Способ получения биомассы и рибофлавина

 

«,::,тем н !

ОПИСАН ИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

275023

Союа Соеетокиа

Соллелиатичеекиа

Реооублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 25.1V.1969 (№ 1324516/30-15) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано ОЗ.Vll.1970. Бюллетень № 22

Дата опубликования описания 18.ХI.1970

Кл. 6а, 16/03

6а, 17/02

МПК С 12d 3!06

С 12с1 5/04

УДК 557.15,062(088.8) Комитет ло делам иаобретениЯ и открытиЯ ори Совете 1лиииотров

СССР

Авторы изобретения

И, Н. Позмогова и Л. Г. Логинова

Институт микробиологии АН СССР

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ И РИБОФЛАВИНА

Изобретение относится к области микробиологического синтеза белково-витаминных веществ на основе углеводородов нефти.

Известно, что получение биомассы на основе углеводородов парафинового ряда осуществляется преимущественно с использованием дрожжей, в частности Candida tropicalis.

Однако такой способ имеет тот недостаток, что применение микроорганизма требует предварительной его адаптации к среде.

Предлагаемый спосоо лишен этого недостатка. Это достигается за счет того, что в качестве возбудителя брожения применяют штамм № 41 Mycoccum lactis Krassilnikov (1941), зарегистрированный в Институте микробиологии Академии наук СССР.

Штамм № 41 М. lactis выделен из рубца коровы и не чувствителен к мицетину.

Отношение к кислороду. Аэроб. Температурный оптимум при росле па мясо-пептонном агаре 38 — 43 С, на минеральной среде с парафином 38 — 43 С. Температурный максимум на мясо-пептонном агаре 48+1 С. Чем богаче среда, тем выше температурный оптимум и максимум роста.

Морфология. Клетки округлой или слегка овальной формы, диаметром 0,7 — 1,0 мк.

После 17 час роста встречаются шаровидные и лимоновидные клетки диаметром 1,8 мк, с возрастом культуры число последних увеличивается. При высеве в свежий субатрат На поверхности образуются почки с хорошо заметным каналом между дочерними и материнскими клетками. Клетки одиночные, в неоформленных комплексах, которые легко распадаются. Размножаются делением, перешнуровыванием, почкованием.

На мясо-пептонном arape. Колонии слегка выпуклые, влажные, блестящие, пастообраз1О ной консистенции, бесцветные.

На картофельно-пептонном агаре. Колонии с радикальными линиями.

Желатина. Не разжихкает.

Молоко. Свертывает с подкислением среды.

15 Сгусток молока в плотных глыбах, не разжижается в течение 30 суток.

Крахмал. Гидролизует очень слабо.

Сахара. Образует кислоты при росте на

2О глюкозе, лактозе, ксилозе, галактозе, арабинозе; из сахарозы кислоты образует слабо.

Органические кислоты. Хорошо усваивает уксусную, лимонную, янтарную и молочнучо кислоты.

Углеводороды парафинового ряда. Хорошо растет на н-алканах с числом углеродных атомов в цепи от 15 до 22.

Минеральный азот. Усваивает.

30 Нитриты. Восстанавливает до нитритов.. 275023

Таблица

Содержание аминокислот, % на сухой вес биомассы

Аминокислоты

Дрожжи, „., рода ,;„ I ."

Can i a!

Штамм № 41

М. Iactis

3,2

1,0

2,6

5,6

2.,3

1,3

4,8

1,8

3,5

2,5 — 4,0; 0,6 — 0,8 ! 2,0 — 3,0 !

3,5 — 7,5

1,5 — 3,5

1,0 — 3,5 i, 5,5 — 8,0

0,5 — 1,3

1,5 — 4,0

4,1

1,2

3,0

15 Лизин

Гистидин

Аргинин

3,7

1,3

2,5

Лег арагиновая

1 реонин

20 Серпп

5,3

2,8

3,9

Глутаминовая

Пролин

Глиции

6,3

3,9

0,6

2,5

4,1 ! 1,1

1,2

2,0 — 5,0

2,5 — 3,5

0,5 — 1,0

4,9

4,1

1,3

Алании

Валин

Метиоиии .

2,0 — 3,0

1,5 — 4,0, 0,5 — 1,0 ! 1,5 — 2,5

3,3

4,7

1,8

2,3

Изолейцин

Лейцин

Тирозин

30 Феиилалан

Предмет изобретения

Составитель М. Драиишникбв

Редактор Г. Кузьмина

Корректор О. А. Лапшина

Заказ 3l62/3 "Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета ио делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва,. )K-35, Раушская наб.„д. 4 5

Типография, пр: Сапунова, 2

Образование рибофлавина. При росте на минеральной жидкой среде с парафином или гептадеканом выделяет в среду рибофлавин.

Штамм № 41 M. lactis можно отнести г термотолерантным.

На минеральной среде с парафином способен образовывать биомассу не в меньшем количестве, чем дрожжи. Так, на минеральной среде с добавлением 1% (по объему) парафина дрожжи С. .ropicalis штамм T-20

IlpH культив фбванйи в условиях перемешивапня на качалке при температуре 36 С образуют 6 л г сухой биомассы на 1 ил среды.

На этой же ср еде ЫЫЙы ¹ 41 М. 1ас11з в условиях перЖЙешйвания на качалке при темпера туве 4О С вЂ” 6,3 лгг сухо1г бггомассы на

1 л л среды.

По сравнению с С, tropicalis штамм ¹ 41

М. lactis обладает более быстрым ростом (36 час против 50 час при выращивании на минеральной среде с парафином на качалках, 280 об)мин, Кроме того, штамм выделяет в среду рибофлавин — 20 лкг/нл. В аналогичных условиях (в средах с парафином на качалках) Eremothecium ashhyii и ряда микобактерий образуют меньше рибофлавипа—

8 и 2 лгкг/мл.

РН оптимальной среды 7,0 — 7,5.

Штамм № 41 М, lactis вполне пригоден для получения биомассы. При этом из культуральной жидкости моЖет быть получен рибофлавин. Важно подчеркнуть, что этот микокк не требует предварительной адаптации к углеводородам парафинового ряда.

В опытах на среде, содержащей 5,5 г

NH4Н2РО, 0,7 г NgSC4, 0,5 г NaC1, 0,4 г

Ca (NOs), 0,1 г К2НРО4, 0;1 г КН РО, 1 об. % парафина (ГОСТ 1747 — 64) и 1 л водопроводной воды, штамм № 41 М. lactis дал результаты, которые приведены в таблице. В этой же таблице приведены литературные данные, относящиеся к роду Caudida (Чепиго и соавт., 1967) и Qycobacterium !01епп1 (Самбилов и соавт., 1968).

Применение штамма 41 Мусоссцгп lactis

35 Krassiluikov (1941), зарегистрированного в

Институте микробиологии Академии наук

СССР, для получения биомассы и рибофлавпна на основе сбраживания углеводородов парафинового ряда.