Способ выделения восьми соединений из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины

Авторы патента:

ЧЖАН, Чуанфэн (CN)

ШЭНЬ, Шуо (CN)

СУН, Ляньцян (CN)

C07H17/04 - гетероциклические радикалы, содержащие только кислород в качестве гетероатомов

A61K36/78 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

A61K33/06 - алюминий, кальций или магний; их соединения

A61K31/045 - оксисоединения, например алкоголяты (гидропероксиды A61K 31/327)

Владельцы патента RU 2769512:

ШИЦЗЯЧЖУАН ИЛИН ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД. (CN)

Изобретение относится к способу выделения компонентов из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины. По результатам систематических исследований в отношении материалов лекарственных средств китайской медицины для прояснения фармакологического механизма действия соединения и закономерности совместимости соединений с одновременным тщательным изучением химического состава фармацевтической композиции по данной схеме было выделено 8 соединений, которые представляли собой 10-О- (п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту, алоэ-эмодин-8-О-β-D-глюкопиранозид, кверцетин, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид, ликвиритин-апиозид, эпивогелозид, вогелозид и этилкофеат. Изобретение обеспечивает повышение качества полученной фармацевтической композиции с проявлением более сильного терапевтического эффекта по сравнению с однокомпонентными лекарственными средствами. 5 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

Область техники

Настоящее изобретение относится к способу выделения нескольких компонентов из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины.

Предпосылки изобретения

Многокомпонентные составы являются основной формой лекарственных средств китайской медицины. За прошедшие несколько тысяч лет клинического применения лекарственные средства на основе многокомпонентных составов смогли продемонстрировать более сильный терапевтический эффект по сравнению с однокомпонентными лекарственными средствами, что уже полностью доказывает научность получения многокомпонентного состава. Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим решением состоит из 13 лекарственных средств китайской медицины, таких как форсайтия свисающая, жимолость японская, сушеная эфедра китайская и др., при этом она обладает противоэпидемическим и дезинтоксикационным действием, а также удаляет жар для повышения рассеивающей функции легких и применяется в лечении эпидемического гриппа. Клинические исследования подтверждают однозначное лечебное действие и выраженный эффект фармацевтической композиции в соответствии с настоящим решением при лечении гриппа и острой инфекции верхних дыхательных путей. Для выяснения фармакологического механизма действия многокомпонентных составов и научного обоснования закономерности совместимости лекарственных веществ в многокомпонентных составах крайне необходимо провести систематическое исследование их материальной основы. Поэтому химический состав фармацевтической композиции в соответствии с настоящим решением был тщательно изучен, при этом было выделено 8 соединений, которые представляли собой 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид, кверцетин, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид (матаирезинол-4'-O-глюкозид), ликвиритин-апиозид, эпивогелозид, вогелозид и этилкофеат. На основании этого предложен новый способ выполнения контроля качества фармацевтической композиции в соответствии с настоящим решением.

Суть изобретения

Техническая задача

Согласно настоящему изобретению предложен способ выделения 8 соединений из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины.

Техническое решение

Композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 200–300; эфедры китайской 60–100; ревеня лекарственного 40–60; гуттуинии сердцелистной 200–300; жимолости японской 200–300; вайды красильной 200–300; пачули 60–100; высушенных корневищ щитовника 200–300; родиолы розовой 60–100; ментола 5-9; горького миндаля 60–100; корня солодки 60–100 и гипса 200–300.

