Диагностический иммунохимический препарат на основе гексацианферрата железа для выявления онкоассоциированных экзосом в биологических жидкостях.

Авторы патента:

A61K49/00 - Препараты для исследований на живом организме

Владельцы патента RU 2680965:

Общество с ограниченной ответственностью "БИОМЕД-РЕСУРС" (ООО "БИОМЕД-РЕСУРС") (RU)

Изобретение относится к области диагностики. Диагностический иммунохимический препарат для выявления онкоассоциированных экзосом в моче содержит, мас.%

Гексацианферрат железа 0,7717-4,1266 Антитела к онкоэкзосомам 0,0018-0,0019 Глутаровый альдегид 0,0230-0,0239 Деионизированная вода остальное

2 пр., 3 табл.

Диагностический иммунохимический препарат на основе гексацианферрата железа для выявления онкоассоциированных экзосом в биологических жидкостях.

Изобретение относится к иммунохимии и биотехнологии и направлено на извлечение полезного эффекта - бесприборной экспрессной диагностики и выявления онкомаркёров в биологических жидкостях человека.

С каждым годом заболеваемость онкологией только возрастает. Согласно последним статистическим данным, смертность от рака в мире составляет 70%. И если на ранних стадиях это заболевание поддаётся лечению, то на поздних опухоль порождает метастазы и становится неоперабельной.

Чтобы выявить рак на ранней стадии, а в большинстве случаев болезнь сначала проходит почти бессимптомно, необходимо с завидным постоянством посещать врача и проходить дорогостоящие и зачастую болезненные процедуры, такие как маммография или колоноскопия. К тому же, эти услуги предоставляются в городах с развитой медицинской инфраструктурой, тогда как в небольших населённых пунктах относительно простых способов диагностики рака пациентам и вовсе не предлагают.

В 2014 году в статье Andrew D. Warren et al. Point-of-care diagnostics for noncommunicable diseases using synthetic urinary biomarkers and paper microfluidics// Proc Natl Acad Sci U S A. 2014 Mar 11; 111(10): 3671–3676 был опубликован простой и дешевый метод экспресс-тестирования на онкологические заболевания. Диагностика рака, по аналогии с тестом на беременность, осуществляется с помощью образца мочи и бумажной тест-полоски, а ее результат готов уже через несколько минут. Но, в отличие от того же теста на беременность, экспресс-тест на выявление рака требует предварительного введения в организм специального препарата, который содержит наночастицы, взаимодействующие с белками протеазы опухоли. Результатом реакции являются биомаркеры-пептиды, выделяемые из мочи тестируемого. Эти биомаркеры и вызывают изменение цвета тест-полосок

Недостатком описанного метода является необходимость предварительного введения в организм наночастиц, а также нанесение антител на нитроцеллюлозную бумагу, что усложняет процесс проведения анализа.

На российском рынке также присутствует экспресс-тест для выявления в домашних условиях рака простаты производства ООО «Мед-Экспресс-Диагностика» (№ ФСР 2010/08485 от 04.08.2010). Указанный тест позволяет обнаружить специфический человеческий антиген предстательной железы в цельной крови.

Недостатком описанного теста является использование в качестве биологического материала крови, забор которого может быть некорректно произведен простым пользователем.

Одним из маркеров онкологических заболеваний являются онкоассоциированные экзосомы. Экзосомы, секретируемые опухолевыми клетками, играют важную роль в различных аспектах прогрессии заболевания: локальной инвазии, подавлении противоопухолевых иммунных реакций, стимуляции неоангиогенеза и формировании отдаленных метастазов. В настоящее время онкоэкзосомы выявляют приборными методами, например - иммуноферментным анализом (RU 2520741 C2 27.06.2014). Недостатком данного метода является его исполнение с использованием дорогих и дефицитных приборов, он невозможен к постановке в условиях хоум - тестинга. Общее время постановки занимает от 1 до 10 часов.

Целью изобретения является упрощение процесса диагностики, снижение времени проведения иммунохимического анализа, возможность его исполнения в моче пациента.

Поставленная цель достигается с использованием диагностического иммунохимического препарата в виде коллоидного раствора, содержащего, мас.%

Гексацианферрат железа	0,7717-4,1266
Антитела к онкоэкзосомам	0,0018-0,0019
Глутаровый альдегид	0,0230-0,0239
Деионизированная вода	остальное

Гидрозоли гексацианоферрата (II) железа (III) обладают разветвленной поверхностью, способны к адсорбции иммунных компонентов - антител и антигенов различной химической природы, стабильны, обладают яркой окраской.

