Ингибитор контрольных точек и целые клетки микобактерий для применения в терапии рака

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и касается терапии рака. Для этого применяют комбинированную терапию, включающую иммуномодулятор и ингибитор контрольных точек. При этом иммуномодулятор содержит целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium obuense, а ингибитор контрольных точек представляет собой антитело, выбранное из пембролизумаба, атезолизумаба, тремелимумаба, MGA-271, AMP-224, BMS-986016. Это обеспечивает эффективное лечение рака за счет синергетического действия лекарственных средств. 2 н. и 24 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.

 

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к области терапии рака. В частности, настоящее изобретение относится к способу профилактики, лечения или ингибирования развития опухоли и/или метастазов у индивидуума.

Предпосылки создания изобретения

У людей с прогрессирующим раком, противоопухолевый иммунитет часто является неэффективным из-за жестко регулируемого взаимодействия про- и противовоспалительных, иммуностимулирующих и иммуносупрессорных сигналов. Так, например, потеря противовоспалительных сигналов приводит к хроническому воспалению и длительной передаче пролиферативного сигнала. Интересно отметить, что цитокины, которые стимулируют и подавляют пролиферацию опухолевых клеток, продуцируются на месте опухоли. В результате этого, между действием этих различных процессов происходит дисбаланс, что приводит к стимуляции развития опухоли.

В настоящее время, основным препятствием в попытках разработать эффективную иммунотерапию рака была неспособность блокировать иммуносупрессию в области развития рака и восстановливать нормальные сети иммунной реактивности. Физиологический подход к иммунотерапии заключается в нормализации иммунной реактивности так, чтобы, например, могли распознаваться эндогенные опухолевые антигены и вырабатываться эффективные цитолитические ответы против опухолевых клеток. Хотя точно неизвестно, существует ли иммунологический «надзор» над опухолью, однако, в настоящее время считается, что иммунная система постоянно отслеживает и устраняет недавно трансформированные клетки. В соответствии с этим, раковые клетки могут изменять свой фенотип в ответ на иммунное давление, чтобы избежать атаки (иммунологического «редактирования») и активировать экспрессию ингибирующих сигналов. В результате иммунологического «редактирования» и других разрушительных процессов первичные опухоли и их метастазы поддерживают свою жизнеспособность.

Один из основных механизмов ослабления противоопухолевого иммунитета известен как Т-клеточное истощение, которое обусловлено хроническим воздействием антигенов и характеризуется позитивной регуляцией ингибирующих рецепторов. Эти ингибирующие рецепторы служат в качестве иммунных контрольных точек для предотвращения неконтролируемых иммунных реакций.

PD-1 и коингибирующие рецепторы, такие как цитотоксический Т-лимфоцитарный антиген 4 (CTLA-4, аттенюатор В- и Т-лимфоцитов (BTLA; CD272), Т-клеточный иммуноглобулин и домен муцина-3 (Tim-3), ген активации лимфоцитов 3 (Lag-3; CD223) и т.п. часто называют регуляторами контрольных точек. Они действуют как молекулярные «ловушки», которые дают внеклеточную информацию, позволяющую определить прохождение клеточного цикла и других внутриклеточных процессов передачи сигнала.

Помимо специфического распознавания антигена посредством TCR, активация Т-клеток регулируется благодаря балансу положительных и отрицательных сигналов, передаваемых костимулирующими рецепторами. Эти поверхностные белки обычно являются членами суперсемейств рецепторов TNF или В7. Антитела-агонисты, направленные против активирующих костимулирующих молекул, и блокирующие антитела, направленные против негативных костимулирующих молекул, могут усилить стимуляцию Т-клеток и способствовать разрушению опухоли.

Белок запрограммированной клеточной гибели 1 (PD-1 или CD279), трансмембранный 55 кД-белок типа 1, является членом семейства CD28 Т-клеточных костимулирующих рецепторов, которое включает член суперсемейства иммуноглобулинов CD28, CTLA-4, индуцируемый костимулятор (ICOS) и BTLA. PD-1 в высокой степени экспрессируется на активированных Т-клетках и В-клетках. Экспрессия PD-1 может также детектироваться на субпопуляциях Т-клеток памяти с различными уровнями экспрессии. Были идентифицированы два лиганда, специфичные к PD-1: лиганд запрограммированной гибели 1 (PD-L1, также известный как B7-H1 или CD274) и PD-L2 (также известный как В7-DC или CD273). Было обнаружено, что PD-L1 и PD-L2 ингибируют активацию Т-клеток после связывания с PD-1 в мышиных и человеческих системах (Okazaki et al., Int. Immunol., 2007; 19: 813-824). Взаимодействие PD-1 с его лигандами, PD-L1 и PD-L2, которые экспрессируются на антигенпрезентирующих клетках (АПК) и дендритных клетках (ДК), передает отрицательные регуляторные стимулы для негативного модулирования иммунного ответа активированных Т-клеток. Блокада PD-1 подавляет этот отрицательный сигнал и усиливает Т-клеточные ответы.

Многочисленные исследования показали, что микроокружение рака влияет на сигнальный путь PD-L1/PD-1, и что индуцирование экспрессии PD-L1 ассоциируется с ингибированием иммунных ответов против рака и таким образом стимулирует прогрессирование рака и развитие метастазов. Сигнальный путь PD-L1/PD-1 является основным механизмом «ускользания» рака от иммунного «надзора» по нескольким причинам. Во-первых, что самое главное, этот путь участвует в негативной регуляции иммунных ответов активированных эффекторных Т-клеток, обнаруженных в периферических органах. Во-вторых, PD-L1 активируется в микроокружении рака, а PD-1 также активируется на активированных опухоль-инфильтрирующих Т-клетках, что тем самым может создавать порочный круг ингибирования. В-третьих, этот путь непосредственно участвует в регуляции врожденной и адаптивной иммунной системы посредством двунаправленной передачи сигнала. Эти факторы образуют комплексы PD-1/PD-L1, через центральную точку которых рак может влиять на иммунные ответы и стимулировать прогрессирование опухоли.

Первым ингибитором контрольных точек иммунного ответа, который был протестирован в клиническом испытании, является ипилимумаб (Yervoy, Bristol-Myers Squibb), анти-CTLA-4 mAb. CTLA-4 относится к суперсемейству рецепторов иммуноглобулинов, которое также включает PD-1, BTLA, TIM-3 и ингибитор Т-клеточной активации V-домена иммуноглобулина (VISTA).

Анти-CTLA-4 mAb представляет собой сильный ингибитор контрольных точек, который предотвращает «разрушение» «необученных» и антиген-содержащих клеток. Терапия усиливает противоопухолевую функцию CD8⁺-T-клеток, повышает соотношение количества CD8⁺-T-клеток и регуляторных Foxp3⁺-T-клеток и ингибирует супрессорную функцию регуляторных Т-клеток. Основным недостатком терапии с использованием анти-CTLA-4 mAb является генерирование аутоиммунной токсичности, вызываемой воздействием на мишень сверхизбыточной функции иммунной системы, которая утратила свою способность к переключению. Сообщалось, что у 25% пациентов, подвергнутых лечению ипилимумабом, развивались серьезные побочные эффекты 3-4-ой степени/побочные эффекты аутоиммунного типа, включая дерматит, энтероколит, гепатит, эндокринопатии (включая гипофизит, тиреоидит и адреналит), артрит, увеит, нефрит и асептический менингит. В отличие от терапии анти-CTLA-4 антителом, терапия анти-PD-1 антителом лучше переносится пациентом и индуцирует побочные эффекты аутоимунного типа на относительно более низком уровне.

TIM-3 был идентифицирован как еще один важный ингибирующий рецептор, экспрессируемый истощенными CD8⁺-T-клетками. На мышиных моделях рака было показано, что наиболее дисфункциональные опухоль-инфильтрирующие CD8⁺-T-клетки фактически коэкспрессируют PD-1 и TIM-3.

LAG-3 является другим недавно идентифицированным ингибирующим рецептором, который действует как ограничитель функции эффекторных Т-клеток и стимулятор супрессорной активности регуляторных Т-клеток. Недавно было установлено, что PD-1 и LAG-3 широко коэкспрессируются совместно с опухоль-инфильтрирующими Т-клетками у мышей, и что блокада PD-1 и LAG-3 стимулирует сильные синергические противоопухолевые иммунные ответы у мышей с моделью рака.