Указанный способ выделения согласно настоящему изобретению включает следующие этапы, на которых:

(1) общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом и 50% этанолом; соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части;

(2) берут экстракт элюированной 50% этанолом части, полученный на этапе (1), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG; после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG; последовательно элюируют раствором метанол-вода при соотношениях 20:80, 40:60, 60:40, 80:20 и 100% метанолом с получением в результате Fr.A - Fr.E;

(3) берут образец Fr.A, полученный на этапе (2), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;

(4) берут образец Fr.A-2, полученный на этапе (3), и смешивают его с силикагелем, затем загружают в колонку с силикагелем и разделяют в изократическом режиме при объемном соотношении дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;

(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин и 12-13 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении, выполняют следующие разделения:

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, кверцетина;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;

(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со временем удерживания 10-11 мин, 17-19 мин и 21-24 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении; при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду; 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, и после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;

(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин соответственно, и удаляют растворитель при пониженном давлении, собранную жидкость, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, осаждают с образованием белого осадка с помощью раствора метиленхлорида-метанола с объемным соотношением 2:1 с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, колонка для хроматографии: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовой кислоты.

Предпочтительный способ выделения согласно настоящему изобретению включает следующие этапы, на которых:

(1) 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют с помощью 150 л воды, 87,5 л 10% этанола, 225 л 30% этанола и 250 л 50% этанола;

(2) берут 200 г экстракта элюированной 50% этанолом части, полученного на этапе (1), добавляют к 200 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG S-50 мкм, после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG, S-50 мкм с соотношением высоты слоя 1:4, при пониженном давлении последовательно элюируют с помощью 6 л раствора метанол-вода с соотношением 20:80, с помощью 7 л раствора с соотношением 40:60, с помощью 7 л раствора с соотношением 60:40, с помощью 5 л раствора с соотношением 80:20 и с помощью 3 л 100% метанола с получением в результате Fr.A – Fr.E;

(3) берут 50,0 г образца Fr.A, полученного на этапе (2), добавляют к 50 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75–60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;

(4) берут 3,2 г образца Fr.A-2, полученного на этапе (3), и смешивают его с 6,4 г силикагеля, 200–300 меш, помещают в колонку с силикагелем, соотношение высоты слоя 1:50, разделяют в изократическом режиме с объемным соотношением дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении с получением Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;

(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), растворяют его в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 10-11 мин, 17-19 мин, 21-24 мин соответственно, и растворитель удаляют при пониженном давлении, при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду; время удерживания 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду, фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;

(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, и раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении и собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, в растворе дихлорметана-метанола с объемным соотношением 2:1 осаждают белый осадок с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-О-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовой кислоты.

Предпочтительная композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях:

форсайтии свисающей 200, жимолости японской 300, вайды красильной 200, ревеня лекарственного 40, пачули 60, высушенных корневищ щитовника 300, родиолы розовой 100, ментола 9, эфедры китайской 60, горького миндаля 100, гуттуинии сердцелистной 200, корня солодки 100 и гипса 200.

форсайтии свисающей 300, жимолости японской 200, вайды красильной 300, ревеня лекарственного 60, пачули 100, высушенных корневищ щитовника 200, родиолы розовой 60, ментола 5, эфедры китайской 100, горького миндаля 60, гуттуинии сердцелистной 300, корня солодки 60 и гипса 300.

форсайтии свисающей 278, жимолости японской 294, вайды красильной 285, ревеня лекарственного 55, пачули 95, высушенных корневищ щитовника 290, родиолы розовой 87, ментола 8,5, эфедры китайской 88, горького миндаля 80, гуттуинии сердцелистной 284, корня солодки 95 и гипса 277.

Общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины, описанной в настоящем решении, получают с помощью следующих этапов:

(1) взвешивают лекарственные средства китайской медицины в соответствии с весовым соотношением сырья, тщательно промывают их и измельчают их соответствующим образом;

(2) измельчают пачули, добавляют 10-кратное количество воды с извлечением эфирного масла, время экстракции масла составляет 8 часов, собирают эфирное масло и хранят, после фильтрации экстракта остаток удаляют и применяют фильтрат;

(3) форсайтию свисающую, эфедру китайскую, гуттуинию сердцелистную, ревень лекарственный 3 раза экстрагируют 12-кратным количеством 70% этанола, каждый раз в течение 2,5 часа, экстракты объединяют и фильтруют, этанол удаляют и применяют фильтрат;

(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью от 1,10 до 1,15, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;

(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до получения экстракта с относительной плотностью от 1,15 до 1,20, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.

