Способ оценки интенсивности обмена нуклеиновых кислот в клинической практике

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ диагностики нарушений обмена нуклеиновых кислот (НК) у критических больных. Определяют концентрации олигонуклеотидов ДНК и мочевой кислоты (МК) в сыворотке крови (СК). Рассчитывают индекс интенсивности обмена НК (ИИ ОНК). Значения индекса менее 30% у критических больных свидетельствуют о том, что распад НК преобладает над синтезом de novo. Значения индекса, превышающие 30%, свидетельствуют о преобладании синтеза над распадом НК. Изобретение обеспечивает эффективную диагностику нарушений обмена НК у критических больных. 3 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к медицине.

Интенсивность обмена нуклеиновых кислот (НК) при критических состояниях является решающим фактором, определяющим исход критического состояния. Синтез фрагментов НК (нуклеотидов) - один из наиболее активных процессов в клетке. Воспроизводство нуклеотидов требует значительное количество пластических веществ - аминокислот глутамина, глицина, а также углеводов, фосфатов. По затратам энергии этот процесс относится к крайне напряженным.

Ряд «барьерных» органов (печень, кишечник, лимфоузлы, селезенка) и костный мозг должны усиливать синтез НК в десятки раз при критических состояниях. Скорость деления клеток в этих органах и скорость синтеза НК определяет скорость регенерации и функциональные резервы этих органов.

В настоящий момент существуют способы изменения интенсивности синтеза и распада НК путем использования, например, ряда нутриентов, как глютамин, фолиевая кислота, витамин D3 или экзогенные олигонуклеотиды. Однако для эффективного использования этих препаратов необходим надежный способ оценки интенсивности обмена НК, в противном случае их использование будет либо малоэффективно, либо может привести к ухудшению состояния организма человека.

Известен способ определения интенсивности синтеза НК, заключающийся в оценке включения Н3-тимидиновой метки. Недостатком способа является использование радиоактивных материалов, что затрудняет использование метода в рутинной клинической практике.

Известен способ определения НК экзосом сыворотки крови. Способ характеризуется крайней технологической загруженностью, что делает его пригодным только в эксперименте.

Предлагаемый нами способ заключается в одновременном определении в сыворотке крови двух параметров - нуклеиновых кислот сыворотки крови (НКСК) и мочевой кислоты сыворотки крови (МКСК). НКСК характеризуют секрецию НК. Влияние распада клеток на уровень НКСК, по-видимому, минимальное, поскольку клеточные фрагменты НК быстро распадаются под действием ферментов или элиминируются с большой скоростью через рецепторы-привратники TLR 3 и 9 типов.

Наши исследования (Валеева В.А. и др., 2012) показали, что у больных с тяжелым хирургическим сепсисом, при котором отмечается усиленный катаболизм и ускоренная гибель клеток, концентрация НКСК может быть как снижена, так и повышена. Более того, многочисленные исследования (Наборщиков Д.А. и др., 2012; Vlasov V., et al., 2007) свидетельствуют о том, что в норме концентрация НКСК является величиной постоянной, а изменения концентрации НКСК в ту или иную сторону могут сами по себе сопровождаться патологическими сдвигами. Таким образом, поддержание определенного уровня НКСК является активным процессом и определяется, в первую очередь, внеклеточной секрецией НК. Очевидно, что интенсивность секреции НК во внеклеточную жидкость и затем в сыворотку крови прямо пропорциональна интенсивности синтеза НК.

МКСК характеризует, как известно, скорость распада нуклеиновых кислот до пуриновых оснований и далее до мочевой кислоты (МК). Однако обычно определение концентрации МКСК используется для диагностики мочекислого диатез или подагры, при этом принимаются в расчет только повышенные значения. Вместе с тем, при критических состояниях отмечено резкое снижение МК, свидетельствующее о том, что большинство образующихся пуриновых оснований вновь используется в синтезе НК de novo.

Следовательно, МКСК является параметром, по которому можно оценить интенсивность обмена НК. При высоких значениях МК отмечается избыток пуриновых оснований, что свидетельствует о преобладании распада НК над синтезом, при этом значительная часть пуриновых оснований метаболизируются до МК. Низкие значения МК, напротив, свидетельствуют о том, что синтез НК преобладает над возможностью синтеза пуриновых оснований.

Таким образом, при одновременном определении НКСК и МКСК оценивается как интенсивность синтеза НК, так и интенсивность распада НК. Используя полученные данные, можно рассчитать индекс интенсивности обмена НК.

