Способ диагностики рака шейки матки
Изобретение относится к способу диагностики рака шейки матки, включающему определение насыщенной жирной кислот с нечетным числом атомов углерода - нонадекановой (C19:0). Способ характеризуется тем, что дополнительно определяют содержания нечетных насыщенных (пентадекановой (C15:0), гептадекановой (С17:0)) и ненасыщенных (гептадеканоеновой (C17:1, пентадекаеновой (C15:1)) жирных кислот и рассчитывают диагностический коэффициент К по формуле
где С15:1 - содержание пентадекаеновой кислоты, C17:1 - содержание гептадеканоеновой кислоты; С15:0 - содержание пентадекановой кислоты, С17:0 - содержание гептадекановой кислоты, С19:0 - содержание нонадекановой кислоты, и при значении К менее 0,3 диагностируют рак шейки матки. Эффективность предлагаемого способа диагностики определяется его высокой точностью и специфичностью. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии и гинекологии, и может быть использовано для диагностики рака шейки матки.
Рак шейки матки (РШМ) является одной из самых частых злокачественных опухолей у женщин. На долю этой опухоли приходится около 5% среди всех злокачественных новообразований у женщин в России, что соответствует более 17 тыс. новых случаев заболевших ежегодно [1]. При этом согласно эпидемиологическим данным А.Д. Каприна и соавт. (2017) в России в 2018 г. 32,6% первичных случаев РШМ были диагностированы в запущенных стадиях, несмотря на проводимый скрининг среди населения [1]. Имеющиеся диагностические программы РШМ несовершенны: отсутствие специфических макроскопических признаков рака, несмотря на визуальную локализацию; ошибки кольпоскопической диагностики, расхождения макроскопического, цитологического и морфологического заключений [2].
Известен способ диагностики рака шейки матки у женщин с выявленной цервикальной дисплазией по данным онкоцитологии путем определения экспрессии мРНК гена c-fos относительно ТАТА-связывающего белка (ТВР) с использованием количественной ПЦР из фрагмента ткани шейки матки. [3]. Рак шейки матки диагностируют при отношении уровня экспрессии мРНК гена c-fos к мРНК ТВР от 148 отн. ед и более. Однако данный способ не может быть использован как метод первичной диагностики рака шейки матки т.к. используется для диагностики рака у женщин с уже имеющейся патологией шейки матки.
Известен способ диагностики неинвазивного рака шейки матки путем измерения микроциркуляции в шейки матки методом лазерной допплеровской флоуметрии, основанный на фиксации несколько параметров: показатель микроциркуляции, амплитуда колебаний кровотока, рассчитывают среднее арифметическое (М) и среднее квадратичное (σ) отклонение для первого и второго показателей соответственно, коэффициент вариации (Kv), измеряют показатели нейрогенного (НТ) и миогенного тонуса (МТ), показатель шунтирования (ПШ). [4]. По установленным цифровым значениям определяют степень диспластических изменений цервикального эпителия. При значении М - 28,06 пф. ед, σ - 24,42, Kv - 94,15%, МТ - 2,56 Гц и ПШ - 0,99 Гц диагностируют рак шейки матки in situ. Безусловным достоинством этого метода является неинвазивность, а недостатком - невозможность диагностики инвазивного рака шейки матки.
Известен способ диагностики рака шейки матки, взятый в качестве прототипа, основанный на детекции жирной кислоты C19:0 в суспензии клеток, полученной из биоптата шейки матки. Содержание С19:0 выше 3,53% указывает на наличие рака шейки матки [5]. Недостатком этого метода является невысокая специфичность, так как уровень данной кислоты может измениться при других онкологических заболеваниях, а также при неопухолевой патологии [6].
Для повышения специфичности способа в биоптате шейки матки определяют содержание пентадекаеновой (C15:1), гептадеканоеновой (С17:1), пентадекановой (C15:0), гептадекановой (С17:0) и нонадекановой (С19:0) кислот и рассчитывают коэффициент К по формуле
где: С15:1 - содержание пентадекаеновой кислоты, C17:1 - содержание гептадеканоеновой; С15:0 - содержание пентадекановой, С17:0 - содержание гептадекановой, С19:0 - содержание нонадекановой кислот и при значении К менее 0,3 диагностируют рак шейки матки.
