъекта. Дополнительные критерии, например другие клинические признаки ЭЭ (например утолщение стенки пищевода и пищевая аллергия, указывающая на ЭЭ), можно использовать в комбинации с любым из вышеупомянутых биомаркеров ЭЭ для выявления пациентов, являющихся подходящими кандидатами для терапии антагонистом ИЛ-4Р, как указано в другом месте этого документа.

Ингибиторы рецептора интерлейкина-4

[0042] Способы настоящего изобретения включают введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтической композиции, содержащей ингибитор рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4Р). В этом документе под «ингибитором ИЛ-4Р» (также упоминается в этом документе как «антагонист ИЛ-4Р», «антагонист ИЛ-4Рα», «блокатор ИЛ-4Р», «блокатор ИЛ-4Рα» и т.д.) понимается любое вещество, которое связывается или взаимодействует с ИЛ-4Рα или лигандом ИЛ-4Р и ингибирует или ослабляет нормальный биологический сигналинг, опосредованный рецепторами ИЛ-4 типа 1 и (или) типа 2. ИЛ-4Рα имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 11. Рецептор ИЛ-4 типа 1 является димерным рецептором, содержащим цепь ИЛ-4Рα и цепь γc. Рецептор ИЛ-4 типа 2 является димерным рецептором, содержащим цепь ИЛ-4Рα и цепь ИЛ-13Рα1. Рецепторы ИЛ-4 типа 1 взаимодействуют с ИЛ-4 и стимулируются им, тогда как рецепторы ИЛ-4 типа 2 взаимодействуют как с ИЛ-4, так и с ИЛ-13, а также стимулируются ими. Таким образом, ингибиторы ИЛ-4Р, которые можно использовать для способов настоящего изобретения, могут функционировать посредством блокирования опосредованного ИЛ-4 сигналинга, опосредованного ИЛ-13 сигналинга или опосредованного и ИЛ-4, и ИЛ-13 сигналинга. Таким образом, ингибиторы ИЛ-4Р настоящего изобретения могут предотвращать взаимодействие ИЛ-4 и (или) ИЛ-13 с рецепторами типа 1 или типа 2.

[0043] Примерами групп ингибиторов ИЛ-4Р, помимо прочего, являются ингибиторы ИЛ-4Р, которые являются малыми молекулами, анти-ИЛ-4Р аптамеры, пептидные ингибиторы ИЛ-4Р (например молекулы типа «пептитело»), «рецепторные тела» (например молекулы, получаемые методом генной инженерии, содержащие лиганд-связывающий домен компонента ИЛ-4Р), и антитела или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые специфически связываются с ИЛ-4Рα человека. В этом документе к ингибиторам ИЛ-4Р также относятся антигенсвязывающие белки, которые специфически связываются с ИЛ-4 и (или) ИЛ-13.

Антитела к ИЛ-4α и их антигенсвязывающие фрагменты

[0044] Согласно некоторым примерам вариантов осуществления настоящего изобретения, ингибитор ИЛ-4Р представляет собой антитело к ИЛ-4Р или его антигенсвязывающий фрагмент. Термин «антитело», используемый в этом документе, относится к молекулам иммуноглобулинов, состоящим из четырех полипептидных цепей: двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, соединенных дисульфидными связями, а также к их мультимерам (например IgM). У типичного антитела каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (в этом документе используется сокращение HCVR или VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи включает три домена: CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (в этом документе используется сокращение LCVR или VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи включает один домен (CL1). Области VH и VL, в свою очередь, включают гипервариабельные участки, называемые определяющими комплементарность участками (CDR), которые перемежаются с более консервативными участками, называемыми каркасными (FR). Каждая область VH и VL состоит из трех участков CDR и четырех участков FR, которые располагаются от N-конца до карбоксильного конца белковой цепи в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Согласно различным вариантам осуществления настоящего изобретения, участки FR антитела к ИЛ-4Р (или его антигенсвязывающего фрагмента) могут иметь последовательность, идентичную герминативным последовательностям человека или могут иметь естественные или искусственные модификации. Аминокислотную консенсусную последовательность можно определить путем непосредственного сопоставления двух или более участков CDR.

[0045] Термин «антитело», используемый в этом документе, также включает антигенсвязывающие фрагменты или полные молекулы антител. Термины «антигенсвязывающая часть» антитела, «антигенсвязывающий фрагмент» антитела и им подобные, используемые в этом документе, включают любые естественные, получаемые ферментативным путем, синтетические или получаемые методом генной инженерии полипептиды или гликопротеины, которые специфически связываются с антигеном с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела можно получить, например, из полных молекул антител путем использования любых подходящих стандартных методик, например протеолитического расщепления или генной инженерии с применением рекомбинантных технологий с изменением и экспрессией ДНК, кодирующей вариабельные и, в некоторых случаях, константные домены антитела. Такая ДНК известна и (или) легко доступна из, например, коммерческих источников, библиотек ДНК (включая, например, библиотеки фаговых антител), либо ее можно синтезировать. ДНК можно секвенировать или изменять химически либо с помощью методик молекулярной биологии, например, для придания одному или более вариабельным и (или) константным доменам подходящей конфигурации, или для введения кодонов, создания цистеиновых остатков, модификации, добавления или удаления аминокислот и т.д.

[0046] Примерами антигенсвязывающих фрагментов, помимо прочего, являются: (i) фрагменты Fab; (ii) фрагменты F(ab')2; (iii) фрагменты Fd; (iv) фрагменты Fv; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) фрагменты dAb; и (vii) единицы минимального распознавания аминокислотных остатков, имитирующие гипервариабельные участки антитела (например отдельный определяющий комплементарность участок (CDR), такой как пептид CDR3), или пептиды c ограниченной конформационной свободой FR3-CDR3-FR4. Другие молекулы, получаемые методом генной инженерии, например домен-специфические антитела, антитела с одним доменом, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, минитела, нанотела (например моновалентные нанотела, бивалентные нанотела и др.), иммунофармацевтические вещества на основе малых молекул модульного белка (SMIP) и вариабельные акульи домены IgNAR, также входят в понятие «антигенсвязывающий фрагмент», как указано в этом документе.

[0047] Антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно включает по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может иметь любой размер или аминокислотную последовательность и обычно включает по меньшей мере один участок CDR, который прилежит к одной или более последовательностям каркасного участка или находится в одной или более последовательностях каркасного участка. В антигенсвязывающих фрагментах с доменом VH, связанным с доменом VL домены VH и VL могут располагаться относительно друг друга любым подходящим образом. Например, вариабельная область может быть димерной и содержать димеры VH-VH, VH-VL или VL-VL. В качестве альтернативы, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен VH или VL.

