Способ получения полностью гидролизованного коллагена


C07K1/12 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2680968:

Тер-Саркисян Эрик Мушекович (RU)

Изобретение относится к способу получения высокоочищенной смеси из 15 свободных аминокислот, полученной путем полного гидролиза коллагена. Способ получения полностью гидролизованного коллагена включает гидролиз в присутствии соляной кислоты при температуре +120-125°C; сорбцию аминокислот коллагена на среднесшитом катионите, например КУ-2-8; элюцию аминокислот и аммиака 2Н щелочью; отгонку аммиака из элюата под вакуумом; нейтрализацию и осветление раствора аминокислот на ионосорбенте ИА-4, согласно изобретению часть соляной кислоты, химически не связанную с аминокислотами, после окончания гидролиза удаляют в виде хлористого водорода путем вакуум-отгонки, пары хлористого водорода и воды поглощают в замкнутом цикле холодной водой и полученную соляную кислоту используют в процессе гидролиза коллагена. Способ позволяет исключить стадию нейтрализации соляной кислоты на анионите типа АН-31 в ОН-форме с последующей его регенерацией раствором щелочи, сократить количество отечных вод. 1 пр.

 

Данное изобретение относится к пищевой промышленности и медицины, также касается производства высокоочищенной смеси аминокислот, по их соотношению и количеству полностью соответствующей белку коллагену. Коллаген и его ферментативные гидролизаты широко используются в медицине для лечения опорно-двигательного аппарата и в косметологии. Однако эффективность коллагена многократно возрастает, если использовать его полный гидролизат, т.е. смесь из 15-ти аминокислот коллагена в свободном состоянии. Поступая в желудочно-кишечный тракт, аминокислоты быстрее всасываются в кровь и разносятся по всему организму, обеспечивая воспроизводство коллагена путем биохимического синтеза в кровеносных сосудах, дисках позвоночника, связках костей и в костной ткани. Полный гидролизат коллагена (условно «коллагенит») получают путем высокотемпературного кислотного гидролиза гольевого спилка шкур КРС или другого сырья, содержащего коллаген. Технология не имеет близких аналогов и состоит в следующем: сырье, содержащего коллаген, загружают в эмалированный или стеклянный реактор, затем заливают 16-17% раствор соляной кислоты, герметизируют реактор, нагревают содержимое до +120 градусов и выдерживают при указанной температуре 6 часов. Затем реактор охлаждают до температуры +50-55 градусов, подключают вакуум и отгоняют смесь воды и хлористого водорода, собирая ее в абсорбере, где пары НС1 поглощаются водой, распыляемой сверху форсункой. Оставшийся хлористый водород химически связан с аминокислотами и выделяющимся при гидролизе в виде побочного продукта аммиаком. После отгонки НСl гидролизат фильтруют под вакуумом на нутч-фильтре. Прозрачный фильтрат с рН 1,5-2,0 осветляют, пропуская через ионообменную колонну с ионосорбентом ИА-4-продуктом поликонденсации фенола, формальдегида, уротропина и этиленгликоля микропористой структуры. Осветленный раствор аминокислот пропускают через ионообменную колонну с катеонитом типа ку2 8, где аминокислоты сорбируются вместе с аммиаком. После промывки колонны водой, аминокислоты элюируют с колонны раствором 2Н щелочи, количество которой эквивалентно обменной емкости катионита в колонне. Аммиак отпаривают из элюата под вакуумом, аминокислоты нейтрализуют соляной кислотой рН 4,5-5,0 и осветляют на колонне со смолой МА-4. Полученный из очищенного раствора путем лиофильной сушки препарат содержит не менее 90% свободных аминокислот коллагена.

Пример 1.