Полезный эффект

Способ выделения согласно настоящему решению обеспечивает выделение 8 соединений, которые представляют собой 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид, кверцетин, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид, ликвиритин апиозид, эпивогелозид, вогелозид и этилкофеат.

Варианты осуществления данного изобретения

Пример 1

Взвешивают в пропорциях: 20 кг форсайтии свисающей, 30 кг жимолости японской, 20 кг вайды красильной, 4 кг ревеня лекарственного, 6 кг пачули, 30 кг высушенных корневищ щитовника, 10 кг родиолы розовой, 0,9 кг ментола, 6 кг эфедры китайской, 10 кг горького миндаля, 20 кг гуттуинии сердцелистной, 10 кг корня солодки, 20 кг гипса, и выполняют выделение в соответствии со следующим способом:

(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью 1,15, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;

(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до экстракта с относительной плотностью 1,20, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.

Стадии способа выделения являлись следующими.

1. Инструменты и материалы

Инфракрасный спектрометр Bruker Alpha (компания Bruker в Швейцарии); спектрометр ядерного магнитного резонанса Bruker AVIIIHD 600 (компания Bruker в Швейцарии); масс-спектрометр Synapt G2-S (компания Waters, США); препаративный жидкостный хроматограф среднего и низкого давления Combi Flash Rf (компания Teledvne ISCO, США); препаративный жидкостный хроматограф NP7000 (Jiangsu Hanbon Science & Technology, Co.); очиститель чистой воды Milli-Q (компания Millipore, США); аналитические электронные весы AL204 (компания Mettler Toledo, США); обращенно-фазовый силикагель YMC ODS-A-HG, 50 мкм (компания YMC, Япония), силикагель для колоночной хроматографии (100-200 меш и 200-300 меш, Qingdao Ocean Chemical Industry, LC), тонкослойная тоска с силикагелем хроматографии GF₂₅₄ (Qingdao Ocean Chemical Industry, LC); YMC-Pack R&D ODS-A (250 × 20 мм, S-10 мкм, компания YMC, Япония), общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины согласно настоящему решению (Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии: B1509001); хроматографически чистые ацетонитрил и метанол (Shanghai Adamas Reagent Company); аналитические реагенты (Beijing Chemical Factory).

2. Извлечение и выделение

(1) 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины, адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют с помощью 150 л воды, 87,5 л 10% этанола, 225 л 30% этанола и 250 л 50% этанола и, соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозида;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 4, матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозида;

(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), растворяют его в метаноле, пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракцию, соответствующую хроматографическим пикам со значением времени удерживания 10-11 мин, 17-19 мин, 21-24 мин соответственно, и растворитель удаляют при пониженном давлении, при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, эпивогелозиду, 21-24 мин - соединению 7, вогелозиду, фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, ликвиритин-апиозид;

(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), растворяют в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин, удаляют растворитель при пониженном давлении и собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, осаждали в растворе дихлорметана-метанола с объемным соотношением 2:1 осаждают белый осадок с получением соединения 8; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищали с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 1, 10-О-(п-гидроксициннамоил)адоксозидовой кислоты.

3. Идентификация структуры

3.1 Идентификация структуры новых соединений

Соединение 1: светло-желтый порошок, УФ λ_max (MeOH): 228, 312 нм. Инфракрасная спектроскопия показала, что присутствуют гидроксильная группа (3330 см^-1), α,β-ненасыщенная карбонильная группа (1680, 1630 см^-1) и бензольное кольцо (1603, 1514 см^-1). HR-ESI-MS масса/заряд: 521,1699[M-H]^- (рассчитанное значение: 521,1659) в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой C₂₅H₃₀O₁₂. Ненасыщенность составляет 11.