[0048] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный по меньшей мере с одним константным доменом. Примерами конфигураций вариабельных и константных доменов, которые можно обнаружить в антигенсвязывающем фрагменте антитела в рамках настоящего изобретения, помимо прочего, являются: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1-CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; и (xiv) VL-CL. При любой конфигурации вариабельных и константных доменов, включая любые примеры представленных выше конфигураций, вариабельные и константные домены могу либо быть напрямую связаны друг с другом, либо связаны полной или частичной шарнирной или линкерной областью. Шарнирная область может включать по меньшей мере 2 (например 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислоты, что приводит к возникновению гибкой или полугибкой связи между прилежащими вариабельными и (или) константными доменами в молекуле, представляющей собой одиночный полипептид. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела в рамках настоящего изобретения может включать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) с любой из перечисленных вышей конфигураций вариабельных и константных доменов, связанных друг с другом нековалентной связью, и (или) с одним или более мономерными доменами VH или VL (например, дисульфидной(-ыми) связью(-ями)).

[0049] Термин «антитело», используемый в этом документе, также относится к мультиспецифическим (например биспецифическим) антителам. Мультиспецифическое антитело или антигенсвязывающий фрагмент антитела обычно состоит по меньшей мере из двух разных вариабельных доменов, причем каждый вариабельный домен способен специфически связываться с отдельным антигеном или с различными эпитопами этого же антигена. Любое мультиспецифическое антитело можно приспособить для использования в качестве антитела или антигенсвязывающего фрагмента антитела в контексте настоящего изобретения с использованием стандартных методик, доступных в рассматриваемой области. Например, настоящее изобретение включает способы, предполагающие применение биспецифических антител, где один Fab-фрагмент иммуноглобулина специфичен по отношению к ИЛ-4Рα или его фрагменту, а другой Fab-фрагмент иммуноглобулина специфичен ко второй терапевтической мишени или конъюгирован с терапевтическим веществом. Примерами биспецифических антител, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, являются, помимо прочего, например, биспецифические антитела на основе scFv или диатела, продукты слияния IgG и scFv, Ig с двойным вариабельным доменом (ДВД), антитела квадромы, антитела с укладкой типа «выступ в углублении» (например, общие легкие цепи c укладкой типа «выступ в углублении»), антитела CrossMab, антитела CrossFab, антитела SEED, «лейциновая застежка», антитела Duobody, IgG1/IgG2, IgG с фрагментом Fab с двойным действием (DAF) и биспецифические антитела Mab2 (для получения информации о вышеперечисленных антителах см., например, Klein с соавт. 2012, mAbs 4:6, 1-11, а также упомянутые в другом месте этого документа источники). Биспецифические антитела также можно получить путем конъюгирования антитела с белком/нуклеиновой кислотой, например, когда синтетические аминокислоты с ортогональной химической реактивностью используют для получения сайт-специфического конъюгата антитела и олигонуклеотида, который затем самостоятельно трансформируется в мультимерный комплекс с заданной структурой, валентностью и конфигурацией. (См., например, Kazane с соавт., J. Am. Chem. Soc. [Epub: Dec. 4, 2012]).

[0050] Антитела, используемые для способов настоящего изобретения, могут быть человеческими антителами. Термин «человеческое антитело», используемый в этом документе, включает антитела с вариабельными и константными областями, полученными из герменативных последовательностей иммуноглобулина человека. Человеческие антитела настоящего изобретения, могут, тем не менее, включать аминокислотные остатки, не кодируемые герминативными последовательностями иммуноглобулина человека (например мутации, возникшие вследствие случайного сайт-специфического мутагенеза in vitro, или соматические мутации, возникшие in vivo), например в участках CDR и, в частности, в участке CDR3. Однако термин «человеческое антитело», используемый в этом документе, не включает антитела, в которых последовательности CDR, полученные из герминативных последовательностей других видов млекопитающих, например мышей, были внесены в каркасную последовательность у человека.

[0051] Антитела, используемые для способов настоящего изобретения, могут быть рекомбинантными человеческими антителами. Термин «рекомбинантное человеческое антитело», используемый в этом документе, включает все человеческие антитела, приготовленные, экспрессированные, созданные или выделенные с помощью рекомбинантных методик, например антитела, экспрессированные с применением вектора рекомбинантной экспрессии, трансфицированного в клетку-хозяина (описано ниже), антитела, выделенные из библиотеки рекомбинантных комбинаторных антител человека (описано ниже), антитела, выделенные от животного (например мышей), являющегося трансгенным для генов иммуноглобулина человека (см., например, Taylor с соавт. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295) или антитела, приготовленные, экспрессированные, созданные или выделенные любым другим способом, который предполагает сплайсинг гена иммуноглобулина человека до других последовательностей ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные и константные области, полученные из герминативной последовательностей иммуноглобулина человека. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, однако, такие рекомбинантные человеческие антитела подвержены мутагенезу in vitro (или, когда используется животное с трансгенностью в отношении последовательностей человеческого Ig, соматическому мутагенезу in vivo), и, таким образом, аминокислотные последовательности областей VH и VL рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и получены из родственных для человека герминативных последовательностей VH и VL, могут отсутствовать в естественных условиях в герминативном наборе антител человека in vivo.

[0052] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, антитела, используемые для способов настоящего изобретения, специфически связываются с ИЛ-4Рα. Термин «специфически связывается» и подобные ему означают, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образует комплекс с антигеном, который относительно стабилен в физиологических условиях. Способы определения специфичности связывания антитела с антигеном хорошо известны в рассматриваемой области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс, и им подобные способы. Например, антитело, которое «специфически связывается» с ИЛ-4Рα, в контексте настоящего изобретения, включает антитела, которые связываются с ИЛ-4Рα или его частью с KD менее приблизительно 500 нМ, менее приблизительно 300 нМ, менее приблизительно 200 нМ, менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 90 нМ, менее приблизительно 80 нМ, менее приблизительно 70 нМ, менее приблизительно 60 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 40 нМ, менее приблизительно 30 нМ, менее приблизительно 20 нМ, менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 4 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 2 нМ, менее приблизительно 1 нМ или менее приблизительно 0,5 нМ, при определении с помощью метода поверхностного плазмонного резонанса. Выделенное антитело, которые специфически связывается с ИЛ-4Рα, может, однако, иметь перекрестную реактивность к другим антигенам, например молекулам ИЛ-4Рα других видов животных (не человека).