Способ осуществляют следующим образом:
У женщин производят забор биоптата макроскопически измененного участка шейки матки или, при его отсутствии, из зоны стыка эпителиев. Из биоптата шейки матки получают суспензию клеток путем измельчения и гомогенизации с использованием набора реагентов для диссоциации опухолей. Полученную суспензию клеток фильтруют, отмывают в среде RPMI-1640 с добавлением 10% телячьей сыворотки и стандартного набора антибиотиков. Далее липиды экстрагируют методом J. Folch [8]. Анализируют жирно-кислотный спектр на газо-жидкостном хроматографе, определяют содержание пентадекаеновой (С15:1), гептадеканоеновой (С17:1), пентадекановой (С15:0), гептадекановой (C17:0) и нонадекановой (С19:0) кислот и рассчитывают коэффициент К по формуле
где: С15:1 - содержание пентадекаеновой кислоты, С17:1 - содержание гептадеканоеновой кислоты; С15:0 - содержание пентадекановой кислоты, С17:0 - содержание гептадекановой кислоты, С19:0 - содержание нонадекановой кислоты.
При к менее 0,3 диагностируют рак шейки матки.
Для расчета диагностического коэффициента были использованы показатели содержания насыщенных и ненасыщенных жирных кислот с нечетным числом атомов углерода, поскольку известно, что опухолевой ткани шейки матки присущ атипический метаболизм высших жирных кислот с образованием нечетных аналогов, а также установлено наличие корреляционных связей между последними и некоторыми биологическими процессами в раковых клетках (пролиферация, дестабилизация фаз клеточного цикла, апоптоз, регуляция иммунного ответа) [7].
Примеры конкретного применения способа.
ПРИМЕР №1.
Больная К., 26 лет, направлена в онкологический диспансер с подозрением на рак шейки матки. На момент осмотра состояние удовлетворительное. Локально: наружние половые органы развиты правильно, оволосение по женскому типу, влагалище рожавшей. Шейка матки гиперемирована, полностью не выводится. Матка, придатки не пальпируются. Инфильтратов в параметриях нет. Слизистая прямой кишки подвижная. По результатам онкоцитологии цервикального соскоба - клетки HSIL, гистологического исследования биоптата шейки матки - некроз отдельных фрагментов эпителия, элементы соединительной ткани, эпителиальных элементов нет. Выполнена ребиопсия шейки матки. Описанным выше способом проведен анализ жирнокислотного спектра биоптата шейки матки. С15:1=0,64%; C17:1=1,23%; С15:0=1,55%; C17:0=3,12%; C19:0=2,35%. Рассчитан коэффициент к
Выставлен диагноз рак шейки матки, который был подтвержден морфологически. Больная направлена на хирургическое лечение в профильное отделение онкодиспансера.
ПРИМЕР №2.
Больная П.. 30 лет, направлена в онкологический диспансер с подозрением на рак шейки матки. На момент осмотра состояние удовлетворительное. Локально: наружние половые органы развиты правильно, оволосение по женскому типу, влагалище рожавшей. Шейка матки рубцово деформирована, кровоточит. Матка, придатки не пальпируются. Инфильтратов в параметриях нет. Слизистая прямой кишки подвижная. Выполнена биопсия шейки матки. Проведен анализ жирнокислотного спектра биоптата шейки матки. C15:1=2,94%; C17:1=1,09%; С15:0=2,02%; С17:0=3,47%; С19:0=0%. Коэффициент к=0,7, что соответствует неопухолевому заболеванию шейки матки. По результатам гистологического исследования биоптата выставлен диагноз цервикальная интраэпителиальная неоплазия I степени. Рак шейки матки исключен. Больная направлена на лечение к гинекологу по месту жительства.
ПРИМЕР №3.
Больная З., 28 лет, на момент осмотра состояние удовлетворительное. Локально: наружние половые органы развиты правильно, оволосение по женскому типу, влагалище рожавшей. Шейка матки гиперемирована в области наружнего зева, кровоточит. Матка, придатки не пальпируются. Инфильтратов в параметриях нет. Слизистая прямой кишки подвижная. Проведен анализ жирнокислотного спектра биоптата шейки матки. C15:1=0,66%; C17:1=0,57%; С15:0=1,73%; С17:0=3,31%; С19:0=3,83%. Коэффициент к=0,13. Выставлен диагноз рак шейки матки. Больная направлена в онкодиспансер, где после дообследования и морфологической верификации выставлен диагноз рак шейки матки. Больная направлена на хирургическое лечение.