На спектре ¹H-ЯМР (DMSO-d₆, 600 МГц) (таблица 1) показано, что соединение содержит пару двойных транс-связей: δ 7,56 (1H, d, J = 16,2 Гц), 6,39 (1H, d, J = 16,2 Гц) и соответствующие ароматической системе AB атомы водорода: δ 7,55 (2H, d, J = 8,4 Гц), 6,79 (2H, d, J = 8,4 Гц), химический сдвиг водорода на спектре составляет 4,52 (1H, d, J = 7,8 Гц), предположительно водорода является концевым атомом сахара.

На спектре ¹³C-ЯМР (DMSO-d₆, 150 МГц) (таблица 1) показано, что соединение содержит два сопряженных карбонильных углерода (δ_C: 168,4, 167,2) и два различных фрагмента, δ_C: 116,2 (2C), 130,8 (2C), 160,2 представляет собой п-гидроксифенильный фрагмент, δC: 99,3, 77,6, 77,1, 73,6, 70,4, 61,6 представляет собой фрагмент на основе глюкозы.

Согласно HMBC двойные связи с δ_H 7,56 и 6,39 связаны с фенильным углеродом с δ_C 125,5, двойные связи с δ_H 6,39 и -CH₂-δ_H 4,12 связаны с карбонилом с δ_C 167,2. Указанный выше фрагмент не имеет корреляций с другими химическими сдвигами C и H. Предполагается, что этот фрагмент представляет собой независимый фрагмент п-гидроксициннамоила, а оставшийся фрагмент, не включающий сахар, считается ядром. После расчета ненасыщенность ядра равна 4 (содержит карбонильную группу и двойную связь), и предполагается, что ядро имеет структуру двойного кольца. Посредством присваивания и объединения HSQC и HMBC предполагается, что это соединение является иридоидным соединением, а также путем поиска в литературе определили, что ядром данного соединения является аксоксозидовая кислота.

Можно увидеть, что оставшийся фрагмент представляет собой п-гидроксициннаминовую кислоту, которая образует сложный эфир относительно положения 10 ядра на основе адоксозидовой кислоты. Посредством поиска в базе данных SciFinder и Reaxys было определено, что это соединение является новым соединением (конфигурация данного соединения не была подтверждена в этом эксперименте и будет подтверждена в последующих исследованиях), а именно представляет собой 10-О-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту.

Таблица 1. Данные ЯМР для соединения 1

^aВозможно, химические сдвиги обусловлены обменом

3.2 Идентификация структуры известных соединений

Соединение 2: желтый порошок, ESI-MS масса/заряд: 431[M-H]^-, в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой C₂₁H₂₀O₁₀. ¹H-ЯМР (DMSO-d₆, 600 МГц) δ_H: 12,88 (1H, s, OH), 7,89 (1H, dd, J = 1,2, 8,4 Гц, H-5), 7,86 (1H, t, J = 7,8 Гц, H-6), 7,72 (1H, dd, J = 1,2, 8,4 Гц, H-7), 7,66 (1H, brs, H-4), 7,28 (1H, brs, H-2), 5,17 (1H, d, J = 7,8 Гц, аномерный H), 4,62 (2H, s, CH₂OH), 3,72~3,23 (Glc-H). ¹³C-ЯМР (DMSO-d₆, 150 МГц) δ_H: 188,8 (C-9), 182,6 (C-10), 162,2 (C-1), 158,7 (C-8), 152,7 (C-3), 136,4 (C-6), 135,3 (C-10a), 132,7 (C-4a), 122,9 (C-7), 121,2 (C-2), 121,0 (C-5), 116,4 (C-8a, C-9a), 100,9 (C-1'), 77,7 (C-5'), 77,0 (C-3'), 73,7 (C-2'), 70,0 (C-4'), 62,5 (CH₂OH), 61,0 (C-6'). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид.