Блокада пути PD-1 может быть объединена с введением вакцин или других иммуномодулирующих антител для повышения эффективности терапии (Hirano, F. et al, Cancer Res., 65(3): 1089-1096 (2005); Li, B. et al, Clin. Cancer Res., 15: 1507-1509 (2009); и Curran, M.A. et al., Proc. Natl. Acad. Set, 107(9):4275-4280 (2010)).

В настоящее время, mAb-антагонисты, направленные против PD-1 и лиганда PD-L1, находятся на различных стадиях разработки для лечения рака, и недавно проведенные испытания с участием человека показали обнадеживающие результаты у раковых пациентов с прогрессирующим заболеванием, не поддающимся лечению.

Первым из агентов, блокирующих путь B7-H1/PD-1 и включенных в программу клинических испытаний фазы I, является ниволумаб (MDX-1 106/BMS-936558/ONO-4538), то есть, полностью человеческое анти-PD-1 mAb IgG4, разработанное Bristol-Myers Squibb. Другим анти-PD-1 mAb, находящимся на стадии клинического испытания, является CT-011, то есть, гуманизованное mAb IgG1, специфичное к PD-1 и разработанное CureTech Ltd. Другими агентами являются ламбролизумаб (MK-3475 - Merck), то есть, гуманизованное моноклональное анти-PD-1 антитело IgG4; BMS-936559, полностью человеческое анти-PD-L1 антитело IgG4 и MPDL3280A Roche, человеческое моноклональное антитело, нацеленное на путь PD-L1.

Результаты испытания фазы II, в котором сравнивали данные комбинированного введения ниволумаба и ипилимумаба с данными, полученными с использованием только ипилимумаба у пациентов с BRAF-меланомой дикого типа, выявили, что объективные показатели отклика составляют 61% при комбинированной терапии и 11% при монотерапии, причем, полный отклик наблюдался у 22% и 0% пациентов, соответственно. Побочные эффекты 3 и 4-ой степени, ассоциированные с лечением, наблюдались у 54% пациентов в группе комбинированной терапии и у 24% пациентов в группе, которой вводили ипилимумаб. Ассоциированные с лечением побочные эффекты любой степени, которые приводили к прекращению приема исследуемого лекарственного средства, наблюдались у 7,7% пациентов в группе, которой вводили ниволумаб, у 36,4% пациентов в группе, которой вводили ниволумаб+ипилимумаб, и у 14,8% пациентов в группе, которой вводили ипилимумаб.

Соответственно, целью настоящего изобретения является комбинированная терапия для лечения рака, включающая введение иммуномодулятора и блокаду ингибиторов контрольных точек, обладающих способностью вырабатывать сильные и устойчивые иммунные ответы.

Другой целью настоящего изобретения является комбинированная терапия для лечения рака, включающая введение иммуномодулятора и блокаду ингибиторов контрольных точек, обладающих способностью снижать побочные эффекты, ассоциированные с лечением.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к эффективному способу лечения и/или профилактики рака и/или развития метастазов путем введения ингибитора контрольных точек, который действует синергично с целой клеткой непатогенной термоинактивированной Mycobacterium.

В своем первом аспекте, настоящее изобретение относится к иммуномодулятору для применения в лечении, ослаблении, ингибировании или контроле рака у пациента, которому назначено проведение терапии посредством ингибирования контрольных точек, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1 PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций, где иммуномодулятор содержит целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, где введение указанного иммуномодулятора и проведение терапии посредством ингибирования контрольных точек осуществляют одновременно, отдельно или последовательно, и где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает, но необязательно, введение субтерапевтического количества указанного блокирующего агента и/или его длительное введение.

Во втором своем аспекте, настоящее изобретение относится к способу лечения, ослабления, ингибирования или контролирования неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение индивидууму (i) ингибитора контрольных точек, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций, и (ii) иммуномодулятора, где указанный способ обеспечивает более высокую терапевтическую эффективность по сравнению с введением ингибитора контрольных точек или иммуномодулятора по отдельности, где иммуномодулятор содержит целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, и где указанный способ включает, но необязательно, введение субтерапевтического количества указанного ингибитора контрольных точек.

Следовательно, настоящее изобретение относится к комбинированной терапии, включающей терапию ингибитором контрольных точек вместе с иммунотерапией конкретного типа, включающей введение иммуномодулятора. Авторами настоящего изобретения было обнаружено, что комбинация этих способов терапии дает синергетический эффект, превышающий простые аддитивные эффекты каждой терапии, проводимой отдельно.

Описание чертежей

Настоящее изобретение описано со ссылкой на нижеследующие чертежи, где:

На фигуре 1 показано влияние препарата термоинактивированной Mycobacterium obuense (NCTC 13365), вводимого вместе с ингибитором контрольных точек (анти-PD-L1 mAb) или без этого ингибитора, у модели ксенотрансплантата рака поджелудочной железы (клетки KPC вводили подкожно).

На фигуре 2 представлен график, аналогичный описанному выше, за исключением того, что совместно вводимым ингибитором контрольных точек является анти-PD-1 mAb.

На фигуре 3 указано соотношение CD3⁺-CD8⁺-клеток и клеток FoxP3 Treg, инфильтрирующих опухоли у контрольных мышей (красный), у мышей, которых обрабатывали только анти-CTLA-4 антителом (синий), или у мышей, которым проводили комбинированную обработку, состоящую из IMM-101 и анти-CTLA-4 антитела (зеленый). Авторами было обнаружено значительное увеличение (ANOVA р<0,05) в этой группе.

Подробное описание изобретения

Изобретение относится к способу лечения, ослабления, ингибирования или контролирования неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает введение иммуномодулятора и ингибитора контрольных точек. Настоящее изобретение основано на обнаружении того факта, что введение иммуномодулятора (целой клетки термоинактивированной Mycobacterium) в комбинации с ингибитором контрольных точек, направленным против PD-L1, PD-1, CTLA-4, PD-L2, CAG-3, B7-H3, В7-Н4, В7-Н6, A2AR или IDO, индуцирует синергическую противоопухолевую активность и/или противоопухолевую активность, которая является более сильной, чем активность при введении только иммуномодулятора или только ингибитора контрольных точек.

Предпочтительно, чтобы ингибитор контрольных точек для использования в настоящем изобретении был направлен против PD-L1, PD-1 или CTLA-4. Так, например, ингибитор может быть направлен против PD-L1.

Для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приводятся определения некоторых терминов. Дополнительные определения приводятся в подробном описании изобретения.

«Ингибитор контрольных точек» представляет собой агент, который действует на поверхностные белки, являющиеся членами суперсемейств TNF-рецепторов или В7, включая агенты, которые связываются с негативными костимулирующими молекулами, выбранными из CTLA-4, PD-1, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3 и/или их соответствующих лигандов, включая PD-L1 (Mellman et al., см. выше). «Блокирующий агент» представляет собой агент, который связывается с указанными выше костимулирующими молекулами и/или их соответствующими лигандами. Термины «ингибитор контрольных точек» и «блокирующий агент» являются синонимами. Ингибитор предпочтительно представляет собой антитело или антигенсвязывающую молекулу, нацеленные на антигенный сайт поверхностных белков. Так например, ингибитор представляет собой антитело, которое нацелеоно на антигенный сайт на PD-L1 или PD-1 или CTLA-4.

Иммуномодулятор, определенный в соответствии с настоящим изобретением, представляет собой компонент, который стимулирует врожденный иммунитет и иммунитет типа 1, включая активацию Th1 и макрофагов и активность цитотоксических клеток, а также, независимо, ингибирование несоответствующих анти-Th2-ответов посредством иммунорегуляторных механизмов.

Используемые здесь термины «опухоль», «рак» и «неоплазия» являются синонимами и относятся к клетке или к популяции клеток, рост, пролиферация или выживаемость которых превышает рост, пролиферацию или выживаемость нормальной клетки-аналога, что вызывает, например, расстройство, ассоциированное с пролиферацией или дифференцировкой клеток. Обычно, такой рост является неконтролируемым. Термин «злокачественное заболевание» относится к инвазии в близлежащую ткань. Термин «метастазы» относится к распространению или диссеминации опухоли, рака или неоплазии в другие участки, места локализации или области у индивидуума, где такие участки, места локализации или области отличаются от места нахождения первичной опухоли или рака.

