Новые производные 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола

Авторы патента:

C07D513/04 - орто-конденсированные системы

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K31/4439 - содержащие пятичленное кольцо с азотом в качетве гетероатома, например омепразол (никотин A61K 31/465)

A61K31/433 - тиадиазолы

Группа изобретений относится к области фармацевтической химии и включает производное 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтическую композицию на их основе. В формуле (I) R₁ и R₂ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из C₁-C₅ алкила; R₃ выбран из группы, состоящей из CH₂R₈, CH₂CH₂R₈, CH=CHR₈,CH₂CH₂CH₂R₈, CH₂-OR₈, замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, ΝΟ₂; R₄, R₅, R₆, R₇ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из H и OCH₃; R₈ представляет собой замещенный или незамещенный фенил, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, NO₂. Соединение формулы (I) обладает цитостатическим и цитотоксическим действием в отношении рака яичника, молочной железы, предстательной железы, легких и лимфом и показывает низкую острую и системную токсичность. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.

Техническая область изобретения

Настоящее изобретение относится к новым производным 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола, способам их получения и применению в лечении рака.

Уровень техники

Рак все еще остается фатальной проблемой здравоохранения, даже несмотря на отмеченный прогресс в области терапевтических средств. В наше время наблюдается постоянное увеличение летальных исходов от различных типов рака, и считается, что в 2030 году число летальных исходов достигнет 12 миллионов. Обычно противораковую терапию рассматривают как проблематичную из-за сопровождающей ее высокой токсичности. Главными побочными эффектами лекарственных средств против рака являются тошнота, рвота, диарея, алопеция и инфекции (которые обычно вызываются лейкопенией). Следовательно, разработка новых нетоксичных или менее токсичных активных лекарственных средств против рака имеет наибольшее значение и необходимость.

Гетероциклические соединения, включающие тиазольные или тиадиазольные химические структуры, показали очень важную биологическую активность, такую как антибактериальная [a) Holla, B.S., Shivananda, M.K., Akberali, P.M., Baliga, S., Safeer, S., Farmaco, 1996, 51, 785. b) Zhang, Z.Y., Sum, X.W., Chu, C.H., Zhao, L., J. Chim. Chem. Soc., 1997, 44, 535. c) Demirbas, N., Demirbas, A., Karaoglu, S.A., Celik, E., Arkivoc., 2005, 1, 75.], противораковая [a) Ibrahim, D.A., Eur. J. Med. Chem., 2009, 44, 2776 b) Al-Masoudi, N.A., Al-Soud, Y.A., Nucleos:Nucleot. Nucleic Acids, 2008, 27, 1034. c) Chowrasia, D., Karthikeyan, C., Choure, L., Sahabjada, Gupta, M., Arshad, Md., Trivedi, P., Arab. J. of Chem., 2013, doi:10.1016/j.arabjc,2013,08,026. d) Ilango, K., Valentina, P., Eur. J. Chem., 2010, 1, 50.], противовирусная [a) Kritsanida, M., Mouroutsou, A., Marakos, P., Pouli, N., Papakonstantinou-Garoufalias, S., Pannecouque, C., Witvrouw, M., Declercq, E., Farmaco, 2002, 57, 253. b) Invidiata, F.P., Simoni, D., Skintu, F., Pinna, N., Farmaco., 1996, 51, 659. c) Srivastava, V., Sen, S., Shekar, R., Indian J. Chem., 1994, 33B, 344.], противовоспалительная [a) Chawla, G., Kumar, U., Bawa, S., Kumar, J., J. Enzyme Inhib. Med. Chem., 2012, 27, 658. b) Amir, M., Harish, K., Javed, S.A., Eur. J. Med. Chem., 2008, 43, 2056. c) Prasad, A.R., Ramlingam, T., Bhaskar Rao A., Diwan, P.B., Sattur., Indian J. Chem., 1986, 25B, 566.], аналгезирующая [a) Srivastava, V., Sen, S., Shekar, R., Indian J. Chem., 1994, 33B, 344. b) Chawla, G., Kumar, U., Bawa, S., Kumar, J., J. Enzyme Inhib. Med. Chem., 2012, 27, 658.], противогрибковая [a) Karabasanagouda, T., Adhikari, A.V., Suchethasettey, N., Eur. J. Med. Chem., 2007, 42, 521. b) Tiwari, N., Chaturvedi, B., Nizamuddin., Agric. Biol. Chem., 1988, 52, 1229.] и противогельминтозная [α) El-Khawass, S.M., Khalil, M.A., Hazzaa, A.A., Bassiouny, H.A., Loutfy, N.F., Farmaco. 1989, 44, 703. 2. Imitiaz, M., Kumar, V., Indian J. Chem., 1992, 31B, 673.]. В более старых исследованиях некоторые производные амино- и дииминотиадиазола показали противораковую активность [a) Hill, D.L. Cancer Chemother. Pharmacol. 1980, 4, 215. b) Nelson, J.A., Rose, L.M., Benette, L. Cancer Res. 1977, 37, 182. c) Tsukamoto, K., Suno, M., Igarashi, K., Kozai, Y., Sugino, Y., Cancer Res. 1975, 35, 2631].

Сущность изобретения

Настоящее изобретение предоставляет новые производные 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола и их фармацевтически приемлемые соли, способы их получения и биологическую активность. Соединения согласно настоящему изобретению могут быть использованы в противораковых терапиях вследствие их противораковой активности, сопровождающейся низкой острой токсичностью.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение предоставляет 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазолы формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли

в которой,

R₁ и R₂ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из C₁-C₅ алкила, фенила, метилфенила,

R₃ выбран из группы, состоящей из CH₂R₈, CH₂CH₂R₈, CH=CHR₈,CH₂CH₂CH₂R₈, CH₂CH=CHR₈, CH=CHCH₂R₈, CH=CH-OR₈, CH₂-OR₈, CH₂CH₂-OR₈, CH=CH-NHR₈, CH₂-NHR₈, CH₂CH₂-NHR₈, CH=CH-SR₈, CH₂-SR₈, CH₂CH₂-SR₈,

, , ,

замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, пиримидинила, триазинила, триазинанила, оксазинила, оксазинанила, циклогексанила, циклогексенила, циклогексадиенила, пиранила, оксатианила, пиперидинила, циклопентанила, циклопентенила, циклопентадиенила, пирролидинила, пирролила, фуранила, оксазолидинила, пиразолидинила, тиофенила, оксатиинил, оксатиолила, оксатиоланила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, NO₂, CN, NH₂, OCH₂X, CH₂X, CX₃, CH₂CH₂X, OH, причем X выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I,

R₄, R₅, R₆, R₇ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, NO₂, CN, NH₂, OCH₃, OH, NHCH₂CH₃, N(CH₃)₂,

R₈ выбран из группы, состоящей из

, , ,

замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, пиримидинила, триазинила, триазинанила, оксазинила, оксазинанила, циклогексанила, циклогексенила, циклогексадиенила, пиранила, оксатианила, пиперидинила, циклопентанила, циклопентенила, циклопентадиенила, пирролидинила, пирролила, фуранила, оксазолидинила, пиразолидинила, тиофенила, оксатиинила, оксатиолила, оксатиоланила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила F, Cl, Br, I, NO₂, CN, NH₂, OCH₂X, CH₂X, CX₃, CH₂CH₂X, OH, причем X выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I,

R₉ выбран из группы, состоящей из NHR₁₀, NR₁₁R₁₂,

R₁₀ выбран из группы, состоящей из C₁-C₅ алкила, фенила,

R₁₁ и R₁₂ являются одинаковыми или разными, и они обозначают C₁-C₅ алкил.

