Комбинация антагониста pd-1 и эрибулина для лечения рака

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и касается лечения тройного негативного рака молочной железы. Для этого вводят антагонист PD-1 пембролизумаб в комбинации с эрибулином в эффективных дозах. Такая комбинированная терапия обеспечивает эффективное лечение данного вида рака молочной железы за счет синергетического действия компонентов комбинации. 6 н. и 12 з.п. ф-лы, 8 ил., 7 табл., 1 пр.

 

Ссылка на родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на патент США №62/128373, поданной 4 марта 2015 г., и предварительной заявкой на патент США №62/264068, поданной 7 декабря 2015 г., содержание которых полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.

Перечень последовательностей

Также прилагается перечень последовательностей, содержащий SEQ ID NO: 1-25, который полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к комбинированным способам лечения, пригодным для лечения рака молочной железы. В частности, настоящее изобретение относится к комбинированному способу лечения, который предусматривает антагонист белка Programmed Death 1 (PD-1) и эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

PD-1 распознается как важный участник в иммунной регуляции и поддержании периферической толерантности. PD-1 умеренно экспрессируется на наивных Т-, В- и NKT-клетках, и регулируется передачей сигнала рецепторов Т/В-клеток на лимфоцитах, моноцитах и миелоидных клетках (1).

Два известных лиганда для PD-1, PD-L1 (В7-Н1) и PD-L2 (B7-DC) экспрессируются в злокачественных опухолях человека, возникающих в различных тканях. В больших наборах образцов, например, рака яичника, почки, толстой и прямой кишки, поджелудочной железы, печени и меланомы, было показано, что экспрессия PD-L1 коррелирует с плохим прогнозом и сниженной общей выживаемостью независимо от последующего лечения (2-13). Сходным образом, было обнаружено, что экспрессия PD-1 на инфильтрирующих опухоли лимфоцитах указывает на дисфункциональные Т-клетки при раке молочной железы и меланоме (14-15) и коррелирует с плохим прогнозом при раке почки (16). Таким образом, было высказано предположение, что экспрессирующие PD-L1 опухолевые клетки взаимодействует с экспрессирующими PD-1T клетками для ослабления активации Т-клеток и уклонения раковых клеток от иммунологического надзора, тем самым способствуя нарушению иммунного ответа против опухоли.

Несколько моноклональных антител, которые ингибируют взаимодействие между PD-1 и одним или обоими лигандами PD-L1 и PD-L2, находятся в клинической разработке для лечения рака. Было высказано предположение о том, что эффективность таких антител может быть повышена при введении в комбинации с другими одобренными или экспериментальными способами лечения рака, например, излучением, хирургическим вмешательством, химиотерапевтическими средствами, нецеленными способами лечения, средствами, которые ингибируют другие сигнальные пути, которые подвергаются дисрегуляции в опухолях, и другими иммуномодулирующими средствами.

Краткое раскрытие настоящего изобретения

Согласно одному варианту осуществления в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума, предусматривающий введение индивидууму комбинированной терапии, которая содержит антагонист PD-1 и эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат).

Согласно другому варианту осуществления в настоящем изобретении предусмотрено лекарственное средство, содержащее антагонист PD-1, для применения в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью (например, эрибулина мезилатом) для лечения рака молочной железы или меланомы.

Согласно еще одному варианту осуществления в настоящем изобретении предусмотрено лекарственное средство, содержащее эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат), для применения в комбинации с антагонистом PD-1 для лечения рака молочной железы или меланомы.

Другие варианты осуществления предусматривают применение антагониста PD-1 при изготовлении лекарственного средства для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума при введении в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью (например, эрибулина мезилатом) и применение эрибулина или фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата) при изготовлении лекарственного средства для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума при введении в комбинации с антагонистом PD-1.

Согласно еще дополнительному варианту осуществления в настоящем изобретении предусмотрено применение антагониста PD-1 и эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата) при изготовлении лекарственных средств для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума. Согласно некоторым вариантам осуществления лекарственные средства содержат набор, и набор может также содержать листок-вкладыш в упаковке, содержащий инструкции для применения антагониста PD-1 в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью (например, эрибулина мезилатом) для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума.

Во всех вышеуказанных способах лечения, лекарственных средств и применениях антагонист PD-1 ингибирует связывание PD-L1 с PD-1 и предпочтительно также ингибирует связывание PD-L2 с PD-1. Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных способов лечения, лекарственных средств и применений антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-1 или PD-L1 и блокирует связывание PD-L1 с PD-1. Согласно одному варианту осуществления антагонист PD-1 представляет собой антитело к PD-1, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и причем тяжелые и легкие цепи содержат аминокислотные последовательности, показанные на фиг. 6 (SEQ ID NO: 21 и SEQ ID NO: 22).

Согласно всем вышеприведенным вариантам осуществления способов лечения, лекарственных средств и их применения в настоящем документе эрибулин представляет собой необязательно эрибулина мезилат.

Согласно некоторым вариантам осуществления вышеуказанных способов лечения, лекарственных средств и применений индивидуум представляет собой человека, а рак молочной железы представляет собой метастатический рак молочной железы и/или тройной негативный рак молочной железы.

Кроме того, согласно некоторым вариантам осуществления любого из вышеуказанных способов лечения, лекарственных средств и применений рак молочной железы или меланома при исследовании дает положительный результат на экспрессию одного или обоих PD-L1 и PD-L2. Согласно другим вариантам осуществления рак молочной железы или меланома характеризуется повышенной экспрессией PD-L1.

Согласно одному варианту осуществления вышеуказанных способов лечения, лекарственных средств и применений индивидуум представляет собой человека, а рак представляет собой рак молочной железы (например, метастатический и/или тройной негативный рак молочной железы), которая при исследовании дает положительный результат в отношении PD-L1 человека.

Согласно другому варианту осуществления вышеуказанных способов лечения, лекарственных средств и применений рак молочной железы предварительно лечат 0, 1 или 2 курсами химиотерапии в терапии метастатических форм рака.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 показаны аминокислотные последовательности CDR легкой цепи и тяжелой цепи для иллюстративного моноклонального антитела к PD-1, применимого в настоящем изобретении (SEQ ID NO: 1-6).

На фиг. 2 показаны аминокислотные последовательности CDR легкой цепи и тяжелой цепи для другого иллюстративного моноклонального антитела к PD-1, применимого в настоящем изобретении (SEQ ID NO: 7-12).

На фиг. 3 показаны аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и тяжелой цепи полной длины для иллюстративного моноклонального антитела к PD-1, применимого в настоящем изобретении (SEQ ID NO: 13 и SEQ ID NO: 14).

На фиг. 4 показаны аминокислотные последовательности альтернативных вариабельных областей легкой цепи для иллюстративного моноклонального антитела к PD-1, применимого в настоящем изобретении (SEQ ID NO: 15-17).

На фиг. 5 показаны аминокислотные последовательности альтернативных легких цепей для иллюстративного моноклонального антитела к PD-1, применимого в настоящем изобретении, с фиг. 5А, на которой показаны аминокислотные последовательности для легких цепей K09A-L-11 и K09A-L-16 (SEQ ID NO: 18 и 19 соответственно), и фиг. 5В, на которой показана аминокислотная последовательность легкой цепи K09A-L-17 (SEQ ID NO: 20).

На фиг. 6 показаны аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей для пембролизумаба (SEQ ID NO: 21 и 22, соответственно).

На фиг. 7 показаны аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей для ниволумаба (SEQ ID NO: 23 и 24, соответственно).

На фиг. 8 показан дизайн исследования фазы 1b/2, открытое, простое, многоцентровое клиническое исследование.

Подробное описание настоящего изобретения

I. Сокращения. На протяжении подробного описания и примеров настоящего изобретения будут использоваться следующие сокращения:

АЕ Нежелательное явление

ANC Абсолютное количество нейтрофилов

BOR Лучший общий ответ

CDR Определяющая комплементарность область

СНО Яичник китайского хомячка

CR Полный ответ

DFS Безрецидивная выживаемость

DLT Дозолимитирующая токсичность

DOR Продолжительность ответа

FFPE Фиксированный в формалине, заключенный в парафин

FR Каркасная область

IHC Иммуногистохимия или иммуногистохимическая

irRC Связанные с иммунитетом критерии ответа

mTNBC Метастатический тройной негативный рак молочной железы

NCBI Национальный центр биотехнологической информации

OR Общий ответ

OS Общая выживаемость

PD Прогрессирующее заболевание

PD-1 Рецептор Programmed Death 1

PD-L1 Лиганд 1 рецептора Programmed Death 1

PD-L2 Лиганд 2 рецептора Programmed Death 1

PFS Выживаемость без прогрессирования заболевания

РР Прогностическая вероятность

PR Частичный ответ

Q2W Одна доза каждые две недели

Q3W Одна доза каждые три недели

RECIST Критерии оценки ответа в солидных опухолях

SD Стабильное заболевание

VH Вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина

VK Вариабельная область легкой цепи каппа иммуноглобулина

I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Чтобы настоящее изобретение было более понятным, определенные технические и научные термины конкретно определены ниже. Если специально не определено в другом месте настоящего документа, все другие технические и научные термины, используемые в настоящем документе, характеризуются значением, обычно понимаемое специалистом в настоящей области техники, к которому относится настоящее изобретение.

Как используется в настоящем документе, включая прилагаемую формулу изобретения, единственные формы слов включают в себя их соответствующие множественные формы, если контекст явно не диктует иное.

«Приблизительно» при использовании для модификации числового параметра (например, дозы антагониста PD-1 (или эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата)) или продолжительности лечения с антагонистом PD-1 (или эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью (например, эрибулина мезилатом))) означает, что параметр может варьировать на 10% выше или ниже указанного численного значения для этого параметра.

«Введение» и «обработка», применительно к животному, человеку, экспериментальному субъекту, клетке, ткани, органу или биологической жидкости, относится к контакту экзогенного фармацевтического, терапевтического, диагностического средства или композиции с животным, человеком, субъектом, клеткой, тканью, органом или биологической жидкостью. Обработка клетки предусматривает контакт реагента с клеткой, а также контакт реагента с жидкостью, когда жидкость находится в контакте с клеткой. «Введение» и «обработка» также означают обработки in vitro и ex vivo, например, клетки, реагентом, диагностическим, связывающим соединением или другой клеткой. Термин «субъект» включает в себя любой организм, предпочтительно животное, более предпочтительно млекопитающее (например, крысу, мышь, собаку, кошку и кролика) и наиболее предпочтительно человека.

Используемый в настоящем документе термин «антитело» относится к любой форме антитела, которая проявляет желаемую биологическую или связывающую активность. Таким образом, он используется в самом широком смысле и конкретно охватывает, но без ограничения, моноклональные антитела (включая полноразмерные моноклональные антитела), поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), гуманизированные и приматизированные антитела, полностью человеческие антитела, химерные антитела и верблюжьи однодоменные антитела. «Исходные антитела» представляют собой антитела, полученные путем воздействия иммунной системы на антиген до модификации антител для предполагаемого применения, такой как гуманизация исходного антитела, производимой мышью, для использования в качестве терапевтического средства для человека.

В общем, структурная единица основного антитела содержит тетрамер. Каждый тетрамер включает в себя две идентичные пары полипептидных цепей, причем каждая пара содержит одну «легкую» (около 25 кДа) и одну «тяжелую» цепь (около 50-70 кДа). Амино-концевая часть каждой цепи включает в себя вариабельную область приблизительно от 100 до 110 или более аминокислот, в первую очередь ответственную за распознавание антигена. Карбокси-концевая часть тяжелой цепи может определять константную область, в основном ответственную за эффекторную функцию. Легкие цепи человека могут быть классифицированы как легкие цепи каппа и лямбда. Кроме того, тяжелые цепи человека можно классифицировать как мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон и определить изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. В легкой и тяжелой цепях вариабельная и константная области соединяются областью «J», содержащей приблизительно 12 или более аминокислот, причем тяжелая цепь также включает в себя «D» область из приблизительно 10 аминокислот. Смотрите в общем, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989).

Вариабельные области каждой пары легкая/тяжелая цепь образуют антителосвязывающий сайт. Таким образом, в целом, интактное антитело содержит два связывающих сайта. За исключением бифункциональных или биспецифических антител, оба связывающих сайта, как правило, одинаковы.

Как правило, вариабельные домены как тяжелой, так и легкой цепей содержат три гипервариабельные области, также называемые определяющими комплементарность областями (CDR), которые расположены в относительно консервативных каркасных областях (FR). CDR, как правило, выравниваются каркасными областями, что делает возможным их связывание с определенным эпитопом. В общем случае, от N-конца до С-конца, вариабельные домены как легкой, так и тяжелой цепей содержат FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Расположение аминокислот для каждого домена, как правило, соответствует определениям в Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5^th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32: 1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252: 6609-6616; Chothia, et al., (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 или Chothia, et al., (19879) Nature 342: 878-883.

Используемый в настоящем документе термин «гипервариабельная область» относится к аминокислотным остаткам антитела, которые ответственны за связывание антигена. Гипервариабельная область содержит аминокислотные остатки из «определяющей комплементарность области» или «CDR» (то есть CDRL1, CDRL2 и CDRL3 в вариабельном домене легкой цепи и CDRH1, CDRH2 и CDRH3 в вариабельном домене тяжелой цепи). Смотрите Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (определение областей CDR антитела по последовательности); смотрите также Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917 (определение областей CDR антитела по структуре). Используемый в настоящем документе термин остатки «каркаса» или «FR» относится к тем остаткам вариабельного домена, отличным от остатков гипервариабельной области, определенным в настоящем документе как остатки CDR.