[0053] Согласно некоторым примерам вариантов осуществления настоящего изобретения, ингибитор ИЛ-4Р является антителом к ИЛ-4Рα или его антигенсвязывающим фрагментом и содержит вариабельную область тяжелой цепи (HCVR), вариабельную область легкой цепи (LCVR) и (или) определяющие комплементарность участки (CDR) с любой аминокислотной последовательностью антитела к ИЛ-4Р, указанной в патенте США № 7,608,693. Согласно некоторым примерам вариантов осуществления настоящего изобретения, антитело к ИЛ-4Рα или антигенсвязывающий белок, которые можно использовать в контексте способов настоящего изобретения, включают определяющие комплементарность участки тяжелой цепи (HCDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO: 1 и определяющие комплементарность участки легкой цепи (LCDR) вариабельной области легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:2. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, антитело к ИЛ-4Рα или его антигенсвязывающий фрагмент содержит три HCDR (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) и три LCDR (LCDR1, LCDR2 и LCDR3), причем HCDR1 имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO:3; HCDR2 имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO:4; HCDR3 имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 5; LCDR1 имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO:6; LCDR2 имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO:7; и LCDR3 имеет аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO:8. Согласно другим вариантам осуществления настоящего изобретения, антитело к ИЛ-4Р или его антигенсвязывающий фрагмент содержит HCVR с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:1 и LCVR с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:2. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, способы настоящего изобретения предполагают использование антитела к ИЛ-4Р, причем это антитело имеет тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:13. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, антитело к ИЛ-4Р имеет легкую цепь с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:14. Примером антитела, имеющего тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:13 и легкую цепь с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:14, является полностью человеческое антитело к ИЛ-4Р, известное как дупилумаб. Согласно некоторым примерам вариантов осуществления настоящего изобретения, способы настоящего изобретения предполагают использование дупилумаба или его биоэквивалента. Термин «биоэквивалент», используемый в этом документе, относится к антителам к ИЛ-4Р или связывающим ИЛ-4Р белкам или их фрагментам, которые фармацевтически эквиваленты или фармацевтически альтернативны, скорость и (или) степень всасывания которых не отличается значительно от таковой дупилумаба при применении в той же самой молярной дозе в подобных экспериментальных условиях как однократно, так и многократно. В контексте настоящего изобретения этот термин относится к антигенсвязывающим белкам, которые связываются с ИЛ-4Р и не имеют клинически значимых отличий от дупилумаба в отношении безопасности, чистоты и (или) активности.

[0054] Согласно некоторым конкретным вариантам осуществления настоящего изобретения, способы настоящего изобретения включают использование противомышиного антитела к ИЛ-4Р или его антигенсвязывающего фрагмента с HCVR с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO: 9 и LCVR с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:10. Согласно одному примеру варианта осуществления настоящего изобретения, способы настоящего изобретения включают использование противомышиного антитела к ИЛ-4Р («анти-м-ИЛ-4Рα») с целью уменьшения выраженности эозинофильной инфильтрации в мышиной модели эозинофильного эзофагита.

[0055] К другим антителам к ИЛ-4Рα, которые можно использовать в контексте способов настоящего изобретения, относятся, например, антитело, известное в рассматриваемой области как AMG317 (Corren с соавт., 2010, Am J Respir Crit Care Med., 181(8):788-796), или любые антитела к ИЛ-4Рα, указанные в патенте США № 7,186,809, патенте США № 7,605,237, патенте США № 7,608,693 или патенте США № 8,092,804.

[0056] Антитела к ИЛ-4Рα, используемые в контексте способов настоящего изобретения, могут иметь pH-зависимые характеристики связывания. Например, антитело к ИЛ-4Рα, используемое для способов настоящего изобретения, может демонстрировать снижение связывания с ИЛ-4Рα при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. В качестве альтернативы, антитело к ИЛ-4Рα настоящего изобретения может демонстрировать повышение связывания с его антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Выражение «кислый pH» охватывает значения pH менее 6,2, например приблизительно 6,0, 5,95, 5,9, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0 или менее. В этом документе выражение «нейтральный pH» означает значение pH приблизительно от 7,0 до 7,4. Выражение «нейтральный pH» включает значения pH приблизительно 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35 и 7,4.

[0057] В некоторых случаях «снижение связывания с ИЛ-4Рα при кислом pH по сравнению с нейтральным pH» выражается в виде отношения значения KD связывания антитела с ИЛ-4Рα при кислом pH к значению KD связывания антитела с ИЛ-4Рα при нейтральном pH (или наоборот). Например, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент могут рассматриваться как демонстрирующие «снижение связывания с ИЛ-4Рα при кислом pH по сравнению с нейтральным pH» для целей настоящего изобретения, если отношение значений KD при кислом или нейтральном pH для антитела или его антигенсвязывающего фрагмента составляет приблизительно 3,0 или более. Согласно некоторым примерам вариантов осуществления настоящего изобретения, отношение значений KD при кислом или нейтральном pH для антитела или его антигенсвязывающего фрагмента настоящего изобретения может составлять приблизительно 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5, 10,0, 10,5, 11,0, 11,5, 12,0, 12,5, 13,0, 13,5, 14,0, 14,5, 15,0, 20,0, 25,0, 30,0, 40,0, 50,0, 60,0, 70,0, 100,0 или более.

[0058] Антитела с pH-зависимыми характеристиками связывания можно получить, например, путем скрининга антител на предмет сниженного (или повышенного) связывания с конкретным антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. Кроме того, модификация антигенсвязывающего домена на уровне аминокислот может дать антитела с pH-зависимыми характеристиками связывания. Например, путем замены одной или более аминокислот антигенсвязывающего фрагмента (например в пределах CDR) гистидиновым остатком, можно получить антитело со сниженным связыванием с антигеном при кислом pH по сравнению с нейтральным pH. В этом документе выражение «кислый pH» означает значение pH 6,0 или менее.

Фармацевтические композиции

[0059] Настоящее изобретение включает способы, заключающиеся в введении субъекту ингибитора ИЛ-4Р, который входит в состав фармацевтической композиции. В состав фармацевтических композиций настоящего изобретения могут входить подходящие носители, вспомогательные вещества и другие вещества, обеспечивающие надлежащие перенос, доставку и переносимость композиции, а также прочие ее свойства. Множество подходящих лекарственных форм можно найти в справочниках, известных всем химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, США. К этим лекарственным формам относятся: порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, липидосодержащие везикулы (катионные или анионные) (например LIPOFECTIN™), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсия масла в воде и воды в масле, эмульсия карбовакса (твердый полиэтиленгликоль различной молекулярной массы), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. См. также Powell с соавт. «Compendium of excipients for parenteral formulations» PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.

[0060] Известны и могут использоваться различные системы для введения фармацевтической композиции настоящего изобретения, например липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, опосредованный рецепторами эндоцитоз (см., например, Wu с соавт., 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-4432). Способы введения включают, помимо прочего, внутрикожное, внутримышечное, внутрибрюшное, внутривенное, подкожное, интраназальное, эпидуральное и пероральное введение, а также пероральное применение. Настоящая композиция может быть доставлена в организм любым удобным способом, например путем инфузии или болюсной инъекции, либо за счет всасывания через эпителиальные и слизисто-кожные выстилки (например, слизистая оболочка полости рта, прямой кишки и кишечника); также ее можно вводить с другими биологически активными средствами.