Используемые здесь термины «запрограммированная гибель 1», «запрограммированная клеточная гибель 1», «белок PD1», «PD-1» и «PD1» являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого PD-1 и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с PD-1. Полную последовательность PD-1 можно найти в GenBank Accession No. U64863.

Используемые здесь термины «CD27» и «антиген CD27» являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого CD27 и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с CD27 (см., например, Hendriks (2000) Nat Immunol. 171 (5): 433-40).

Используемые здесь термины «В7-Н3» и «CD276» являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого В7-Н3 и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с В7-Н3 (см, например, Wilcox et al., (2012) Eur. J. Haemaiotogy; 88: 465-475).

Используемые здесь термины «В7-H4» и «VTCN1» являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого B7-H4 и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с В7-H4 (Wilcox см., выше).

Используемые здесь термины «A2AR» и «рецептор аденозина А2А» являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого A2AR и аналоги, имеющие по меньшей мере, один общий эпитоп с A2AR.

Используемые здесь термины «IDO» и «индоламин-2,3-диоксигеназа» являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого IDO и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с IDO.

Используемые здесь термины «антиген-4, ассоциированный с цитотоксическими Т-лимфоцитами», «CTLA-4», «CTLA4» и «антиген CTLA-4» (см., Murata, Am. J. Pathol. (1999) 155:453-460) являются синонимами и включают варианты, изоформы, видовые гомологи человеческого CTLA-4 и аналоги, имеющие по меньшей мере один общий эпитоп с CTLA-4 (см., например, Balzano (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7:28-32). Полную последовательность нуклеиновой кислоты CTLA-4 можно найти в GenBank Accession No. L15006.

Используемый здесь термин «субтерапевтическая доза» означает дозу терапевтического соединения (например, антитела) или продолжительность терапии, где указанная доза ниже, чем обычная или типичная доза терапевтического соединения, или продолжительность терапии меньше, чем продолжительность монотерапии рака.

Термин «терапевтически эффективное количество» определяется как количество ингибитора контрольных точек в комбинации с иммуномодулятором, которое предпочтительно снижает тяжесть симптомов заболевания, увеличивает частоту и продолжительность бессимптомных периодов заболевания или предотвращает обострение заболевания или не приводит к инвалидности вследствие такого обострения. Термины «эффективное количество» или «фармацевтически эффективное количество» означают количество агента, достаточное для достижения желаемого биологического или терапевтического результата. Таким результатом может быть снижение, ослабление, временное ослабление, уменьшение, задержка и/или облегчение одного или более признаков, симптомов или факторов заболевания или любое другое желаемое изменение биологической системы. Что касается рака, то эффективное количество может включать количество, достаточное для сокращения объема опухоли и/или уменьшения скорости роста опухоли (например, для подавления роста опухоли) или для предотвращения или замедления другой нежелательной пролиферации клеток. В некоторых вариантах осуществления изобретения, эффективным количеством является количество, достаточное для задержки развития рака или опухоли или увеличения продолжительности жизни или стимуляции стабилизации рака или опухоли.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, терапевтически эффективным количеством является количество, достаточное для предотвращения или замедления наступления рецидива. Терапевтически эффективное количество может быть введено в один или более приемов. Терапевтически эффективное количество лекарственного средства или комбинации лекарственных средств может давать один или более из нижеследующих эффектов: (i) уменьшение числа раковых клеток; (ii) уменьшение размера опухоли; (iii) ингибироваие, торможение, замедление до некоторой степени и предпочтительно прекращение инфильтрации раковых клеток в периферические органы; (iv) ингибирование (т.е., замедление до некоторой степени, а предпочтительно прекращение) метастазирования опухолей; (v) ингибирование роста опухоли; (vi) предотвращение или задержку развития и/или рецидива опухоли; и/или (vii) уменьшение до некоторой степени одого или более симптомов, ассоциированных с раком.

Так, например, при лечении опухолей, «терапевтически эффективная доза» может вызвать уменьшение размеров опухоли по меньшей мере приблизительно на 5% по сравнению с базовым значением, например по меньшей мере приблизительно на 10%, или приблизительно на 20%, или приблизительно на 60% или более. Базовое значение может быть получено у индивидуумов, не подвергавшихся лечению.

Терапевтически эффективное количество терапевтического соединения может уменьшать размер опухоли или как либо иначе ослаблять симптомы у индивидуума. Специалист в данной области может самостоятельно определить это количество исходя из таких факторов, как масса индивидуума, тяжесть симптомов у индивидуума и конкретный состав препарата или выбранный способ его введения.

Термин «иммунный ответ» относится к действию, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитов, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцируемых вышеуказанными клетками или печенью (включая антитела, цитокины, и комплемент), которое приводит к селективному повреждению, деструкции или к удалению раковых клеток из организма человека.

Используемый здесь термин «антитело» включает полноразмерные антитела и любой их антигенсвязывающий фрагмент (т.е. «антигенсвязывающая часть») или их одиночные цепи.

Используемый здесь термин «антигенсвязывающая часть» антитела (или просто «часть антитела») означает один или более фрагментов антитела, сохраняющих способность специфически связываться с рецептором и его лигандом (например, PD-1). включая: (i) Fab-фрагмент, (ii) F(ab')₂-фрагмент; (iii) Fd-фрагмент, состоящий из VH- и CHI-доменов; (iv) Fv-фрагмент, (v) dAb-фрагмент (Ward et al., Nature, 341:544-546 (1989)), состоящий из VH-домена; и (vi) выделенную гипервариабельную область (CDR). Одноцепочечные антитела также входят в объем термина «антигенсвязывающая часть» антитела. Эти фрагменты антител получают стандартными методами, известными специалистам, и скринируют на возможность их использования таким же образом, как и интактные антитела.

Используемые здесь термины «моноклональное антитело» или «композиция моноклонального антитела» означают препарат молекул антитела из одной молекулярной композиции. Композиция моноклонального антитела обладает одной специфичностью связывания и аффинностью к конкретному эпитопу.

Используемый здесь термин «человеческое антитело» включает антитела, имеющие вариабельные области, в которых каркасные области и CDR-области происходят от последовательности иммуноглобулина человеческой зародышевой линии.

Используемый здесь термин «гуманизованное антитело» означает антитела, в которых последовательности CDR, происходящие от зародышевой линии млекопитающего другого вида, такого как мышь, были перенесены на каркасные человеческие последовательности. Дополнительные модификации каркасной области могут быть введены в человеческие каркасные последовательности.

Помимо антител, другие биологические молекулы могут действовать как ингибиторы контрольных точек, включая пептиды, обладающие аффинностью связывания с соответствующей мишенью.

Термин «лечение» или «терапия» относится к введению активного агента для лечения, облегчения, ослабления, временного ослабления, положительного изменения, корректировки, улучшения состояния, снижения его тяжести или положительного воздействия на данное состояние (например, заболевание) или симптомы данного состояния, или для предотвращения или замедления наступления симптомов, осложнений, биохимических признаков заболевания или какого-либо иного предотвращения или статистически значимого подавления дальнейшего развития заболевания, состояния или расстройства.

Используемый здесь термин «индивидуум» включает человека и животных, не являющихся человеком. Предпочтительными индивидуумами являются пациенты, нуждающиеся в усилении иммунного ответа. Эти способы являются особенно подходящими для лечения пациентов, страдающих расстройством, которое можно лечить путем усиления иммунного ответа, опосредуемого Т-клетками. В конкретном варианте осуществления изобретения, такие способы являются особенно подходящими для удаления раковых клеток in vivo.

Используемые здесь термины «одновременное введение» или «одновременно» или «совместно» означают, что введение осуществляют в один и тот же день. Термины «последовательное введение» или «последовательно» или «отдельно» означают, что введение осуществляют в разные дни.

«Одновременное введение», определенное в настоящем описании, включает введение иммуномодулятора и агента или проведение процедуры, включающей лечение ингибитором контрольных точек с интервалами приблизительно в 2 часа или приблизительно в 1 час или менее, а еще более предпочтительно, в одно и то же время.