Используемый в настоящем документе, если не указано иначе, «фрагмент антитела» или «антигенсвязывающий фрагмент» относится к антигенсвязывающим фрагментам антител, т.е. фрагментам антител, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном, связанным полноразмерным антителом, например, фрагментам, которые сохраняют одну или несколько областей CDR. Примеры антигенсвязывающих фрагментов включают в себя, но без ограничения, фрагменты Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv; димеры; линейные антитела; молекулы одноцепочечных антител, например, sc-Fv; нанотела и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

Антитело, которое «специфически связывается» с указанным белком-мишенью, представляет собой антитело, которое обладает преимущественным связыванием с этой мишенью по сравнению с другими белками, но эта специфичность не требует абсолютной специфичности связывания. Антитело считается «специфическим» для его предполагаемой мишени, если его связывание представляет собой определяющим для присутствия белка-мишени в образце, например, без получения нежелательных результатов, таких как ложные срабатывания. Антитела или их связывающие фрагменты, применимые в настоящем изобретении, будут связываться с белком-мишенью с аффинностью, которая по меньшей мере в два раза больше, предпочтительно по меньшей мере в десять раз больше, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз больше и наиболее предпочтительно по меньшей мере в 100 раз больше, чем аффинность с белками-мишенями. Используемый в настоящем документе термин «антитело» специфически связывается с полипептидом, содержащим данную аминокислотную последовательность, например, аминокислотную последовательность зрелой молекулы PD-1 человека или PD-L1 человека, если она связывается с полипептидами, содержащими эту последовательность, но не связывается с белками, лишенными этой последовательности.

«Химерное антитело» относится к антителу, в котором часть тяжелой и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителе, полученном от определенного вида (например, человека), или принадлежащему определенному классу или подклассу антителу, тогда как остальная часть цепи(ей) идентична или гомологична соответствующим последовательностям в антителе, полученном из другого вида (например, мыши), или принадлежащему другому классу или подклассу антителу, а также фрагменты таких антител, пока они проявляют желаемую биологическую активность.

«Человеческое антитело» относится к антителу, которое содержит только белковые последовательности иммуноглобулина человека. Человеческое антитело может содержать мышиные углеводные цепи, если они производятся у мыши, в мышиной клетке или в гибридоме, полученной из мышиной клетки. Аналогично, «антитело мыши» или «антитело крысы» относится к антителу, которое содержит только мышиные или крысиные иммуноглобулиновые последовательности, соответственно.

«Гуманизованное антитело» относится к формам антител, которые содержат последовательности из отличных от человеческих (например, мышиных) антител, а также человеческих антител. Такие антитела содержат минимальную последовательность, полученную из отличного от человеческого иммуноглобулина. В общем, гуманизированное антитело будет содержать по существу все из по меньшей мере одного и, как правило, двух вариабельных доменов, в которых все или по существу все гипервариабельные петли соответствуют таковым отличного от человеческого иммуноглобулина и все или практически все FR-области представляют собой последовательности человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело необязательно также будет содержать по меньшей мере часть константной области (Fc) иммуноглобулина, как правило, иммуноглобулина человека. Гуманизированные формы антител грызунов, как правило, будут содержать те же последовательности CDR исходных антител грызуна, хотя некоторые аминокислотные замены могут быть включены для увеличения аффинности, повышения стабильности гуманизированного антитела или по другим причинам.

«Противоопухолевый ответ», когда речь идет о пациенте с раком, подвергаемого лечению терапевтическим средством, таким как антагонист PD-1, означает по меньшей мере один положительный терапевтический эффект, такой как уменьшенное количество раковых клеток, уменьшенный размер опухоли, сниженная скорость инфильтрации раковых клеток в периферические органы, сниженная скорость метастазирования опухоли или роста опухоли или выживаемость без прогрессирования. Положительные терапевтические эффекты при злокачественной опухоли/раке можно измерить несколькими способами (смотрите, например, W.А. Weber, J. Null. Med. 50: 1S-10S (2009); Eisenhauer et al., выше). Согласно некоторым вариантам осуществления противоопухолевый ответ на антагонист PD-1 оценивают с использованием критериев RECIST 1.1, двумерного irRC или одномерного irRC. Согласно некоторым вариантам осуществления противоопухолевый ответ представляет собой любой из SD, PR, CR, PFS и DFS.

«Двумерный irRC» относится к набору критериев, описанных в Wolchok JD, et al. Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors: immune-related response criteria. Clin Cancer Res. 2009; 15(23): 7412-7420. Эти критерии используют двумерные измерения опухолей целевых поражений, которые получаются путем умножения самого длинного диаметра и самого длинного перпендикулярного диаметра (см²) каждого поражения.

«Биотерапевтическое средство» означает биологическую молекулу, такую как антитело или слитый белок, который блокирует передачу сигналов лиганда/рецептора в любом биологическом пути, который поддерживает поддержание и/или рост опухоли или подавляет противоопухолевый иммунный ответ.

Термины «рак», «раковый» или «злокачественный» относятся к физиологическому состоянию у млекопитающих или описывают его, который, как правило, характеризуется нерегулируемым ростом клеток. Примеры рака включают в себя рак молочной железы (например, метастатический и/или тройной негативный рак молочной железы) и меланому. Особенно предпочтительные типы рака молочной железы или меланомы, которые можно лечить в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя те, которые характеризуются повышенной экспрессией одного или обоих PD-L1 и PD-L2 в исследуемых образцах тканей.

Используемый в настоящем документе термин «CDR» означает определяющую комплементарность область(и) в вариабельной области иммуноглобулина, определенную с использованием системы нумерации Кабата, если не указано иное.

«Химиотерапевтическое средство» представляет собой химическое соединение, применимое для лечения рака/злокачественной опухоли. Классы химиотерапевтических средств включают в себя, без ограничения: алкилирующие средства, антиметаболиты, ингибиторы киназы, алкалоиды веретенного яда растений, цитотоксические/противоопухолевые антибиотики, ингибиторы топоизомеразы, фотосенсибилизаторы, антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (SERM), антипрогестероны, супрессоры эстрогеновых рецепторов (ERD), антагонисты рецепторов эстрогена, агонисты леутинизирующего гормона-высвобождающего гормона, антиандрогены, ингибиторы ароматазы, ингибиторы рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR), ингибиторы фактора роста сосудистого эндотелия (VEGF), антисмысловые олигонуклеотиды, которые ингибируют экспрессию генов, вовлеченных в аномальную клеточную пролиферацию или рост опухоли. Химиотерапевтические средства, применимые в способах лечения по настоящему изобретению, включают в себя цитостатические и/или цитотоксические средства.

Используемый в настоящем документе термин «chotia» означает систему нумерации антител, описанную в Al-Lazikani et al., JMB 273: 927-948 (1997).

«Содержащий» или такие вариации, как «содержать», «содержит» или «состоит из», используются в описании и формуле изобретения в инклюзивном смысле, то есть указывают на наличие указанных признаков, но не исключают присутствие или добавление дополнительных признаков, которые могут существенно улучшить работу или полезность любого из вариантов осуществления настоящего изобретения, если контекст не требует иного из-за недвусмысленного языка или необходимой импликации.

«По существу состоит из» и такие вариации, как «по существу состоят из» или «по существу состоящий из», используемые в настоящем документе и формуле изобретения, указывают на включение каких-либо повторяющихся элементов или группы элементов и необязательное включение других элементов аналогичной или другой природы, чем указанные элементы, которые существенно не изменяют основные или новые свойства указанной схемы дозирования, способа или композиции. В качестве неограничивающего примера антагонист PD-1, который по существу состоит из указанной аминокислотной последовательности, может также включать в себя одну или несколько аминокислот, включая в себя замены одного или нескольких аминокислотных остатков, которые не оказывают существенного влияния на свойства связывающего соединения.

«Консервативно модифицированные варианты» или «консервативная замена» означают замены аминокислот в белке на другие аминокислоты, имеющие схожие характеристики (например, заряд, размер боковой цепи, гидрофобность/гидрофильность, конформация и жесткость остова и т.д.), так что изменения часто могут быть выполнены без изменения биологической активности или другого желаемого свойства белка, такого как аффинность к антигену и/или специфичность. Специалисты в настоящей области техники признают, что, как правило, замены одной аминокислоты в несущественных областях полипептида существенно не изменяют биологическую активность (смотрите, например, Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin / Cummings Pub. Co., p.224 (4th Ed.)). Кроме того, замены структурно или функционально сходных аминокислот с меньшей вероятностью нарушают биологическую активность. Иллюстративные консервативные замены приведены в таблице 1 ниже.

«Диагностическое моноклональное антитело к PD-L» означает моноклональное антитело, которое специфически связывается со зрелой формой обозначенного PD-L (PD-L1 или PDL2), который экспрессируется на поверхности определенных клеток млекопитающих. У зрелого PD-L отсутствует предсекреторная лидерная последовательность, также называемая лидирующим пептидом. Термины «PD-L» и «зрелый PD-L» используются в настоящем документе взаимозаменяемо и означают одну и ту же молекулу, если не указано иное или не видно из контекста.

Используемое в настоящем документе диагностическое моноклональное антитело к PD-L1 человека или моноклональное антитело к hPD-Ll человека относится к моноклональному антителу, которое специфически связывается со зрелым PD-L1 человека. Зрелая молекула PD-L1 человека состоит из аминокислот 19-290 следующей последовательности:

Конкретные примеры диагностических моноклональных антител к PD-L1 человека, применимых в качестве диагностических моноклональных антител для иммуногистохимического (IHC) выявления экспрессии PD-L1 в фиксированных формалином заключенных в парафин (FFPE) срезах опухолевой ткани представляют собой антитело 20С3 и антитело 22С3, которые описаны в находящейся на рассмотрении международной патентной заявке PCT/US13/075932, поданной 18 декабря 2013 г. и опубликованной как публикация международной заявки WO 02014/100079 от 26 июня 2014 г. Еще одно моноклональное антитело к PD-L1 человека, которое, как сообщается, применимо для IHC обнаружения экспрессии PD-L1 в FFPE срезах ткани (Chen, B.J. et al., Clin Cancer Res 19: 3462-3473 (2013)), представляет собой кроличье моноклональное антитело к PD-L1 человека, общедоступное от Sino Biological, Inc. (Beijing, P.R. China; номер в каталоге 10084-R015).

Используемая в настоящем документе «дозолимитирующая токсичность» или «DLT» означает токсичность, возникающую во время окна оценки DLT и считающаяся связанной с пембролизумабом и/или эрибулином. Токсичность может включать в себя гематологическую токсичность (например, любую тромбоцитопению 4-й степени или нейтропению продолжительностью > 7 дней) и/или негематологические токсичности (например, эписклерит, увеит или ирит 2-й степени или выше, токсичность 4-й степени, любая токсичность 3-й степени, исключая тошноту, рвоту или диарею, которые контролируются медицинским вмешательством в течение 72 часов).

«Продолжительность ответа» определяется как время с даты, когда подтвержденный объективный ответ сначала документируется до даты PD или смерти из-за какой-либо причины для субъектов с подтвержденным PR или CR.

Используемая в настоящем документе «каркасная область» или «FR» означает вариабельные области иммуноглобулина, исключая области CDR.

«Гомология» относится к сходству последовательностей между двумя полипептидными последовательностями, когда они оптимально выровнены. Когда положение в обеих из двух сравниваемых последовательностей занято одной и той же аминокислотной субъединицей мономера, например, если положение в CDR легкой цепи двух разных антител занято аланином, тогда оба антитела гомологичны в этом положении. Процент гомологии представляет собой количество гомологичных положений, разделяемых двумя последовательностями, деленное на общее количество сравниваемых положений, × 100. Например, если 8 из 10 положений в двух последовательностях совпадают или гомологичны, когда последовательности оптимально выровнены, тогда две последовательности являются гомологичными на 80%. Как правило, сравнение проводится, когда две последовательности выровнены для обеспечения максимальной процентной гомологии. Например, сравнение может быть выполнено с помощью алгоритма выравнивания полинуклеотидов, BLAST^®, который представляет собой зарегистрированный товарный знак Национальной медицинской библиотеки, в котором параметры алгоритма выбраны так, чтобы обеспечить наибольшее совпадение между соответствующими последовательностями по всей длине соответствующих эталонных последовательностей.

Следующие ссылки относятся к алгоритмам BLAST^®, которые часто используются для анализа последовательности: Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3: 266-272; Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266: 131-141; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7: 649-656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17: 149-163; Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10: 67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol 219: 555-565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3: 66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36: 290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22: 2022-2039 и Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York. «Выделенное антитело» и «выделенный фрагмент антитела» относится к состоянию очистки и в этом контексте означает, что названная молекула по существу не содержит других биологических молекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другой материал, такой как клеточный дебрис и среды роста. Как правило, термин «выделенный» и «очищенный» не предназначен для обозначения полного отсутствия такого материала или отсутствия воды, буферов или солей, если они не присутствуют в количествах, которые существенно мешают экспериментальному или терапевтическому применению описанного в настоящем документе связывающего соединения.