[0061] Фармацевтическую композицию настоящего изобретения, можно вводить подкожно или внутривенно с помощью стандартных иглы и шприца. Кроме того, что касается подкожного введения, то фармацевтическую композицию настоящего изобретения, можно вводить с помощью шприца-ручки. Такой шприц-ручка может быть предназначена для многократного или однократного пользования. Шприц-ручка многократного пользования обычно имеет заменяемый картридж, содержащий фармацевтическую композицию. После введения фармацевтической композиции, содержащейся в картридже, пустой картридж можно выбросить и заменить на новый, содержащий фармацевтическую композицию. Шприц-ручку затем можно использовать заново. Шприц-ручка однократного пользования не имеет заменяемого картриджа. Шприц-ручка однократного пользования имеет емкость, заполненную фармацевтической композицией. Шприц-ручку после введения фармацевтической композиции выбрасывают.

[0062] В некоторых случаях фармацевтическую композицию можно вводить с помощью системы с контролируемым высвобождением лекарственного вещества. Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения, можно использовать помпу. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, можно использовать полимерные материалы; см. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida, США. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, систему с контролируемой доставкой лекарственного вещества можно размещать вблизи целевого органа, что требует введения лишь части системной дозы (см., например, Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы с контролируемой доставкой лекарственного вещества рассматриваются в обзорной статье Langer, 1990, Science 249:1527-1533.

[0063] К инъекционным препаратам могут относиться лекарственные формы для внутривенного, подкожного, внутрикожного и внутримышечного инъекционного введения, формы для внутривенного капельного введения и др. Эти инъекционные препараты можно готовить с помощью известных способов. Например, инъекционные препараты можно готовить, например, путем растворения, суспендирования или эмульсифицирования антитела или его соли, описанной выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно используемой для приготовления инъекционных препаратов. В качестве водных сред для приготовления инъекционных препаратов используются изотонический раствора хлорида натрия, изотонический раствор глюкозы и других вспомогательных веществ, например веществ, которые могут быть использованы в комбинации с подходящими солюбилизирующими веществами, например спиртом (например этиловым спиртом), полиспиртом (например пропиленгликолем, полиэтиленгликолем), неионными сурфактантами (например, полисорбатом 80, аддуктом гидрогенизированного касторового масла HCO-50 (полиоксиэтилен (50 моль)) и др. В качестве масляной среды используется, например, кунжутное масло, соевое масло и др., которые можно использовать в комбинации с солюбилизирующим веществом, например бензилбензоатом, бензиловым спиртом и др. Приготовленный таким образом инъекционный препарат можно помещать в подходящую ампулу.

[0064] Предпочтительно, фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, рассмотренные выше, готовят в виде лекарственных форм с унифицированной дозой, соответствующей дозе действующих веществ. К таким лекарственным формам с унифицированной дозой относятся, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекционные лекарственные формы (раствор в ампулах), свечи и др.

[0065] Примеры фармацевтических композиций, содержащих антитело к ИЛ-4Р, которые можно использовать в контексте настоящего изобретения, указаны, например, в опубликованной патентной заявке для США № 2012/0097565.

Дозировка

[0066] Количество ингибитора ИЛ-4Р (например антитела к ИЛ-4Рα), вводимое субъекту согласно способам настоящего изобретения, обычно является терапевтически эффективным количеством. В этом документе фраза «терапевтически эффективное количество» означает количество ингибитора ИЛ-4Р, вызывающие одно или более из нижеследующего: (а) уменьшение выраженности или длительности симптома эозинофильного эзофагита; (б) уменьшение количества эозинофилов в ткани пищевода; (в) профилактика или уменьшение выраженности аллергической реакции; и (г) снижение частоты использования или необходимости использования традиционной противоаллергической терапии (например снижение частоты или снятие использования антигистаминных препаратов, деконгестантов, интраназальных или ингаляционных стероидов, анти-IgE препаратов, эпинефрина и др.).

[0067] В случае антитела к ИЛ-4Рα, терапевтически эффективным количеством может быть количество от приблизительно 0,05 мг до приблизительно 600 мг, например приблизительно 0,05 мг, приблизительно 0,1 мг, приблизительно 1,0 мг, приблизительно 1,5 мг, приблизительно 2,0 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 110 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 130 мг, приблизительно 140 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 160 мг, приблизительно 170 мг, приблизительно 180 мг, приблизительно 190 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 210 мг, приблизительно 220 мг, приблизительно 230 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 260 мг, приблизительно 270 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 290 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 310 мг, приблизительно 320 мг, приблизительно 330 мг, приблизительно 340 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 360 мг, приблизительно 370 мг, приблизительно 380 мг, приблизительно 390 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 410 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 430 мг, приблизительно 440 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 460 мг, приблизительно 470 мг, приблизительно 480 мг, приблизительно 490 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 510 мг, приблизительно 520 мг, приблизительно 530 мг, приблизительно 540 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 560 мг, приблизительно 570 мг, приблизительно 580 мг, приблизительно 590 мг или приблизительно 600 мг антитела к ИЛ-4Р. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, вводят 300 мг антитела к ИЛ-4Р.

[0068] Количество ингибитора ИЛ-4Р, содержащееся в отдельной дозе, можно выражать в миллиграммах антитела на килограмм массы тела пациента (т.е. мг/кг). Например, ингибитор ИЛ-4Р можно вводить пациенту в дозе приблизительно от 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг массы тела.

ПРИМЕРЫ

[0069] Следующие примеры приведены с целью предоставления средним специалистам в рассматриваемой области полной информации и полного представления о том, как надлежит выполнять и применять способы и композиции настоящего изобретения, и не имеют своей целью ограничить ту область, которую изобретатели считают своим изобретением. Были приложены все усилия для обеспечения точности приведенных числовых значений (например количество, температура и т.д.), однако следует учитывать вероятность некоторых экспериментальных ошибок и отклонений. Если не указано иное, части - это части по массе, молекулярная масса - это средняя молекулярная масса, температура - это температура в градусах Цельсия и давление - это давление на уровне атмосферного давления или близкое к нему.

Пример 1. Антитело к ИЛ-4Р уменьшает выраженность эозинофильного эзофагита в мышиной модели с гидродинамической доставкой ДНК ИЛ-25 (HDD)

[0070] В этой модели изучался эффект блокады ИЛ-4Рα на течение эозинофильного эзофагита в мышиной модели с гидродинамической доставкой (HDD) ДНК ИЛ-25. Данная модель основана на наблюдении, что индуцированная экспрессия ИЛ-25 запускает опосредованный ИЛ-13 сигналинг через гетеродимерный рецептор ИЛ-4Рα/ИЛ-13Р и в последующем приводит к эозинофилии в желудочно-кишечном тракте, включая эозинофильную инфильтрацию пищевода и продуцирование слизи.