«Отдельные» введение», определенное в настоящем описании, включает введение иммуномодулятора и агента или проведение процедуры, включающей лечение ингибитором контрольных точек с интервалами более, чем приблизительно 12 часов, или приблизительно 8 часов, или приблизительно 6 часов или приблизительно 4 часа или приблизительно 2 часа.

«Последовательное введение», определенное в настоящем описании, включает введение иммуномодулятора и химиотерапевтического агента, каждый из которых вводится во множестве аликвот и/или доз и/или в отдельные периоды времени. Иммуномодулятор может быть введен пациенту до и/или после введения ингибитора контрольных точек. Альтернативно, иммуномодулятор может непрерывно вводиться пациенту после лечения ингибитором контрольных точек.

Использование альтернативных вариантов (например, «или») следует понимать как одну, две или любую их комбинацию. Используемые здесь неопределенные артикли «а» или «an» следует понимать как относящиеся к «одному или более» любым упомянутым или перечисленным компонентам.

Используемый здесь термин «приблизительно» означает значение с отклонением от конкретного значения в приемлемом диапазоне, определенном специалистом в данной области техники отчасти в зависимости от способа измерения или оценки данной величины, то есть ограничений измерительной системы. Например, «приблизительно» может означать в пределах 1 или более, чем 1 стандартное отклонение в соответствии с известной практикой. Альтернативно, «приблизительно» может означать отклонение в диапазоне до 20%. Когда в описании и в формуле изобретения приводятся конкретные значения, то, если это не оговорено особо, значение «приблизительно» следует рассматривать как величину с отклонением от данного значения в приемлемом диапазоне.

В одном из аспектов настоящего изобретения, иммуномодулятор включает целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium. Примерами видов микобактерий, используемых в настоящем изобретении, являются M. vaccae, M. thermoresistibile, M. flavescens, M. duvalii, M. phlei, M. obuense, M. parafortuitum, M. sphagni, M. aichiense, M. rhodesiae, M. neoaurum, M. chubuense, M. tokaiense, M. komossense, M. aurum, M. w, M. tuberculosis, M. microti; M. africanum; M. kansasii, M. marinum; M. simiae; M. gastri; M. nonchromogenicum; M. terrae; M. triviale; M. gordonae; M. scrofulaceum; M. paraffinicum; M. intracellulare; M. avium; M. xenopi; M. ulcerans; M. diernhoferi, M. smegmatis; M. thamnopheos; M. flavescens; M. fortuitum; M. peregrinum; M. chelonei; M. paratuberculosis; M. leprae; M. lepraemurium и их комбинации.

Целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, предпочтительно, выбрана из M. vaccae, M. obuense, M. parafortuitum, M. aurum, M. indicus pranii, M. phlei и их комбинаций. Более предпочтительно, целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium представляет собой шероховатый вариант. Количество Mycobacterium, вводимое пациенту, является достаточным для вырабатывания протективного иммунного ответа у пациента, в результате чего иммунная система пациента будет вырабатывать эффективный иммунный ответ на рак или опухоль. В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к контейнеру, содержащему эффективное количество термоинактивированной Mycobacterium для ее использования в настоящем изобретении, и такое количество обычно составляет от 10³ до 10¹¹ микроорганизмов, предпочтительно, от 10⁴ до 10¹⁰ микроорганизмов, предпочтительно, от 10⁶ до 10¹⁰ микроорганизмов, а еще более предпочтительно, от 10⁶ до 10⁹ микроорганизмов. Эффективное количество термоинактивированной Mycobacterium для ее использования в настоящем изобретении может составлять от 10³ до 10¹¹ микроорганизмов, предпочтительно, от 10⁴ до 10¹⁰ микроорганизмов, более предпочтительно, от 10⁶ до 10¹⁰ микроорганизмов, а еще более предпочтительно, от 10⁶ до 10⁹ микроорганизмов. Наиболее предпочтительное количество термоинактивированной Mycobacterium для ее использования в настоящем изобретении составляет от 10⁷ до 10⁹ клеток или микроорганизмов. Обычно композиция согласно изобретению может быть введена человеку и животному в дозе от 10⁸ до 10⁹ клеток. Альтернативно, доза составляет от 0,01 мг до 1 мг или 0,1 мг до 1 мг микроорганизмов, приготовленных в виде суспензии или сухого препарата.

Особенно предпочтительными являются М. vaccae и М. obuense.

М. vaccae и М. obuense индуцируют комплексный иммунный ответ у хозяина. Лечение с помощью этих препаратов будет стимулировать врожденный иммунитет и иммунитет 1-го типа, включая активацию Th1 и макрофагов и активность цитотоксических клеток. Эти препараты также независимо подавляют неадекватные Th2-ответы по иммунорегуляторным механизмам. Это восстанавливает нормальный баланс иммунной системы.

Настоящее изобретение может быть использовано для лечения опухолевых заболеваний, таких как солидные или несолидные раковые опухоли. Используемый здесь термин «лечение» охватывает профилактику, ослабление, устранение и/или ингибирование опухолевого заболевания. Такие заболевания включают саркому, карциному, аденокарциному, меланому, миелому, бластому, глиому, лимфому или лейкоз. Репрезентативными раковыми заболеваниями являются, например, карцинома, саркома, аденокарцинома, меланома, неврома (бластома, глиома), мезотелиома и ретикулоэндотелиальные, лимфатические или гемопоэтические опухолевые заболевания (например, миелома, лимфома или лейкоз). В конкретных аспектах изобретения, новообразование, опухоль или рак включают аденокарциному легких, карциному легких, диффузную или интерстициальную карциному желудка, аденокарциному толстой кишки, аденокарциному предстательной железы, карциному пищевода, карциному молочной железы, аденокарциному поджелудочной железы, аденокарциному яичника, аденокарциному коры надпочечника, аденокарциному эндометрия или аденокарциному матки.

Неоплазия, опухоль и рак включают доброкачественные, злокачественные, метастазирующие и неметастазирующие заболевания и неоплазию, опухоль или рак на любой стадии (I, II, III, IV или V) или любого класса (G1, G2, G3 и т.д.), или неоплазию, опухоль, рак или метастазы, которые находятся на стадии прогрессирования, рецидива, стабилизации или ремиссии. Раковыми заболеваниями, которые можно лечить в соответствии с настоящим изобретением, являются, но не ограничиваются ими: рак мочевого пузыря, крови, кости, костного мозга, головного мозга, молочной железы, толстой кишки, пищевода, тонкого кищечника, десны, головы, почек, печени, легких, носоглотки, шеи, яичников, предстательной железы, кожи, желудка, яичек, языка или матки. Предпочтительно, рак выбран из рака предстательной железы, рака печени, рака почек, рака легких, рака молочной железы, рака прямой и ободочной кишки, рака поджелудочной железы, рака головного мозга, гепатоцеллюлярного рака, лимфомы, лейкоза, рака желудка, рака шейки матки, рака яичника, рака щитовидной железы, меланомы, рака головы и шеи, рака кожи и саркомы мягких тканей и/или других форм карциномы. Опухоль может быть метастазирующей или злокачественной.

Более предпочтительно, раком является рак поджелудочной железы, прямой и ободочной кишки, предстательной железы, яичника.

В одном из вариантов осуществления изобретения, терапия ингибитором контрольных точек, включающая введение блокирующего агента, выбранного из клеток, белка, пептида, антитела или антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций, в сочетании с целой клеткой непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, применяется для снижения или ингибирования метастазов первичной опухоли или рака в другие участки или образования или формирования метастазирующих опухолей или раковых опухолей в других участках, удаленных от первичных опухолей или раковых опухолей, и тем самым, для ингибирования или снижения рецидива опухоли или рака или прогрессирования опухоли или рака. Предпочтительно, блокирующий агент направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1, а также их комбинаций. Наиболее предпочтительно, блокирующий агент направлен против PD-L1.