«Выделенное антитело» и «выделенный фрагмент антитела» относится к состоянию очистки и в этом контексте означает, что названная молекула по существу не содержит других биологических молекул, таких как нуклеиновые кислоты, белки, липиды, углеводы или другой материал, такой как клеточный дебрис и среды роста. Как правило, термин «выделенный» не предназначен для обозначения полного отсутствия такого материала или отсутствия воды, буферов или солей, если они не присутствуют в количествах, которые существенно мешают экспериментальному или терапевтическому применению связывающего соединения, как описано в настоящем документе.

Используемый в настоящем документе термин «Кабат» означает систему выравнивания и нумерации иммуноглобулина, впервые предложенную Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD).

Используемое в настоящем документе «моноклональное антитело» или «mAb» или «Mab» относится к популяции по существу гомогенных антител, т.е. молекулам антител, содержащим популяции, идентичные по аминокислотной последовательности, за исключением возможных естественных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Напротив, обычные (поликлональные) препараты антител, как правило, включают в себя множество различных антител, имеющих различные аминокислотные последовательности в своих вариабельных доменах, особенно своих CDR, которые часто специфичны для разных эпитопов. Модификатор «моноклональный» указывает на характер антитела, получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и не должен истолковываться как требующий производства антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для применения в соответствии с настоящим изобретением могут быть получены с помощью гибридомного способа, впервые описанного Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, или могут быть получены способами рекомбинантной ДНК (смотрите, например, патент США №4816567). «Моноклональные антитела» также могут быть выделены из библиотек фаговых антител, используя способы, описанные в Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 и Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597, например. Смотрите также Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116: 731.

«Не отвечающий на лечение пациент» в отношении конкретного противоопухолевого ответа на лечение антагонистом PD-1 означает, что пациент не проявлял противоопухолевый ответ на назначенное лечение антагонистом PD-1.

«Пациент» относится к любому человеку, для которого требуется терапия или который участвует в клиническом исследовании, эпидемиологическом исследовании или используется в качестве контроля.

«Антагонист PD-1» означает любое химическое соединение или биологическую молекулу, которая блокирует связывание PD-L1, экспрессируемого в раковой клетке, с PD-1, экспрессируемым на иммунной клетке (Т-клетка, В-клетка или клетка натуральный киллер Т (NKT)) и предпочтительно также блокирует связывание PD-L2, экспрессируемого в раковой клетке, с экспрессированным иммунной клеткой PD-1. Альтернативные названия или синонимы для PD-1 и его лигандов включают в себя: PDCD1, PD1, CD279 и SLEB2 для PD-1; PDCD1L1, PDL1, В7Н1, В7-4, CD274 и В7-Н для PD-L1; и PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc и CD273 для PD-L2. Согласно любому из различных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения, в котором человека подвергают воздействию, антагонист PD-1 блокирует связывание PD-L1 человека с PD-1 человека и предпочтительно блокирует связывание как PD-L1 человека, так и PD-L2 человека с PD-1 человека. Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в NCBI локус №: NP_005009. Аминокислотные последовательности PD-L1 и PD-L2 человека можно найти в NCBI локус №: NP_054862 и NP_079515, соответственно.

Антагонисты PD-1, используемые согласно любому из различных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения, включают в себя моноклональное антитело (mAb) или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-1 или PD-L1 и предпочтительно специфически связывается с PD-1 человека или PD-L1 человека. Моноклональное антитело может представлять собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело и может включать в себя константную область человека. Согласно некоторым вариантам осуществления константную область человека выбирают из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и согласно предпочтительным вариантам осуществления константная область человека представляет собой константную область IgG1 или IgG4. Согласно некоторым вариантам осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбирают из группы, состоящей из фрагментов Fab, Fab'-SH, F(ab')₂, scFv и Fv.

Примеры моноклональных антител, которые связываются с PD-1 человека и применимы в способах лечения, лекарственных средствах и применениях настоящего изобретения, описаны в US 7488802, US 7521051, US 8008449, US 8354509, US 8168757, WO 2004/004771, WO 2004/072286, WO 2004/056875 и US 2011/0271358. Специфические моноклональные антитела к PD-1 человека, применимые в качестве антагониста PD-1 в способах лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему изобретению, включают в себя:

пембролизумаб (также известный как MK-3475), гуманизированное моноклональное антитело IgG4 со структурой, описанной в WHO Drug Information, Vol. 27, No. 2, p. 161-162 (2013), и который содержит аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей, показанные на фиг. 6, ниволумаб (BMS-936558), человеческое моноклональное антитело IgG4 со структурой, описанной в WHO Drug Information, Vol. 27, No. 1, p. 68-69 (2013), и который содержит аминокислотные последовательности тяжелых и легких цепей, показанные на фиг. 7; гуманизированные антитела h409A11, h409A16 и h409A17, которые описаны в публикации международной заявки WO 2008/156712, и АМР-514, которые разрабатываются MedImmune.

Примеры моноклональных антител, которые связываются с PD-L1 человека и применимы согласно любому из различных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения, описаны в публикациях международных заявок WO 02013/019906, W 02010/077634 А1 и US 8383796. Конкретные моноклональные антитела к PD-L1 человека, применимые в качестве антагониста PD-1 согласно различным аспектам и вариантам осуществления настоящего изобретения, включают в себя MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C и антитело, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 21, соответственно, публикация международной заявки WO 0201/019906.

Другие антагонисты PD-1, применимые согласно любому из различных аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения, предусматривают иммуноадгезию, которая специфически связывается с PD-1 или PD-L1 и предпочтительно специфически связывается с PD-1 человека или PD-L1 человека, например, слитый белок, содержащий внеклеточную или PD-1 связывающую часть PD-L1 или PD-L2, слитую с константной областью, такой как Fc-область молекулы иммуноглобулина. Примеры молекул иммуноадгезии, которые специфически связываются с PD-1, описаны в публикациях международных заявок WO 02010/027827 и WO 2011/066342. Специфические слитые белки, используемые в качестве антагониста PD-1 в способах лечения, лекарственных средствах и применениях по настоящему изобретению, включают в себя АМР-224 (также известный как B7-DCIg), который представляет собой слитый белок PD-L2-FC и связывается с PD-1 человека.

Согласно некоторым предпочтительным вариантам способов лечения, лекарственных средств и применений настоящего изобретения антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который содержит: (a) SEQ ID NO: 1, 2 и 3 CDR легкой цепи и SEQ ID NO: 4, 5 и 6 CDR тяжелой цепи; или (b) SEQ ID NO: 7, 8 и 9 CDR легкой цепи и SEQ ID NO: 10, 11 и 12 CDR тяжелой цепи.

Согласно другим предпочтительным вариантам осуществления способов лечения, лекарственных средств и применений настоящего изобретения антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-1 человека и содержит (а) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую SEQ ID NO: 13 или ее вариант, и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 15 или ее варианта; SEQ ID NO: 16 или ее варианта и SEQ ID NO: 17 или ее варианта. Вариант последовательности вариабельной области тяжелой цепи идентичен эталонной последовательности, за исключением того, что содержит до 17 консервативных аминокислотных замен в каркасной области (то есть вне CDR) и предпочтительно характеризуется наличием менее чем десяти, девяти, восьми, семи, шести, пяти, четырех, трех, двух или одной консервативной аминокислотной замены в каркасной области. Вариант последовательности вариабельной области легкой цепи идентичен эталонной последовательности, за исключением того, что в каркасной области (т.е. вне CDR) содержится до пяти консервативных аминокислотных замен, и предпочтительно характеризуется наличием менее четырех, трех, двух или одной консервативной аминокислотной замены в каркасной области.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления способов лечения, лекарственных средств и применений настоящего изобретения антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека и содержит (а) тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 14, и (b) легкую цепь, содержащую SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19 или SEQ ID NO: 20.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления способов лечения, лекарственных средств и применений настоящего изобретения антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело, которое специфически связывается с PD-1 человека и содержит (а) тяжелую цепь, содержащую SEQ ID NO: 14, и (b) легкую цепь, содержащую SEQ ID NO: 18.

Ниже в таблице 2 приведен список аминокислотных последовательностей иллюстративных моноклональных антител к PD-1 для использования в способах лечения, лекарственных средствах и применениях настоящего изобретения, а последовательности показаны на фиг. 1-5.

Используемое в настоящем документе выражение «PD-L1» или «PD-L2» означает любой обнаруживаемый уровень экспрессии указанного белка PD-L на поверхности клетки или обозначенной мРНК PD-L внутри клетки или ткани. Экспрессия белка PD-L может быть обнаружена с помощью диагностического антитела PD-L в анализе IHC среза опухолевой ткани или проточной цитометрии. Альтернативно, экспрессия белка PD-L опухолевыми клетками может быть обнаружена с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) с использованием связующего средства (например, фрагмента антитела, аффитела и т.п.), которое специфически связывается с целевой мишенью PD-L, PD-L1 или PD-L2. Способы определения и измерения экспрессии мРНК PD-L предусматривают ОТ-ПЦР и количественную ОТ-ПЦР в реальном времени.

Было описано несколько подходов для количественного определения экспрессии белка PD-L1 в анализах IHC срезов опухолевой ткани. Смотрите, например, Thompson, R. H., et al., PNAS 101 (49): 17174-17179 (2004); Thompson, R. H. et al., Cancer Res. 66: 3381-3385 (2006); Gadiot, J., et al., Cancer 117: 2192-2201 (2011); Taube, J. M. et al., Sci Transl Med 4: 127ra37 (2012) и Toplian, S. L. et al., New Eng. J Med. 366 (26): 2443-2454 (2012).

В одном подходе используется простая двоичная конечная точка положительной или отрицательной экспрессии для PD-L1 с положительным результатом, определяемым в процентах опухолевых клеток, которые проявляют гистологические признаки окрашивания мембран клеточной поверхности. Срез опухолевой ткани считается положительным в отношении экспрессии PD-L1, если составляет по меньшей мере 1%, а предпочтительно 5% от всех опухолевых клеток.

В другом подходе экспрессию PD-L1 в срезе опухолевой ткани количественно определяют в опухолевых клетках, а также в инфильтрирующих иммунных клетках, которые преимущественно содержат лимфоциты. Процент опухолевых клеток и инфильтрирующих иммунных клеток, которые демонстрируют окрашивание мембраны, отдельно оценивают как < 5%, от 5 до 9%, а затем с шагом 10% до 100%. Для опухолевых клеток экспрессия PD-L1 считается отрицательной, если оценка составляет < 5%, и положительной, если оценка составляет ≥ 5%. Экспрессия PD-L1 в иммунном инфильтрате сообщается как полуколичественное измерение, называемое скорректированным показателем воспаления (AIS), которое определяется путем умножения процента клеток с окрашенной мембраной на интенсивность инфильтрата, которая оценивается как отсутствие (0), умеренная (оценка 1, редкие лимфоциты), средняя (оценка 2, очаговая инфильтрация опухоли лимфогистиоцитарными агрегатами) или тяжелая (оценка 3, диффузная инфильтрация). Срез опухолевой ткани считается положительной в отношении экспрессии PD-L1 иммунными инфильтратами, если AIS составляет ≥ 5.

Уровень экспрессии мРНК PD-L можно сравнить с уровнями экспрессии мРНК одного или нескольких эталонных генов, которые часто используются в количественной ОТ-ПЦР, такого как убиквитин С.

Согласно некоторым вариантам осуществления уровень экспрессии PD-L1 (белка и/или мРНК) злокачественными клетками и/или путем проникновения иммунных клеток в опухоль определяется как «сверхэкспрессированный» или «повышенный» на основе сравнения с уровнем экспрессии PD-L1 (белка и/или мРНК) с помощью соответствующего контроля. Например, контрольный белок PD-L1 или уровень экспрессии мРНК может быть определен в количественном выражении в незлокачественных клетках того же типа или в срезе из соответствующей нормальной ткани. Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления экспрессию PD-L1 в образце опухоли определяют как повышенную, если белок PD-L1 (и/или мРНК PD-L1) в образце составляет по меньшей мере на 10%, 20% или 30% больше, чем в контроле.

«Биоаналог пембролизумаба» означает биологический продукт, произведенный организацией, отличной от Merck Sharpe & Dohme, и который одобрен регулирующим агентством в любой стране для маркетинга в виде биоаналога пембролизумаба. Согласно одному варианту осуществления биоаналог пембролизумаба содержит вариант пембролизумаба в качестве лекарственного вещества. Согласно одному варианту осуществления биоаналог пембролизумаба характеризуется такой же аминокислотной последовательностью, что и пембролизумаб.

Используемый в настоящем документе термин «пембролизумаб» означает моноклональное антитело, которое содержит последовательности тяжелой цепи и легкой цепи, которые идентичны последовательностям в пембролизумабе, за исключением трех, двух или одной консервативной аминокислотной замены в положениях, которые расположены вне CDR легкой цепи, и шесть, пять, четыре, три, две или одну консервативную аминокислотную замену, которые расположены вне CDR тяжелой цепи, например, варианты положений расположены в областях FR или в константной области. Другими словами, пембролизумаб и вариант пембролизумаба содержат идентичные CDR-последовательности, но отличаются друг от друга из-за того, что содержат консервативную аминокислотную замену не более чем трех или шести других положений в своей полноразмерной последовательности легкой и тяжелой цепи, соответственно. Вариант пембролизумаба по существу такой же, как пембролизумаб, в отношении следующих свойств: аффинность связывания с PD-1 и способность блокировать связывание каждого из PD-L1 и PD-L2 с PD-1.