[0071] В день 0 мышам Balb/c вводили инъекционно либо плазмиду, экспрессирующую мышиную ДНК ИЛ-25 («pRG977/мИЛ-25», n=17), либо пустой вектор («pRG977», n=4) в дозе 25 мкг ДНК/мышь методом гидродинамической доставки ДНК (HDD) (см, например, Liu с соавт. 1999, Gene Therapy 6:1258-1266). Плазмиду растворяли в ФСБ и вводили полученный раствор в большом объеме (10% от массы тела (мл)) с высокой скоростью (6–8 секунд на инъекцию) в хвостовую вену. Мышам, которые получали инъекционно ДНК pRG977/мИЛ-25, вводили подкожно (п/к) противомышиное антитело к ИЛ-4Р («анти-м-ИЛ-4Рα»), контрольный изотип антитела или гибридный белок, состоящий из альфа единицы рецептора ИЛ-13 и фрагмента Fc мыши («ИЛ-13Рa2-мFc», использовавшийся в качестве рецептора-ловушки; Yasunaga с соавт. 2003; Cytokine 24: 293-303), по инъекции в дни 1, 3, 6 и 9. Каждая доза составляла 50 мг/кг массы тела. В этом примере противомышиным антителом к ИЛ-4Рα было антитело, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:9, и LCVR с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:10. ИЛ-13Рa2-мFc имел аминокислотную последовательность с идентификатором SEQ ID NO: 12. Мышей умерщвляли в день 12 для исследования пищевода и анализа крови. Брали кровь животных и получали из нее сыворотку для определения уровней общего IgE методом ИФА.

[0072] Пищеводы мышей фиксировали в фиксирующем растворе, заливали парафином и окрашивали гематоксилином и эозином. Выполняли патологическое исследование срезов пищеводов и степень эозинофильной инфильтрации определяли согласно следующей шкале:

степень 0: толщина стенки пищевода не изменена, лейкоцитарная инфильтрация отсутствует;

степень 1: незначительная или умеренно выраженная лейкоцитарная инфильтрация подслизистого слоя;

степень 2: умеренно выраженная или сильно выраженная лейкоцитарная инфильтрация подслизистого слоя, явное утолщение стенки пищевода;

степень 3: сильно выраженная лейкоцитарная инфильтрация с выраженным утолщением стенки пищевода.

[0073] Степень эозинофильной инфильтрации определяли для проксимальной, средней и дистальной частей пищевода по одной шкале, и итоговая степень у животного представляла собой среднее этих трех значений.

[0074] У мышей, получивших инъекционно II25, а затем изотип контрольного антитела или гибридный белок ИЛ-13Рa2-мFc, наблюдался повышенный уровень IgE в сыворотке крови, который был значительно ниже у мышей, получавших моноклональное антитело анти-м-ИЛ-4Рα, по сравнению с мышами, получавшими ИЛ-13Рa2-мFc (см. фиг. 1). Результаты оценки степени эозинофильной инфильтрации по данным гистологического исследования показаны на фиг. 2. И моноклональное антитело анти-м-ИЛ-4Рα, и ИЛ-13Рa2-мFc уменьшали степень выраженности эозинофильной инфильтрации пищевода по данным гистологического исследования приблизительно на 50% (см. фиг. 2). Для определения статистической значимости изначально применяли t-критерий, однако в дальнейшем использовали дисперсионный анализ (или непараметрический критерий Краскела - Уоллиса).

Пример 2. Антитело к ИЛ-4Р уменьшает выраженность эозинофильной инфильтрации пищевода в мышиной модели с аллергией на арахис

[0075] В этом примере изучался эффект блокады ИЛ-4Рα на индуцированный аллергеном арахиса эозинофильный эзофагит у мышей.

[0076] Мышей Balb/c сенсибилизировали экстрактом аллергеном арахиса в дозе 200 мкг (PAE) в 1 мг адъюванта в виде алюминиевых солей (Alum) в день 0 и день 14. Через три недели, в день 21, мышам вводили внутриназально PAE в дозе 100мкг, растворенный в 50 мкл фосфатно-солевого буфера (ФСБ). Провокационную пробу с аллергеном повторяли в дни 24, 27 и 30. Начиная с дня 21, одна группа мышей, которым была выполнена провокационная проба с аллергеном, не получала терапию, а две группы мышей получали либо антитело к ИЛ-4Р («моноклональное антитело анти-м-ИЛ-4Р», как описано выше) в дозе 25 мг/кг, либо изотип контрольного антитела IgG1. Терапию проводили два раза в неделю, начиная с дня 21. Мышей умерщвляли через 24 часа после выполнения последней провокационной пробы с аллергеном PEA в день 31 и забирали у них образцы крови и пищеводы.

[0077] Пищеводы фиксировали в забуференном формалине, а затем заливали парафином и готовили срезы с окрашиванием тканей гематоксилином и эозином. Степень лейкоцитарной инфильтрации и воспаления оценивали в баллах в слепом режиме, используя следующую шкалу: степень 0 - толщина стенки пищевода не изменена, лейкоцитарная инфильтрация отсутствует; степень 1 - незначительная или умеренно выраженная лейкоцитарная инфильтрация подслизистого слоя; степень 2 - умеренно выраженная или сильно выраженная лейкоцитарная инфильтрация подслизистого слоя, явное утолщение стенки пищевода; степень 3 - сильно выраженная лейкоцитарная инфильтрация с выраженным утолщением стенки пищевода. Каждым 25% длины пищевода присваивали определенный бал (4 значения для пищевода в целом); рассчитывали средний балл и выражали его как «балл/мышь».

[0078] Для определения лейкоцитарной формулы и активности лейкоцитов ткани пищевода подвергали воздействию фермента либеразы DL в течение 30 мин при температуре 37°C (n=5 на группу). После воздействия либеразой DL суспензию клеток отфильтровывали и окрашивали клетки маркерами, специфичными в отношении эозинофилов, Т-клеток, нейтрофилов и макрофагов, а затем выполняли анализ методом проточной цитометрии. Некоторые клетки, выделенные из пищеводов с помощью либеразы DL, стимулировали антителами к CD3 и CD28 для активации Т-клеток и культивировали в течение 3 дней. В супернатантах тканевой культуры определяли уровни цитокинов Th2 методом ИФА (ИЛ-13, ИЛ-10 и ИЛ-4).

[0079] Средний балл для группы мышей, не подвергнутых сенсибилизации и перенесших провокационные пробы с арахисовым аллергеном, составлял 0. Балл у мышей, подвергнутых сенсибилизации, перенесших провокационные пробы с арахисовым аллергеном и не получавших терапию, составлял 0,925±0,497 (среднее значение ±СО), а у мышей, подвергнутых сенсибилизации, перенесших провокационные пробы с арахисовым аллергеном и получавших терапию изотипом контрольного антитела или моноклональным антителом анти-м-ИЛ-4Р составлял 0,975±0,615 и 0,725±0,652 соответственно. Различия между группами, получавшими изотип контрольного антитела, моноклональное антитело анти-м-ИЛ-4Р, или не получавших терапию, не были статистически значимыми по результатам однофакторного дисперсионного анализа (см. фиг. 3).