Предпочтительно, R₁ и R₂ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из C₁-C₃ алкила, фенила, метилфенила. Более предпочтительно R₁ и R₂ являются метилом.

Предпочтительно, R₃ выбран из группы, состоящей из CH₂R₈, CH₂CH₂R₈, CH₂CH₂CH₂R₈, CH₂CH=CHR₈,

, , ,

замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, NO₂, CN, NH₂, OCH₂X, CH₂X, CX₃, CH₂CH₂X, OH, причем X выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I. Более предпочтительно, R₃ выбран из группы, состоящей из CH=CHR₈, CH₂CH₂CH₂R₈,

, , ,

замещенного или незамещенного фенила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из F, Cl, NO₂.

Предпочтительно, R₄, R₅, R₆, R₇ являются одинаковыми или разными, и они выбраны из группы, состоящей из H, Cl, Br, I, NH₂, OCH₃. Более предпочтительно, R₄ и R₇ обозначают H, R₅ и R₆ обозначает OCH₃.

Предпочтительно, R₈ выбран из группы, состоящей из

, , ,

замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, NO₂, CN, NH₂, OCH₂X, CH₂X, CX₃, CH₂CH₂X, OH, причем X выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I. Более предпочтительно, R₈ выбран из группы, состоящей из

, , ,

Предпочтительно, R₁₀ выбран из группы, состоящей из C₁-C₃ алкила, фенила. Более предпочтительно, R₁₀ является метилом.

Предпочтительно, R₁₁ и R₁₂ являются одинаковыми или разными, и они обозначают C₁-C₃ алкил. Более предпочтительно R₁₁ и R₁₂ являются метилом.

Соединения формулы (I) содержат по меньшей мере одну основную группу, и, следовательно, они могут образовывать фармацевтически приемлемые соли в результате обработки подходящей кислотой. Подходящие кислоты включают фармацевтически приемлемые органические кислоты, а также фармацевтически приемлемые неорганические кислоты. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают хлорид, бромид, сульфат, фосфат, нитрат, ацетат, пропионат, бутират, малеат, тартрат, цитрат, лактат, оксалат, сукцинат и бензоат.

Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли могут использоваться в лечении различных типов злокачественных опухолей (солидные опухоли, лимфомы и лейкоз). Предпочтительно, они используются в лечении рака яичника, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких и лимфом. Более предпочтительно они используются в лечении овариальной аденокарциномы и мелкоклеточного и немелкоклеточного рака легких.

Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли показывают сильное цитостатическое и цитотоксическое действие и низкую острую и системную токсичность.

Настоящее изобретение также предоставляет фармацевтические композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль. Такая фармацевтическая композиция может быть составлена так, чтобы ее можно было вводить подходящим путем, таким как пероральное, внутриносовое, топическое или парентеральное введение. Например, такая фармацевтическая композиция может быть составлена в таблетку, капсулу, порошок, раствор, суспензию, мазь или гель. Такая композиция обычно содержит, кроме соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, фармацевтически приемлемый носитель. Такой носитель может включать эксципиенты, хорошо известные в данной области техники, такие как разбавители, связующие, наполнители, разрыхлители, лубриканты, растворители, загустители, суспендирующие агенты, желирующие агенты, буферы или консерванты. Эти композиции могут быть получены согласно способам, которые известны в данной области техники.

Настоящее изобретение также предоставляет способ получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей.

Общий путь синтеза 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола представлен ниже на Схеме 1.

Схема 1

Сульфонилхлориды (V) могут быть синтезированы реакцией ароматических сложных эфиров (VI) с хлорсульфоновой кислотой. Сульфонамиды (IV) могут быть получены реакцией сульфонилхлоридов (V) с аминами. Гидразиды (III) могут быть получены из сульфонамидов (IV) обработкой водным раствором гидразина согласно методологии Camoutsis и его коллег (Ezabadi IR, Camoutsis C, Zoumpoulakis P, Geronikaki A, Soković M, Glamocilija J, Cirić A. Bioorg Med Chem. 2008, 16(3):1150-61). Стадии 4 и 5 могут быть выполнены согласно способу Mathew и его коллег (Mathew, V.; Keshavayya, J; Vaidya, V. P.; Giles, D. Eur. J. Med. Chem., 2007, 42, 521). Таким образом гидразиды (III) могут реагировать с дисульфидом углерода и гидразином, приводя к аминотриазолам (II) через промежуточные калиевые соли дитиокарбаматов. Наконец, аминотриазолы (II) могут быть превращены в 3,6-дизамещенные 1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,2,4-тиазолы (I) реакцией с кислотами в присутствии оксихлорида фосфора.

Пример 1

Синтез 2-(2-(хлорсульфонил)-4,5-диметоксифенил)метилацетата

В колбу, содержащую 2-(3,4-диметоксифенил)метилацетат (3,7 г, 17,65 ммоль),добавляли CHCl₃ (35 мл) и затем хлоросульфоновую кислоту (5,28 мл, 79,4 ммоль) по каплям при 0°C в атмосфере Ar. Раствор приобретал темно-фиолетовый цвет, и его перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакцию останавливали постепенным добавлением воды (35 мл) при 0°C с последующей экстракцией DCM (3×35 мл), высушиванием органического слоя над Na₂SО₄, конденсацией и колоночной хроматографией с элюентом 2:1 PS/ЕА. Каждый продукт собирали в форме твердого вещества белого цвета с 88%-ым выходом.

Синтез 2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметокси-фенилацетилгидразида.

В систему автоклава, содержащую 2-(2-(хлорсульфонил)-4,5-диметоксифенил)метилацетат (450 мг, 1,46 ммоль), растворенный в THF (1,8 мл), добавляли раствор диметиламина в THF 2M (1,47 мл, 2,92 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и наблюдали твердое вещество бледно-желтого цвета. После того, как реакция была закончена, раствор фильтровали в колбу с необходимым количеством DCM, концентрировали на ротационном испарителе, и продукт собирали как твердое вещество бледно-желтого цвета с 100%-ым выходом.

Синтез 5-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметокси-бензил]-4-амино-3-меркапто-1,2,4-триазола.

В холодный раствор 2-(N,N-диметилoсульфамоил)-4,5-диметокси-фенилацетилгидразида (0,01 моль) в абсолютном этаноле (150 мл) добавляли гидроксид калия (0,015 моль) и дисульфид углерода (0,015 моль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 20 ч. Во время реакции осаждалась промежуточная калиевая соль дитиокарбамата. Затем сухой эфир (150 мл) добавляли для завершения кристаллизации сформированной соли, полученной фильтрацией, и затем высушивали сухим эфиром.

Соль в форме суспензии в 80%-м водном растворе гидразина (0,02 моль) перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали, растворяли в холодной воде и нейтрализовали 10%-й соляной кислотой. Осадок собирали фильтрацией, промывали холодной водой, высушивали и перекристаллизовывали в метаноле.

Выход: 56%, Т.пл. 222-223°C (CH₃OH), ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 13,30 (с, 1 H), 7,15 (с, 1 H), 6,92 (с, 1 H), 5,46 (с, 2H), 4,20 (с, 2H), 3,71 (с, 3H), 3,68 (с, 3H), 3,22 (с, 6H), ¹³C ЯМР (126 МГц, DMSO-d6) δ 165,8, 151,8, 151,5, 147,1, 127,7, 126,3, 115,6, 112,7, 55,9, 36,8, 28,1. Анализ: C₁₃H₁₉N₅O₄S₂ (373). Рассчит. %: C:41,82, H:5,09, найдено N:18,76: C:41,77, H:5,12, N:18,79

Синтез 3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметокси-бензил]-6-фенил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазола.