Глутаровый альдегид является эффективным сшивающим агентом, получившим широкое применение для иммобилизации белков. Глутаровый альдегид, линейный 5-углеродный диальдегид, представляет собой прозрачную, бесцветную до бледно-соломенного цвета острую маслянистую жидкость, которая растворяется во всех пропорциях в воде и спирте, а также в органических растворителях.

Антитела к онокоэкзосомам, пригодные для использования в рамках настоящего изобретения, например, могут быть выбраны из антител к антигенам CD-9, СD-63, CD-81.

Препарат получают последовательным смешением компонентов. Сначала получают коллоидный раствор гексацианферрата железа в деионизированной воде. Затем в этот раствор вносят при интенсивном перемешивании антитела к онкоэкзосомам в физиологическом растворе и глутаровый альдегид.

Процесс диагностики с помощью предлагаемого препарата осуществляют следующим образом. В сосуд из пластика или стекла осуществляют забор мочи. Далее вносят предлагаемый препарат в количестве 1/7-1/10 объема мочи, перемешивают. По прошествии 1-3 минут фиксируют изменение цвета смеси гидрозоля и мочи. В положительном варианте цвет остаётся синим, в отрицательном - изменяется от зеленого до полного обесцвечивания.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами исполнения.

Пример 1.

Заявляемый препарат получают следующим образом. Осуществляют создание коллоидного раствора гексацианферрата железа в деионизированной воде. Полученный гидрозоль имеет интенсивный синий цвет. Далее в этот раствор вносят при интенсивном перемешивании расчётное количество антител к онкоэкзосомам солидных опухолей (CD-9 в опытах 1 и 2, СD-63 в опыте 3, CD-81 в опытах 4 и 5) в физиологическом растворе и глутаровый альдегид.

Составы получаемых гидрозолей представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Компонент	Опыт 1	Опыт 2	Опыт 3	Опыт 4	Опыт 5
Гексацианферрат железа	0,7710	0,7717	2,4496	4,1266	5,0916
Антитела к онкоэкосомам	0,0017	0,0018	0,0018	0,0019	0,0019
Глутаровый альдегид	0,0228	0,0230	0,0234	0,0239	0,0241
Вода деионизированная	До 100%	До 100%	До 100%	До 100%	До 100%

Далее полученный гидрозольный препарат и тестируемую мочу смешивают в сосуде из пластика либо стекла в объемном соотношении 1:7-10. По прошествии 1-3 минут фиксируют изменение цвета смеси гидрозоля и мочи. В положительном варианте цвет остаётся синим, в отрицательном - изменяется от зеленого до полного обесцвечивания.

Всего было исследовано 50 проб мочи от пациентов с верифицированным диагнозом "солидный рак", предлагаемый тест выявил положительную реакцию у 46 больных. В качестве контроля использовали мочу от 38 здоровых пациентов.

Результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2.

	Опыт 1	Опыт 2	Опыт 3	Опыт 4	Опыт 5
% ложноположительных результатов	11	2	2	2	12

Как видно из таблицы 2, выход за пределы оптимальных дозировок приводит к увеличению числа ложноположительных проб.

Пример 2.

Приготовление препарата осуществляют по аналогии с методикой, описанной в примере 1, с той разницей, что используют антитела к онкоэкзосомам гематологических опухолей. Составы получаемых гидрозолей аналогичны составам, представленным ранее в таблице 1.

Постановка реакции также осуществлялась по аналогии с методикой, описанной в примере 1. Для подтверждения возможности применения получаемых препаратов по назначению было исследовано 48 проб мочи от пациентов с верифицированным диагнозом "гематологический рак", предлагаемый тест выявил положительную реакцию у 45 больных. В качестве контроля использовали мочу от 38 здоровых пациентов.

Результаты представлены в таблице 3.

Таблица 3.

	Опыт 1	Опыт 2	Опыт 3	Опыт 4	Опыт 5
% ложноположительных результатов	10	2	2	2	11

Таким образом, предлагаемый препарат позволяет осуществлять простое, быстрое и достоверное выявление онкоэкзосом в моче пациента, что позволяет производить диагностику раковых заболеваний в домашних условиях.

Диагностический иммунохимический препарат для выявления онкоассоциированных экзосом в моче, представляющий собой коллоидный раствор, содержащий, мас.%:

Гексацианферрат железа	0,7717-4,1266
Антитела к онкоэкзосомам	0,0018-0,0019
Глутаровый альдегид	0,0230-0,0239
Деионизированная вода	остальное

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к композиции для специфического связывания гетеротипичного комплекса кератина 7 с кератином 19, что может быть использовано в медицине.