[0080] Кровь брали из сердца с помощью пункции после умерщвления животных, и в сыворотке крови методом ИФА определяли уровни общего IgE и специфического по отношению к арахису IgG1 (PAE-специфический IgG1). Кратко излагая: для выявления PAE-специфического IgG1 планшеты, покрытые раствором с PAE, инкубировали с образцами сыворотки крови в серийном разведении после инкубирования с противомышиным антителом IgG1, конъюгированным с пероксидазой хрена. Относительные уровни IgG1 в сыворотке крови выражали в виде титровальных единиц (показатель OD450 умножали на величину коэффициента разведения для получения значения OD450≤0,5). Для определения уровней общего IgE в сыворотке крови образцы сыворотки крови в серийном разведении инкубировали со связывающим IgE антителом в 96-луночных планшетах, и уровни IgE определяли путем биотинилирования со вторичным противомышиным антителом IgE. Очищенный мышиный IgE, меченый пероксидазой хрена, использовали в качестве стандарта.

[0081] Уровни PAE-специфического IgG1 и общего IgE в крови у несенсибилизированных мышей, не перенесших провокационные пробы, составляли 439±17,25 единиц и 644±337,7 нг/мл соответственно. У мышей, сенсибилизированных PAE и перенесших провокационные пробы, но не получавших терапию, уровни PAE-специфического IgG1 и общего IgE в крови повысились до 57 822±8455 единиц и 2857±1149 нг/мл соответственно. У мышей, получавших изотип контрольного антитела, уровень PAE-специфического IgG1 составлял 61 304±17 293 единиц и уровень IgE составлял 2516±1613 нг/мл. Терапия моноклональным антителом анти-м-ИЛ-4Рα не влияла существенно на уровни PAE-специфического IgG1 (48 128±22 691 единиц), однако влияла существенно на уровень общего IgE в сыворотке крови (300±187,8 нг/мл) по сравнению со значениями у мышей, получавших изотип контрольного антитела или не получавших терапию (см. фиг. 4).

Пример 3. Клиническое исследование с подкожным введением дупилумаба у взрослых пациентов с эозинофильным эзофагитом (ЭЭ)

[0082] Данное исследование представляет собой 32-недельное рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование по оценке эффективности, безопасности, переносимости и иммуногенности дупилумаба у взрослых пациентов с ЭЭ. Дупилумаб является полностью человеческим антителом к ИЛ-4Р, содержащим тяжелую цепь с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:13 и легкую цепь с аминокислотной последовательностью с идентификатором SEQ ID NO:14; HCVR/LCVR с парой аминокислотных последовательностей с идентификаторами SEQ ID NO:1/2; и CDR тяжелой и легкой цепей с аминокислотными последовательностями с идентификаторами SEQ ID NO:3–8.

[0083] Исследуемый препарат пациенты получали в течение периода длительностью до 12 недель с последующим наблюдением для оценки безопасности в течение 16 недель. После подписания формы информированного согласия пациенты проходили оценку на предмет возможности включения в исследования на скрининговом визите в течение 4 недель после визита исходного уровня в день 1. На скрининговом визите и еженедельно в течение исследования собирали данные, полученные с помощью опросника для оценки дисфагии Страуманна (SDI) (0–9) (данные за 1 неделю) и инструмента для оценки активности ЭЭ (EoEAI) (данные за 1 неделю) (Straumann с соавт. 2010, Gastroenterology 139: 1526-1537). На скрининговом визите и визите по окончании лечения пациентов анкетировали с помощью опросника для оценки качества жизни у взрослых пациентов с ЭЭ. Исходное состояние пациентов, которые соответствовали критериям включения, оценивали в день 1. Пациентов рандомизировали в соотношении 1:1 для получения дупилумаба в дозе 300 мг или плацебо подкожно один раз в неделю в течение 12-недельного двойного слепого периода.

[0084] В исследование включались пациенты в возрасте 18–50 лет с документально подтвержденным диагнозом ЭЭ, максимальной плотностью эозинофилов в ткани пищевода по результатам гистологического исследования биоптата ≥15 клеток в п./зр. как в проксимальном, так и дистальном отрезках пищевода, по меньшей мере с 2 эпизодами дисфагии в анамнезе и наличием в анамнезе сопутствующей аллергической бронхиальной астмы, аллергического ринита, атопического дерматита или пищевых аллергий; либо с увеличенным количеством эозинофилов в периферической крови (≥300 клеток/мкл) или повышенным уровнем сывороточного IgE (≥150 тыс. ед./л).

[0085] Исследуемое лечение включало нагрузочную дозу дупилумаба 600 мг в день 1, с последующим еженедельным введением препарата в дозе 300 мг; либо двойную дозу плацебо в день 1 с последующим его еженедельным введением.

[0086] Пациенты получали 2 инъекции (включая нагрузочную дозу) в день 1, а затем получали инъекции еженедельно. В конце 12-недельной двойной слепой фазы лечения пациентов наблюдали еще в течение 16 недель. Исследуемую популяцию стратифицировали по предыдущему ответу на пероральную терапию топическими кортикостероидами. Недостаточный ответ определяли как отсутствие нормализации количества эозинофилов в ткани пищевода и сохранение симптомов по меньшей мере после 2 месяцев терапии топическими кортикостероидами. Биопсию пищевода выполняли на скрининговом визите на неделе 12. Пациентам, выбывшим из исследования до 12-й недели, выполняли биопсию на визите досрочного прекращения участия в исследовании. В рамках этой процедуры также выполнялась оценка воспаления и ремоделирования пищевода с помощью шкалы оценки ЭЭ на основании данных эндоскопии.

[0087] Все пациенты в процессе получения исследуемой терапии получали сопутствующие лекарственные препараты (за исключением запрещенных лекарственных средств) согласно необходимости. При необходимости в качестве неотложной помощи пациенты получали различные лекарственные препараты (например системные кортикостероиды и топические кортикостероиды), или им выполняли дилатацию пищевода. Пациентов, получавших неотложную терапию, исключали из исследования. Оценку безопасности, лабораторные исследования и клиническое обследование выполняли во время определенных визитов в клинику. Визиты последующего наблюдения по окончании лечения осуществлялись на неделях 16, 20, 24 и 28. У пациентов, участвовавших в дополнительном субисследовании по изучению геномики, брали образцы крови для анализа ДНК и РНК. РНК в биоптатах пищевода определяли с помощью транскриптомного секвенирования или микроматричного анализа.

[0088] Основой целью исследования являлась оценка потенциальной эффективности дупилумаба при повторном еженедельном подкожном введении (12 недель лечения) в сравнении с плацебо в отношении контроля ЭЭ у взрослых пациентов с активным заболеванием. Дополнительные цели были следующими: (а) оценка безопасности, переносимости и иммуногенности дупилумаба при повторном подкожном введении у взрослых пациентов с активным ЭЭ; (б) оценка эффекта дупилумаба на максимальное количества эозинофилов в биоптатах пищевода (эоз./в поле зрения); (в) оценка фармакокинетики дупилумаба у взрослых пациентов с ЭЭ; (г) оценка и оптимизация разрабатываемой схемы регистрации клинических конечных точек; и (д) оценка фармакодинамического эффекта дупилумаба с помощью биомаркеров, включая тканевые маркеры и маркеры в кровотоке (TARC и эотаксин-3).