Смесь 5-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметокси-бензил]-4-амино-3-меркапто-1,2,4-триазола (0,01 моль) и бензойной кислоты (0,01 моль) в сухом оксихлориде фосфора (3,7 мл) перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и затем выливали на лед. Избыток оксихлорида фосфора нейтрализовали сухим карбонатом калия, и соответствующим количеством гидроксида калия, пока pH реакции не становился равен 8. Твердое вещество отфильтровывали, промывали обильно водой и высушивали.

Выход: 74%, Т.пл. 212-214°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,95 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,68 (м, 1H), 7,63 (м, 2H), 7,30 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 4,78 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,63 (с, 6H), ИК v см^{- 1} 1601 (C=N), 1573, 1513, 1470, 1446 (C=C), 1265 (N-N=C), 1328 (S-O антисим.), 1141 (S-O сим.), Анализ: C₂₀H₂₁N₅O₄S₂ (459). Рассчит. %: C:52,28, H:4,57, N:15,25 Найдено: C:52,25, H:4,53, N:15,27

Пример 2

В соответствии с методологией примера 1, осуществляли синтез следующих тиазолов.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 52%. Т.пл. 228-229°C (CH₃OH-CH₂Cl₂), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,97 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,71 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,30 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 4,78 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 2,62 (с, 6H), ИК v см^-1 1600 (C=N), 1573, 1519, 1470 (C=C), 1272 (N-N=C), 1339 (S-O антисим.), 1138 (S-O сим), Анализ: C₂₀H₂₀N₅O₄S₂Cl (493,5). Рассчит. %: C:48,63, H:4,05, N:14,18 Найдено: C:48,65, H:4,01, N:14,21.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(2-хлор-4-нитрофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол

Выход: 65%. Т.пл. 216-217°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,57 (д, J=2,3 Гц, 1H), 8,40 (дд, J=8,7, 2,3 Гц, 1H), 8,27 (д, J=8,7 Гц, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 4,80 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,61 (с, 6H), ИК v см^-1 1603 (C=N), 1573, 1518, 1476 (C=C), 1269 (N-N=C), 1331 (S-O антисим.), 1138 (S-O сим.), Анализ: C₂₀H₁₉N₆O₆S₂Cl (538,5). Рассчит. %: C:44,56, H:3,52, N:15,60. Найдено: C:44,53, H:3,55, N:15,63.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3-метил-4-нитрофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 46%. Т.пл. 142-144°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,18 (д, J=8,5 Гц, 1H), 8,08 (с, 1H), 8,02 (д, J=8,5 Гц, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 4,80 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,62 (с, 6H), ИК v см^-1 1600 (C=N), 1573, 1510, 1476 (C=C), 1271 (N-N=C), 1344 (S-O антисим.), 1133 (S-O сим.), Анализ: C₂₁H₂₂N₆O₆S₂ (518). Рассчит. %: C:48,64, H:4,24, N:16,21. Найдено: C:48,68, H:4,21, N:16,25.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3,4,5-триметоксифенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 38%. Т.пл. 169-170°C (CH₃OH),¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,30 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 7,14 (с, 2H), 4,78 (с, 2H), 3,89 (с, 6H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 3,76 (с, 3H), 2,62 (с, 6H), ИК v см^-1 ^{1630 (C=N), 1586, 1459, 1414 (C=C), 1267 (N-N=C), 1333 (S-O антисим.), 1127 (S-O сим.), Анализ: C₂₃H₂₇N₅O₇S₂ (549). Рассчит. %: C:50,27, H:4,92, N:12,75. Найдено: C:50,25, H:4,96, N:12,78.}