В эмалированный реактор емкостью 630 литров, снабженный мешалкой и рубашкой загружают 150 килограмм нарезанного на полоски гольевого спилка шкур и заливают 305 литров 17% раствор соляной кислоты. Аппарат герметизируют и нагревают паром до 120 градусов. Затем включают мешалку и перемешивают содержимое при указанной температуре в течении 6 часов. Затем аппарат охлаждают до 50 градусов, подключают вакуум и при перемешивании отгоняют озеотропную смесь воды и хлористого водорода, постепенно повышая температуру в реакторе до 80 градусов. Пары направляют в абсорбер, где они орошаются холодной водой в количестве 100 литров, циркулирующей в замкнутом пространстве. Процесс ведут до тех пор, пока проба рН, взятая из аппарата не покажет 1,5. Полученную соляную кислоту сливают в сборник из полипропилена. Туда же загружают 60 литров 32% технической соляной кислоты. Получают 305 литров 17% соляной кислоты для следующей операции гидролиза. В остаток после отгонки соляной кислоты добавляют 200 литров воды и фильтруют под вакуумом на нутч-фильтре. Получают 17 килограмм черного маслянистого осадка и 300 литров прозрачного фильтрата, содержащего 75 килограмм аминокислот. Фильтрат пропускают через осветляющую ионообменную колонну, загруженную ионосорбентом ИА-4-продуктом поликонденсации фенола, формальдегида, уротропина и этиленгликоля микропористой структуры. Объем колонны составляет 100 литров. Раствор подают снизу со с скоростью 50 л/час. Осветленную фракцию отбирают, когда коэффициент преломления «п» повышается от 1,333 до 1,335 и заканчивают отбирать при снижении «п» до величины 1,334. Осветленный раствор пропускают через ионообменную колонну, загруженного 400 литров катионита ку2 8 рН-форме снизу со скоростью 100л/час. Раствор вытесняют с колонны водой. Сорбированные на катионите аминокислоты элюируют 300 литров 2Н раствора КОН. Элюат представляет собой раствор с запахом аммиака-побочного продукта гидролиза коллагена с рН 11,2. Аммиак удаляют путем вакуум-выпарки при температуре 75 градусов и вакууме 0,8 атм. Упаренный раствор в количестве 250 литров имеет рН 8,7 и содержание сухих веществ 28%. Аминокислоты переводят в Сl- форму добавляя в раствор 46 литров 36% НСl. 296 литров нейтрализованного до рН 5,5 раствора осветляют на колонне, содержащей 100 литров осветляющего сорбента ИА-4. Раствор подают на колонну снизу со скоростью 50 л/час. Контроль процесса ведут по коэффициенту преломления. Фракцию аминокислот отбирают в диапазоне «п» от 1,335 к снижению до 1,334. Получают 376 литров бесцветного раствора без запаха с приятным вкусом и концентрацией аминокислот 23%. Товарная форма продукта-запаянные пакетики из фольги, содержащие 20 миллилитров 20% раствора. Распылительная или лиофильная сушка продукта представляет больше трудности в силу его чрезвычайно высокой гигроскопичности.

По качеству продукт полностью удовлетворяет требованиям фармстатьи:

Содержание свободных аминокислот - 92%

Содержание короткоцепочечных пептидов - 5%

Зольность - 0,2%

Влага-2,8%

Тяжелые металлы отсутствуют.

Способ получения полностью гидролизованного коллагена, включающий гидролиз в присутствии соляной кислоты при температуре +120-125°C; сорбцию аминокислот коллагена на среднесшитом катионите, например КУ-2-8; элюцию аминокислот и аммиака 2Н щелочью; отгонку аммиака из элюата под вакуумом; нейтрализацию и осветление раствора аминокислот на ионосорбенте ИА-4, отличающийся тем, что часть соляной кислоты, химически не связанную с аминокислотами, после окончания гидролиза удаляют в виде хлористого водорода путем вакуум-отгонки, пары хлористого водорода и воды поглощают в замкнутом цикле холодной водой и полученную соляную кислоту используют в процессе гидролиза коллагена.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и микробиологии и касается штамма вируса Эбола Заир. Представленный штамм вируса Эбола Заир H.sapiens-wt/GIN/2015/Kalidie-Kindia-1022 выделен из крови больного лихорадкой Эбола во время эпидемии в Гвинее 2014-2015 гг.