На основании полученных данных рассчитывается индекс интенсивности обмена (ИИ ОНК) с использованием следующей формулы:

ИНДЕКС ИНТЕНСИВНОСТИ ОБМЕНА НК=НКСК/МКСК×100%,

где НКСК - концентрация олигонуклеотидов сывортки крови (мкг/л),

МКСК - концентрация мочевой кислоты сыворотки крови (мкмоль/л).

Пример 1. У группы взрослых здоровых добровольцев (n=10) оценивали концентрации НКСК и МКСК. При расчете индекса интенсивности обмена НК получено, что в норме индекс составил 16+/-5%.

Пример 2.

В исследование включены больные с тяжелыми ожогами, проходившие лечение в ожоговом центре ОКБ Новосибирска. Возраст 15-65 лет, продолжительность наблюдения 21 день.

Исследование проведено в группе ожоговых больных (n=18) с площадью ожога более 50% тела и степенью 2а и выше. Данные больные разделены на две группы - выжившие больные (n=13) и умершие (n=5).

В ходе исследования выявлены достоверные различия между группами (выжившие/умершие) по следующим показателям: Индекс Франка, оценка по шкале SOFA, уровень гликемии и уровень альбумина сыворотки крови. СРП был также достоверно выше у умерших больных с 10 суток госпитализации.

Уровень лейкоцитов, относительное содержание лимфоцитов, лактат сыворотки крови достоверно не отличались между группами.

Со стороны показателей обмена нуклеиновых кислот были отмечены следующие изменения. Наиболее низкие значения НКСК отмечены в группе умерших больных. Отмечены достоверные (р<0.05) различия в содержании олигонуклеотидов ДНК в сыворотке крови в группе выживших больных по сравнению с группой умерших на 10 (106±5 и 72±9 соответственно) и 14 дни (89±5 и 50±9 соответственно).

Напротив, МКСК в первые 5 суток была достоверно ниже сравнению со средними значениями в группе выживших больных. Отмечены достоверные (р<0.5) различия в содержании мочевой кислоты в сыворотке крови в группе выживших больных по сравнению с группой умерших на 3 (180,2±44,1 и 340,2±19,0 соответственно) и 5 дни (127,7±14,9 и 205,6±13,3 соответственно).

При расчете индекса интенсивности обмена НК было показано, что в первые 5 суток после ожога наиболее низкие значения индекса отмечены у умерших больных. Коэфициент на 5 сутки составил 58% и 24% в группах выживших и умерших соответственно, и 62% и 27% соответственно на 14 сутки. Таким образом, у выживших больных на протяжении всего периода наблюдения ИИО НК превышал 30%.

Таким образом, у критических больных значения индекса<30% свидетельствуют о выраженном распаде клеток со сниженной репарацией, что типично для шока и персистирующей полиорганной недостаточностью. Соответственно распад НК преобладает над синтезом de novo. Напротив, значения индекса, превышающие 30% свидетельствуют о преобладании синтеза над распадом НК, и преобладании репарации тканей над их распадом.

Пример 3.

Больной И., 45 лет. DS: Ожоговая болезнь, ожог IIa-III, площадь более 50%. Проходил лечение в отделении реанимации ожогового центра в течение 28 дней. Исход - выздоровление. Результаты оценки показателей интенсивности обмена нуклеиновых кислот представлены в табл. 1.

Таким образом, при благоприятном течении ожоговой болезни отмечены значения индекса интенсивности обмена НК от 43 до 150%. Пример 4.

Больная К., 49 лет.DS: Ожоговая болезнь, ожог IIa-III, площадь 55%. Проходила лечение в отделении реанимации ожогового центра в течение 22 дней. Летальный исход. Результаты оценки показателей интенсивности обмена нуклеиновых кислот представлены в табл. 2.

Таким образом, при неблагоприятном течении ожоговой болезни отмечены значения индекса интенсивности обмена НК ниже 10% (9 и 3%).

Пример 5.

Больная Н., DS: Ахалазия пищевода, кахексия III степени. На момент осмотра: вес 36 кг, индекс Кетле 14, дефицит массы тела 30%.

Проводилась нутритивная поддержка: стандартная энтеральная смесь в разведении 1:1 в объеме 2000 мл/сутки в назогастральный зонд. Несмотря на проводимую терапию, потеряла за последние 2 недели 3 кг. Обращает на себя внимание отсутствие прироста альбумина и потеря массы тела на фоне относительно стабильного состояния.

В программу нутритивной поддержки включен дополнительно Интестамин 500 мл/сутки, доза Глутамина 30 гр/сут.

Динамика показателей отражена в табл. 3.