[0089] У пациентов оценивались следующие показатели: (a) изменение балла активности эозинофильного эзофагита (EoEAI) в процентах согласно опроснику от исходного уровня к неделе 12; (б) изменения балла по опроснику SDI от исходного уровня к неделе 12; и (в) снижение уровня TARC в сыворотке крови и уровня эотаксина-3 в плазме крови от исходного уровня к неделе 12. Также контролировали такие показатели как уменьшение степени гиперплазии пищевода, воспаление, воспалительный профиль генной экспрессии и ремоделирование (гистологическое исследование) и уменьшение количества эозинофилов в слизистой оболочке пищевода в поле зрения (400-кратное увеличение).

[0090] Применение настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами осуществления настоящего изобретения, описанными в этом документе. Более того, различные модификации данного изобретения, помимо модификаций, описанных в этом документе, будут очевидны специалистам в рассматриваемой области, исходя из вышеупомянутого описания и сопровождающих текст графических материалов. Такие модификации, как предполагается, попадают в сферу охвата прилагаемой формулы изобретения.

1. Способ лечения или уменьшения выраженности по меньшей мере одного симптома или признака эозинофильного эзофагита (ЭЭ), включающий введение нуждающемуся в этом субъекту фармацевтической композиции, содержащей ингибитор рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4Р), в терапевтически эффективном количестве, где указанный ингибитор ИЛ-4Р представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с ИЛ-4Р.

2. Способ по п. 1, где симптом или признак ЭЭ выбирают из группы, состоящей из эозинофильной инфильтрации пищевода, утолщения стенки пищевода, отказа от пищи, рвоты, боли в животе, изжоги, регургитации пищи, дисфагии и застревания пищи в пищеводе.

3. Способ по п. 1, где у субъекта наблюдается аллергическая реакция на пищевой аллерген, содержащийся в пищевом продукте, выбранном из группы, состоящей из молочных продуктов, яиц, пшеницы, сои, кукурузы, рыбы, морепродуктов, арахиса, орехов, говядины, курицы, овса, ячменя, свинины, стручковой фасоли, яблок и ананасов.

4. Способ по п. 1, где у субъекта наблюдается аллергическая реакция на непищевой аллерген, связанный с пылью, пыльцой, плесенью, растениями, кошками, собаками или насекомыми.

5. Способ по п. 1, где введение ингибитора ИЛ-4Р приводит к снижению у субъекта уровня связанного с ЭЭ биомаркера.

6. Способ по п. 5, где связанный с ЭЭ биомаркер выбирают из группы, состоящей из эозинофилов в ткани пищевода, эотаксина-3, периостина, сывороточного IgE (общего и аллерген-специфического), ИЛ-13, ИЛ-5, сывороточного регулируемого тимусом и активацией хемокина (TARC), тимического стромального лимфопопоэтина (TSLP), сывороточного эозинофильного катионного белка (ECP) и эозинофильного нейротоксина (EDN).

7. Способ по любому из пп. 1-6, где композицию вводят в одной или более дозах, где каждая доза содержит 50-600 мг ингибитора ИЛ-4Р.

8. Способ по п. 7, где начальная доза содержит 600 мг, а каждая последующая доза содержит 300 мг ингибитора ИЛ-4Р.

9. Способ по п. 8, где каждую последующую дозу вводят пациенту через одну неделю или через две недели после непосредственно предшествующей дозы.

10. Способ по любому из пп. 1-9, где ингибитором ИЛ-4Р является антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые связываются с ИЛ-4Рα и предотвращают взаимодействие ИЛ-4 и/или ИЛ-13 с рецепторами ИЛ-4 типа 1 или типа 2.

11. Способ по п. 10, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит определяющие комплементарность участки тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и определяющие комплементарность участки легкой цепи (LCDR1, LCDR2 и LCDR3) вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащие аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2.

12. Способ по п. 11, где HCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3; HCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:4; HCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:5; LCDR1 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:6; LCDR2 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7; и LCDR3 содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:8.

13. Способ по п. 11, где HCVR содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1 и LCVR содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2.

14. Способ по п. 10, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит тяжелую цепь, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13 и легкую цепь, содержащую аминокислотную последовательность ID NO:14.

15. Способ по п. 1, где ингибитором ИЛ-4Р является дупилумаб или его биоэквивалент.

16. Способ по любому из пп. 1-15, где ингибитор ИЛ-4Р применяют в комбинации со вторым терапевтическим средством или методом лечения, в котором второе терапевтическое средство или

второй метод лечения выбирают из группы, состоящей из ингибитора ИЛ-1-бета, ингибитора ИЛ-5, ингибитора ИЛ-9, ингибитора ИЛ-13, ингибитора ИЛ-17 и ингибитора ИЛ-25, ингибитора ФНО-альфа, ингибитора эотаксина-3, ингибитора IgE, ингибитора простагландина D2, иммунносупрессанта, кортикостероида, глюкокортикоида, ингибитора протонной помпы, нестероидного противовоспалительного средства (НПВС), исключения воздействия аллергена и изменения диеты.

17. Способ по п. 1, где субъект до или на момент введения ингибитора ИЛ-4Р имеет или у него диагностируется заболевание или расстройство, выбранное из группы, состоящей из атопического дерматита, бронхиальной астмы, аллергического ринита и аллергического конъюнктивита.



 

Похожие патенты:
Группа изобретений относится к фармации и медицине. Предложено: таблетка для перорального введения для лечения аллергического или воспалительного состояния, содержащая, в мг на таблетку общей массой 206 мг: Монтелукаст натрия 10,4; Левоцетиризина дигидрохлорид 5,0 и вспомогательные ингредиенты; причём таблетка получена по способу, включающему стадии: a) смешивания монтелукаста натрия, моногидрата лактозы, микрокристаллической целлюлозы, безводного двухосновного фосфата кальция и кроскармеллозы натрия; b) растворения гидроксипропилцеллюлозы в растворителе с образованием связующего раствора; c) гранулирования смеси со стадии а) с применением связующего раствора со стадии b); d) смешивания гранул со стадии с) с левоцетиризина дигидрохлоридом, кроскармеллозой натрия и микрокристаллической целлюлозой; e) введения смазывающего вещества, представляющего собой стеарат магния, в смесь со стадии d); f) прессования продукта со стадии е) с получением таблетки и способ её получения.

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к эмульсионной композиции, содержащей дифлупреднат и цинк. А также относится к способу стабилизации эмульсионной композиции, содержащей дифлупреднат, включающему добавление образующего ион цинка соединения на стадии приготовления композиции.