В еще одном своем варианте, настоящее изобретение относится к комбинированной терапии для лечения рака, включающей введение иммуномодулятора и ингибитора(ов) контрольных точек, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клеток, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций, где иммуномодулятор содержит целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, способной вызывать сильные и длительные иммунные ответы с повышенным терапевтическим эффектом и более регулируемой токсичностью. Предпочтительно, блокирующий агент направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций. Наиболее предпочтительно, блокирующий агент направлен против PD-L1.

В еще одном своем варианте, настоящее изобретение относится к комбинированной терапии для лечения рака, включающей введение иммуномодулятора, который (i) стимулирует врожденный иммунитет и иммунитет 1-го типа, включая активацию Th1 и макрофагов и активность цитотоксических клеток; и (ii) независимо подавляет неадекватные Th2-ответы по иммунорегуляторным механизмам; и введение ингибитора контрольных точек, где иммуномодулятором является, но необязательно, целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, выбранной из M. vaccae или M. obuense.

В одном из своих вариантов, настоящее изобретение относится к способу лечения рака и/или профилактики образования метастазов с использованием ингибитора контрольных точек, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций, которые действуют синергически с целой клеткой непатогенной термоинактивированной Mycobacterium. Предпочтительно, используемый ингибитор контрольных точек направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций. Наиболее предпочтительно, блокирующий агент направлен против PD-L1.

В других вариантах осуществления изобретения, способы согласно изобретению включают одно или более из следующих действий: 1) снижение или ингибирование роста, пролиферации, миграции или инвазивности опухолевых или раковых клеток, которые могут образовывать или образуют метастазы, 2) снижение или ингибирование образования или формирования метастазов из первичной опухоли или рака в один или более других участков, мест или областей локализации, удаленных от первичной опухоли или рака; 3) снижение или ингибирование роста или пролиферации метастазов в одном или более других участков, мест или областей локализации, удаленных от первичной опухоли или рака после образования или формирования метастазов, 4) уменьшение или ингибирование образования или формирования дополнительных метастазов после их формирования или образования, 5) увеличение общей продолжительности жизни, 6) увеличение продолжительности жизни без прогрессирования заболевания или 7) стабилизацию заболевания.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, введение ингибитора контрольных точек, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций путем комбинированной терапии, проводимой с использованием целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, обеспечивает детектируемое или заметное улучшение состояния у данного индивидуума, такое как ослабление или облегчение одного или более негативных (физических) симптомов или осложнений, ассоциированных с наличием клеточной пролиферации или клеточного гиперпролиферативного расстройства, неоплазии, опухоли или рака, или метастазов, то есть, обеспечивает терапевтический эффект или полезный эффект.

Предпочтительно, блокирующий агент направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций. Наиболее предпочтительно, блокирующий агент направлен против PD-L1.

Терапевтической пользой или полезным эффектом являются любое объективное или субъективное, переходное, временное или длительное улучшение состояния или ослабление патологии, или замедление начала развития, снижение тяжести, продолжительности или частоты неблагоприятных симптомов, ассоциированных, или вызываемых ими, с клеточной пролиферацией или клеточным гиперпролиферативным расстройством, таким как неоплазия, опухоль или рак или метастазы. Это может приводить к увеличению продолжительности жизни. Удовлетворительная клиническая конечная точка способа лечения согласно изобретению достигается, например, в случае пошагового или частичного снижения тяжести, продолжительности или частоты одного или более из ассоциированных патологий, неблагоприятных симптомов или осложнений, или ингибирования или устранения одной или более физиологических, биохимических или клеточных манифестаций или признаков клеточной пролиферации или клеточных гиперпролиферативных расстройств, таких как неоплазия, опухоль или рак, или метастазы. Следовательно, терапевтическими эффектами или улучшениями могут быть, но не ограничиваются ими, деструкция пролиферирующих клеток-мишеней (например, неоплазии, опухоли или рака, или метастазов) или устранение одной или более, большинства или всех патологий, неблагоприятных симптомов или осложнений, ассоциированных, или вызываемых ими, с клеточной пролиферацией или клеточным гиперпролиферативным расстройством, таким как неоплазия, опухоль или рак или метастазы. Однако, терапевтический эффект или улучшение необязательно должны означать уничтожение или полную деструкцию всех пролиферирующих клеток-мишеней (например, неоплазии, опухоли или рака, или метастазов) или устранение одной или более, большинства или всех патологий, неблагоприятных симптомов или осложнений, ассоциированных, или вызываемых ими, с клеточной пролиферацией или клеточным гиперпролиферативным расстройством, таким как неоплазия, опухоль или рак или метастазы. Так, например, частичная деструкция клеточной массы опухоли или рака, или стабилизация массы, размера или числа клеток опухоли или рака путем ингибирования прогрессирования или роста опухоли или раковой опухоли может снизить смертность и увеличить продолжительности жизни, хотя бы на несколько дней, недель или месяцев, даже если остается какая-либо часть или большая часть массы опухоли или раковой опухоли, ее объема или клеток.

Конкретными не ограничивающими примерами терапевтического эффекта являются снижение объема неоплазии, опухоли или рака, или метастазов (размера или клеточной массы) или числа клеток; ингибирование или предотвращение увеличения объема неоплазии, опухоли или рака (например, стабилизация), замедление или ингибирование прогрессирования роста или метастазов неоплазии, опухоли или рака, или ингибирование пролиферации, роста или метастазов неоплазии, опухоли или рака.

В одном из вариантов осуществления изобретения, введение ингибитора контрольных точек, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций путем комбинированной терапии, проводимой с использованием целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, обеспечивает детектируемое или заметное улучшение состояния или общего ответа в соответствии с irRC (параметром, полученным путем оценки ответа в определенный период времени и исходя из опухолевой нагрузки), включая один или более из таких параметров, как (i) irCR - полное исчезновение всех поражений, независимо от того, были ли они зарегистрированы или нет, и отсутствие новых поражений (подтвержденных путем повторной оценки за период не более, чем 4 недели после опубликования данных первой оценки); (ii) irPR - снижение опухолевой нагрузки ≥50% по сравнению с базовым уровнем (подтвержденное путем последующей оценки по меньшей мере через 4 недели после первой регистрации). Предпочтительно, используемый ингибитор контрольных точек направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций.

Способ согласно изобретению не может давать немедленного эффекта. Например, лечение может сопровождаться увеличением числа клеток или массы неоплазии, опухоли или рака, но с течением времени может наблюдаться окончательная стабилизация или уменьшение клеточной массы, размера или числа клеток опухоли у данного индивидуума.

Другими неблагоприятными симптомами и осложнениями, ассоциированными с неоплазией, опухолью, раком и метастазами, которые могут быть ингибированы, снижены, уменьшены, отсрочены или предотвращены, являются, например, тошнота, отсутствие аппетита, вялость, боли и дискомфорт. Таким образом, конкретными неограничивающими примерами терапевтического эффекта являются частичное или полное устранение или уменьшение тяжести, продолжительности или частоты неблагоприятного симптома или осложнений, ассоциированных с клеточным гиперпролиферативным расстройством, или вызванных этим расстройством; улучшение качества жизни и/или самочувствия индивидуума, например, повышение его жизненной энергии, аппетита и психологического состояния.

Следовательно, терапевтический эффект или улучшение могут также включать субъективное улучшение качества жизни индивидуума, подвергаемого лечению. В дополнительном варианте осуществления изобретения, этот способ обеспечивает увеличение продолжительности жизни или продлевает жизнь (выживание) индивидуума. В еще одном варианте осуществления изобретения, этот способ улучшает качество жизни индивидуума.

В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения, введение ингибитора контрольных точек, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций, путем комбинированной терапии, проводимой с использованием целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, обеспечивает клинически релевантное увеличение уровня одного или более маркеров патологического состояния и прогрессирования заболевания, выбранных из одного или более показателей, таких как: (i) общая продолжительность жизни, (ii) продолжительность жизни без прогрессирования заболевания, (iii) общий показатель отклика, (iv) снижение тяжести метастазирующего заболевания, (v) уровни опухолевых антигенов в крови, таких как углеводный антиген 19.9 (CA19.9) и карциноэмбриональный антиген (CEA), или других антигенов в зависимости от опухоли, (vii) режим питания (масса тела, аппетит, сывороточный альбумин), (viii) купирование боли или использование аналгетиков, (ix) отношение CRP/альбумин. Предпочтительно, вводимый ингибитор контрольных точек направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций.