Композиция и способ для детектирования злокачественного неопластического заболевания // 2678135

Способ прогнозирования терапевтического эффекта для пациента с колоректальным раком, у которого повышена экспрессия белка tk1 // 2677656

Настоящее изобретение относится к способу лечения пациента с колоректальным раком и способу прогнозирования терапевтического эффекта химиотерапии с использованием противоопухолевого средства, содержащего трифлуридин и типирацил гидрохлорид в молярном отношении 1:0,5, в отношении пациента с колоректальным раком, включающему следующие стадии: (1) детекцию экспрессии белка TK1 способом иммуногистохимического окрашивания в опухолевых клетках, содержащихся в биологическом образце, полученном от пациента; (2) классификацию опухолевых клеток на положительные клетки и отрицательные клетки с учетом результатов детекции, полученных на стадии (1), и вычисление процентной доли положительных клеток среди опухолевых клеток; и (3) с учетом результатов вычисления, полученных на стадии (2), прогнозирование того, что, когда процентная доля составляет 30% или более, пациент будет отвечать на химиотерапию с использованием противоопухолевого средства, содержащего трифлуридин и типирацил гидрохлорид в молярном отношении 1:0,5.

Способ выявления присутствия или отсутствия агрессивного рака предстательной железы // 2675370

Группа изобретений относится к медицине и касается способа на основе составленной с избыточностью комбинации данных для проверки присутствия или отсутствия агрессивного рака предстательной железы (PCa) у индивидуума, включающего этапы получения у указанного индивидуума биологического образца; анализа биомаркеров PCa и SNP, ассоциированных с PCa (SNPpc), в указанном биологическом образце; комбинирования полученных данных; определения корреляции указанного комбинированного значения с присутствием или отсутствием агрессивного PCa у указанного индивидуума.

Способ прогнозирования развития метастазов у больных раком молочной железы // 2675236

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования развития метастазов у больных раком молочной железы (РМЖ) на основе анализа экспрессии генов MAGEA2, MAGEB1 и XAGE3.

Комбинированный способ дифференциальной диагностики кистозных неоплазий поджелудочной железы // 2674870

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики кистозных неоплазий поджелудочной железы.

Предиктивный биомаркер для терапии рака // 2672358

Группа изобретений относится к медицине, а именно к прогнозированию или мониторингу будущего или текущего ответа пациента, страдающего раком, на лечение агонистом TLR-9.

Способ прогнозирования риска возникновения рака или диагностирования рака у женщины // 2671578

Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования риска возникновения рака молочной железы или рака легких у женщины, которая не страдает раком, включающего определение уровня проэнкефалина или его фрагментов, состоящих по меньшей мере из 5 аминокислот, в общей воде организма, взятой у указанной женщины, и установление корреляции между указанным уровнем проэнкефалина (PENK) или его фрагментов и риском возникновения рака молочной железы или рака легких.

Набор реагентов для определения риска возникновения рецидива онкологических заболеваний молочной железы // 2671557

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности, к онкологии и молекулярной биологии. Предложены набор реагентов и планшет для определения риска возникновения рецидива онкологических заболеваний молочной железы, включающие праймеры и зонды, специфичные по отношению к генам-маркерам ELOVL5, IGFBP6, TXNDC9.

Способ обнаружения злокачественных опухолей // 2671497

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для обнаружения злокачественной опухоли, экспрессирующей CAPRIN-1.

Anti-cxcr4 антитела и конъюгаты антитело-лекарство // 2675516

Изобретение относится к биотехнологии. Описано изолированное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которое связывается с рецептором хемокина 4 (CXCR4) и содержит:a) вариабельный участок тяжелой цепи (VH), содержащий (i) VH CDR1, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 107, 113, 114; (ii) VH CDR2, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 162, 128, 154, 123, 158, 124, 159, 125, 160, 126, 161, 127, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 155, 129, 156 и 130, и (iii) VH CDR3, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 112; и;b) вариабельный участок легкой цепи (VL), содержащий (i) VL CDR1, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 144, 138, 141, 142, 143, 146, 147, 148, 149 и 150; (ii) VL CDR2, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 145, 132; и (iii) VL CDR3, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 139, 140 и 170.

Мини-антитела j591 и цис-диатела для направленной доставки простата-специфичного мембранного антигена (psma) человека и способы их применения // 2673908

Изобретение относится к области биохимии, в частности к мини-антителу для связывания с простата-специфичным мембранным агентом (PSMA), содержащему последовательность scFv, которая может связываться с PSMA, причем указанная scFv содержит вариабельный домен тяжелой цепи (VH), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) линкерной последовательностью; искусственную шарнирную область и последовательность СН3 IgG человека; и изолированному полинуклеотиду, который кодирует вышеуказанное мини-антитело.