Изобретение относится к новым аминопиримидиновым соединениям формулы (I), обладающим свойствами ингибитора PI3-киназы, в частности PI3Kδ. Соединения предназначены для регулирования, лечения или облегчения тяжести заболевания, вызванного неадекватной активностью PI3-киназы, путем введения терапевтически эффективного количества соединения.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту Pseudolysimachion rotundum var subintegrum для предотвращения и лечения воспалительного заболевания. Экстракт Pseudolysimachion rotundum var subintegrum для предотвращения и лечения воспалительного заболевания, содержащий 30-60% (масс./масс.) верпрозида, 0,5-10% (масс./масс.) вератровой кислоты, 2-20% (масс./масс.) каталпозида, 1-10% (масс./масс.) пикрозида II, 1-10% (масс./масс.) изованиллоилкаталпола и 2-20% (масс./масс.) 6-О-вератроилкаталпола в расчете на общую массу экстракта (100%) Pseudolysimachion rotundum var subintegrum, где указанный экстракт получен по способу, включающему: добавление водного этанола к высушенному Pseudolysimachion rotundum var subintegrum на 1-м этапе; проведение экстракции холодной водой и затем проведение экстракции с обратным холодильником; повторение указанных этапов с получением 1-го экстракта на 2-м этапе; суспендирование указанного 1-го экстракта в приблизительно 1-5-кратном объеме воды с получением суспендированного экстракта на 3-м этапе; добавление 1-10-кратного объема бутанола, фракционирование с получением водного слоя и бутанольного слоя и сбор бутанольного слоя с получением указанного очищенного экстракта, фракционированного с использованием бутанола (АТС1), на 3-м этапе и очистка указанного очищенного экстракта, фракционированного с использованием бутанола (АТС1), с помощью обращенно-фазовой распределительной хроматографии с использованием неподвижной фазы, выбранной из неподвижной фазы на основе силикагеля или неподвижной фазы на основе полимера, и подвижной фазы, выбранной из группы, состоящей из воды, ацетонитрила, метанола, этанола, бутанола, тетрагидрофурана (ТГФ) и их смеси, при определенных условиях.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой офтальмологический продукт, представляющий собой контейнер, содержащий жидкий препарат в виде глазных капель, содержащий хлорфенирамин и/или его фармацевтически пригодную соль, отличающийся тем, что: указанный жидкий препарат имеет рН от 7,0 до 9,0; контейнер включает: корпус контейнера для помещения жидкого препарата; носик, имеющий выход, через который должен выливаться препарат, помещенный в корпусе контейнера; и колпачок для закрытия выхода; и по меньшей мере одна из поверхности стенок внутреннего пространства носика и поверхности стенок колпачка, обращенной к выходу, содержит смолу, содержащую терефталат полибутилена; а также способ стабилизации жидкого препарата, содержащего хлорфенирамин и/или его фармацевтически пригодную соль и имеющего рН от 7,0 до 9,0, включающий помещение жидкого препарата, содержащего хлорфенирамин и/или его фармацевтически пригодную соль, в контейнер, в котором по меньшей мере часть области, образующей внутреннюю стенку контейнера, включает смолу, содержащую терефталат полибутилена.

Изобретение относится к композиции для предупреждения или лечения аллергического заболевания. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения аллергического заболевания, содержащая экстракт из растения рода Justicia или его фракцию в качестве активного ингредиента, где растение рода Justicia представляет собой Justicia procumbens L., а экстракт представляет собой экстракт на основе органического растворителя.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комплексной гранулированной композиции, включающей первую гранулированную часть, включающую левоцетиризин или его фармацевтически приемлемую соль, циклодекстрин или его производное и ощелачивающий агент; и вторую гранулированную часть, включающую монтелукаст или его фармацевтически приемлемую соль, циклодекстрин или его производное и ощелачивающий агент.

Изобретение относится к новому соединению общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые могут быть использованы для лечения заболеваний, связанных с аномальной активностью киназ JAK3 и/или JAK1, выбранных из аутоиммунных заболеваний, воспалительных заболеваний, раковых заболеваний, миелопролиферативных заболеваний, заболеваний резорбции костной ткани или заболеваний "трансплантат против хозяина".Такими заболеваниями могут быть например, заболевания, выбранные из ревматоидного артрита, псориаза, болезни Крона, системной красной волчанки, рассеянного склероза, диабета I типа, аллергических заболеваний, хронической обструктивной болезни легких, астмы, лейкемии и лимфомы, раковых заболеваний, миелопролиферативных заболеваний, заболеваний резорбции костной ткани и заболеваний "трансплантат против хозяина”.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к средству для применения при индукции толерантности при пероральном введении к белкам коровьего молока у млекопитающих.

Изобретение относится к (+)-5-(3,4-дифторфенил)-5-[(3-метил-2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил]имидазолидин-2,4-диону или к его соли. Также предлагается лекарственное средство с ингибирующей активностью по отношению к ферменту, расщепляющему фактор-альфа некроза опухоли (ФНО-альфа) (TACE), включающее в качестве активного ингредиента (+)-5-(3,4-дифторфенил)-5-[(3-метил-2-оксопиридин-1(2H)-ил)метил]имидазолидин-2,4-дион или его соль.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается лечения неопластического заболевания. Для этого вводят фармацевтическую композицию, включающую антитело к IL-1α.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для получения конъюгата для лечения индивидуума с пролиферативным расстройством.

Группа изобретений относится к иммунологии. Предложены гуманизированное моноклональное антитело к фактору D человека или его антигенсвязывающий фрагмент, его нуклеотидная последовательность, клетка и вектор, которые несут эти антитела, способ его получения и применение для получения композиций для лечения заболеваний и нарушений, ассоциированных с избыточной или неконтролируемой активацией системы комплемента.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для лечения рака. Пациенту вводят антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, причем антитело вводят таким образом, чтобы обеспечить уровни в сыворотке по меньшей мере 40 мкг/мл.

Изобретение относится к медицине, в частности к ветеринарии, а именно к способу нормализации эмоционально-психического состояния домашних животных. Для этого в организм животных вводят лекарственное средство, содержащее действующую субстанцию в виде активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100.

Изобретение относится к медицине, в частности к ветеринарии, а именно к способу нормализации эмоционально-психического состояния домашних животных. Для этого в организм животных вводят лекарственное средство, содержащее действующую субстанцию в виде активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело, обладающее иммунологической реактивностью в отношении белка CAPRIN-1.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело, обладающее иммунологической реактивностью в отношении белка CAPRIN-1.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к композиции для специфического связывания гетеротипичного комплекса кератина 7 с кератином 19, что может быть использовано в медицине.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложен связывающий агент, представляющий собой биспецифическое антитело, содержащее домен, связывающийся с клаудином (CLDN), а именно CLDN18.2, и домен, связывающийся с CD3.

Изобретение относится к медицине и предназначено для уменьшения степени тяжести эозинофильного эзофагита. Субъекту вводят терапевтически эффективное количество терапевтической композиции, содержащей ингибитор рецептора интерлейкина-4, а именно антитело к ИЛ-4Р или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с ИЛ-4Р. Способ позволяет расширить арсенал терапевтических средств. 16 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 пр.

Наверх