Лечение с использованием целых клеток непатогенных термоинактивированных M. vaccae и М. obuense приводит к вырабатыванию более комплексного иммунитета, включая не только развитие врожденного иммунитета и иммунитета типа 1, но и иммунорегуляцию, которая более эффективно восстанавливает соответствующие иммунные функции.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение субтерапевтического количества и/или длительное введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, В7-Н3, Н4-В7, В7-Н6, A2AR или IDO и их комбинаций. Предпочтительно, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение субтерапевтического количества блокирующего агента, направленного против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против PD-1 и/или PD-L1.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против PD-1 и/или PD-L1, и одновременное, отдельное или последовательное введение блокирующего антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является антитело, выбранное из группы, состоящей из ипилимумаба, ниволумаба, пембролизумаба, атезолизумаба, тремелимумаба (описанного в WO2006/101692), MEDI-0680 (Astra Zeneca), MDX-1105 (Medarex), MEDI-4736 (Medimmune, Inc.) или MSB001078C (Merck KGaA) и их комбинаций.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является антитело, выбранное из ипилимумаба, ниволумаба, пембролизумаба, атезолизумаба, тремелимумаба и их комбинаций.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является пембролизумаб (описанный в WO2012/135408), и где у указанного пациента присутствуют опухоли, дефицитные по несоответствующей репарации и ассоциированные с указанным раком, и/или наблюдается экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 10%, или 20%, или 30%, или 40%, или 50% или более опухолевых клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является ипилимумаб (описанный в патентах США NN 9868388, 8962804 и 8809562), который вводят внутривенно в дозе 2 мг/мг или менее в каждые три недели, необязательно, максимум за четыре вливания.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является ниволумаб (человеческое антитело, обозначаемое 5C4 и описанное в патенте США 8004449), который вводят внутривенно в дозе по меньшей мере 3, или 5 или 10 мг/мг или более в каждые четыре недели, где у указанного пациента наблюдается, но необязательно, экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 1%, 5% или 10% или более опухолевых клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является атезолизумаб (последовательность 21 в патенте США 8217149), который вводят внутривенно в дозе по меньшей мере 10 или 15 мг/мг или более в каждые три недели, где у указанного пациента наблюдается, но необязательно, экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 1%, 5% или 10% или более опухолевых клеток, и/или опухоль-инфильтрирующих иммунных клеток, выбранных из B-клеток и NK-клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против PD-L2.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против PD-L2, и одновременное, отдельное или последовательное введение блокирующего антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является антитело, выбранное из группы, состоящей из: AMP-224 (Amplimmune, Inc), BMS-986016 или MGA-271 и их комбинаций.

AMP-224, также известный как B7-DCIg, представляет собой гибридный растворимый рецептор PD-L2-Fc, описанный в WO2010/027827 и WO2011/066342.

BMS-986016 представляет собой полностью человеческое антитело, специфичное к человеческому LAG-3, которое было выделено у иммунизованных трансгенных мышей, экспрессирующих гены человеческого иммуноглобулина. Этот ген экспрессируется как антитело изотипа IgG4, которое включает стабилизирующую мутацию в шарнирной области (S228P), введенную для связывания с аттенюированным Fc-рецептором в целях снижения вероятности или устранения антитело- или комплемент-опосредуемой гибели клеток-мишеней. Аминокислотные последовательности тяжелой и легкой цепи BMS-986016 представлены в SEQ ID NN: 17 и 18 WO2015/042246.

В другом варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает внутривенное введение BS-988018 в дозе приблизительно от 20 мг до приблизительно 8000 мг в каждые три недели, необязательно, максимум за 48 вливаний.

В еще одном варианте осуществления изобретения, терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, где указанным блокирующим агентом является антитело, которое специфически связывается с В7-Н3, такое как GA271 (гуманизованное моноклональное антитело против В7-Н3, Macrogenics, Inc.) или другие антитела, описанные в публикации заявки на патент США № 2012-0294796, содержание которого вводится в настоящее описание посредством ссылки; или ингибиторы индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), такие как DI-метил-триптофан (Lunate) и другие соединения, описанные в патенте США № 7799776, содержание которого вводится в настоящее описание посредством ссылки.

Термин «комбинация», используемый в настоящем описании, включает введение ингибитора контрольных точек и одновременное, отдельное или последовательное введение целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium. В соответствии с этим, ингибитор контрольных точек и целые клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium могут присутствовать в одном и том же или в различных фармацевтических препаратах и вводятся в одно и то же время или в разное время.

Таким образом, целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium и ингибитор контрольных точек могут быть приготовлены в виде отдельных лекарственных средств для введения в одно и то же время или в разное время.

Предпочтительно, чтобы целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium и ингибитор контрольных точек были приготовлены в виде отдельных лекарственных средств для введения в разное время. При введении по отдельности и в разное время, сначала могут быть введены либо целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, либо ингибитор контрольных точек, однако, желательно сначала вводить ингибитор контрольных точек, а затем целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium. Кроме того, оба они могут быть введены в один и тот же день или в разные дни по одной и той же схеме или по различным схемам введения во время проведения курса лечения.

В одном из вариантов осуществления изобретения, курс лечения состоит из введения целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium ежедневно, еженедельно, раз в две недели или раз в месяц, одновременно с еженедельным введением ингибитора контрольных точек. В качестве альтернативы, целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium вводят до и/или после введения ингибитора контрольных точек.

В другом варианте осуществления изобретения, целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium вводят пациенту до и после введения ингибитора контрольных точек. То есть, в одном из вариантов осуществления изобретения, целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium вводят пациенту до и после введения указанного ингибитора контрольных точек.

При необходимости, в зависимости от индивидуальной переносимости пациентом курсов лечения, может быть осуществлена отсрочка введения дозы и/или ее снижение и корректировка схемы введения.

Альтернативно, введение ингибитора контрольных точек может быть осуществлено одновременно с введением эффективного количества целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium.

Целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium клеток может быть введена пациенту парентерально, перорально, подъязычно, интраназально или пульмонально. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, иммуномодулятор вводят парентеральным способом, выбранным из подкожной, интрадермальной, субдермальной, внутрибрюшинной, внутривенной и интравезикулярной инъекции. Альтернативно, способ парентерального введения может включать внутриопухолевую инъекцию указанной непатогенной термоинактивированной Mycobacterium и/или блокирующего агента.

У индивидуума, которому проводят терапию посредством ингибирования контрольных точек согласно изобретению, такая терапия и введение целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium могут быть проведены одновременно, отдельно или последовательно.

В одном из аспектов изобретения, эффективное количество целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium может быть введено в виде разовой дозы. Альтернативно, эффективное количество целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium может быть введено в виде многократных (повторных) доз, например, двух или более, трех или более, четырех или более, пяти или более, десяти или более или двадцати или более повторных доз. Целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium может быть введена приблизительно за период времени от 4 недель до 1 дня перед проведением терапии посредством ингибирования контрольных точек терапии, например, приблизительно за период времени от 4 недель до 1 недели, или приблизительно от 3 недель до 1 недели, или приблизительно от 3 недель до 2 недель. Введение может быть осуществлено в виде одноразовой дозы или дробных доз.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения, целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium используется для лечения опухолевого заболевания в комбинации с ингибитором контрольных точек, выбранным из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, B7-H3, B7-H4, B7-H6, A2AR или IDO и их комбинаций, где указанную Mycobacterium вводят индивидууму до, во время и/или после введения ингибитора контрольных точек. Предпочтительно, Mycobacterium используют для лечения опухолевого заболевания в комбинации с ингибиторами контрольных точек, направленными против PD-1, PD-L1, или CTLA-4 и их комбинаций.

В другом своем предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится к способу лечения, снижения, ингибирования или удаления неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение индивидууму (i) ингибитора контрольных точек, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, B7-H3, B7-H4, B7-H6, A2AR или IDO и их комбинаций, и (ii) иммуномодулятора, где указанный способ обеспечивает более высокую терапевтическую эффективность по сравнению с введением только ингибитора контрольных точек или только иммуномодулятора, где иммуномодулятор включает целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, и где указанный способ включает, но необязательно, введение субтерапевтического количества указанного ингибитора контрольных точек.