Используемый в настоящем документе «критерий ответа RECIST 1.1» означает определения, изложенные в Eisenhauer et al., Е.А. et al., Eur. J. Cancer 45: 228-247 (2009), для целевых поражений или нецелевых поражений, в зависимости от ситуации, на основе контекста, в котором измеряется ответ.

«Отвечающий пациент» в отношении конкретного противоопухолевого ответа на лечение с комбинированной терапией, описанной в настоящем документе, означает, что пациент проявил противоопухолевый ответ.

«Образец», когда речь идет об опухоли или любом другом биологическом материале, упомянутом в настоящем документе, означает образец, который был удален из субъекта; таким образом, ни один из методов исследования, описанных в настоящем документе, не выполняется в субъекте или на нем.

«Длительный ответ» означает продолжительный терапевтический эффект после прекращения лечения терапевтическим средством или комбинированной терапией, описанной в настоящем документе. Согласно некоторым вариантам осуществления длительный ответ характеризуется продолжительностью, которая по меньшей мере такая же, как продолжительность лечения, или по меньшей мере в 1,5, 2,0, 2,5 или 3 раза дольше, чем продолжительность лечения.

«Срез ткани» относится к одной части или куску образца ткани, например, тонкому кусочку ткани, вырезанному из образца нормальной ткани или опухоли.

Используемый в настоящем документе термин «лечить» или «лечение» рака/злокачественной опухоли означает введение антагониста PD-1 и эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата) или другого терапевтического средства субъекту, характеризующемуся наличием рака или диагноза рака, для достижения хотя бы одного положительного терапевтического эффекта, такого как, например, уменьшенное количество раковых клеток, уменьшенный размер опухоли или опухолевой нагрузки, сниженная скорость инфильтрации раковых клеток в периферические органы или сниженная скорость метастазирования опухоли или роста опухоли. Положительные терапевтические эффекты при раке можно измерить несколькими способами (смотрите W. A. Weber, J. Null. Med. 50: 1S-10S (2009); Eisenhauer et al., выше). Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления ответ на антагонист PD-1 оценивают с использованием критериев RECIST 1.1 или irRC. Согласно некоторым вариантам осуществления лечение, достигаемое терапевтически эффективным количеством, представляет собой любой из PR, CR, PFS, DFS, OR или общую выживаемость (OS). Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления биомаркер сигнатуры генов согласно настоящему изобретению предсказывает, достигнет ли субъект с солидной опухолью PR или CR. Описанная в настоящем документе схема приема препарата, которая эффективна для лечения пациента с раком, может варьировать в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст и масса пациента, а также способности способа лечения вызывать противораковый ответ у субъекта. Хотя вариант осуществления способов лечения, лекарственных средств и применений настоящего изобретения может быть неэффективным для достижения положительного терапевтического эффекта у каждого субъекта, он должен делать это у статистически значимого количества субъектов, как определено любым статистическим тестом, известным в настоящей области техники, таким как t-критерий Стьюдента, критерий хи², U-критерий в соответствии с Манном и Уитни, критерий Крускал-Уоллиса (Н-критерий), критерий Джонкхера-Терпстра и критерий Уилкоксона.

«Опухоль», как она применяется к субъекту, у которого диагностировали или подозревают наличие злокачественной опухоли, относится к злокачественному или потенциально злокачественному новообразованию или массе ткани любого размера и включает в себя первичные опухоли и вторичные новообразования. Солидная опухоль представляет собой аномальный рост или массу ткани, которая, как правило, не содержит кисты или области жидкости. Различные типы солидных опухолей называются по типу клеток, которые их образуют. Примерами солидных опухолей являются саркомы, карциномы и лимфомы. Лейкозы (рак крови), как правило, не образуют солидных опухолей (Национальный онкологический институт, словарь онкологических терминов).

«Опухолевая масса», также называемая как «опухолевая нагрузка», относится к общему количеству опухолевого материала, распределенного по всему организму. Опухолевая нагрузка относится к общему количеству раковых клеток или общему размеру опухоли(ей) в организме, включая в себя лимфатические узлы и костные сужения. Опухолевая нагрузка может быть определена с помощью различных способов, известных в настоящей области техники, таких как, например, путем измерения размеров опухоли(ей) при удалении из субъекта, например, с использованием калиперов, или в то время как в теле используются способы визуализации, например, сканирование ультразвуком, сканирование костей, компьютерная томография (КТ) или магнитно-резонансная томография (МРТ).

Термин «размер опухоли» относится к общему размеру опухоли, который может быть измерен как длина и ширина опухоли. Размер опухоли может определяться различными способами, известными в настоящей области техники, такими как, например, путем измерения размеров опухоли(ей) при удалении из субъекта, например, с использованием калиперов, или в то время как в теле используются способы визуализации, например, сканирование костей, ультразвука, КТ или МРТ.

«Одномерный irRC относится к набору критериев, описанных в Nishino М, Giobbie-Hurder A, Gargano М, Suda М, Ramaiya NH, Hodi FS. "Developing a Common Language for Tumor Response to Immunotherapy: Immune-related Response Criteria using Unidimensional measurements." Clin Cancer Res. 2013; 19(14): 3936-3943). Эти критерии используют самый длинный диаметр (см) каждого поражения.

Используемые в настоящем документе «вариабельные области» или «V-область» означают сегмент цепей IgG, например, который представляет собой вариабельный в последовательности между различными антителами. Он распространяется до остатка Кабата 109 в легкой цепи и 113 в тяжелой цепи.

«Эрибулин» представляет собой синтетический аналог галихондрина В. Эрибулин также известен как ER-086526 и ему присвоен номер CAS 253128-41-5 и номер обозначения NCI US NSC-707389. Мезилатная соль эрибулина (эрибулина мезилат, который продается под торговым названием HALAVEN® и также известен как Е7389) одобрена для лечения пациентов с раком молочной железы, которые ранее получали по меньшей мере две химиотерапевтические схемы лечения для лечения метастатического заболевания, которые должны были включать в себя антрациклин и таксан в дополнительной терапии или терапии метастатических форм рака.

Химическое название эрибулина мезилата представляет собой 11,15:18,21:24,28-триэпокси-7,9-этано-12,15-метано-9H,15H-фуро[3,2-i]фуро[2',3':5,6]пирано[4,3-b][1,4]диоксациклопентакозин-5(4H)-он, 2-[(2S)-3-амино-2-гидроксипропил]гексакозагидро-3-метокси-26-метил-20,27-бис(метилен)-, (2R,3R,3aS,7R,8aS,9S,10aR,11S,12R,13aR,13bS,15S,18S, 21S,24S,26R,28R,29aS)-метансульфонат (соль), и его можно изобразить следующим образом:

Способы синтеза эрибулина описаны, например, в патенте США №6214865; патенте США №7982060; патенте США №8350067 и в патенте США №8093410, каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки. Эрибулина мезилат доступен в продаже и продается как HALAVEN^®.

Как отмечено выше, эрибулин необязательно может быть использован в настоящем изобретении в формах соли. Нет особых ограничений в отношении используемой соли, будь то соль неорганической кислоты или соль органической кислоты. Например, соль может быть выбрана из соли мезиловой кислоты (например, эрибулина мезилата), соли соляной кислоты, соли серной кислоты, цитрата, соли бромистоводородной кислоты, соли йодистоводородной кислоты, соли азотной кислоты, бисульфата, соли фосфорной кислоты, соли суперфосфорной кислоты, соли изоникотиновой кислоты, соли уксусной кислоты, соли молочной кислоты, соли салициловой кислоты, соли винной кислоты, соли пантотеновой кислоты, соли аскорбиновой кислоты, соли янтарной кислоты, соли малеиновой кислоты, соли фумаровой кислоты, соли глюконовой кислоты, соли сахариновой кислоты, соли муравьиной кислоты, соли бензойной кислоты, соли глутаминовой кислоты, соли метансульфоновой кислоты, соли этансульфоновой кислоты, соли бензолсульфоновой кислоты, соли пара-толуолсульфоновой кислоты, соли памовой кислоты (памоат) и так далее. Кроме того, приемлемо использовать соль алюминия, кальция, лития, магния, натрия, цинка и диэтаноламина.

Эрибулин, как правило, предоставляется в жидкой форме для внутривенного введения

I. СПОСОБЫ, ПРИМЕНЕНИЕ И ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА

Согласно одному аспекту настоящего изобретения в настоящем изобретении предусмотрен способ лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума, предусматривающий введение индивидууму комбинированной терапии, которая содержит антагонист PD-1 и эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат).

Комбинированная терапия может также содержать одно или несколько дополнительных терапевтических средств. Дополнительным терапевтическим средством может быть, например, химиотерапевтическое средство, отличное от эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата), биотерапевтическое средство, иммуногенное средство (например, аттенуированные раковые клетки, опухолевые антигены, антигенпрезентирующие клетки, такие как дендритные клетки, импульсно меченые опухолевым антигеном или нуклеиновыми кислотами, иммуностимулирующие цитокины (например, IL-2, IFNα2, GM-CSF) и клетки, трансфицированные генами, кодирующими иммуностимулирующие цитокины, такие как, без ограничения, GM-CSF).

Примеры химиотерапевтических средств включают в себя такие алкилирующие средства, как тиотепа и циклофосфамид; такие алкилсульфонаты, как бусульфан, имсульфан и пиросульфан; такие азиридины, как бензодопа, карбокен, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая в себя альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ацетогенины (особенно буллатацин и буллатинон); камптотецин (включая в себя синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая в себя его синтетические аналоги адозелезин, карцелезин и бизелезин); криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая в себя синтетические аналоги, KW-2189 и CBI-TMI); элейтеробин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; такие азотистые иприты, как хлорамбуцил, хлорнафазин, холофосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, гидрохлорид мехлорэтаминоксида, мелфалан, новемчин, фенстерин, преднимустин, трофосфамид, урациловый иприт; такие нитрозомочевины, как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; такие антибиотики, как ендииновые антибиотики (калихимицин, особенно калихимицин гамма1I и калихимицин омегаI1, смотрите, например, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994); динемицин, включая в себя динемицин А; такие бисфосфонаты, как клодронат, эсперамицин, а также хромофоры неокарзиностатина и хромофофоры хромопротеидов ендииновых антибиотиков), аклациномизины, актиномицин, автрамицин, азерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, каминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-L-норлейцин, доксорубицин (включая в себя морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2-пирролино-доксорубицин и дезоксидокорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, такие митомицины, как митомицин С, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, келамицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; такие антиметаболиты, как метотрексат и 5-фторурацил (5-ФУ); такие аналоги фолиевой кислоты, как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; такие пуриновые аналоги, как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамитрин, тиогуанин; такие пиримидиновые аналоги, как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флуксуридин; такие андрогены, как калустерон, дромоностанолона пропионат, эпитиостанолон, мепитиостан, тестолактон; такие угнетающие функции надпочечников средства, как аминоглютетимид, митотан, трилостан; такой заменитель фолиевой кислоты, как фролиновая кислота; ацеглатон; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновая кислота; енилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элформитин; эллиптиний ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; такие майтансиноиды, как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; разоксан; ризоксин; сизофуран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2''-трихлортриэтиламин; трихотецены (особенно токсин Т-2, верракурин А, роридин А и ангидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид («Ara-С»); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды, например, паклитаксел и доксетаксел; хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; такие аналоги платины, как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; винорелбин; новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы 9-нитрокамптотецин (RFS 2000); дифторметилорнитин (DMFO); такие ретиноиды, как ретиноевая кислота; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных. Также включены противогормональные средства, которые действуют таким образом, чтобы регулировать или ингибировать гормональное действие на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (SERM), включая в себя, например, тамоксифен, ралоксифен, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY117018, онапристон и торемифен (Fareston); ингибиторы ароматазы, которые ингибируют ферментативную ароматазу, которая регулирует образование эстрогенов в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглютетимид, мегестролацетат, экземестан, форматестан, фадрозол, ворозол, летрозол и анастрозол; и такие антиандрогены, как флутамид, нилутамид, бикалютамид, лейпролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанных.

Каждое терапевтическое средство в комбинированной терапии по настоящему изобретению может вводиться либо отдельно, либо в лекарственном средстве (также называемом в настоящем документе как фармацевтическая композиция), которое содержит одно или несколько терапевтических средств и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, вспомогательных веществ и разбавителей в соответствии со стандартной фармацевтической практикой.

Каждое терапевтическое средство в комбинированной терапии по настоящему изобретению может вводиться одновременно (то есть в одном и том же лекарственном средстве), параллельно (то есть в отдельных лекарственных средствах, вводимых один за другим в любом порядке) или последовательно в любом порядке. Последовательное введение особенно применимо, когда терапевтические средства в комбинированной терапии находятся в разных дозированных формах (одно средство представляет собой таблетку или капсулу, а другое средство представляет собой стерильную жидкость) и/или их вводят с разными графиками дозирования, например, химиотерапевтическое средство, которое вводят по меньшей мере ежедневно, и биотерапевтическое средство, которое вводят реже, например, один раз в неделю, раз в две недели или раз в три недели.