Предложен способ получения полипептида, включающий культивирование клетки Escherichia coli, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую полипептид, регулирование значения рН во время культивирования с помощью щелочного раствора, содержащего аминокислоту, выделение полипептида из клеток или культуральной среды и, таким образом, получение полипептида.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуногенным системам презентации множественных антигенов, и может быть использовано в медицине. Иммуногенная композиция против одного или более из антигенного полисахарида, пептидного антигена или полипептидного антигена содержит по меньшей мере один антигенный полисахарид, по меньшей мере один пептидный или полипептидный антиген и по меньшей мере одну комплементарную пару аффинных молекул.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к индуцированию экспрессии антигена на раковых клетках, и может быть использовано в медицине. Обработкой раковых клеток агентом, выбранным из Mycobacterium w, цисплатина, паклитакселя, гемцитабина и их комбинации, получают раковые антигены: белок 45 кДа, экспрессируемый клетками рака поджелудочной железы, и белок 36 кДа, экспрессируемый клетками меланомы.

Изобретение относится к способу получения маркеров молекулярной массы для глатирамера ацетата со случайной аминокислотной последовательностью, аналогичной последовательности глатирамера ацетата, содержащему стадии: a) воздействие на полипептидную смесь, которая является смесью полипептидов, содержащих аланин, глутаминовую кислоту, тирозин и лизин в том же молярном соотношении, что у глатирамера ацетата, гель-проникающей хроматографией (ГПХ)/эксклюзионной хроматографией (ЭХ) для получения полипептидных фракций с молекулярными массами в диапазоне от 2 кДа до 30 кДа; b) выбор полипептидных фракций, которые будут использованы в качестве маркеров молекулярной массы, из указанных полипептидных фракций, полученных на стадии а), таким образом, что одна из фракций представляет вершину пика молекулярной массы, а другие фракции распределены по обе стороны от вершины пика молекулярной массы; и c) определение полидисперсности указанных выбранных полипептидных фракций, где полидисперсность указанных выбранных полипептидных фракций должна составлять меньше, чем или быть равной 1,20.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам активации NKT-клеток млекопитающих, и может быть использовано в медицине. Способ включает введение в пептид или полипептид, которые не активируют NKT-клетки, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива путем введения, замены и/или делеции аминокислоты, где CD1d-связывающий мотив представляет собой [FWTHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], где Х2, Х3, Х5 и Х6 обозначают любую аминокислоту.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к подавлению нежелательных иммунных ответов млекопитающих, и может быть использовано в медицине. Способ заключается в (a) установлении, по меньшей мере, одного CD1d-связывающего мотива NKT-клеточного эпитопа в пептиде или полипептиде, при этом указанный эпитоп содержит мотив [FWTHY]-X2X3-[ILMV]-X5X6-[FWTHY], где Х2, Х3, Х5, Х6 означает любую аминокислоту, (b) устранении указанного эпитопа путем замены аминокислотных остатков в положении Р1 и/или Р7 на негидрофобные остатки; и (c) получении изолированного пептида или полипептида с пониженной способностью активировать NKT-клетки в млекопитающем.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к пептидам, обладающим противомикробной активностью, и может быть использовано в медицине. Получены пептиды RRRFRFFFRFRRR, HHHFRFFFRFRRR, KKFPWRLRLRYGRR, RRRRRFFFRFRRR, RRRFRFRFRFRRR, RRRFRFPFRFRRR, RRFRRFFFRRFRR, RRRRFFFRRRR, RRRRFRFRRRR, RRRRFPFRRRR, RRFRRRFRRFR, RRFRRRFRRFG, RRFGRRFRRFG, RRFRRFRRRFG, RRFRRFRRRFR, FRRRRFFFRFRRR, RRRRRFFFRRRRF, FFFFRRRRRFRRR, RRRRFFFFFRRRR, FRRRRFFFRRRRF, RRRYRYYYRYRRR, RRRARAAARARRR, RRRFRRRRRFFFF, RRRFFFFFFFRRR, которые могут быть использованы в составе противомикробной композиции.

Предложены комплекс для ферментативного гидролиза полисахаридных субстратов, способ его получения и его использование. Комплекс содержит основной каркас и ферментные компоненты.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Bacillus subtilis Maseca-1, вырабатывающий пептид, имеющий противомикробную активность против Micrococcus luteus, Bacillus cereus и Aspergillus flavus.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к терапевтическим химерным белкам, которые можно применять в медицине для лечения мукополисахаридоза IIIB типа (Синдром Санфилиппо В).

Изобретение относится к вариантам триспецифичной связывающей молекулы, содержащей вариабельный домен VHH, специфично связывающий человеческие IL-17A и IL-17F, и домен, содержащий вариабельные домены тяжелой и легкой цепи и специфично связывающий человеческий TNF-альфа (ФНО-альфа).