3-[2-(N,N-диметилoсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(2-аминофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 36%. Т.пл. 219-220°C (C₂H₅OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,30 (с, 1H), 7,23 (т, J=7,8 Гц, 1H), 7,20 (с, 1H), 7,13 (м, 1H), 7,03 (д, J=8,35 Гц, 1H), 6,82 (д, J=8,2 Гц, 1H), 4,75 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 2,61 (с, 6H), ИК v см^-12436^,3382, 3267 (N-H), 1608 (C=N), 1555, 1514, 1474 (C=C), 1265 (N-N=C), 1328 (S-O антисим.), 1141 (S-O сим.), Анализ: C₂₀H₂₂N₆O₄S₂ (474). Рассчит. %: C:50,63, H:4,64, N:17,72. Найдено: C:50,60, H:4,61, N:17,75.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3-аминофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 20%. Т.пл. 164-165°C (C₂H₅OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,44 (дд, J=8,0, 1,4 Гц, 1H), 7,29 (м, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 6,93 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,71 (с ушир., 2H, NH₂), 6,68 (т, J=7,5 Гц, 1H), 4,81 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,78 (с, 3H), 2,63 (с, 6H), ИК v см^-1, 3450, 3347 (N-H), 1626 (C=N), 1579, 1512, 1473 (C=C), 1272 (N-N=C), 1322 (S-O антисим.), 1129 (S-O сим.), Анализ: C₂₀H₂₆N₆O₄S₂ (474). Рассчит. %: C:50,63, H:4,64, N:17,72. Найдено: C:50,65, H:4,67, N:17,69.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(4-аминофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 18%. Т.пл. 179-181°C (C₂H₅OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,58 (дд, J=8,6, 2,9 Гц, 2H), 7,29 (д, J=3,0 Гц, 1H), 7,19 (д, J=2,8 Гц, 1H), 6,68 (дд, J=8,6, 2,9 Гц, 2H), 6,17 (с, 2H), 4,72 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,78 (с, 3H), 2,61 (с, 6H), ИК v см^-1 3457,3348, 3237 (N-H), 1603 (C=N), 1577, 1518, 1461 (C=C), 1265 (N-N=C), 1331 (S-O антисим.), 1138 (S-O сим.), Анализ: C₂₀H₂₆N₆O₄S₂ (474). Рассчит. %: C:50,63, H:4,64, N:17,72. Найдено: C:50,60, H:4,59, N:17,70.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-бензил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 18%. Т.пл. 178-179°C (CH₃OH); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,42-7,36 (м, 4H), 7,36-7,30 (м, 1H), 7,28 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 4,69 (с, 2H), 4,44, (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,76 (с, 3H), 2,57 (с, 6H), ИК v см^-1 1601 (C=N), 1565, 1517, 1475 (C=C), 1267 (N-N=C), 1339 (S-O антисим.), 1140 (S-O сим.), Анализ: C₂₁H₂₃N₅O₄S₂ (473). Рассчит. %: C:53,27, H:4,86, N:14,80. Найдено: C:53,23, H:4,89, N:14,83.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3-метоксибензил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 58%. Т.пл. 165-166°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,30 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,97 (с, 1H), 6,94 (д, J=7,7 Гц, 1H), 6,90 (дд, J=8,3, 2,5 Гц, 1H), 4,70 (с, 2H), 4,41 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 2,57 (с, 6H), ИК v см^-1 1607 (C=N), 1581, 1515, 1491 (C=C), 1266 (N-N=C), 1334 (S-O антисим.), 1139 (S-O сим.), Анализ: C₂₂H₂₅N₅O₅S₂ (503). Рассчит. %: C:52,48, H:4,97, N:13,91. Найдено: C:52,44, H:4,95, N:12,88.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(4-метоксибензил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 52%. Т.пл. 184-185°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,30 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,29 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,94 (д, J=8,6 Гц, 2H), 4,69 (с, 2H), 4,36 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 2,57 (с, 6H), ИК v см^-1 1610 (C=N), 1571, 1514, 1476 (C=C), 1267 (N-N=C), 1340 (S-O антисим.), 1140 (S-O сим.), Анализ: C₂₂H₂₅N₅O₅S₂ (503). Рассчит. %: C:52,48, H:4,97, N:13,91. Найдено: C:52,45, H:4,99, N:13,94.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3,4-диметоксибензил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 50%. Т.пл. 139-140°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,29 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 6,99 (с, 1H), 6,95 (д, J=8,2 Гц, 1H), 6,90 (дд, J=8,3, 2,0 Гц, 1H), 4,70 (с, 2H), 4,35 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 3,73 (с, 3H), 2,58 (с, 6H), ИК v см^-1 1602 (C=N), 1555, 1516, 1462 (C=C), 1266 (N-N=C), 1336 (S-O антисим.), 1139 (S-O сим.), Анализ: C₂₃H₂₇N₅O₆S₂ (533). Рассчит. %: C:51,78, H:5,06, N:13,13. Найдено %: C:51,81, H:5,10, N:13,15.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3-фенилпропил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 14%. Т.пл. 128-129°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,30-7,26 (м, 3H), 7,23-7,17 (м, 3H), 7,12 (с, 1H), 4,69 (с, 2H), 3,82 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 3,04 (т, J=7,4 Гц, 2H), 2,68 (т, J=7,7 Гц, 2H), 2,59 (с, 6H), 2,03 (p, J=7,6 Гц, 2H), ИК v см^-1 1600 (C=N), 1574, 1516, 1478 (C=C), 1267 (N-N=C), 1334 (S-O антисим.), 1139 (S-O сим.), Анализ: C₂₃H₂₇N₅O₄S₂ (501). Рассчит. %: C:55,09, H:5,38, N:13,97. Найдено %: C:55,11, H:5,41, N:14,01.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(2-пиридинил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 32%. Т.пл. 198-199°C (CH₃OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,76, (с, 1H), 8,23-8,00 (м, 2H), 7,69 (с, 1H), 7,37-7,15 (м, 2H), 4,79 (с, 2H), 3,83 (с, 3H), 3,78 (с, 3H), 2,62 (с, 6H), ИК v см^-1 1599 (C=N), 1576, 1517, 1456 (C=C), 1270 (N-N=C), 1335 (S-O антисим.), 1137 (S-O сим.), Анализ: C₁₉H₂₀N₆O₄S₂ (460). Рассчит. %: C:49,56, H:4,34, N:18,26. Найдено %: C:49,60, H:4,31, N:18,30.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(4-пиридинил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 37%. Т.пл. 231-232°C (C₂H₅OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 8,85 (д, J=5,0 Гц, 2H), 7,91 (д, J=5,0 Гц, 2H), 7,30 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 4,80 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,63 (с, 6H), ИК v см^-1 1600 (C=N), 1561, 1507, 1473, 1411 (C=C), 1274 (N-N=C), 1337 (S-O антисим.), 1138 (S-O сим.), Анализ: C₁₉H₂₀N₆O₄S₂ (460). Рассчит. %: C:49,56, H:4,34, N:18,26. Найдено %: C:49,58, H:4,37, N:18,23.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3-bromo-5-пиридинил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 41%. Т.пл. 227-228°C (C₂H₅OH), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 9,10 (д, J=2,0 Гц, 1H), 8,98 (д, J=2,2 Гц, 1H), 8,58 (с, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,22 (с, 1H), 4,79 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,63 (с, 6H), ИК v см^-1 1600 (C=N), 1573, 1516, 1481, 1440, 1412 (C=C), 1270 (N-N=C), 1338 (S-O антисим.), 1140 (S-O сим.), Анализ: C₁₉H₁₉BrN₆O₄S₂ (539). Рассчит. %: C:42,30, H:3,52, N:15,58. Найдено %: C:42,32, H:3,49, N:15,56.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-циннамил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 44%. Т.пл. 191-193°C (CH₃OH-CH₂Cl₂); ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,81 (д, J=7,1 Гц, 2H), 7,64 (д, J=16,4 Гц, 1H), 7,60 (д, J=16,3 Гц, 1H), 7,52-7,40 (м, 3H), 7,30 (с, 1H), 7,16 (с, 1H), 4,73 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,62 (с, 6H), ИК v см^-1 1630 (CH=CH), 1600 (C=N), 1575, 1576, 1475 (C=C), 1267 (N-N=C), 1332 (S-O антисим.), 1138 (S-O сим.), Анализ: C₂₂H₂₃N₅O₄S₂ (485). Рассчит. %: C:54,43, H:4,74, N:14,43. Найдено %: C:54,45, H:4,71, N:14,39.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(E)-4-фторстирил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 73%. Т.пл. 210-212 °C. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7,89 (дд, J=8,6, 5,6 Гц, 2H), 7,65 (д, J=16,4 Гц, 1H), 7,58 (д, J=16,4 Гц, 1H), 7,36-7,25 (м, 2H), 7,16 (с, 1H), 4,72 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 2,60 (с, 6H). ИК v см^-1 2926, 2853, 1736, 1631, 1601, 1513, 1494, 1474, 1387, 1337, 1268, 1231, 1139, 1156, 1048.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(E)-4-хлорстирил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол

Выход: 72%. Т.пл. 229-231 °C. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7,84 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,64 (с, 2H), 7,53 (д, J=8,6 Гц, 2H), 7,30 (с, 1H), 7,15 (с, 1H), 4,72 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 2,61 (с, 6H). ¹³C ЯМР (126 МГц, DMSO-d6) δ 165,7, 151,9, 147,2, 146,3, 139,4, 134,8, 133,3, 129,8, 129,0, 127,9, 126,1, 119,0, 115,5, 112,7, 55,9, 36,8, 27,6. ИК v см^-1 2934, 2844, 1726, 1633, 1516, 1488, 1473, 1410, 1381, 1339, 1268, 1224, 1139, 1175, 1087.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(E)-3-фторстирил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 52%. Т.пл. 212-215 °C. ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 7,92-7,73 (м, 2H), 7,68 (td, J=8,1, 5,8 Гц, 1H), 7,55 (td, J=8,6, 2,4 Гц, 1H), 7,30 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 4,78 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,80 (с, 3H), 2,63 (с, 6H). ИК v см^-1 2929, 2844, 1589, 1516, 1474, 1387, 1338, 1270, 1228, 1174, 1155, 1140, 1042