Согласно некоторым вариантам осуществления эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат) вводят перед введением антагониста PD-1, тогда как согласно другим вариантам осуществления эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат) вводят после введения антагониста PD-1.

Согласно некоторым вариантам осуществления по меньшей мере одно из терапевтических средств в комбинированной терапии вводят с использованием той же схемы дозирования (доза, частота и продолжительность лечения), которая обычно применяется, когда средство используется в качестве монотерапии для лечения того же вида рака. Согласно другим вариантам осуществления пациент получает более низкое общее количество по меньшей мере одного из терапевтических средств в комбинированной терапии, чем когда средство используется в качестве монотерапии, например, меньшие дозы, менее частые дозы и/или более короткая продолжительность лечения.

Каждое низкомолекулярное терапевтическое средство в комбинированной терапии по настоящему изобретению может вводиться перорально или парентерально, включая в себя внутривенный, внутримышечный, внутрибрюшинный, подкожный, ректальный, местный и трансдермальный пути введения.

Комбинированную терапию по настоящему изобретению можно применять до или после операции для удаления опухоли и ее можно применять до, во время или после лучевой терапии.

Согласно некоторым вариантам осуществления комбинированную терапию по настоящему изобретению вводят пациенту, который ранее не лечился посредством биотерапевтического или химиотерапевтического средства, то есть не получал предварительного лечения. Согласно другим вариантам осуществления комбинированную терапию вводят пациенту, который не смог достичь устойчивого ответа после предшествующей терапии с помощью биотерапевтического или химиотерапевтического средства, то есть подвергался лечению.

Комбинированную терапию по настоящему изобретению, как правило, применяют для лечения опухоли, которая достаточно велика для обнаружения пальпацией или способами визуализации, хорошо известными в настоящей области техники, такими как МРТ, ультразвуковое исследование или сканирование компьютерной осевой томографией (CAT).

Комбинированную терапию по настоящему изобретению предпочтительно вводят пациенту-человеку, у которого имеется рак молочной железы или меланома, которые согласно исследованиям характеризуется положительным результатом в отношении экспрессии PD-L1. Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления экспрессия PD-L1 обнаруживается с использованием диагностического антитела к PD-L1 человека или его антигенсвязывающего фрагмента в анализе IHC на FFPE или срезе замороженной ткани образца опухоли, удаляемой у пациента. Как правило, врач пациента заказывает диагностический тест для определения экспрессии PD-L1 в образце опухолевой ткани, удаляемой у пациента, до начала лечения посредством антагониста PD-1 и эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата), но предполагается, что врач может заказать первый или последующие диагностические тесты в любое время после начала лечения, например, после завершения цикла лечения.

Выбор схемы приема лекарственного средства (также называемой в настоящем документе как схема введения) для комбинированной терапии по настоящему изобретению зависит от нескольких факторов, включающих в себя скорость циркуляции сыворотки или ткани субъекта, уровень симптомов, иммуногенность субъекта и доступность клеток-мишеней, ткани-мишени или органа-мишени у подвергаемого лечению человека. Предпочтительно, схема приема лекарственного средства максимизирует количество каждого терапевтического средства, доставляемого пациенту, в соответствии с приемлемым уровнем побочных эффектов. Соответственно, количество дозы и частота дозирования каждого биотерапевтического и химиотерапевтического средства в комбинации частично зависят от конкретного терапевтического средства, тяжести подвергаемой лечению злокачественной опухоли/рака и характеристик пациента. Доступны рекомендации по выбору подходящих доз антител, цитокинов и малых молекул. Смотрите, например, Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd., Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348: 601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341: 1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344: 783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342: 613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348: 24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343: 1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed.); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002). Определение подходящей схемы приема лекарственного средства может быть сделано клиницистом, например, с использованием параметров или факторов, известных или предполагаемых в настоящей области техники, для воздействия на лечение или прогнозируемого воздействия на лечение и будет зависеть, например, от истории болезни пациента (например, предыдущей терапии), типа и стадии подлежащего лечению рака и биомаркеров ответа на один или несколько терапевтических средств в комбинированной терапии.

Биотерапевтические средства в комбинированной терапии по настоящему изобретению могут вводиться путем непрерывной инфузии или с помощью доз с такими интервалами, как, например, ежедневно, через день, три раза в неделю или один раз в неделю, в две недели, в три недели, ежемесячно, раз в два месяца и т.д. Общая недельная доза, как правило, составляет по меньшей мере 0,05 мкг/кг, 0,2 мкг/кг, 0,5 мкг/кг, 1 мкг/кг, 10 мкг/кг, 100 мкг/кг, 0,2 мг/кг, 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 10 мг/кг, 25 мг/кг, 50 мг/кг массы тела или более. Смотрите, например, Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349: 427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456; Portielji et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144.

Согласно некоторым вариантам осуществления, в которых используется моноклональное антитело к PD-1 человека в качестве антагониста PD-1 в комбинированной терапии, схема приема лекарственного средства будет содержать введение моноклонального антитела к PD-1 человека в дозе 1, 2, 3, 5 или 10 мг/кг с интервалом приблизительно 14 дней (± 2 дня) или приблизительно 21 день (± 2 дня) или приблизительно 30 дней (± 2 дня) на протяжении всего курса лечения.

Согласно другим вариантам осуществления, в которых используется моноклональное антитело к PD-1 человека в качестве антагониста PD-1 в комбинированной терапии, схема приема лекарственного средства будет содержать введение моноклонального антитела к PD-1 человека в дозе от приблизительно 0,005 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг, с повышением дозы у одного и того же пациента. Согласно другим вариантам осуществления повышения дозы интервал между дозами будет постепенно сокращаться, например, приблизительно 30 дней (± 2 дня) между первой и второй дозой, приблизительно 14 дней (± 2 дня) между второй и третьей дозами. Согласно некоторым вариантам осуществления интервал дозирования будет составлять приблизительно 14 дней (± 2 дня) для доз после второй дозы.

Согласно некоторым вариантам осуществления субъекту будет вводиться внутривенная (IV) инфузия лекарственного средства, содержащего любой из описанных в настоящем документе антагонистов PD-1.

Согласно одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения антагонист PD-1 в комбинированной терапии представляет собой пембролизумаб, который вводят внутривенно в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг Q2W, 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W и 10 мг Q3W.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения антагонист PD-1 в комбинированной терапии представляет собой пембролизумаб, который вводят в жидком лекарственном средстве в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q2W, 2 мг/кг Q2W, 3 мг/кг Q2W, 5 мг/кг Q2W, 10 мг Q2W, 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W, 3 мг/кг Q3W, 5 мг/кг Q3W, 10 мг Q3W и эквивалентов фиксированной дозы любой из этих доз, такой как 200 мг Q3W. Согласно некоторым вариантам осуществления пембролизумаб вводят в виде жидкого лекарственного средства, которое содержит 25 мг/мл пембролизумаба, 7% (w/v) сахарозы, 0,02% (w/v) полисорбата 80 в гистидиновом буфере с концентрацией 10 мМ, pH 5,5, и выбранную дозу лекарственного средства вводят путем внутривенной инфузии в течение периода времени, составляющего приблизительно 30 минут.

Оптимальная доза для пембролизумаба в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью может быть идентифицирована путем повышения дозы одного или обоих из этих средств. Согласно одному варианту осуществления эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат) вводят внутривенно в течение приблизительно 2-5 минут в дозе 1,4 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла, а пембролизумаб вводят внутривенно в течение 30 минут в дозе 200 мг в 1-й день 21-дневного цикла.

На фиг. 8 показана схема исследования фазы 1b/2, открытого, простого, многоцентрового клинического испытания. В общей сложности приблизительно 95 взрослых пациентов могут быть включены в исследование, включая в себя двенадцать в фазе 1b и 83 в фазе 2 исследования, причем 80 пациентов оцениваются как подлежащие анализу для первичного анализа. Дозолимитирующая токсичность (DLT) комбинированной схемы введения пембролизумаба и эрибулина может быть определена в части фазы lb клинического испытания, которая может включать в себя одну начальную вводную когорту, в которой по меньшей мере шесть пациентов (до максимума двенадцать) могут принимать эрибулина мезилат в дозе 1,4 мг/м² (эквивалентно 1,36 мг/м² эрибулина [выраженный в виде свободного основания]), вводимого внутривенно (IV) в дни 1 и 8, и пембролизумаб в дозе 200 мг IV в 1-й день 21-дневного цикла (величина дозы 1). Если у одного или менее из шести пациентов DLT составляет величину дозы 1, эта схема введения может быть выбрана для применения в части фазы 2 клинического исследования. В противном случае доза эрибулина может быть снижена до 1,1 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла (величина дозы 0). Если один или менее из шести пациентов испытывают DLT, часть фазы 2 клинического испытания может продолжаться с использованием величины дозы 0, как показано на фиг. 8. В части фазы 2 клинического испытания пациенты могут быть включены в исследование в двух когортах в соответствии с получением предшествующей химиотерапии при терапии метастатических форм рака (отсутствие по сравнению с 1-2 предшествующими курсами). Пациенты могут проходить лечение до тех пор, пока не будет продемонстрирована клиническая польза, или до тех пор, пока не начнется интеркуррентное заболевание, неприемлемая токсичность, прогрессирование заболевания, отказ от согласия или смерть.

Согласно другому варианту осуществления эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат) вводят в дозе 1,4 мг/м² в дни 1 и 15 28-дневного цикла, а пембролизумаб вводят внутривенно в дозе 200 мг в 1-й день 21-дневного цикла.

Согласно другому варианту осуществления, если вышеуказанные комбинации доз не переносятся пациентом, то доза эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилат) снижается до 1,1 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла (или дни 1 и 15 28-дневного цикла).

Согласно другому варианту осуществления, если вышеуказанные комбинации доз не переносятся пациентом, то доза эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли (например, эрибулина мезилата) снижается до 0,7 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла (или дни 1 и 15 28-дневного цикла).

Согласно некоторым вариантам осуществления пациента выбирают для лечения комбинированной терапией по настоящему изобретению, если пациенту был поставлен диагноз рака молочной железы, которая, возможно, представляет собой метастатический рак молочной железы и/или тройной негативный рак молочной железы.

В настоящем изобретении также предусмотрено лекарственное средство, которое содержит описанный выше антагонист PD-1 и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Когда антагонист PD-1 представляет собой биотерапевтическое средство, например, моноклональное антитело, антагонист может быть получен в клетках СНО с использованием традиционной культуры клеток и технологий восстановления/очистки.

Согласно некоторым вариантам осуществления лекарственное средство, содержащее антитело к PD-1 в качестве антагониста PD-1, может быть предусмотрено в виде жидкой композиции или получено путем восстановления лиофилизированного порошка стерильной водой для инъекций перед применением. В публикации международной заявки WO 2012/135408 описано получение жидких и лиофилизированных лекарственных средств, содержащих пембролизумаб, которые пригодны для применения в настоящем изобретении. Согласно некоторым вариантам осуществления лекарственное средство, содержащее пембролизумаб, предусмотрено в стеклянном флаконе, который содержит приблизительно 100 мг пембролизумаба в 4 мл раствора.

В настоящем изобретении также предусмотрено лекарственное средство, которое содержит эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат) и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Антагонист PD-1 и эрибулин или его фармацевтически приемлемая соль (например, эрибулина мезилат), описанные в настоящем документе, могут быть предусмотрены в виде набора, который содержит первый контейнер и второй контейнер и листок-вкладыш в упаковке. Первый контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего антагонист PD-1, второй контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль (например, эрибулина мезилат) и листок-вкладыш в упаковке или этикетка содержит инструкции по лечению пациента с раком молочной железы с использованием лекарственных средств. Первый и второй контейнеры могут содержать одну и ту же или разные формы (например, флаконы, шприцы и бутылки) и/или материалы (например, пластик или стекло). Набор может дополнительно содержать другие материалы, которые могут быть применимы при введении лекарственных средств, такие как разбавители, фильтры, мешки и системы для внутривенного введения, иглы и шприцы. Согласно некоторым предпочтительным вариантам осуществления набора антагонист PD-1 представляет собой антитело к PD-1, а в инструкциях указано, что лекарственные средства предназначены для применения при лечении пациента с раком молочной железы, исследование которой показало положительный результат в отношении экспрессии PD-L1 посредством IHC анализа.

Эти и другие аспекты настоящего изобретения, включающие в себя приведенные ниже примеры конкретных вариантов осуществления, будут очевидны из приведенных в настоящем документе идей.

Иллюстративные конкретные варианты осуществления настоящего изобретения

1. Способ лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума, предусматривающий введение индивидууму комбинированной терапии, которая содержит антагонист PD-1 и эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль.

2. Способ по варианту осуществления 1, при котором антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

3. Способ по варианту осуществления 1 или 2, при котором фармацевтически приемлемая соль эрибулина представляет собой эрибулина мезилат.

4. Лекарственное средство, содержащее антагонист PD-1 для применения в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума, причем антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

5. Лекарственное средство, содержащее эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в комбинации с антагонистом PD-1 для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума.

6. Лекарственное средство по варианту осуществления 4 или 5, которое дополнительно содержит фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

7. Применение антагониста PD-1 при изготовлении лекарственного средства для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума при введении в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью.

