Питательная среда для культивирования bacillus subtilis вкпм в-12079

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, сульфат аммония и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. 5 табл., 3 пр.

 

Область техники:

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, микробиологии, и может быть использовано для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, который составляет основу кормовой добавки «Энимспорин».

Определенный набор питательных веществ необходим микроорганизмам для проявления их полезных свойств [1]. Для получения полноценного питания (азотистые соединения, углеводы, микро- и макроэлементы, другие биологически активные вещества) необходимо, на основании индивидуальных особенностей микроорганизмов, проводить исследования по подбору состава питательных сред [2]. Для повышения биологической активности микроорганизмов в настоящее время все чаще используют дешевые питательные среды, на их основе разрабатывают более совершенные технологии с целью значительного повышения продуктивности бактериальных культур. В состав питательной среды входят различные компоненты, необходимые для развития микроорганизмов, в том числе и неорганические соединения - соли.

Неорганические соли используются в питательных средах как дополнительный источник N, Р, О, S, Н. Микроорганизмы лучше усваивают азот в восстановленной форме, остальные элементы - в окисленной форме.

Известна питательная среда [3] для культивирования Bacillus subtilis следующего состава (г/л):

фосфат калия однозамещенный - 0.2-0.4;

сульфат аммония - 1.0-3.0;

цитрат натрия - 1.0-3.0;

сернокислая медь - 0.001-0.01;

сернокислый цинк - 0.002-0.005;

сернокислое железо - 0.0001-0.001;

хлористый кальций - 0.09-0.2;

сернокислый магний - 0.1-0.5;

сернокислый марганец - 0.01-0.1;

пептон - 2.0-8.0;

мальтоза - 1.0-5.0;

вода - остальное.

Недостатком данной среды является многокомпонентность.

Известна аналогичная питательная среда [4] для культивирования Bacillus subtilis следующего состава (г/л):

1. Пептон - 12.0;

2. Дрожжевой экстракт - 5.0;

3. Натрий хлористый - 5.0;

4. Вода водопроводная до 1 л;

5. Канамицин - 50 мг/л;

6. Агар-Агар-20.0;

7. Вода водопроводная до 1 л.

Питательную среду формируют в емкости в виде слоя, на который укладывают полупроницаемую мембрану, например, целлофановую пленку. Сверху на пленку наносят посевную дозу штамма бактерий. Культивирование осуществляют в термостате при температуре 34-37°С в течение 20-24 ч. Далее емкость переносят в термостат с температурой 6-10°С и выдерживают при этой температуре в течение суток до образования спор бактерий.

Недостатком данной среды является то, что в состав среды входит канамицин - антибиотический препарат группы аминогликозидов. Для его приобретения требуется оформление разрешающих документов. Так же используется трудоемкая технология посева микроорганизмов.

Целью предлагаемого изобретения является создание питательной среды для увеличения количества бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Поставленная цель достигается тем, что в питательную среду, содержащую питательную основу и дистиллированную воду, вносится одна из неорганических солей - сульфат аммония.

Сущность технического решения поясняется следующим.

В качестве исходного штамма использовали штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, который представляет собой светло-коричневый сухой порошок из лиофильно высушенных бактерий штамма Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Содержание спор составляет 5×109 КОЕ/г. Навеску спор взвешивали в стерильных условиях на аналитических весах, погрешность которых составляет 0.0002 г.

Описание изобретения

Из спор готовили суспензию: в колбу Эрленмейера объемом 50 мл, содержащую жидкую питательную среду, которую готовят при следующем соотношении компонентов (г/л): пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, неорганическая соль в различных количествах (см таблица 1), остальное - дистиллированная вода. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 40 мин.

Затем вносили 5 г спор. Микроорганизмы (штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-12079) выращивали в колбах с жидкой средой в шейкер-инкубаторе «Innova 44» при 250 об/мин (эксцентриситет 5 см) и температуре 37°С в течение 24 часов. Такие условия являются оптимальными для Bacillus subtilis. Для выявления численности микроорганизмов использовали стандартный метод десятикратных разведений, с высевом в стерильных условиях в чашки Петри на твердую питательную среду, которую готовили при следующем соотношении компонентов: пептон ферментативный - 15, дрожжевой экстракт - 5, натрий хлористый - 5, неорганическая соль в различных количествах (см таблица 1), агар - 18, остальное - дистиллированная вода. Значение рН 7,0-7,2. Стерилизация при 1,1 атм. в течение 40 мин.