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-феноксиметил-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 41%. Т.пл. 178-179°C (CH₃OH-CH₂Cl₂), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,37-7,31 (м, 2H), 7,29 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 7,09 (д, J=7,7, 1,0 Гц, 2H), 7,06-7,01 (м, 1H), 5,55 (с, 2H), 4,72 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,78 (с, 3H), 2,58 (с, 6H), ИК v см^-1 1598 (C=N), 1572, 1516, 1479 (C=C), 1267 (N-N=C), 1337 (S-O антисим.), 1139 (S-O сим.), Анализ: C₂₁H₂₃N₅O₅S₂ (489). Рассчит. %: C:51,53, H:4,70, N:14,31. Найдено %: C:51,51, H:4,67, N:14,33.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-[2-(2-метоксифенил)этил]-1,2,4-триазоло [3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 37%. Т.пл. 154-155°C (CH₃OH-CH₂Cl₂), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,29 (с, 1H), 7,21 (м, 1H), 7,17 (д, J=7,5 Гц, 1H), 7,10 (с, 1H), 6,95 (д, J=8,2 Гц, 1H), 6,84 (т, J=7,26 Гц, 1H), 4,67 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 3,29 (м, 2H), 3,01 (т, J=7,5 Гц, 4H), 2,56 (с, 6H), ИК v см^-1 1601 (C=N), 1569, 1519, 1477 (C=C), 1267 (N-N=C), 1336 (S-O антисим.), 1139 (S-O сим.), Анализ: C₂₃H₂₇N₅O₅S₂ (517). Рассчит. %: C:53,38, H:5,22, N:13,53. Найдено %: C:53,41, H:5,19, N:13,56.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-[2-(4-метоксифенил)этил]-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 41%. Т.пл. 151-152°C (CH₃OH-CH₂Cl₂), ¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 7,29 (с, 1H), 7,18 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,11 (с, 1H), 6,83 (д, J=8,1 Гц, 2H), 4,67 (с, 2H), 3,83 (с, 3H), 3,77 (с, 3H), 3,71 (с, 3H), 2,99 (т, J=7,6 Гц, 2H), 2,55 (с, 6H), ИК v см^-11601 (C=N), 1569, 1519, 1477 (C=C), 1267 (N-N=C), 1336 (S-O антисим.), 1139 (S-O сим.), Анализ: C₂₃H₂₇N₅O₅S₂ (517). Рассчит. %: C:53,38, H:5,22, N:13,53. Найдено %: C: 53,35, H:5,24, N:13,50.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(3-хлорфенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 45%. Т.пл. 237-239 °C, ¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 7,86 (с, 1H), 7,74 (д, J=7,7 Гц, 1H), 7,56 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,53-7,39 (м, 2H), 6,99 (с, 1H), 4,90 (с, 2H), 3,93 (с, 3H), 3,87 (с, 3H), 2,72 (с, 6H). ¹³C ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 164,9, 153,1, 152,5, 147,7, 146,8, 135,7, 132,7, 130,9, 130,8, 127,9, 127,03, 127,0 125,3, 114,4, 113,4, 56,4, 56,2, 36,9, 27,9. ИК v см^-1 3088, 3056, 2955, 2927, 2852, 2616, 1598, 1573, 1518, 1482, 1470, 1439, 1405, 187, 1339, 1270, 1228, 1175, 1139, 1101, 1078, 1043.

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(4-нитрофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 53%. Т.пл. 223-225 °C, ¹H ЯМР (500 МГц, CDCl₃) δ 8,39 (д, J=8,7 Гц, 2H), 8,08 (д, J=8,7 Гц, 2H), 7,45 (с, 1H), 7,00 (с, 1H), 4,94 (с, 2H), 3,93 (с, 3H), 3,88 (с, 3H), 2,73 (с, 6H), ¹³C ЯМР (126 МГц, CDCl₃) δ 163,9, 153,1, 152,5, 150,1, 147,9, 147,1, 134,8, 128,2, 127,5, 126,9, 124,7, 114,5, 113,1, 113,1, 56,4, 37,1, 28,0, ИК v см^-1 3108, 3004, 2931, 2837, 1600, 1534, 1571, 1518, 1471, 1351, 1337, 1270, 1227, 1138, 1049

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(4-фторфенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 66%. Т.пл. 220-223 °C, ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,02 (дд, J=8,8, 5,2 Гц, 2H), 7,48 (т, J=8,8 Гц, 2H), 7,30 (с, 1H), 7,20 (с, 1H), 4,78 (с, 2H), 3,84 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 2,62 (с, 6H), ИК v см^-1 2933, 2842,1602, 1517, 1475, 187, 1337, 1268, 1241, 1225, 1139, 1042

3-[2-(N,N-диметилсульфамоил)-4,5-диметоксибензил]-6-(2,4-динитрофенил)-1,2,4-триазоло[3,4-b]-1,3,4-тиазол.

Выход: 29%. Т.пл. 162-164 °C, ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ 8,74 (с, 1H), 8,69 (д, J=8,4 Гц, 1H), 8,50 (д, J=8,6 Гц, 1H), 7,29 (с, 1H), 7,13 (с, 1H), 4,74 (с, 2H), 3,83 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 2,58 (с, 6H), ¹³C ЯМР (126 МГц, DMSO-d6) δ 161,2, 153,8, 151,9, 150,5, 149,3, 147,3, 146,3, 128,2, 127,7, 127,6, 126,9, 126,1, 124,3, 115,4, 112,8, 55,9, 55,8, 36,7, 27,6, ИК v см^-1 2917, 2850, 1729, 1555, 1514, 1457, 1346, 1308, 1270, 1223, 1137, 1042

Пример 3

In vitro исследование цитостатическо-цитотоксической активности в отношении человеческих линий клеток рака и лейкоза

Настоящий пример иллюстрирует цитостатическо-цитотоксические эффекты следующих соединений согласно настоящему изобретению в отношении человеческих клеточных линий рака яичника UWB1,289 (с мутантом BRCA1), UWB1,289+BRCA1, OVCAR-3, SCOV-3, человеческих клеточных линий рака молочной железы MCF-7 [экспрессирующих рецепторы эстрогена, белков, связывающих инсулиноподобный фактор роста (IGFBP) BP-2, BP-4; BP-5), онкоген WNT7B], T-47D (положительной в отношении экспрессии всех стероидных рецепторов и онкогена WNT7B), человеческой линии раковых клеток гормон-резистентного рака предстательной железы PC-3, человеческой линии острого T-клеточного лейкоза MOLT-4 (не демонстрирующей экспрессию мутанта онкогена P53) и человеческой клеточной линии рака легкого A549, имеющий мутацию в онкогене KRAS (p. G12S c, 34G>A).

Заместитель R3 изученных соединений определен в Таблице 1:

Ένωση	R₃	Ένωση	R₃
TS167	C₆H₅-	TS50	4-CH₃O-C₆H₄CH₂-
TS63	4-Cl-C₆H₄-	TS51	3,4-CH₃O-C₆H₃CH₂-
TS57	2-NH₂-C₆H₄-	TS56	C₆H₅-OCH₂-
TS70	3-NH₂-C₆H₄-	TS53	C₆H₅-CH=CH-
TS71	4-NH₂-C₆H₄-	TS54	2-CH₃O-C₆H₄CH₂CH₂-
TS61	2-Cl-4-NO₂-C₆H₃-	TS55	4-CH₃O-C₆H₄CH₂CH₂-
TS60	2-CH₃-4-NO₂-C₆H₃-	TS52	C₆H₅CH₂CH₂CH₂-
TS59	3,4,5-CH₃O-C₆H₂-	TS66
TS62	C₆H₅CH₂-	TS65
TS58	3-CH₃O-C₆H₄CH₂-	TS67
TS22	3-Cl-C₆H₄-	TS25	4-F-C₆H₄-CH=CH-
TS29	3-F-C₆H₄-	TS26	4-Cl-C₆H₄-CH=CH-

Таблица 1

Специфические характеристики линий клеток рака яичника

SKOV-3 (SKOV-3) (ATCC HTB 77) и OVCAR-3 (ATCC® HTB-161™)

Человеческие клетки аденокарциномы яичника, выращенные легко в однослойной культуре с эпителиоподобной морфологией. SKOV-3 резистентны к фактору некроза опухоли (TNF) и к другим цитотоксическим лекарственным средствам, таким как цисплатин и адриамицин, в то время как OVCAR-3 резистентны к адриамицину, цисплатину и мелфалану. Эти клеточные линии экспрессируют рецепторы андрогенов, эстрогенов и прогестерона. Когда клетки SKOV-3 или OVCAR-3 внедряют подкожно голым мышам, мышам SCID, развивается умеренно дифференцированная опухоль, и полученная модель напоминает первичную овариальную аденокарциному у человека.