6. Применение эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственного средства для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума при введении в комбинации с антагонистом PD-1.

7. Применение антагониста PD-1 и эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли при изготовлении лекарственных средств для лечения рака молочной железы или меланомы у индивидуума.

8. Набор, который содержит первый контейнер, второй контейнер и листок-вкладыш в упаковке, причем первый контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего антагонист к PD-1, второй контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль, и листок-вкладыш в упаковке содержит инструкции для лечения индивидуума от рака молочной железы с применением лекарственных средств.

9. Набор по варианту осуществления 8, в котором в инструкциях указано, что лекарственные средства предназначены для применения при лечении индивидуума, характеризующегося наличием рака молочной железы, исследование которой показало положительный результат в отношении экспрессии PD-L1 посредством иммуногистохимического (IHC) анализа.

10. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления 1-9, при котором индивидуум представляет собой человека, а антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-L1 человека и блокирует связывание PD-L1 человека с PD-1 человека.

11. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 9, при котором антагонист PD-1 представляет собой MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C или моноклональное антитело, которое содержит вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи SEQ ID NO: 24 и SEQ ID NO: 21, соответственно, в публикации международной заявки WO 0201/019906.

12. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления с 1 по 9, при котором индивидуум представляет собой человека, а антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-1 человека и блокирует связывание PD-L1 человека с PD-1 человека.

13. Способ, лекарственное средство, применение или набор по варианту осуществления 12, при котором антагонист PD-1 также блокирует связывание PD-L2 человека с PD-1 человека.

14. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 13, при котором моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит: (a) CDR легкой цепи SEQ ID NO: 1, 2 и 3 и CDR тяжелой цепи SEQ ID NO: 4, 5 и 6; или (b) CDR легкой цепи SEQ ID NO: 7, 8 и 9 и CDR тяжелой цепи SEQ ID NO: 10, 11 и 12.

15. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 13, при котором моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDR легкой цепи SEQ ID NO: 7, 8 и 9 и CDR тяжелой цепи SEQ ID NO: 10, 11 и 12.

16. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 13, при котором антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело к PD-1, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и причем тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 21, а легкая цепь содержит SEQ ID NO: 22.

17. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 13, при котором антагонист PD-1 представляет собой моноклональное антитело к PD-1, которое содержит тяжелую цепь и легкую цепь, и причем тяжелая цепь содержит SEQ ID NO: 23, а легкая цепь содержит SEQ ID NO: 24.

18. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления 10-17, при котором рак молочной железы представляет собой солидную опухоль.

19. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления 10-17, при котором рак молочной железы представляет собой тройной негативный рак молочной железы.

20. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления 10-17, при котором рак молочной железы является метастатическим.

21. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления 10-17, при котором индивидуум ранее не подвергался лечению от рака молочной железы.

22. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления 10-21, при котором рак молочной железы является положительным в отношении PD-L1 человека.

23. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 22, при котором экспрессия PD-L1 человека повышается.

25. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 13, при котором антагонист PD-1 представляет собой пембролизумаб, вариант пембролизумаба, биоаналог пембролизумаба или ниволумаб.

26. Способ, лекарственное средство, применение или набор варианта осуществления 25, при котором пембролизумаб составляют в виде жидкого лекарственного средства, которое содержит 25 мг/мл пембролизумаба, 7% (w/v) сахарозы, 0,02% (w/v) полисорбата 80 в гистидиновом буфере с концентрацией 10 мМ и pH 5,5.

27. Способ, лекарственное средство, применение или набор по любому из вариантов осуществления с 1 по 26, при котором эрибулин представляет собой эрибулина мезилат.

28. Способ лечения человека с диагнозом рака молочной железы, предусматривающий введение индивидууму комбинированной терапии, которая содержит пембролизумаб и эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль, причем эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе 1,4 мг/м², 1,1 мг/м² или 0,7 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла, а пембролизумаб вводят в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W и 200 мг Q3W.

29. Лекарственное средство, содержащее пембролизумаб для применения в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью, для лечения рака молочной железы у индивидуума-человека по способу, предусматривающему введение индивидууму эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли в дозе 1,4 мг/м², 1,1 мг/м² или 0,7 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла и пембролизумаба в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W и 200 мг Q3W.

30. Лекарственное средство, содержащее эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в комбинации с пембролизумабом для лечения рака молочной железы у индивидуума-человека по способу, предусматривающему введение индивидууму эрибулина или его фармацевтически приемлемой соли в дозе 1,4 мг/м², 1,1 мг/м² или 0,7 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла и пембролизумаба в дозе, выбранной из группы, состоящей из 1 мг/кг Q3W, 2 мг/кг Q3W и 200 мг Q3W.

31. Способ или лекарственное средство по любому из вариантов осуществления 28-31, при котором рак молочной железы представляет собой метастатический и/или тройной негативный рак молочной железы.

32. Способ или лекарственное средство по варианту осуществления 31, при котором индивидуум ранее не подвергался лечению от рака молочной железы.

33. Способ или лекарственное средство по любому из вариантов осуществления 28-32, при котором срез ткани рака молочной железы удаляется у человека до введения комбинированной терапии, положительной в отношении экспрессии PD-L1.

34. Способ или лекарственное средство по варианту осуществления 33, при котором по меньшей мере 50% опухолевых клеток в срезе ткани характеризуются положительным результатом в отношении экспрессии PD-L1 посредством иммуногистохимического (IHC) анализа.

35. Способ или лекарственное средство по варианту осуществления 34, при котором в IHC анализе используется антитело 22С3 для обнаружения экспрессии PD-L1.

36. Способ или лекарственное средство по любому из вариантов осуществления 31-35, при котором пембролизумаб вводят путем внутривенной инфузии.

ОБЩИЕ СПОСОБЫ

Стандартные способы в молекулярной биологии описаны Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2^nd Edition, 2001 3^rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Стандартные способы также представлены в Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, где описано клонирование бактериальных клеток и мутагенеза ДНК (том 1), клонирование в клетках млекопитающих и дрожжах (том 2), гликоконъюгаты и экспрессия белка (том 3) и биоинформатика (том 4).

Описаны способы очистки белков, включая в себя иммунопреципитацию, хроматографию, электрофорез, центрифугирование и кристаллизацию (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Описан химический анализ, химическая модификация, посттрансляционная модификация, продуцирование слитых белков, гликозилирование белков (смотрите, например, Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). Описано производство, очистка и фрагментация поликлональных и моноклональных антител (Coligan, et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, выше). Доступны стандартные способы для описания взаимодействия лиганд/рецептор (смотрите, например, Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York).

Могут быть получены моноклональные, поликлональные и гуманизированные антитела (смотрите, например, Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165: 6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224: 487-499, патент США №6329511).

Альтернативой гуманизации является применение библиотек человеческих антител, отображаемых на библиотеках фагов или человеческих антител у трансгенных мышей (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14: 309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1: 837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21: 371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17: 397-399).

Очистка антигена не требуется для выработки антител. Животные могут быть иммунизированы клетками, обладающими представляющим интерес антигеном. Спленоциты затем могут быть выделены у иммунизированных животных и спленоциты могут сливаться с клеточной линией миеломы для получения гибридомы (смотрите, например, Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13: 233-242; Preston et al., выше; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163: 5157-5164).

Антитела могут быть конъюгированы, например, с небольшими молекулами лекарственного средства, ферментами, липосомами, полиэтиленгликолем (ПЭГ). Антитела применимы для терапевтического средства, диагностического средства, набора или других целей и включают в себя антитела, связанные, например, с красителями, радиоизотопами, ферментами или металлами, например, коллоидным золотом (смотрите, например, Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146: 169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160: 3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162: 2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168: 883-889).

Доступны способы проточной цитометрии, включающие в себя сортировку флуоресцентно активированных клеток (FACS) (смотрите, например, Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2^nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Доступны флуоресцентные реагенты, подходящие для модификации нуклеиновых кислот, включая в себя праймеры нуклеиновых кислот и зонды, полипептиды и антитела, для применения, например, в качестве диагностических реагентов (Molecular Probesy (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

Описаны стандартные способы гистологии иммунной системы (смотрите, например, Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams и Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).

Доступны пакеты программного обеспечения и базы данных для определения, например, антигенных фрагментов, лидерных последовательностей, упаковки белков, функциональных доменов, сайтов гликозилирования и выравнивания последовательностей (смотрите, например, GenBank, Vector NTI^® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, СA); DeCypher^® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

В таблице 3 приведено краткое описание последовательностей в перечне последовательностей.

ПРИМЕР

Дизайн исследования

Ниже описано открытое простое многоцентровое исследование с фазой 1b/2 эрибулина в сочетании с пембролизумабом у пациентов с метастатическим тройным негативным раком молочной железы, которых ранее лечили посредством 0-2 схем химиотерапии в терапии метастатических форм рака. На фиг. 8 показан пример дизайна исследования открытого, простого, многоцентрового клинического испытания с фазой 1b/2. Число субъектов, предусмотренных для каждой фазы исследования ниже, представляет собой неограничивающий пример. Конкретная схема дозирования и/или количества также являются неограничивающими. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что количество субъектов, участвующих в исследовании, может быть увеличено или уменьшено. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, как изменить схему дозирования и/или количества для конкретного пациента или группы субъектов.

Субъект/пациент может быть включен в исследование, если пациент имеет mTNBC, ранее подвергаемый лечению посредством 0-2 курсов химиотерапии для метастатического заболевания. Присутствие измеряемого заболевания может быть определено как ≥ 1 поражения ≥10 мм в диаметре по длинной оси для нелимфатических узлов или ≥ 15 мм в диаметре по короткой оси для лимфатических узлов, которое можно измерить в соответствии с критериями RECIST версии 1.1. Пациенту также может потребоваться адекватная функция почек, костного мозга и печени, и продолжительность жизни ≥ 3 месяцев. Пациент может иметь разрешение на любую химиотерапию или связанную с радиацией токсичность до ≤ 1 степени тяжести, за исключением устойчивой сенсорной невропатии (степень ≤ 2) и алопеции (любая степень).

Субъект/пациент может быть исключен из исследования, если у пациента было предыдущее лечение эрибулином или любым средством анти-PD-1, PD-L1 или PD-L2 или предыдущее участие в исследовании MK-3475 Merck. Пациент может быть исключен, если у пациента есть аутоиммунное заболевание, требующее лечения системными стероидами или иммунодепрессантами, если прошло менее 6 месяцев после предшествующей неоадъювантной химиотерапии и/или пациент получил лечение посредством химиотерапии или биологической терапии в течение предыдущих 3 недель или лучевой терапии или нацеленной терапии малыми молекулами в течение предыдущих 2 недель. Пациент может быть исключен из исследования, если у пациента есть известное заболевание центральной нервной системы, за исключением тех пациентов с подвергаемым лечению метастазом головного мозга, которые стабильны в течение ≥ 1 месяца, не имея признаков прогрессирования или кровоизлияния после лечения и не требующих постоянной потребности в кортикостероидах, как установлено клиническим исследованием и визуализацией головного мозга (магнитно-резонансная томография или компьютерная томография) в течение периода скрининга.

Субъекты могут получать предшествующую неоадъювантную химиотерапию. Часть фазы 1b включает в себя одну начальную вводную когорту, в которой от шести до двенадцати субъектов могут принимать эрибулина мезилат в дозе 1,4 мг/м² внутривенно в дни 1 и 8 21-дневного цикла и пембролизумаб в дозе 200 мг внутривенно (IV) в 1-й день 21-дневного цикла (величина дозы 1). Эрибулин можно вводить в течение приблизительно 2-5 минут на дозу, а пембролизумаб можно вводить в течение приблизительно 25-40 минут на дозу, предпочтительно приблизительно в течение 30 минут на дозу. Эрибулин можно разбавить до 100 мл 0,9% солевым раствором для внутривенной инфузии.

Часть 1b фазы исследования включает в себя одну когорту вводного исследования начальной безопасности, в которой по меньшей мере 6 субъектов могут принимать эрибулина мезилат в дозе 1,4 мг/м² внутривенно (IV) в дни 1 и 8 21-дневного цикла и пембролизумаб в дозе 200 мг внутривенно в 1-й день 21-дневного цикла (величина дозы 1). DLT может быть оценена в первом цикле. Величина дозы 1 может быть выбрана в качестве рекомендуемой дозы фазы 2 (RP2D), если не более 1 субъекта характеризуется DLT. В противном случае дозу эрибулина мезилата можно снизить с 1,4 мг/м² до 1,1 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла (величина дозы 0). Если не более 1 из 6 субъектов при величине дозы 0 характеризуется DLT, часть фазы 2 может протекать с дозой 0. Приблизительно 12 субъектов могут быть включены в часть 1b фазы исследования.

В части 2 фазы приблизительно 83 субъекта могут быть включены в 2 страты и получать одинаковое комбинированное лечение на уровне RP2D. Страты включают в себя не получавших предшествующую химиотерапию при лечении метастатических форм рака (страта 1) и ранее подвергавшихся лечению посредством 1-2 курсов химиотерапии при лечении метастатических форм рака (страта 2). Приблизительно 70% и 30% субъектов могут быть зачислены из страты 1 и 2, соответственно.