Предпочтительно, ингибитор контрольных точек направлен против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций. Наиболее предпочтительно, блокирующий агент направлен против PD-L1.

В другом своем предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится к способу лечения, снижения, ингибирования или удаления неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение индивидууму (i) ингибитора контрольных точек и (ii) иммуномодулятора, а предпочтительно, целой клетки термоинактивированной Mycobacterium, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против PD-1 и/или PD-L1.

В другом своем предпочтительном варианте, настоящее изобретение относится к способу лечения, снижения, ингибирования или удаления неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение индивидууму (i) ингибитора контрольных точек и (ii) целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение блокирующего агента, выбранного из антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1 и/или PD-L1 и их комбинаций, и где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение субтерапевтического количества указанного блокирующего антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или продолжительное введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В еще одном своем варианте, настоящее изобретение относится к способу лечения, снижения, ингибирования или удаления неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение индивидууму (i) двух или более ингибиторов контрольных точек и (ii) целой клетки непатогенной термоинактивированной Mycobacterium, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение двух или более блокирующих агентов, выбранных из клетки, белка, пептида, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, направленных против CTLA-4, PD-1 или PD-L1 и их комбинаций, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает, но необязательно, введение субтерапевтического количества любого из этих блокирующих агентов и/или их продолжительное введение.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения, целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium может быть приготовлена в виде лекарственного средства, вводимого пациенту в лекарственной форме.

В некоторых случаях, контейнером согласно изобретению могут быть флакон, ампула, шприц, капсула, таблетка или пробирка. В некоторых случаях, микобактерии могут быть лиофилизованы и приготовлены для ресуспендирования до введения. Однако, в других случаях, микобактерии суспендируют в объеме фармацевтически приемлемой жидкости. В некоторых своих наиболее предпочтительных вариантах, настоящее изобретение относится к контейнеру, содержащему одну унифицированную дозу микобактерий, суспендированных в фармацевтически приемлемом носителе, где такая унифицированная доза содержит приблизительно от 1×10⁶ до приблизительно 1×10¹⁰ микроорганизмов. В некоторых более конкретных вариантах осуществления изобретения, жидкость, содержащая суспендированные микобактерии, приготавливают в объеме приблизительно от 0,1 мл до 10 мл или приблизительно от 0,3 мл до 2 мл или приблизительно от 0,5 мл до 2 мл. Вышеуказанные композиции представляют собой идеальные унифицированные дозы для их применения в иммунотерапии, описанной в настоящей заявке.

Варианты, обсуждаемые в описании способов и/или композиции согласно изобретению, могут быть использованы в любом другом описанном здесь способе или в любой другой описанной здесь композиции. Таким образом, вариант, относящийся к одному способу или одной композиции, может быть также применен и к другим способам и композициям согласно изобретению.

В некоторых случаях, целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium вводят в конкретные участки на поверхности тела или во внутренние органы индивидуума. Так, например, композиции микобактерий согласно изобретению, например, композиции, содержащие, в частности, M. obuense, могут быть введены в участки, расположенные рядом с опухолями или рядом с лимфоузлами, так, чтобы осуществлялся дренаж ткани, окружающей опухоль. Таким образом, в некоторых случаях, участки введения микобактериальной композиции могут находиться рядом с задними отделами шеи, с миндалинами, с подмышечной областью, с паховой областью, с передними отделами шеи, с подчелюстной областью, с подподбородочной областью или с лимфоузлами надключичной области.

Целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium может быть введена пациенту с раком или опухолью(ями) в течение определенного периода времени, или до тех пор, пока не будет наблюдаться регрессия или стабилизация раковой опухоли. Целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium может быть также введена пациентам после регрессии или стабилизации рака или опухоли.

Микобактериальные композиции согласно изобретению могут содержать эффективное количество микобактерий, обычно диспергированных в фармацевтически приемлемом носителе. Термины «фармацевтически или фармакологически приемлемый» относятся к молекулярным частицам и композициям, которые не вызывают нежелательных, аллергических или других побочных реакций при введении животному, например, человеку, если это необходимо. Приготовление фармацевтической композиции, содержащей микобактерии, хорошо известно специалистам в данной области и описано в руководстве Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990. Кроме того, следует отметить, что препараты, вводимые животному (например, человеку), должны отвечать требованиям стерильности, апирогенности, общей безопасности и стандартам чистоты. Конкретным примером описанного здесь фармакологически приемлемого носителя является боратный буфер или стерильный физиологический раствор (0,9% NaCI).

Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, материалы для покрытий, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты (например, антибактериальные агенты, противогрибковые агенты), изотонические агенты, агенты, замедляющие абсорбцию, соли, консерванты, лекарственные средства, стабилизаторы лекарственных средств, гели, связующие вещества, наполнители, дезинтегрирующие агенты, лубриканты, подсластители, ароматизаторы, красители и т.п. и их комбинации, известные специалистам в данной области (см., например, Remington в Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, рр. 1289-1329).

В предпочтительном варианте осуществления изобретения, целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium вводят парентеральным способом, выбранным из подкожной, интрадермальной, субдермальной, внутрибрюшинной, внутривенной и интравезикулярной инъекции. Интрадермальная инъекция обеспечивает доставку всего количества микобактериальной композиции в слой дермы, который является доступным для «иммунного надзора», что приводит к вырабатыванию противоракового иммунного ответа и к стимуляции пролиферации иммунных клеток в локальных лимфоузлах.

Хотя в наиболее предпочтительных вариантах осуществления изобретения микобактериальные композиции вводят путем прямой интрадермальной инъекции, однако, в некоторых случаях, могут быть применены и другие способы введения. Таким образом, в некоторых случаях, целая клетка непатогенной термоинактивированной Mycobacterium согласно изобретению может быть введена путем инъекции, инфузии, непрерывной инфузии, внутривенно, интрадермально, внутриартериально, внутрибрюшинно, в область поражения, в стекловидное тело, интравагинально, ректально, местно, вовнутрь опухоли, внутримышечно, внутрибрюшинно, подкожно, под конъюнктиву, интравезикулярно, в слизистую, интраперикардиально, в пупочную область, офтальмически, перорально, интракраниально, внутрисуставно, в предстательную железу, интраплеврально, интратрахеально, интраназально, местно, локально, путем ингаляции (например, аэрозольной ингаляции), с помощью катетера, лаважа или другим методом или с использованием любой из вышеуказанных комбинаций, известных специалистам в данной области (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990).

Все публикации, упомянутые в приведенном выше описании, вводятся в настоящее описание посредством ссылки. Различные модификации и варианты описанных способов и систем согласно изобретению будут очевидны для специалиста в данной области и не выходят за рамки существа и объема настоящего изобретения. Хотя настоящее изобретение было описано на конкретных предпочтительных вариантах его осуществления, однако, следует отметить, что заявленное изобретение не должно быть чрезмерно ограничено такими конкретными вариантами его осуществления. Действительно, различные модификации описанных способов осуществления изобретения, которые являются очевидными для специалистов в области биохимии и иммунологии или в смежных областях, входят в объем прилагаемой формулы изобретения.

Настоящее изобретение более подробно проиллюстрировано на нижеследующих неограничивающих примерах.

Пример 1

Взрослым мышам C57BL/6 подкожно инъецировали в бок 10⁵ клеток клеточной линии рака поджелудочной железы, выделенных у мышей KPC (Hingorani et al. Cancer Cell, 2005, 7:469-48). Эти мышиные раковые клетки поджелудочной железы имеют мутации в генах Kras, p53 и Pdx-Cre (Hingorani et al., Cancer Cell, 2005, 7:469-48).

После размножения инъецированных опухолевых клеток до образования пальпируемой опухоли (день 0), мышей либо не обрабатывали, либо обрабатывали:

1) 0,1 мг М. obuense NTCT 13365/мышь, путем поочередных подкожных инъекций в загривок и в основание хвоста попеременно в течение 5 дней с 2-дневным перерывом в течение всего исследования;

2) 10 мг/кг анти-PDL-1 mAb или 10 мг/кг анти-PD 1 mAb внутрибрюшинно один раз в неделю;

3) комбинацией анти-PDL-1 mAb или 10 мг/кг анти-PD 1 mAb и М. obuense NTCT 13365 в дозе и по схеме, описанной выше для двух соединений, используемых по отдельности.