UWB1.289 (ATCC CRL-2945)

Человеческие овариальные клетки аденокарциномы, выращенные легко в однослойной культуре, имеют морфологию эпителиальных раковых клеток и не экспрессируют эстрогеновые и прогестероновые рецепторы. Кроме того, клетки UWB1.289 имеют мутированный ген-супрессор опухоли p53 и положительную экспрессию белка опухоли Вилмса (WT), не имеют функционального гена BRCA1 и являются положительными в отношении экспрессии цитокератина 7 (CK-7), калретинина и белка опухоли Вилмса (WT). Наконец, они чувствительны к ионизирующему излучению.

UBWB1.289+BRCA1 (ATCC CRL-2946)

Человеческие овариальные клетки аденокарциномы, полученные из UBWB1.289, в которых было восстановлено присутствие гена BRCA1. Они легко растут в культуре, создавая монослои, имеют морфологию эпителиальных раковых клеток и не экспрессируют эстрогеновые и прогестероновые рецепторы. Они не чувствительны к ионизирующему излучению и радиоиммунным химическим веществам (например, алкилирующим агентам). Кроме того, клетки UWB1.289 имеют мутированный ген-супрессор опухоли p53 и являются положительными в отношении экспрессии цитокератина 7 (CK-7), калретинина и белка опухоли Вилмса (WT).

Клеточная культура

Все линии раковых клеток хранят в резервуаре с жидким азотом в криоампулах на 2,5 мл (Corning-Costar, Кембридж, Массачусетс). DMSO (диметилсульфоксид) действует как криопротектор и добавляется для предотвращения формирования ледяных кристаллов, которые могут привести к лизису клеток. Клетки выращивали как однослойные культуры в колбах T-75 (Corning-Costar, Кембридж, Массачусетс) и сохраняли при 37^oC в инкубаторе с 5% CO₂ и при относительной влажности 100%. Используемой культуральной средой является McCoy's 5a Medium, дополненная 10%-й эмбриональной бычьей сывороткой (FBS, Gibco) и 1% антибиотиков (100 МЕ/мл пенициллина/100 мкг/мл стрептомицина), стерилизованная фильтрацией (Фильтр Corning-Costar, диаметр 0,2 мкм, RPMI-1640 и 50% RPMI-1640 (Каталог No 30-2001) плюс 50%-я среда для выращивания эпителия млекопитающих (MEGM), дополненная 10%-й эмбриональной бычьей сывороткой (FBS, Gibco) и 1% антибиотиков (100 МЕ/мл пенициллина/100 мкг/мл стрептомицина). Пассаж осуществляли каждые 3-4 дня следующим образом: Клетки промывали стерильным PBS (Фосфатный буферный солевой раствор): 8 г/л NaCl, 0,2 г/л KCl, 1,15 г/л Na₂HPO₄, 0,2 г/л KH₂PO₄. pH:7,4), добавляли 2-3 мл 0,05% трипсина (Gibco 1:250) и 0,02% EDTA, чтобы покрыть монослой, и инкубировали колбу при 37°C в течение 5-10 минут. Трипсин-EDTA используется в основном, чтобы отделить клетки от колбы и получить суспензию отдельных клеток. Наконец, число клеток может быть определено прямым подсчетом с помощью камеры Neubauer, и жизнеспособность клеток определяют путем окрашивания клеток трипановым синим.

In vitro исследование

В экспериментальном исследовании in vitro эффект соединения типа (I) был оценен в отношении клеточных линий рака яичника UWB1.289, UWB1.289+BRCA1 и SKOV-3. Клетки высевали на планшет с 96 лунками (MTP) при плотности 1×10⁴ клеток/мл на лунку и сохраняли в течение 72 ч при 37°C в инкубаторе с 5% CO₂, и выращивали как монослои. Выбор начального числа клеток был сделан согласно скорости пролиферации клеточной линии с тем, чтобы клетки в течение эксперимента находились в фазе экспоненциального (log) роста. Через 24 часа клетки обрабатывали 1-100 мкмоль/л тестируемых соединений в течение 48 ч. Эксперименты проводили с использованием тройных лунок. Жизнеспособность культивируемых клеток оценивали с помощью метаболического теста с (3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромидом (MTT), как описано ранее (Finlay GJ, Wilson WR and Baguley BC: Comparison of in vitro activity of cytotoxic drugs towards human carcinoma and leukaemia cell lines. Eur J Cancer Clin Oncol 22: 655-662, 1986; Alley MC, Scudiero DA, Monks A, Hursey ML, Czerwinski MJ, Fine DL, et al. Feasibility of drug screening with panels of human tumor cell lines using a microculture tetrazolium assay. Cancer Res 1988; 48:589-601). MTT (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) растворяли в PBS в концентрации 5 мг/мл, стерилизовали фильтрацией и сохраняли при 4°C. MTT (50 мкл стокового раствора) добавляли к каждой культуре и инкубировали в течение 3 ч при 37°C для обеспечения метаболизации. Кристаллы формазана растворяли с помощью DMSO (100 мкл). Поглощение конвертированного красителя измеряли при длине волны 540 нм на ридере ELISA (BioTek, Винооски, Вермонт, США).

Средние концентрации каждого соединения, генерирующие 50% или полное (100%) ингибирование роста (GI₅₀ и TGI, соответственно), а также концентрации соединения, демонстрирующие цитотоксичность в отношении 50% культивируемых клеток [(половина максимальной ингибирующей концентрации (IC₅₀)] вычисляли с помощью способа линейной регрессии. Используя семь измерений поглощения [время 24 ч (Ct24), контрольный рост 72 ч (Ct72) и исследование роста в присутствии лекарственного средства при пяти уровнях концентрации (Tt72x)], процент роста вычисляли при каждом уровне концентраций лекарственного средства. Процент ингибирования роста вычисляли согласно Национальному институту онкологии (NCI) как:

[(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)]×100 для концентраций, для которых Tt72x>Ct24 и

[(Tt72x)-(Ct24)/Ct24]×100 для концентраций, для которых Tt72x<Ct24

GI₅₀: средняя концентрация, вызывающая 50%-е ингибирование роста клеток (Ингибирование роста 50%). Вычисление значения основывается на формуле:

(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)×100=50

TGI: средняя концентрация, вызывающая 100%-е ингибирование роста клеток (Полное ингибирование роста). Значение вычисляется согласно формуле:

(Tt72x)-(Ct24)/(Ct72)-(Ct24)×100=0

IC₅₀: средняя концентрация, убивающая 50% клеток (Ингибирующая концентрация 50%). Значение вычисляется согласно формуле:

(Tt72x)-(Ct24)/(Ct24)×100=50

Результаты

Результаты анализировали с использованием t-теста Стъюдента. P<0,05 считали статистически значимым.

Результаты in vitro исследования представлены в Таблице 2.