Байесовская прогнозируемая вероятность (РР) скорости ответа может быть использована для контроля скорости ответа после оценки опухоли после базовой оценки по меньшей мере для 38 субъектов. Исследование может быть прекращено раньше из-за эффективности или бесполезности, если РР пересекает заданную границу. Следовательно, заключение эффективности первичной конечной точки ORR может быть сделано на основе прогнозирующей вероятности до полного включения в исследование 80 оцениваемых субъектов.

Фармакокинетические (PK) оценки эрибулина мезилата могут быть выполнены у всех пациентов в части 1b фазы исследования. Субъекты в части 2 фазы могут подвергаться оценке PK на основании небольшой выборки для анализа фармакокинетических/фармакодинамических показателей популяции (PK/PD), где это возможно.

Исследуемое лечение. Комбинированные дозы можно исследовать в одной когорте. Эрибулина мезилат в дозе 1,4 мг/м² через внутривенную инъекцию в течение 2-5 минут, вводимую в 1-й день и 8-й день, и пембролизумаб в дозе 200 мг через внутривенную инфузию в течение 30 минут, вводимую в 1-й день (21-дневного цикла). Альтернативные дозы могут быть исследованы для идентификации RP2D до начала части 2 фазы, если это необходимо. Доза эрибулина мезилата может быть снижена/замедлена; доза пембролизумаба может быть отсрочена по протоколу в случае токсичности. Задержки и модификации дозы при токсичностях, связанных с эрибулина мезилатом и пембролизумабом, подробно описаны ниже.

Продолжительность лечения. Субъекты могут подвергаться лечению посредством эрибулина мезилата и пембролизумаба и могут оставаться на одном или обоих исследуемых препаратах в присутствии клинической пользы до тех пор, пока не произойдет интеркуррентное заболевание, неприемлемая токсичность или прогрессирование заболевания или пока субъект не откажется от согласия.

Анализ эффективности

Фаза 1b первичной эффективности. В исследование может входить по меньшей мере одна когорта вводного исследования безопасности, в которой шесть субъектов с метастатическим mTNBC получают эрибулина мезилат в дозе 1,4 мг/м² в 1 и 8 день и пембролизумаб в дозе 200 мг в 1-й день 21-дневного цикла (величина дозы 1). Субъекты могут наблюдаться в отношении дозолимитирующей токсичности в первом цикле. Целью когорты(когорт) вводного исследования безопасности является изучение безопасности комбинации 2-х лекарственных средств. Часть 2 фазы может протекать с величиной дозы 1, когда не более чем один субъект характеризуется DLT. В противном случае более низкую дозу эрибулина мезилата 1,1 мг/м² и 200 мг пембролизумаба можно оценить в другой когорте из шести субъектов (уровень дозы 0). Если не более 1 субъекта характеризуется DLT, часть 2 фазы будет продолжаться с величиной дозы 0 в качестве RP2D. В противном случае альтернативные дозы (0,7 мг/м² эрибулина мезилата) могут быть исследованы до начала части 2 фазы.

Фаза 2 первичной эффективности. Байесовскую прогнозируемую вероятность (РР) можно использовать для контроля частоты ответа после оценки опухоли после базовой оценки по меньшей мере у 38 субъектов. Вычисление РР основано на цели утверждения превосходства комбинации в конце исследования, если

Р(р>0,2|данные)≥0,95 (уравнение 1),

где p - частота ответа комбинации, 0,2 - частота ответа исторического контроля, основанная на одном средстве пембролизумабе и эрибулина мезилате в недавних исследованиях; 0,95 - предварительно заданная целевая вероятность (θ_T) и P(p>0,2|данные) - это апостериорная вероятность. На основе накопленных данных до сих пор в исследовании можно было бы добавить вероятности всех возможных будущих результатов, которые приводят к уравнению (1) в конце исследования, чтобы получить прогнозируемую вероятность эффективности комбинации. Поэтому раннее определение возможно для утверждения эффективности комбинации, когда РР находится выше предварительно заданного верхнего порога (θ_U) или для утверждения отсутствия эффективности, когда РР ниже заданного нижнего порога (θ_L). Вероятности верхнего и нижнего предельного уровня для принятия решений, θ_U и θ_L, устанавливаются как 0,99 и 0,025. В рамках прогнозирующего мониторинга исследование может продолжаться следующим образом:

Если РР>θ_U (=0,99), прекращение исследования и запрос эффективной или перспективной комбинации;

Если PP<θ_L (=0,025), прекращение исследования и заявление, что комбинация не является многообещающей;

в противном случае продолжение исследования до тех пор, пока количество оцениваемых субъектов не достигнет 80.

Байесовские граничные критерии досрочного завершения исследования включены в таблицу 4 ниже. Во время исследования РР может быть рассчитана с обновленной информацией об ответе до пересечения границы. В случае если непрерывный мониторинг РР не проводится из-за оперативных и логистических причин (например, отсроченные оценки опухолей и быстрое включение в исследование) или принято решение пройти исследование для полного включения в исследование, чтобы собрать более эффективные данные, апостериорная вероятность в уравнении (1) может быть оценена для определения эффективности комбинированной схемы лечения после того, как статус ответа опухоли был собран от последних оцениваемых субъектов. То есть, чтобы заявить об эффективности, если Р(р>0,2|данных)≥0,95. Может быть построен двусторонний 95% доверительный интервал объективной частоты ответа у оцениваемых субъектов для содействия интерпретации результатов.

N = количество

LB = нижняя граница

UB = верхняя граница

Оценка опухоли может быть выполнена на основе, например, RECIST 1.1 и irRC. Эффективность может быть оценена посредством объективных ответов опухоли, предоставленных исследователем в соответствии с критериями оценки ответа в солидных опухолях (RECIST [версия 1.1]) для использования при анализе первичной конечной точки (ORR), вторичных конечных точек (PFS и DOR) и эксплоративной конечной точки (частота клинической эффективности (CBR)). Оценки опухолей могут проводиться каждые 9 недель ± 1 неделя с использованием согласованной методологии визуализации (т.е. компьютерной томографии/MPT или сканирования костей) и последовательного использования или неиспользования контрастных сред. В исследовательских анализах клиническая активность для комбинированного лечения, включающая в себя ORR, PFS, DOR и CBR, также может быть оценена с использованием irRC. Кроме того, статус OS (распределение) может оцениваться на протяжении всего исследования.

Окончательный анализ первичной эффективности. Хотя в начале исследования можно определить эффективность комбинированной схемы лечения с точки зрения ORR, чтобы помочь быстрому принятию решений, окончательный анализ может быть проведен после того, как все пациенты продолжающегося исследования завершат по меньшей мере 24 недели лечения или прекратят лечение, и по меньшей мере 75% субъектов будут характеризоваться прогрессированием заболевания или умрут. Первичные, вторичные и эксплоративные конечные точки могут суммироваться в целом и по когортам. Субъекты в части 1b фазы, которые подвергались лечению посредством схемы дозирования фазы 2 и которые считались оцениваемыми, могут быть объединены с субъектами фазы 2 в анализе эффективности.

Вторичная эффективность

Выживаемость без прогрессирования заболевания (PFS), OS и DOR может быть проанализирована с использованием расчета по множительному способу Каплан-Мейера. Медиана PFS и OS и совокупная вероятность PFS, OS и DOR через 6 и 12 месяцев могут быть представлены с 2-сторонними 95% доверительными интервалами (CI), если они оценены. Совокупные PFS, OS и DOR могут быть построены с течением времени. Медианный и первый и третий квартили из расчета Каплан-Мейера для PFS, OS и DOR могут быть обеспечены 95% CI, если они оценены. Первичные и вторичные конечные точки эффективности (т.е. ORR, PFS, OS и DOR) могут быть дополнительно оценены в положительном наборе PD-L1 после определения точки граничного предела с использованием внешних данных. Может быть оценена клиническая ценность PD-L1 в качестве прогностического маркера у субъектов с mTNBC, которые получают комбинированное лечение эрибулином и пембролизумабом.

Вводимое лечение.

Эрибулина мезилат и пембролизумаб можно вводить, как описано в таблице 5.

Количество эрибулина мезилата (как вычислено выше) может быть набрано из соответствующего количества флаконов в шприц. Его можно вводить непосредственно в виде внутривенной инъекции в течение 2-5 минут или разбавлять до 100 мл 0,9% физиологическим раствором для внутривенного вливания в течение 2-5 минут. Никакой специальной трубки не требуется для внутривенного введения эрибулина мезилата.

Пембролизумаб можно вводить в течение до 3 дней до или после запланированного дня 1 каждого цикла. Когда 2 исследуемых лекарственных средства планируется назначать одновременно в первый день каждого 21-дневного цикла, сначала можно назначить пембролизумаб, а затем эрибулина мезилат. Субъекты, которые первоначально подвергались лечению посредством эрибулина мезилата и пембролизумаба, могут оставаться на одном или обоих исследуемых лекарственных средства при наличии клинической пользы до тех пор, пока не произойдет интеркуррентное заболевание, неприемлемая токсичность или прогрессирование заболевания или пока субъект не откажется от согласия. В случае АЕ, ведущего к прерыванию лечения или задержке любого исследуемого лекарственного средства, субъект может продолжить лечение другим исследуемым лекарственным средством до тех пор, пока есть клиническая польза.

Доза эрибулина мезилата может быть уменьшена/отсрочена во время исследования. Инструкции по временному прекращению и снижению дозы для субъектов, которые испытывают токсичность эрибулина, представлены в таблице 6:

ANC = абсолютное количество нейтрофилов.

а: Токсичность, градуированная в соответствии с общими терминологическими критериями Национального института онкологии для неблагоприятных событий, версия 4.03 (NCI-CTCAE, v 4.03).

b: Связанные с эрибулина мезилатом

В качестве примера отсрочки дозы эрибулин можно не вводить в случае любого из следующего: (1) абсолютное количество нейтрофилов («ANC») < 1000, (2) тромбоцитов < 75000/мм³ и/или (3) негематологическая токсичность 3 или 4 степени. Доза эрибулина в день 8 может быть отложена максимум на 7 дополнительных дней (всего 15 дней). Если токсичность не устраняется или не улучшается до степени тяжести ≤ 2 к 15-му дню, доза 8-го дня эрубилина может быть опущена, и следующий цикл может не начинаться по меньшей мере еще в течение двух недель после 8-го дня. Если доза задерживается из-за токсичности, причем пациент позже восстанавливается до степени тяжести 2 или менее, тогда введение эрибулина может возобновляться в сниженной дозе, как указано в приведенной выше таблице.

Пембролизумаб может не подвергаться уменьшению дозы. Доза пембролизумаба может быть отложена из-за нежелательного явления. Нежелательные явления, как несерьезные, так и серьезные, связанные с воздействием пембролизумаба, могут характеризоваться иммунологической этиологией. Эти нежелательного явления могут произойти вскоре после первой дозы или через несколько месяцев после последней дозы или лечения. Для связанной с лекарственными средствами токсичности и тяжелых или опасных для жизни АЕ, которые происходят вскоре после дозы пембролизумаба, пембролизумаб следует отложить или прекратить (таблица 7):

АЕ = нежелательное явление, АЛТ = аланинаминотрансфераза, ACT = аспартат-аминотрансфераза

Примечание. Навсегда прекратите при любом серьезном связанном с лекарственными средствами нежелательном явлении (АЕ) или АЕ 3 степени, которое повторяется, или при любом опасном для жизни событии.

а: Для субъектов с метастазами в печени, которые начинают лечение со степенью 2 ACT или АЛТ, если ACT или АЛТ увеличивается более чем на 50% по сравнению с исходным уровнем и продолжается в течение минимум 1 недели, то лечение субъектов должно быть прекращено.

b: Субъекты с непереносимым или стойким связанным с лекарственными средствами АЕ 2-й степени могут продолжать введение исследуемого лекарственного средства по усмотрению врача. Навсегда прекратить применение лекарственного средства необходимо для стойких нежелательных явлений 2-й степени (за исключением алопеции и периферической сенсорной невропатии, для которой проводится лечение исследуемым лекарственным средством), которые не восстанавливаются до степени 0-1 в течение 12 недель после последней дозы.

Оценка лечения/завершения лечения

Оценки дозолимитирующей токсичности (DLT) могут быть проведены для субъектов в фазе 1b. DLT включают в себя такие гематологические токсичности, как тромбоцитопения четвертой степени или нейтропения длительностью > 7 дней, а также негематологические токсичности, включающие в себя:

- Эписклерит, увеит или ирит 2-й степени или выше

- Любую токсичность степени 4

- Любую токсичность степени 3, ИСКЛЮЧАЯ:

- Тошноту/рвоту/диарею, контролируемые медицинским вмешательством в течение 72 часов

- Сыпь 3-й степени в отсутствие шелушения, без вовлечения слизистой оболочки, отсутствия необходимости стероидов и переходящая в 1-ю степень со следующей запланированной дозой пембролизумаба

- Переходная степень 3 ACT или АЛТ, определяемая не более 3 дней с использованием стероидов или без них

Прекращение или отсрочку более чем на 2 недели любого исследуемого лекарственного средства из-за связанного с лечением АЕ можно рассматривать как DLT.

Субъекты, включенные в фазу 1b, могут подвергаться оценке на DLT во время окна оценки DLT первого цикла из 21 дня. Субъекты, которые прекращают исследуемое лечение до завершения окна оценки DLT по любой причине, отличной от DLT, могут быть заменены.