Таким образом, при алиментарной дистрофии отмечены нарушения обмена НК, что отразилось в снижении ИИ ОНК (4.6%). После введения в терапию больших доз аминокислоты глютамина отмечены позитивные изменения нутритивного статуса, в том числе, тенденция к нормализации ИИ ОНК (12-13%).

Литература

1. Валеева В.А., Верещагин Е.И., Беркасова И.В., Стрельцова Е.И. Показатели обмена нуклеиновых кислот у больных с абдоминальным сепсисом // Медицина и образование в Сибири.- №6-2012, - стр. 217-222

2. Vlassov V.V., Laktionov P.P., Rykova E.Y. Extracellular nucleic acids // Bioessays. - 2007. - Vol. 29. - P. 654-667.

Способ диагностики нарушений обмена нуклеиновых кислот (НК) у критических больных, характеризующийся тем, что определяют концентрации олигонуклеотидов ДНК и мочевой кислоты (МК) в сыворотке крови (СК), после чего рассчитывают индекс интенсивности обмена НК (ИИ ОНК) по формуле: ИИ ОНК=НКСК/МКСК × 100%, где НКСК - концентрация олигонуклеотидов ДНК сыворотки крови, МКСК - концентрация мочевой кислоты сыворотки крови, при этом значения индекса менее 30% у критических больных свидетельствуют о том, что распад НК преобладает над синтезом de novo, а значения индекса, превышающие 30%, свидетельствуют о преобладании синтеза над распадом НК.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для оценки эффективности нейроретинопротекции первичной открытоугольной глаукомы.

Изобретение относится к способам и методам петрофизических и геохимических исследований коллекции керна нетрадиционного резервуара юрской высокоуглеродистой формации (ЮВУФ) и может быть использовано при определении линейных ресурсов нефти и газа, технически извлекаемых из ЮВУФ, с учетом их различной степени связанности с матрицей породы и заполнения сообщающихся и/или не сообщающихся пор.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для оценки эффективности нейроретинопротекции первичной открытоугольной глаукомы.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и патологической анатомии, предназначено для прогнозирования рецидивирования эндометриоидных кист яичников (ЭКЯ).

Изобретение относится к способу количественного определения пептидогликанов (PGN) в образце полимера глюкозы. Способ включает a) обработку образца полимера глюкозы посредством ультразвука, нагревания и/или ощелачивания для фрагментации и разрушения содержащихся в образце PGN и для образования растворимых PGN с размерами между 30 и 5000 кДа; b) приведение обработанного образца в контакт с рекомбинантной клеткой, экспрессирующей экзогенный рецептор TLR2 (Toll-подобный рецептор 2) и репортерный ген при прямой зависимости от сигнального пути, связанного с рецептором TLR2, причем указанный репортерный ген кодирует секретируемую щелочную фосфатазу; c) измерение сигнала репортерного гена и d) определение количества PGN в образце с применением калибровочной кривой на основе зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена, где калибровочную кривую зависимости количества PGN от интенсивности сигнала репортерного гена стандартизируют или калибруют с использованием трихлоргидрата PAM3Cys-Ser-(Lys)4.
Изобретение относится к аналитической химии, предназначено для определения органического соединения фитина в семенах растений. Способ определения солей фитиновой кислоты в семенах растений включает экстракцию фитина из сырья соляной кислотой, проведение дополнительной очистки солянокислой вытяжки добавлением к ней смеси изоамилового спирта с хлороформом (1:24 об.

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, в частности к способу оценки иммуногенности вакцины чумной живой с использованием антигенспецифических клеточных тестов in vitro и проточно-цитометрического анализа.

Изобретение относится к определениям и испытаниям, а именно к способу определения антиоксидантной активности пептидов животного происхождения. Способ количественного определения антиоксидантной активности пептидов животного происхождения включает спектрофотометрическое определение оптической плотности продукта реакции изучаемых пептидов с 2,2-дифенил-1-пикрилгидразилом (DPPH) в органическом растворителе, выбранном из группы, включающей метанол, этанол, изопропанол, ацетон и метилэтилкетон, определение оптической плотности продукта реакции референтного пептидного антиоксиданта природного происхождения L-глутатиона восстановленного (GSH) с 2,2-дифенил-1-пикрилгидразилом и расчет антиоксидантной активности изучаемых пептидов как глутатионэквивалентной антиоксидантной активности GSHEAC (GSH equivalent antioxidant capacity), представляющей собой отношение концентрации L-глутатиона, при которой прореагировало 50% DPPH, к концентрации изучаемой субстанции, при которой прореагировало 50% DPPH.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к полинуклеотидам, которые кодируют CDR3 в генах TCR-[альфа] и TCR-[бета] цепей CD4+ хелперных Т-клеток, которые специфичны к хелперному пептиду WT1322, и может быть использовано в медицине для индукции иммунного ответа против WT1322-экспрессирующей злокачественной опухоли.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к активации хелперных Т-клеток, которые специфичны к пептиду WT1, и может быть использовано в медицине для индукции иммунного ответа против WT1-экспрессирующей злокачественной опухоли.