	Соед.	GI50 (мкМ)	TGI (мкМ)	IC50 (мкМ)		GI50 (мкМ)	TGI (мкМ)	IC50 (мкМ)		GI50 (мкМ)	TGI (мкМ)	IC50 (мкМ)
UWB1.289+BRCA1	TS53	12	28	42	OVCAR-3	5	12	25	SKOV-3	8	16	32
	TS63	8	64	>100		3	32	>100		8	38	>100
	TS62	8	64	>100		8	68	>100		12	56	>100
	TS50	16	>100	>100		5	86	>100		6	>100	>100
	TS66	>100	>100	>100		24	>100	>100		20	>100	>100
	TS167	76	>100	>100		65	>100	>100		80	>100	>100
	TS71	90	>100	>100		97	>100	>100		>100	>100	>100
	TS57	85	>100	>100	95	>100	>100	>100	>100	>100
	TS22	16	>100	>100		90	>100	>100		60	100	>100
	TS25	5	12	36		24	68	94		18	52	80
	TS29	10	64	>100		74	>100	>100		45	84	>100
TS26	11	37	54	41	87	>100	38	72	>100
UWB1.289	TS53	12	56	>100	MCF-7	15	45	>100	T-47D	8	37	>100
	TS63	30	50	>100		22	50	>100		27	55	>100
	TS62	13	>100	>100		18	>100	>100		24	>100	>100
	TS50	30	>100	>100		40	>100	>100		28	>100	>100
	TS66	>100	>100	>100		>100	>100	>100		>100	>100	>100
	TS167	56	>100	>100		65	>100	>100		52	>100	>100
	TS71	>100	>100	>100		>100	>100	>100		>100	>100	>100
TS57	>100	>100	>100	>100	>100	>100	>100	>100	>100
	TS22	88	>100	>100		24	90	>100		48	97	>100
	TS22	16	>100	>100		90	>100	>100		60	100	>100
	TS25	2	4	60		16	51	86		12	34	76
	TS29	10	67	>100		66	>100	>100		48	86	>100
TS26	8	21	72	25	67	>100	78	>100	>100
PC-3	TS53	12	31	85	MOLT-4	4	21	36	A-549	9	24	58
	TS63	20	45	>100		6	45	78		14	36	92
	TS62	27	>100	>100		7	55	>100		15	71	>100
	TS50	44	>100	>100		10	>100	>100		35	>100	>100
	TS66	>100	>100	>100		85	>100	>100		>100	>100	>100
	TS167	62	>100	>100		42	>100	>100		74	>100	>100
	TS71	>100	>100	>100		55	>100	>100		>100	>100	>100
TS57	>100	>100	>100	94	>100	>100	>100	>100	>100
	TS22	>100	>100	>100		72	>100	>100		45	95	>100
	TS25	8	24	69		16	29	78		11	56	87
	TS29	85	>100	>100		61	>100	>100		30	71	>100
TS26	19	47	86	32	81	>100	20	90	>100

Таблица 2

12 производных 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола TS167, TS70, TS61, TS60, TS59, TS58, TS51, TS56, TS54, TS55, TS52, TS65 показывают более мощную цитостатическую (IG50 < 100 мкм), чем цитотоксическую противораковую активность при протестированной концентрации с IC50 > 100 мкМ во всех 9 человеческих линиях раковых клеток.

Пример 4

Исследование токсичности у мышей C57Bl/6 in vivo

Острая токсичность in vivo

Острую токсичность соединений оценивали по летальности путем тестирования различных концентраций, начиная с 100 мг/кг. Терапевтическая доза тестируемого соединения определяется как LD10 (летальная доза для 10% животных). Для внутрибрюшинного (i.p.) лечения стоковые растворы тестируемых соединений готовили непосредственно перед использованием. Их суспендировали в кукурузном масле при желаемой концентрации после начального растворения в 10%-м диметилсульфоксиде (DMSO). Самцов и самок C57Bl/6 использовали для исследований токсичности. Мышей держали в условиях постоянной температуры и влажности в стерильных клетках с водой и пищей.

Результаты исследования острой токсичности представлены в Таблице 3.

Соединение	LD50 (мг/кг)		LD10 (мг/кг)

TS53		375		>500
TS63		430		>500
TS62		480		>500
TS25		345		>500
TS26		365		>500
TS50		>500		>500
TS66		>500		>500
TS167		>500		>500
TS71		>500		>500
TS57		>500		>500

Таблица 3

Известно, что все соединения производили относительно очень низкую острую токсичность на мышах C57Bl/6. Все LD10 от i.p. введения тестируемых производных 1,2,4-триазоло-[3,4-b]-1,3,4-тиадиазола составляли более 350 мг/кг, тогда как LD50 не были достигнуты в любом случае. Для производных TS50, TS66, TS167, TS71, TS57, TS167, TS70, TS61, TS60, TS59, TS58, TS51, TS56, TS54, TS55, TS52 и TS65, острая токсичность не была продемонстрирована при i.p. введении в более высоких дозах, и LD10 и LD50 не были достигнуты (>500 мг/кг).

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль

в которой

R₁ и R₂ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из C₁-C₅ алкила,

R₃ выбран из группы, состоящей из CH₂R₈, CH₂CH₂R₈, CH=CHR₈,CH₂CH₂CH₂R₈, CH₂-OR₈, замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, ΝΟ₂,

R₄, R₅, R₆, R₇ являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из H, OCH₃,

R₈ представляет собой замещенный или незамещенный фенил, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, I, NO₂.

2. Соединение по п. 1, в котором R₁ и R₂являются одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из C₁-C₃ алкила.

3. Соединение по п. 1 или 2, в котором R₁ и R₂обозначают метил.

4. Соединение по любому из пп. 1-3, в котором R₃ выбран из группы, состоящей из CH₂CH₂R₈, CH=CHR_8,CH₂CH₂CH₂R₈, замещенного или незамещенного фенила, бензила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, ΝΟ₂.

5. Соединение по любому из пп. 1-4, в котором R₃ выбран из группы, состоящей из CH=CHR₈, CH₂CH₂CH₂R₈, замещенного или незамещенного фенила, пиридила, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из F, Cl, ΝΟ₂.

6. Соединение по любому из пп. 1-5, в котором R₄ и R₇ обозначают Η, R₅ и R₆ обозначают OCH₃.

7. Соединение по любому из пп. 1-6, в котором R₈ представляет собой замещенный или незамещенный фенил, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из метила, F, Cl, Br, ΝΟ₂.

8. Соединение по любому из пп. 1-7, в котором R₈ представляет собой замещенный или незамещенный фенил, причем заместитель или заместители выбраны из группы, состоящей из F, Cl, ΝΟ₂.

9. Фармацевтическая композиция, обладающая противораковой активностью в отношении рака яичника, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких и лимфом и содержащая соединение формулы (Ι) по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.

10. Соединение по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении рака яичника, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких или лимфом.

Изобретение относится к способу получения соединений класса 3-ароил-N-бензил-2-гидрокси-1-оксобензо[d]пирроло[2,1-b]тиазол-3а(1H)-карбоксамидов, обладающих антиоксидантной активностью, которые также могут использоваться как исходные продукты для синтеза новых гетероциклических систем и лекарственных препаратов в фармакологии.

Производное п-фенилендиамина как регулятор калиевых каналов, способ его получения и медицинского применения // 2762562

Настоящее изобретение относится к соединению, представленному общей формулой А, в которой: когда кольцо В представляет собой , кольцо А представляет собой тиофен, когда кольцо В представляет собой кольцо А представляет собой бензольное кольцо, R1 - заместитель в кольце А и представляет собой галоген, R2 - заместитель в кольце В и представляет собой атом водорода, R3 и R4 - заместители в шестичленном кольце и представляют собой независимо атом водорода или C1-6-алкил, Y представляет собой СН, Z представляет собой (CH2)n, где n - целое число от 1 до 6, R5 представляет собой C1-6-алкил, или его фармацевтически приемлемой соли.