Изобретение относится к области биохимии. Предложен неконкурентный ингибитор тимидинфосфорилаз пептидной природы H-Trp-Met(О2)-Phe-NH2.

Изобретение относится к способу снижения бионагрузки аффинной хроматографической смолы, включающему подвергание контейнера, включающего композицию, содержащую аффинную хроматографическую смолу и по меньшей мере один антиоксидант, воздействию дозы гамма-излучения между приблизительно 15 кГр и приблизительно 45 кГр, где по меньшей мере один антиоксидант присутствует в количестве, достаточном для снижения утраты связывающей способности хроматографической смолы после воздействия дозы гамма-излучения.

Изобретение относится к способам осуществления хроматографии с использованием гамма-облученной хроматографической смолы, включающим получение хроматографической колонки, включающей гамма-облученную хроматографическую смолу; осуществление первого цикла хроматографии с помощью колонки, где цикл включает восстановление связывающей способности гамма-облученной анионообменной хроматографической смолы путем подвергания гамма-облученной анионообменной хроматографической смолы воздействию денатурирующего буфера; и осуществление по меньшей мере одного дополнительного цикла хроматографии с помощью колонки.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению конъюгатов люминесцентных наночастиц диоксида кремния с антителами, и может быть использовано в диагностике для выявления гиперэкспрессирующегося на поверхности опухолевых клеток рецептора эпидермального фактора роста человека 2 (HER2/neu).

Изобретение относится к биохимии и к медицине и представляет собой пептид формулы H[isoD][pS]GYEVHH, где остаток серина является фосфорилированным, а остаток аспарагиновой кислоты изомеризирован.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантному получению терапевтических белков, и может быть использовано для получения слитого белка MBP84-106-Fc, состоящего из лидерного пептида тяжелой цепи моноклонального антитела FI0, слитого с фрагментом основного белка миелина 84-106 (МВР84-106) и затем с Fc-фрагментом антитела IgG 1 (домены СН2-СН3) человека, в клетках яичника китайского хомячка (СНО).

Группа изобретений относится к иммунологии. Предложены гуманизированное моноклональное антитело к фактору D человека или его антигенсвязывающий фрагмент, его нуклеотидная последовательность, клетка и вектор, которые несут эти антитела, способ его получения и применение для получения композиций для лечения заболеваний и нарушений, ассоциированных с избыточной или неконтролируемой активацией системы комплемента.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело, обладающее иммунологической реактивностью в отношении белка CAPRIN-1.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению иммуногенного полипептида, обеспечивающего формирование иммунного ответа против инфекции, вызываемой спирохетами комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato, и может быть использовано для серодиагностики клещевого боррелиоза. Рекомбинантным путем в клетках штамма бактерий Е. coli BL21(DE3)/pETdbpagNH получен слитый полипептид DBPAG, состоящий из иммуногенных доменов белков DBPA Borrelia garinii и Borrelia afzelii. Изобретение обеспечивает получение нового полипептида, перспективного для разработки новой тест-системы для диагностики Лайм боррелиоза. 5 н.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 5 пр.

Изобретение относится к способу получения высокоочищенной смеси из 15 свободных аминокислот, полученной путем полного гидролиза коллагена. Способ получения полностью гидролизованного коллагена включает гидролиз в присутствии соляной кислоты при температуре +120-125°C; сорбцию аминокислот коллагена на среднесшитом катионите, например КУ-2-8; элюцию аминокислот и аммиака 2Н щелочью; отгонку аммиака из элюата под вакуумом; нейтрализацию и осветление раствора аминокислот на ионосорбенте ИА-4, согласно изобретению часть соляной кислоты, химически не связанную с аминокислотами, после окончания гидролиза удаляют в виде хлористого водорода путем вакуум-отгонки, пары хлористого водорода и воды поглощают в замкнутом цикле холодной водой и полученную соляную кислоту используют в процессе гидролиза коллагена. Способ позволяет исключить стадию нейтрализации соляной кислоты на анионите типа АН-31 в ОН-форме с последующей его регенерацией раствором щелочи, сократить количество отечных вод. 1 пр.

Наверх