Оценки безопасности могут включать в себя мониторинг и регистрацию нежелательных явлений (АЕ) на протяжении всего исследования, включая в себя общие терминологические критерии для степеней нежелательных явлений v4.03, как для увеличения, так и уменьшения тяжести и серьезных нежелательных явлений; регулярный мониторинг гематологии, клинической химии и мочи; периодическое измерение жизненных признаков и выполнение физических обследований. Физическое обследование и лабораторная оценка гематологии могут проводиться на исходном уровне (1-й день) и в 8-й день каждого цикла лечения и в течение 30 дней после окончания лечения. Лабораторная оценка для химии может быть выполнена на исходном уровне (1-й день) и в течение 30 дней после окончания лечения. Функция щитовидной железы будет оцениваться при скрининговом визите, а затем каждые 2 цикла в течение всего исследования.

Конечные точки исследования

Первичная конечная точка. Первичными конечными точками являются безопасность и переносимость (основанная на RECIST версии 1.1) для части 1b фазы исследования и объективной реакции для части 2 фазы исследования (ORR). ORR определяют как долю субъектов, у которых был BOR CR или PR.

Вторичные конечные точки. Вторичными конечными точками исследования являются выживаемость без прогрессирования, общая выживаемость, продолжительность ответа и эффективность в подгруппе пациентов, у которых определена экспрессия PD-L1.

- Выживаемость без прогрессировала (PFS) - определяется как время от даты первой дозы исследуемого лекарственного средства до даты первой документации о прогрессировании заболевания или смерти, в зависимости от того, что наступит раньше

- Общая выживаемость (OS) - определяется как время от даты первой дозы исследуемого лекарственного средства до даты смерти по какой-либо причине

- Продолжительность ответа (DOR) - определяется как время от даты, когда подтвержденный объективный ответ впервые задокументирован, до даты PD или смерти по какой-либо причине для субъектов с подтвержденным PR или CR.

Ссылки

1. Sharpe, А.Н, Wherry, E.J., Ahmed R., and Freeman G.J., The function of programmed cell death 1 and its ligands in regulating autoimmunity and infection. Nature Immunology (2007); 8: 239-245.

2. Dong H et al., Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat Med. 2002 Aug; 8(8): 793-800.

3. Yang et al., PD-1 interaction contributes to the functional suppression of T-cell responses to human uveal melanoma cells in vitro. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2008 Jun; 49(6 (2008) : 49 : 2518-2525.

4. Ghebeh et al., The B7-H1 (PD-L1) T lymphocyte-inhibitory molecule is expressed in breast cancer patients with infiltrating ductal carcinoma: correlation with important high-risk propgnostic factors. Neoplasia (2006) 8: 190-198.

5. Hamanishi J et al., Programmed cell death 1 ligand 1 and tumor-infiltrating CD8+ T lymphocytes are prognostic factors of human ovarian cancer. Proceeding of the National Academy of Sciences (2007) : 104 : 3360-3365.

6. Thompson RH et al., Significance of B7-H1 overexpression in kidney cancer. Clinical genitourin Cancer (2006): 5 : 206-211.

7. Nomi, T. Sho, M., Akahori, Т., et al., Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death- 1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer. Clinical Cancer Research (2007); 13: 2151-2157.

8. Ohigashi Y et al., Clinical significance of programmed death-1 ligand-1 and programmed death-1 ligand 2 expression in human esophageal cancer. Clin. Cancer Research (2005): 11 : 2947-2953.

9. Inman et al., PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression. Cancer (2007): 109 : 1499-1505.

10. Shimauchi T et al., Augmented expression of programmed death-1 in both neoplasmatic and nonneoplastic CD4+ T-cells in adult T-cell Leukemia/ Lymphoma. Int. J. Cancer (2007): 121 : 2585-2590.

11. Gao et al., Overexpression of PD-L1 significantly associates with tumor aggressiveness and postoperative recurrence in human hepatocellular carcinoma. Clinical Cancer Research (2009) 15: 971-979.

12. Nakanishi J., Overexpression of B7-H1 (PD-L1) significantly associates with tumor grade and postoperative prognosis in human urothelial cancers. Cancer Immunol Immunother. (2007) 56: 1173-1182.

13. Hino et al., Tumor cell expression of programmed cell death-1 is a prognostic factor for malignant melanoma. Cancer (2010) : 00: 1-9.

14. Ghebeh H., Foxp3+ tregs and B7-H1+/PD-1+ T lymphocytes co-infiltrate the tumor tissues of high-risk breast cancer patients: implication for immunotherapy. BMC Cancer. 2008 Feb 23; 8: 57.

15. Ahmadzadeh M. et al., Tumor antigen-specific CD8 T cells infiltrating the tumor express high levels of PD-1 and are functionally impaired. Blood (2009) 114: 1537-1544.

16. Thompson RH et al., PD-1 is expressed by tumor infiltrating cells and is associated with poor outcome for patients with renal carcinoma. Clinical Cancer Research (2007) 15: 1757-1761.

Все приведенные в настоящем документе ссылки включены посредством ссылок в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация, запись в базу данных (например, последовательности Genbank или записи GeneID), патентная заявка или патент, была специально и индивидуально указана для включения посредством ссылки. Это заявление о включении по ссылке предназначено заявителями в соответствии с 37 C.F.R. §1.57 (b)(1), чтобы относиться к каждой отдельной публикации, записи в базу данных (например, последовательности Genbank или записи GeneID), заявке на патент или патенту, каждый из которых четко идентифицирован в соответствии с 37 C.F.R. §1.57 (b)(2), даже если такая цитата не сразу примыкает к специальному заявлению о включении по ссылке. Включение специальных заявлений о включении по ссылке, если таковые имеются, в рамках спецификации никоим образом не ослабит это общее заявление о включении по ссылке. Цитирование приведенных в настоящем документе ссылок не предназначено для признания того, что ссылка имеет отношение к предшествующему уровню техники, и не представляет собой никакого допущения относительно содержания или даты этих публикаций или документов.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110>МЕРК ШАРП ЭНД ДОХМЕ КОРП.

ЭЙСАЙ ЭР ЭНД ДИ МЭНЭДЖМЕНТ КО., ЛТД.

<120>КОМБИНАЦИЯ АНТАГОНИСТА PD-1 И ЭРИБУЛИНА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА

<130> 213597-0002-00-WO-539597

<140>

<141>

<160> 25

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Light Chain CDR

<400> 1

Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Light Chain CDR

<400> 2

Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser

1 5

<210> 3

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Light Chain CDR

<400> 3

Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Heavy Chain CDR

<400> 4

Ser Tyr Tyr Leu Tyr

1 5

<210> 5

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Heavy Chain CDR

<400> 5

Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Ser Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 6

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Heavy Chain CDR

<400> 6

Arg Asp Ser Asn Tyr Asp Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 7

<211> 15

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Light Chain CDR

<400> 7

Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr Leu His

1 5 10 15

<210> 8

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Light Chain CDR

<400> 8

Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser

1 5

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Light Chain CDR

<400> 9

Gln His Ser Arg Asp Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 10

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Heavy Chain CDR

<400> 10

Asn Tyr Tyr Met Tyr

1 5

<210> 11

<211> 17

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Heavy Chain CDR

<400> 11

Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asn

<210> 12

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Antibody Heavy Chain CDR

<400> 12

Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 13

<211> 120

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Heavy Chain Variable Region

<400> 13

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 14

<211> 447

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Heavy Chain

<400> 14

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 15

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain Variable Region

<400> 15

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 16

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain Variable Region

<400> 16

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 17

<211> 111

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain Variable Regon

<400> 17

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 18

<211> 218

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain

<400> 18

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 19

<211> 218

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain

<400> 19

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 20

<211> 218

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain

<400> 20

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro

35 40 45

Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Lys Ile Ser

65 70 75 80

Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Leu Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 21

<211> 447

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Heavy Chain

<400> 21

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val

115 120 125

Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala

130 135 140

Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser

145 150 155 160

Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val

165 170 175

Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro

180 185 190

Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys

195 200 205

Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro

210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val

225 230 235 240

Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

245 250 255

Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

260 265 270

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

275 280 285

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

290 295 300

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

305 310 315 320

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

325 330 335

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

340 345 350

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

355 360 365

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

370 375 380

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

385 390 395 400

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

405 410 415

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

420 425 430

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 22

<211> 218

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> Description of Artificial Sequence: Humanized Antibody

Light Chain

<400> 22

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser

65 70 75 80

Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg

85 90 95

Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105 110

Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln

115 120 125

Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr

130 135 140

Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser

145 150 155 160

Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr

165 170 175

Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys

180 185 190

His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro

195 200 205

Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 23

<211> 440

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser

115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys

180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala

210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

245 250 255

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

325 330 335

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

340 345 350

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 24

<211> 214

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 24

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 25

<211> 290

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<221> mat_peptide

<222> (19)..(290)

<400> 25

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

-15 -10 -5

Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr

-1 1 5 10

Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu

15 20 25 30

Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile

35 40 45

Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser

50 55 60

Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn

65 70 75

Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr

80 85 90

Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val

95 100 105 110

Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

115 120 125

Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr

130 135 140

Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

145 150 155

Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn

160 165 170

Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr

175 180 185 190

Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu

195 200 205

Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His

210 215 220

Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr

225 230 235

Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys

240 245 250

Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu

255 260 265 270

Glu Thr

<---

1. Способ лечения тройного негативного рака молочной железы у индивидуума, предусматривающий введение индивидууму комбинированной терапии, содержащей (i) антагонист белка Programmed Death 1 (PD-1), где антагонист PD-1 представляет собой пембролизумаб, и (ii) эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль.

2. Способ по п. 1, при котором индивидуум представляет собой человека.

3. Способ по п. 1 или 2, где тройной негативный рак молочной железы является метастатическим.

4. Способ по любому из пп. 1-3, при котором фармацевтически приемлемая соль эрибулина представляет собой эрибулина мезилат.

5. Лекарственное средство, содержащее антагонист белка Programmed Death 1 (PD-1), где антагонист PD-1 представляет собой пембролизумаб, в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью, для лечения тройного негативного рака молочной железы у индивидуума.

6. Лекарственное средство по п. 5, причем индивидуум представляет собой человека.

7. Лекарственное средство по п. 5 или 6, причем тройной негативный рак молочной железы является метастатическим.

8. Лекарственное средство по любому из пп. 5-7, в котором фармацевтически приемлемая соль эрибулина представляет собой эрибулина мезилат.

9. Лекарственное средство по п. 8, в котором пембролизумаб составлен в виде жидкого лекарственного средства, которое содержит 25 мг/мл пембролизумаба, 7% (w/v) сахарозы, 0,02% (w/v) полисорбата 80 в гистидиновом буфере с концентрацией 10 мМ с рН 5,5, а эрибулин или его фармацевтически приемлемая соль - в виде жидкого лекарственного средства, которое содержит эрибулина мезилат в дозе 0,5 мг/мл или его фармацевтически приемлемую соль.

10. Набор для лечения тройного негативного рака молочной железы у индивидуума, содержащий первый контейнер, второй контейнер и листок-вкладыш в упаковке, причем первый контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего антагонист белка Programmed Death 1 (PD-1), где антагонист PD-1 представляет собой пембролизумаб, второй контейнер содержит по меньшей мере одну дозу лекарственного средства, содержащего эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль, и листок-вкладыш в упаковке содержит инструкции для лечения индивидуума от рака молочной железы с использованием лекарственных средств.

11. Набор по п. 10, причем индивидуум представляет собой человека.

12. Набор по п. 10 или 11, в котором пембролизумаб составлен в виде жидкого лекарственного средства, содержащего 25 мг/мл пембролизумаба, 7% (w/v) сахарозы, 0,02% (w/v) полисорбата 80 в гистидиновом буфере с концентрацией 10 мМ с рН 5,5, и фармацевтически приемлемая соль эрибулина представляет собой эрибулина мезилат, составленный в виде жидкого лекарственного средства, содержащего эрибулина мезилат в дозе 0,5 мг/мл.

13. Набор по любому из пп. 10-12, причем тройной негативный рак молочной железы является метастатическим.

14. Способ лечения индивидуума-человека, у которого диагностирован тройной негативный рак молочной железы, предусматривающий введение индивидууму комбинированной терапии, содержащей пембролизумаб и эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль, причем эрибулин или его фармацевтически приемлемую соль вводят в дозе 1,4 мг/м², 1,1 мг/м² или 0,7 мг/м² в дни 1 и 8 21-дневного цикла, а пембролизумаб вводят в дозе 200 мг каждые три недели.

15. Способ по п. 14, где фармацевтически приемлемая соль эрибулина представляет собой эрибулина мезилат.

16. Применение лекарственного средства, содержащего пембролизумаб в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью, для лечения тройного негативного рака молочной железы у индивидуума.

17. Применение лекарственного средства для лечения тройного негативного рака молочной железы у индивидуума, содержащего пембролизумаб в комбинации с эрибулином или его фармацевтически приемлемой солью, где эрибулин или его фармацевтически приемлемая соль находятся в дозе 1,4 мг/м², 1,1 мг/м² или 0,7 мг/м² и пембролизумаб находится в дозе 200 мг.

18. Применение по п. 16 или 17, где фармацевтически приемлемая соль эрибулина представляет собой эрибулина мезилат.