Производные n-(замещенный фенил)-сульфонамида в качестве ингибиторов киназы // 2753520

Изобретение относится к соединениям формулы (I) и его фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибитора активности протеинкиназы РНК-подобной ER киназы (PERK киназы), способу их получения, фармацевтической композиции и продукту на их основе, in vitro способу ингибирования активности PERK киназы и применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в производстве лекарственного средства для лечения заболевания, вызванного и/или связанного с нарушением регуляции активности PERK киназы, где указанное заболевание выбирают из группы, состоящей из карцином, гематологических опухолей, множественных миелом и нейродегенеративных заболеваний.

Противоинфекционные соединения // 2753403

Настоящее изобретение относится к соединению с общей формулой I где А - фрагмент, выбранный из группы, состоящей из: имеющему ингибирующую активность в отношении роста бактерий, предпочтительно роста М. tuberculosis, а также к фармацевтической композиции и способу лечения бактериальной инфекции, такой как туберкулез.

Новые антимикробные соединения, их применение для лечения инфекций млекопитающих и новый метаболический механизм // 2752568

Изобретение относится к соединению, выбранному из (S)-7-Метил-2-(2-метил-1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил)-8-нитро-6-(трифторметил)-4H-1,3-бензотиазин-4-она, (S)-5-Метил-2-(2-метил-1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил)-8-нитро-6-(трифторметил)-4H-1,3-бензотиазин-4-она и 2-(4-(Циклогексилметил)пиперазин-1-ил)-5-метил-8-нитро-6-(трифторметил)-4H-1,3-бензотиазин-4-она, обладающим активностью против штаммов Mycobacterium tuberculosis H37Rv и (PDR) 12700, M.

Производные тиазолопиридина как агонисты gpr119 // 2749111

Настоящее изобретение относится к новым соединениям формулы (II), Y, R1, R2 приведены в формуле изобретения. Соединения по изобретению предназначены для применения для лечения заболеваний, опосредованных GPR119.

Производное с конденсированным кольцом в качестве ингибитора рецептора a2a // 2748993

Настоящее изобретение относится к соединению, представленному формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, В соединении формулы (I): 1 или 2 из T1, T2, T3 и T4 представляют собой N, при этом остальные независимо представляют собой CH; каждый R1 независимо выбран из H, галогена, NH2 или C1-3алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 R; каждый R2 независимо выбран из H, галогена или C1-3алкила; n выбран из 0 и 1; m выбран из 0, 1 и 2; кольцо A выбрано из 5-10-членного гетероарила; каждый «гетеро» в 5-10-членном гетероариле независимо выбран из N, S и NH; число гетероатомов или гетероатомных групп в 5-10-членном гетероариле независимо выбрано из 1, 2 и 3; кольцо B выбрано из фенила и 5-6-членного гетероарила; каждый «гетеро» в 5-6-членном гетероариле независимо выбран из N, O и S; число гетероатомов или гетероатомных групп в 5-6-членном гетероариле независимо выбрано из 1 и 2; R выбран из F, Cl, Br и I.

Соединения и композиции для подавления активности shp2 // 2744988

Изобретение относится к области органической химии, а именно гетероциклическому соединению формулы I и II, где R1 выбирают из: R2 и R3 вместе с атомом азота, к которому присоединены оба R2 и R3, образуют кольцо, выбранное из пиперидинила, пиперазинила, 2-окса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ила, 8-азаспиро[4.5]декан-8-ила и пирролидинила; где указанные пирролидинил, пиперазинил, 2-окса-8-азаспиро[4.5]декан-8-ил, 8-азаспиро[4.5]декан-8-ил или пиперидинил не замещены или замещены 1-3 группами, независимо выбранными из аминогруппы, метила, этила, амино-метила, метил-аминогруппы, гидроксила, цианогруппы, фтор-метила, фтора и ((((5-метил-2-оксо-1,3-диоксол-4-ил)метокси)карбонил)амино)метила; R4 представляет собой гидроксил; R5 выбран из Н и метила; R6 выбран из водорода, метила и фенила; R7 выбран из водорода, метила, этила, фенила и бензила; R8 выбран из водорода и метила; Y1 выбран из N и CH; Y2 представляет собой CH; Y3 выбран из NН и CH2; Y4 представляет собой N; Y5 представляет собой N.

Арильные, гетероарильные и гетероциклические соединения для лечения заболеваний // 2743298

Настоящее изобретение относится к области органической химии, а именно к соединению, имеющему формулу, указанную ниже, или его фармацевтически приемлемой соли: .В котором А выбран из В выбран из С представляет собой L представляет собой R32 выбран из: R6 выбран из С2-С6алканоила; R8 и R8' представляют собой водород; X11 представляет собой CR11; X12 представляет собой CR12; X13 представляет собой CR13; X14 представляет собой CR14; один из R12 и R13 выбран из R31 и другой из R12 и R13 выбран из R32; R11 и R14 независимо выбраны в каждом случае из водорода и C1-С6алкила; R31 представляет собой водород; R17 представляет собой водород; R18 и R18' представляют собой водород или C1-С6алкил; и m имеет значения 0 или 1.

Способ получения гетероарильного производного пиримидона и промежуточного соединения гетероарильного производного пиримидона // 2741788

Изобретение относится к способу получения соединения формулы (I), который включает стадию взаимодействия соединения формулы (III) с соединением формулы (II) с получением соединения формулы (I), где G представляет собой C, D и E представляют собой N, или D представляет собой C, а E представляет собой S; R1 выбран из группы, состоящей из С1-4 алкила, фенила и пиридазинила; R2 представляет собой С1-4 алкил, где С1-4 алкил дополнительно замещен одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из фенила, где фенил дополнительно замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена; R3 представляет собой С1-4 алкил; R4 выбран из группы, состоящей из водорода и фенила; Ra представляет собой С1-4 алкил; m равно 0; и n равно 1; реакционным растворителем является тетрагидрофуран, реагент имеет в своем составе N,N-диизопропилэтиламин, и реакционный раствор перемешивают при 15-40°C в течение 16-18 часов, при этом способ дополнительно включает следующие стадии: взаимодействия соединения формулы (VI) с соединением формулы (V) с получением соединения формулы (IV), затем из соединения формулы (IV) получают соединение формулы (III), где соединение формулы (VI) представляет собой монометаллический алкоксид или биметаллический алкоксид, M выбран из иона натрия; где для реакции превращения соединения (VI) в соединение (IV) реакционным растворителем является N,N-диметилформамид, реагент имеет в своем составе 2,6-дифторхлорбензил и N,N-диизопропилэтиламин, и реакционный раствор нагревают до 80-110°C и перемешивают в течение 1-3 часов, где для реакции превращения соединения (IV) в соединение (III) реакционным растворителем является этанол, реагент имеет в своем составе соляную кислоту и дигидрат хлорида олова, и реакционный раствор перемешивают при 15-40°C в течение 1-3,5 часов, при этом способ дополнительно включает стадию получения соединения формулы (VI) из соединения формулы (VII), где Rb представляет собой алкил, реакционным растворителем является метанол, реагент имеет в своем составе метилат натрия, и реакционный раствор перемешивают при 30°C в течение примерно 15 часов.

Ингибиторы ezh2 человека и способы их применения // 2765155

Настоящее изобретение относится к ингибированию форм дикого типа и определенных мутантных форм метилтрансферазы гистонов EZH2 человека - каталитической субъединицы комплекса PRC2, которая катализирует от моно- до триметилирования лизина 27 на гистоне H3 (H3-K27), к способам лечения различных типов рака, включающих фолликулярную лимфому и диффузную крупно-B-клеточную лимфому (DLBCL), и к способам определения способности к ответу на ингибитор EZH2 у индивидуума.