Данным способом были обследованы 60 женщин, направленных в Забайкальский краевой онкологический диспансер с подозрением на рак шейки матки, из них у 28 - был выставлен диагноз рак шейки матки, подтвержденный морфологически, у 32 - неопухолевая патология шейки матки (хронический цервицит, цервикальная интраэпителиальная неоплазия I-II степени, лейкоплакия).
Образцы контрольной группы были взяты у 15 гинекологически здоровых женщин-добровольцев, ознакомленных с дизайном исследования и давших информированное согласие на участие в нем.
Специфичность составила 89,2%, чувствительность - 93,8%, точность - 92%.
Список литературы
1) Каприн АД, Старинский ВВ, Петрова ГВ Состояние онкологической помощи населению России в 2017 году. Москва: МНИОИ им. П.А. Герцена - филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, 2019. 236 с.
2) Патент №2601672, Российская Федерация, МПК А61В 18/12, А61В 18/14. Способ проведения биопсии шейки матки у больных с патологией шейки матки / А.Н, Окушко, А.Ю. Шиляев, В.Н. Прилепская, Г.Р. Байрамова; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации. - 2015122373/14; заявл.: 11.06.2015; опубл. 10.11.2016.
3) Патент №2538618, Российская Федерация, МПК G01N 33/50. Способ дифференциальной диагностики цервикальных дисплазий и рака шейки матки / Т.О. Волкова, О.В. Курмышкина, И.Е. Бахлаев, П,И. Ковчур, А.Н. Полторак; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Петрозаводский государственный университет". - 2012157453/15; заявл.: 26.12.2012; опубл. 10.01.2015.
4) Патент №2662709, Российская Федерация, МПК А61В 8/06. Способ диагностики дисплазий и рака шейки матки у женщин репродуктивного возраста / П.М, Джалалова, Н.П. Лапочкина; заявитель и патентообладатель Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ивановская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации. - 2016125629; заявл.: 27.06.2016; опубл. 26.07.2018.
5) Каюкова Е., Белокриницкая Т.Е., Шолохов Л.Ф., Терешков П.П. Статус высших жирных кислот клеток экзоцервикса при дис- и неопластической трансформации. Фундаментальная и клиническая медицина. 2018, 3(3). - С. 35-44.
6) Патент №93053778/14, Российская Федерация, МПК G01N 33/487. Способ диагностики рака легкого / Б.С. Хышиктуев, Н.А. Хышиктуева Н.А.; заявитель и патентообладатель Б.С. Хышиктуев, Н.А. Хышиктуева Н.А.. - 93053778/14; заявл.: 29.11.1993; опубл. 27.08.1997.
7) Каюкова Е.В., Белокринцкая Т.Е., Терешков П.П. Влияние пропионата на спектр высших жирных кислот в клетках шейки матки при дис- и неопластической трансформации. Успехи молекулярной онкологии. 2018; 5(2):31-41.
8) Folch, J., Less M., Sloane-Stanley A.G.H. A symple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues. J. Biol. Chem. 1957, Vol. 226 (1). - P. 497-509.
Способ диагностики рака шейки матки, включающий определение насыщенной жирной кислот с нечетным числом атомов углерода - нонадекановой (C19:0), отличающийся тем, что дополнительно определяют содержания нечетных насыщенных (пентадекановой (C15:0), гептадекановой (С17:0)) и ненасыщенных (гептадеканоеновой (C17:1, пентадекаеновой (C15:1)) жирных кислот и рассчитывают диагностический коэффициент К по формуле
где С15:1 - содержание пентадекаеновой кислоты, C17:1 - содержание гептадеканоеновой кислоты; С15:0 - содержание пентадекановой кислоты, С17:0 - содержание гептадекановой кислоты, С19:0 - содержание нонадекановой кислоты, и при значении К менее 0,3 диагностируют рак шейки матки.