В течение всего исследования был проведен мониторинг роста опухоли для того, чтобы определить, может ли такая обработка снижать размер опухоли и увеличивать продолжительность жизни.

Данные, представленные на чертеже 1, показали, что у мышей, которые получали комбинацию анти-PDL-1 антитела и М. obuense NTCT 13365, наблюдалось дальнейшее уменьшение размера опухоли и исчезновение опухоли. Такое уменьшение размера опухоли было более выраженным, чем у мышей, обработанных лишь одним из указанных агентов. У необработанных мышей наблюдался неконтролируемый рост опухоли и эти мыши вскоре погибали от данного заболевания.

Пример 2

Эффекты комбинированной обработки IMM-101 и ингибиторами контрольных точек были исследованы на мышах C57BL/6, имеющих подкожные опухоли В16-F10.

Мышам вводили инъекцию на день 0 (D0). На D1, мыши были произвольно распределены на группы и получали всего 8 SC-инъекций IMM-101 в дозе 0,1 мг/мышь на D1, D3, D5, D7, D9, D11, D13 и D15 (половина выживших мышей) или D16 (половина выживших мышей) (Q2D×8) или всего 4 IP-инъекции анти-PD1 или анти-CTLA4 антитела в дозе 10 мг/кг (два раза в неделю в течение двух последовательных недель на D1, D5, D8 и D12: TW×2) отдельно или в комбинации. На 15-й и 16-й день, половина всех выживших мышей была исключена из испытания после последней обработки. Характеризацию иммунных опухоль-инфильтрирующих клеток и иммунных клеток селезенки (соотношение CD3⁺-CD8⁺-клеток и клеток FoxP3 Treg) количественно оценивали с помощью FACS-анализа (чертеж 3).

1. Применение иммуномодулятора в лечении, ослаблении, ингибировании или контроле рака у пациента, которому назначено проведение терапии посредством ингибирования контрольных точек, где указанная терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение антитела, выбранного из пембролизумаба, атезолизумаба, тремелимумаба, MGA-271, AMP-224, BMS-986016 и их комбинаций, где иммуномодулятор содержит целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium obuense, где введение указанного иммуномодулятора и проведение терапии посредством ингибирования контрольных точек осуществляют одновременно, отдельно или последовательно.

2. Применение по п. 1, где терапия посредством ингибирования контрольных точек включает введение субтерапевтического количества и/или продолжение лечения указанным антителом.

3. Применение по п. 1 или 2, где указанным антителом является пембролизумаб, и где у указанного пациента присутствуют опухоли, дефицитные по несоответствующей репарации и ассоциированные с указанным раком, и/или наблюдается экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 10%, или 20%, или 30%, или 40%, или 50% или более опухолевых клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

4. Применение по п. 1 или 2, где указанным антителом является атезолизумаб, который вводят внутривенно в дозе по меньшей мере 10 или 15 мг/мг или более в каждые три недели, где у указанного пациента наблюдается, но необязательно, экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 1%, 5% или 10% или более опухолевых клеток, и/или опухоль-инфильтрирующих иммунных клеток, выбранных из B-клеток и NK-клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

5. Применение по п. 1 или 2, где указанным блокирующим агентом является BMS-986016, вводимый внутривенно в дозе от 20 мг до 8000 мг в каждые две недели, необязательно, максимум за 48 вливаний.

6. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанный рак выбран из рака предстательной железы, рака печени, рака почек, рака легких, рака молочной железы, рака прямой и ободочной кишки, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака головного мозга, гепатоцеллюлярного рака, лимфомы, лейкоза, рака желудка, рака шейки матки, рака яичника, рака щитовидной железы, меланомы, карциномы, рака головы и шеи, рака кожи и саркомы мягких тканей.

7. Применение по любому из предшествующих пунктов, где указанный рак выбран из рака поджелудочной железы, рака прямой и ободочной кишки, рака предстательной железы или рака яичника.

8. Применение по любому из предшествующих пунктов, где рак является метастазирующим.

9. Применение по любому из предшествующих пунктов, где непатогенная термоинактивированная Mycobacterium obuense представляет собой преимущественно шероховатый вариант.

10. Применение по любому из предшествующих пунктов, где непатогенную термоинактивированную Mycobacterium obuense и/или антитело вводят парентерально, перорально, подъязычно, интраназально или пульмонально.

11. Применение по п. 10, где способ парентерального введения выбран из подкожного, интрадермального, субдермального, внутрибрюшинного, внутриопухолевого или внутривенного введения.

12. Применение по п. 10 или 11, где способ парентерального введения включает инъекцию внутрь опухоли.

13. Применение по любому из предшествующих пунктов, где введение непатогенной термоинактивированной Mycobacterium obuense осуществляют до и/или после терапии посредством ингибирования контрольных точек.

14. Способ лечения, снижения, ингибирования или контролирования неоплазии, опухоли или рака у индивидуума, где указанный способ включает одновременное, отдельное или последовательное введение индивидууму (i) ингибитора контрольных точек, выбранного из выбранного из пембролизумаба, атезолизумаба, тремелимумаба, MGA-271, AMP-224, BMS-986016 и их комбинаций, и (ii) иммуномодулятора, где иммуномодулятор включает целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium obuense.

15. Способ по п. 14, где указанный способ включает введение субтерапевтического количества и/или продолжение лечения указанным антителом.

16. Способ по п. 14 или 15, где указанным ингибитором контрольных точек является пембролизумаб, и где у указанного пациента присутствуют опухоли, дефицитные по несоответствующей репарации, и/или наблюдается экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 10%, или 20%, или 30%, или 40%, или 50% или более опухолевых клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

17. Способ по п. 14 или 15, где указанным ингибитором контрольных точек является атезолизумаб, где указанный атезолизумаб вводят внутривенно в дозе по меньшей мере 10 или 15 мг/мг или более в каждые три недели, где у указанного пациента наблюдается, но необязательно, экспрессия PD-L1 по меньшей мере в 1%, 5% или 10% или более опухолевых клеток и/или опухоль-инфильтрирующих иммунных клеток, выбранных из B-клеток и NK-клеток, как было определено с помощью иммуногистохимического анализа на антитело SP142.

18. Способ по п. 14 или 15, где указанным ингибитором контрольных точек является BMS-986016, вводимый внутривенно в дозе от 20 мг до 8000 мг в каждые две недели, необязательно, максимум за 48 вливаний.

19. Способ по любому из пп. 14-18, где указанные неоплазия, опухоль или рак ассоциируются с раком, выбранным из рака предстательной железы, рака печени, рака почек, рака легких, рака молочной железы, рака прямой и ободочной кишки, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака головного мозга, гепатоцеллюлярного рака, лимфомы, лейкоза, рака желудка, рака шейки матки, рака яичника, рака щитовидной железы, меланомы, карциномы, рака головы и шеи, рака кожи и саркомы мягких тканей.

20. Способ по п. 19, где указанные неоплазия, опухоль или рак ассоциируются с раком поджелудочной железы, прямой и ободочной кишки, предстательной железы или яичника.

21. Способ по п. 19, где неоплазия, опухоль или рак являются метастазирующими.

22. Способ по любому из пп. 14 или 19-21, где непатогенная термоинактивированная Mycobacterium obuense представляет собой шероховатый вариант.

23. Способ по п. 22, где целую клетку непатогенной термоинактивированной Mycobacterium obuense и/или ингибитор контрольных точек вводят парентерально, перорально, подъязычно, интраназально или пульмонально.

24. Способ по п. 23, где способ парентерального введения выбран из подкожного, интрадермального, субдермального, внутрибрюшинного, внутриопухолевого или внутривенного введения.

25. Способ по п. 23 или 24, где способ парентерального введения включает инъекцию вовнутрь опухоли.

26. Способ по любому из пп. 14 или 19-25, где количество вводимой непатогенной термоинактивированной Mycobacterium составляет от 10⁷ до 10⁹ клеток.