После чего чашки с посевами инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов. В качестве контрольной пробы проводилось культивирование на средах без добавления солей. Для достоверности все опыты были проведены в семикратной повторности. Для культивирования использовали питательные среды (табл. 1).

Для оптимизации питательной среды для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, были выбраны следующие неорганические соли: сульфат аммония - (NH4)2SO4; гидрофосфат аммония - (NH4)2HPO4; дигидрофосфат аммония - NH4H2PO4.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Влияние сульфата аммония.

Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 на средах, содержащих различные концентрации сульфата аммония, представлены в таблице 2.

Из приведенных данных видно, что максимальный достоверный рост количества колоний Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 наблюдался в средах с содержанием сульфата аммония 1,0 г/л соли. Добавление сульфата аммония в концентрации 1,0 г/л увеличивает количества микроорганизмов на 30% относительно контроля.

Пример 2. Влияние гидрофосфата аммония.

Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 на средах, содержащих гидрофосфат аммония, представлены в таблице 3.

Добавление гидрофосфат аммония в питательную среду оказывает минимальное влияние на рост количества бактерий по сравнению с контролем.

Пример 3. Влияние дигидрофосфата аммония.

Данные культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 в среде, содержащей дигидрофосфат аммония, представлены в таблице 4.

При концентрации дигидрофосфат аммония в питательной среде 0,75 г/л, наблюдалось увеличение количества колоний Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. Добавление 0,75 г/л дигидрофосфата аммония улучшает рост количества колоний на 20% относительно контроля.

Таким образом, максимальное увеличение количества Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 достигается внесением в питательную среду 1,0 г/л сульфата аммония (табл. 5).

Литература

1. Биотехнология. Под ред. А. А. Баева. М.: Наука, 1984. - 309 с.

2. White A., Handler P., Smith Е.L. Principles of biochemistry. Baltimore: The Johns Hopkins University School of Medicine, 1974. - 1051 p.

3. Михайлова H.А., Гапонюк П.Я., Маркова Е.А., Марков И.А. Способ получения биопрепарата // Патент РФ №2149008, заявлено 13.10.1999, опубл. 20.05.2000.

4. Леляк А.И., Костровский В.Г., Рязанкина О.И., Набиев К.Ф., Мистюрин Ю.Н., Ноздрин Г.А. Способ получения бактериального препарата на основе Bacillus subtilis // Патент РФ №2105562, заявлено 14.06.1995, опубл. 27.02.1998.

Питательная среда для культивирования Bacillus subtilis ВКПМ В-12079, содержащая пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, хлорид натрия и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что включает сульфат аммония, при следующем соотношении, г/л:

пептон ферментативный 15
дрожжевой экстракт 5
хлорид натрия 5
сульфат аммония 1
вода дистиллированная до 1 л



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения наночастиц золота или серебра, включающий получение бесклеточного фильтрата культуральной жидкости при культивировании Lentinus edodes.

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для производства макролидного антибиотика рапамицина - лекарственного средства, широко используемого в трансплантологии и терапии опухолевых процессов.
Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциации сибиреязвенного микроба. Питательная среда для дифференциации B.

Изобретение относится к генной инженерии и биотехнологии, в частности к генотерапевтическому ДНК-вектору VTvaf17 размером 3165 п.н. и способу его получения.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии. Применение штамма бактерии Azospirillum zeae OPN-14, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-12542, в качестве биологического агента с рост-стимулирующей активностью по отношению к растениям.

Группа изобретений относится к биотехнологии и экологии и включает препарат для биодеградации метанола и способ его получения. Изобретения могут быть использованы для биодеградации загрязнений окружающей среды (почвы, грунтов, морских, пресных и минерализованных вод), а также технологических конструкций метанолом и сопутствующими нефтепродуктами.

Изобретение относится к биотехнологии. Питательная среда для культивирования Pseudomonas fluorescens АР-33 содержит мелассу, калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный, сульфат магния семиводный, горох шлифованный, предварительно обработанный автоклавированием, янтарную кислоту, лапрол для жидкой среды и дистиллированную воду при заданных соотношениях компонентов.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для мониторинга стадии глубинного культивирования клеток в технологии чумной вакцины. Способ мониторинга стадии культивирования в технологии живой чумной вакцины предусматривает тестовое 5-минутное воздействие на клетки чумного микроба додецилсульфата натрия с последующей фотометрической регистрацией литического эффекта и определением показателя резистентности клеток.