Изобретение относится к измерительной технике и может быть использовано для неинвазивного анализа материала. Раскрыты способ и система для анализа материала (100).

Изобретение относится к биотехнологии. Заявлен способ определения вероятности того, что пациент имеет волчанку в доклинической стадии.
Изобретение относится к способам лабораторного определения макроформ креатинкиназы и макроформ МВ-изофермента. Описан способ определения макроформ креатинкиназы и макроформ МВ-изофермента в сыворотке крови человека, включающий определение активности креатинкиназы и МВ-изофермента энзиматическим методом, отличающийся тем, что макроформы креатинкиназы, в том числе МВ-изофермента, осаждают добавлением к сыворотке равного объема полиэтиленгликоля 6000 в конечной концентрации 12-14% с последующим центрифугированием в течение 20-25 минут при 2000-2200 g, в надосадочной жидкости определяют активность креатинкиназы и МВ-изофермента и рассчитывают активности макроформ в процентах от исходной активности креатинкиназы и ее МВ-изофермента.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогноза эффективности лечения пациентов с расстройством адаптации с тревожно-депрессивной симптоматикой.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к диагностике злокачественных опухолей, и может быть использована для оценки риска развития злокачественной опухоли легкого.

Изобретение относится к области исследования и анализа материалов, а именно к способам измерения параметров наночастиц, взвешенных в жидкости, оптическими методами, и может быть использовано для определения концентрации аналита в плазме крови.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования развития некроза кишки у больных с острой мезентериальной ишемией. В венозной крови определяют содержание общих и цитотоксических лимфоцитов у больных, рассчитывают интегральные показатели общих лимфоцитов (P1) и цитотоксических лимфоцитов (Р2) по отношению их содержания у больного к среднему значению у здоровых лиц, вычисляют прогностический индекс (К) по отношению интегрального показателя (P1) к интегральному показателю (Р2) и при значениях коэффициента меньше 0,5 прогнозируют развитие некроза кишечника.

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и касается оценки реперфузионного повреждения сосудистой стенки в эксперименте. Для этого проводят оценку окислительной модификации белков сосудистой стенки и при определении кетон-динитрофенилгидразонов диагностируют реперфузионное поражение сосудистой стенки.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии и генетике, и представляет собой способ диагностики многососудистого атеросклеротического поражения коронарных артерий у больных ишемической болезнью сердца при абдоминальном ожирении; согласно изобретению определяют уровень экспрессии гена микроРНК-203 в сыворотке крови и при уровне экспрессии гена микроРНК-203, равном или более 101,00 условной единице экспрессии, диагностируют многососудистое атеросклеротическое поражение коронарных артерий.

Изобретение относится к области медицины, в частности к способу прогнозирования индивидуального риска развития ожирения у человека на различные по продолжительности периоды жизни.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности при идентификации осмотолерантных дрожжей Zygosaccharomyces rouxii. Способ включает предварительное обогащение дрожжей, осаждение их центрифугированием, выделение ДНК с проведением ПЦР в реальном времени, причем для амплификации используются праймеры: ZygRux-f GACGTGAACTCTTAACGGAG и ZygRux-r GAGAGCAGAACCCTCCC, а также Taqman зонд ZygRux-p FAM CGGAGGAGATTAAAAACAGCCGCGCA BHQ1, а логарифмическое повышение уровня флюоресценции в канале FAM свидетельствует о наличии штамма дрожжей рода Zygosaccharomyces rouxii.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ диагностики нарушений обмена нуклеиновых кислот у критических больных. Определяют концентрации олигонуклеотидов ДНК и мочевой кислоты в сыворотке крови. Рассчитывают индекс интенсивности обмена НК. Значения индекса менее 30 у критических больных свидетельствуют о том, что распад НК преобладает над синтезом de novo. Значения индекса, превышающие 30, свидетельствуют о преобладании синтеза над распадом НК. Изобретение обеспечивает эффективную диагностику нарушений обмена НК у критических больных. 3 табл., 5 пр.

Наверх