Генетически модифицированные не относящиеся к человеческому роду животные и способы их применения // 2673156

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует IL-6 человека, к мыши, которая экспрессирует IL-6 человека и один дополнительный человеческий полипептид, выбранный из человеческого M-CSF, человеческого IL-3, человеческого GM-CSF, человеческого SIRPα и человеческого TPO, а также к мыши, которая экспрессирует IL-6 человека и SIRPα человека, M-CSF человека, IL-3 человека, GM-CSF человека и TPO человека.

Имидазо[1,2-а]пиридин-7-амины в качестве средств визуализации // 2671506

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению формулы I или к его фармацевтически приемлемой кислотно-аддитивной соли, где R1 представляет собой низший алкил или низший алкил, замещенный галогеном; R2, R3 представляет собой водород или тритий.

Отличные от человека животные с гуманизированным геном сигнального регуляторного белка // 2671166

Изобретение относится к области биохимии, в частности к мыши для экспрессии гуманизированного белка SIRPα, содержащей замещение экзонов 2, 3 и 4 гена SIRPα мыши в эндогенном локусе SIRPα мыши на экзоны 2, 3 и 4 гена SIRPα человека с образованием гуманизированного гена SIRPα, а также к клетке и ткани вышеуказанной мыши.

Способ получения кристаллов магнетита // 2668440

Изобретение относится к технологии получения кристаллов магнетита (Fe3O4), которые могут найти применение в качестве контрастных агентов, средств доставки лекарств, при магнитной гипертермии.

Композиция для визуализации суставного хряща // 2667008

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к композиции для визуализации дегенеративного участка суставного хряща, которая содержит положительно заряженный альбумин, меченный индоцианином зеленым; а также к способу визуализации дегенеративного участка суставного хряща, включающему этап распыления, добавления по каплям, нанесения на поверхность суставного хряща, имеющего дегенеративный участок, или погружения указанной поверхности в предложенную композицию, адсорбируя таким образом положительно заряженный альбумин в дегенеративном участке суставного хряща, этап промывания суставного хряща для удаления избытка указанной композиции и этап обнаружения индоцианина зеленого, которым мечен положительно заряженный альбумин, адсорбированный в дегенеративном участке суставного хряща.

Квантово-точечные спектрометры для применения в биомедицинских устройствах и способы их применения // 2665202

Группа изобретений относится к квантово-точечным спектрометрам для применения в биомедицинских устройствах. Биомедицинское устройство по первому варианту содержит элемент подачи питания, включающий в себя первый и второй токосъемники, катод, анод и электролит, квантово-точечный спектрометр, включающий в себя квантово-точечный излучатель света, фотодетектор и средство передачи информации от квантово-точечного спектрометра к пользователю, причем квантово-точечный спектрометр получает питание от элемента подачи питания, и устройство-вставку, которое содержит элемент подачи питания и квантово-точечный спектрометр и изолирует элемент подачи питания от биомедицинской среды, внутри которой действует биомедицинское устройство.

Препарат для магнитно-резонансной диагностики онкологических заболеваний, содержащий дейтерированную 2-амино-2-метилпропионовую кислоту и/или 2-(n-метиламино)-2-метилпропионовую кислоту, и способ диагностики с использованием этого препарата // 2663286

Группа изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой диагностический препарат, включающий дейтерированное производное 2-амино-2-метилпропионовой кислоты, и/или 2-(N-метиламино)-2-метилпропионовой кислоты, и/или его фармацевтически приемлемую соль, или смесь, по меньшей мере, двух дейтерированных производных 2-амино-2-метилпропионовой кислоты, и/или 2-(N-метиламино)-2-метилпропионовой кислоты, и/или ее фармацевтически приемлемой соли, для диагностики онкологических заболеваний методом магнитно-резонансной томографии и/или магнитно-резонансной спектроскопии на ядрах дейтерия, а также способ диагностики онкологического заболевания у субъекта, включающий этапы введения субъекту диагностического препарата, проведения магнитно-резонансной томографии и/или магнитно-резонансной спектроскопии на ядрах дейтерия после введения диагностического препарата и диагностирования наличия или отсутствия онкологического заболевания на основании наблюдаемой интенсивности сигнала ядер дейтерия, отражающей уровень накопления диагностического препарата.

Очистка рентгеноконтрастных веществ // 2662941

Изобретение относится к способу очистки сырого продукта, содержащего неионное йодированное димерное рентгеноконтрастное вещество. Способ включает стадию i) пропускания раствора сырого продукта через мембрану (М1) таким образом, что мономерные загрязняющие примеси и соли проходят через мембрану (пермеат, Р1), а неионное йодированное димерное рентгеноконтрастное вещество не проходит через мембрану (ретентат, R1).