Группа изобретений относится к фармакологии, а именно к штамму лактобактерий, выделенному из свиньи, для лечения кишечного расстройства. Штамм лактобактерий, выделенный из свиньи, который выбран из: NCIMB 41846: Lactobacillus reuteri GGDK31; NCIMB 41847: Lactobacillus paraplantarum и Lactobacillus reuteri GGDK161; NCIMB 41848: Lactobacillus reuteri GGDK255; NCIMB41849: Lactobacillus plantarum/pentosus/helveticus/paraplantarum GGDK258; NCIMB 41850: Lactobacillus johnsonii и Lactobacillus reuteri GGDK2 66; NCIMB 42008 Lactobacillus johnsonii; NCIMB 42009 Lactobacillus reuteri; NCIMB 42010 Lactobacillus plantarum; NCIMB 42011 Lactobacillus reuteri; NCIMB 42012 Lactobacillus reuteri; штамма, составляющего по крайней мере 99,5% идентичность по 16S рРНК со штаммом, выбираемым из тех, которые были депонированы под номером доступа, указанным выше; и любой комбинации из двух или более указанных штаммов, где указанный штамм характеризуется: способностью к демонстрации противомикробной активности, направленной против Е.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены штамм Lactobacillus helveticus D75, депонированный в коллекции ФНБУ ВНИИСХМБ под номером RCAM04483, и штамм Lactobacillus helveticus D76, депонированный в коллекции ФНБУ ВНИИСХМБ под номером RCAM04484, предназначенные для использования в составе пробиотических препаратов.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к плазмиде для синтеза α-зеина В1 кукурузы вида Zea mays, а также к рекомбинантному штамму, содержащему вышеуказанную плазмиду.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к плазмиде для синтеза белка А1 семян Amaranthus hypochondriacus, а также к рекомбинантному штамму, содержащему вышеуказанную плазмиду.

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для производства макролидного антибиотика рапамицина - лекарственного средства, широко используемого в трансплантологии и терапии опухолевых процессов.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу повышения антигенной массы культуры Leptospira interrogans, включающему стадию добавления в культуру Leptospira interrogans полиненасыщенной C18 жирной кислоты, представляющей собой одну или более выбранных из группы, состоящей из линолевой кислоты, α-линоленовой кислоты и γ-линоленовой кислоты.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и биотехнологии и раскрывает, что серовары серогруппы C1 Salmonella enterica вызывают перекрестный иммунитет против сероваров серогруппы C2-3 Salmonella enterica.

Изобретение относится к экологии, сельскому хозяйству, а именно к способу определения устойчивости сапротрофного микробного сообщества почвы. Способ предусматривает внесение в образец почвы измельченной соломы злаков.
Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциации сибиреязвенного микроба. Питательная среда для дифференциации B.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и биотехнологии. Применение штамма бактерии Azospirillum zeae OPN-14, депонированного во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под номером ВКПМ В-12542, в качестве биологического агента с рост-стимулирующей активностью по отношению к растениям.

Группа изобретений относится к биотехнологии и экологии и включает препарат для биодеградации метанола и способ его получения. Изобретения могут быть использованы для биодеградации загрязнений окружающей среды (почвы, грунтов, морских, пресных и минерализованных вод), а также технологических конструкций метанолом и сопутствующими нефтепродуктами.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен микроорганизм рода Escherichia, продуцирующий L-триптофан, где активности эндогенных 6-фосфоглюконатдегидратазы (Edd) и 2-кето-3-дезокси-6-фосфоглюконатальдолазы (Eda) ослаблены или инактивированы, где микроорганизм имеет усиленный РРР (пентозофосфатный путь) посредством ослабленного или блокированного пути Энтнера-Дудорова.

Изобретение относится к биотехнологии. Термофильный планктонный штамм одноклеточной зеленой водоросли Chlorella sorokiniana FAT обладает тонкой оболочкой и способен интенсивно наращивать биомассу в синхронном режиме культивирования, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Аl-26. Штамм Chlorella sorokiniana ВКПМ Аl-26 может быть использован для получения пищевой биомассы, которая может служить основой пищевой продукции – напитка, концентрата или пасты. 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-12079 содержит пептон ферментативный, дрожжевой экстракт, натрий хлористый, сульфат аммония и дистиллированную воду при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы Bacillus subtilis ВКПМ В-12079. 5 табл., 3 пр.

Наверх