Соединение 3: желтый порошок, ESI-MS масса/заряд: 447[M-H]^-, в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой C₂₁H₂₀O₁₁. ¹H-ЯМР (DMSO-d₆, 600 МГц) δ_H: 12,66 (1H, s, 5-OH), 7,31 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-2'), 7,26 (1H, d, J = 2,4, 8,4 Гц, H-6'), 6,87 (1H, d, J = 8,4 Гц, H-5'), 6,39 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-8), 6,21 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-6), 5,26 (1H, d, J = 1,8 Гц, аномерный H), 0,82 (3H, d, J = 6,0 Гц, CH 3). ¹³C-ЯМР (DMSO-d₆, 150 МГц) δ_C: 178,2 (C-4), 164,6 (C-7), 161,7 (C-5), 157,7 (C-2), 156,9 (C-9), 148,9 (C-4'), 145,6 (C-3'), 134,7 (C-3), 121,5 (C-6'), 121,2 (C-1'), 116,1 (C-5'), 115,9 (C-2'), 104,5 (C-10), 102,3 (C-1''), 99,1 (C-6), 94,1 (C-8), 71,6 (C-4''), 71,0 (C-3''), 70,8 (C-2''), 70,5 (C-5''), 17,9 (C-6''). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями и соединение идентифицировано как кверцетин.

Соединение 4: желтый порошок, ESI-MS масса/заряд: 519[M-H]^-, в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой C₂₆H₃₂O₁₁. ¹H-ЯМР(DMSO-d₆, 600 МГц) δ_H: 6,99 (1H, d, J = 8,4 Гц, H-5), 6,78 (1H, d, J = 1,8 Гц, H-2'), 6,67 (2H, m, H-5, H-6'), 6,63 (1H, s, H-2), 6,50 (1H, dd, J = 1,8, 8,4 Гц, H-6), 4,84 (1H, d, J = 7,8 Гц, H-1''), 4,09 (1H, t, J = 7,8 Гц, H-9a), 3,86 (1H, t, J = 8,4 Гц, H-9b), 3,72 (6H, d, J = 2,4 Гц, 2×OCH₃). ¹³C-ЯМР (DMSO-d₆, 150 МГц) δ_C: 178,9 (C-9'), 149,1 (C-3'), 147,9 (C-3), 145,7 (C-4'), 145,4 (C-4), 132,2 (C-1'), 130,0 (C-1), 121,8 (C-6'), 121,2 (C-6), 115,9 (C-5'), 115,6 (C-5), 114,3 (C-2'), 113,1 (C-2), 100,6 (C-1''), 77,4 (C-5''), 77,3 (C-3''), 73,7 (C-2''), 71,1 (C-9), 70,1 (C-4''), 61,1 (C-6''), 56,1 (OCH₃), 56,0 (OCH₃), 46,0 (C-8'), 41,3 (C-8), 37,3 (C-7), 33,9 (C-7'). Приведенные выше данные об углеродном спектре в основном согласуются с литературными сведениями, и это соединение идентифицировано как матаирезинол-4'-O-глюкозид.

Соединение 5: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 549[M-H]^-, в сочетании с данными ЯМР молекулярная формула данного соединения представляет собой C₂₆H₃₀O₁₃. ¹H-ЯМР (CD₃OD, 600 МГц) δ_H: 7,70 (1H, d, J = 9,0 Гц, H-5), 7,40 (2H, d, J = 8.4 Гц, H-2', 6'), 7,09 (2H, d, J = 9,0 Гц, H-3', 5'), 6,48 (1H, dd, J = 2,4, 9,0 Гц, H-6), 6,34 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-8), 5,46 (1H, d, J = 1,2 Гц, H-1'''), 5,39 (1H, dd, J = 2,4, 13,2 Гц, H-2), 4,98 (1H, d, J = 7,2 Гц, H-1''), 4,04 (1H, d, J = 9,6 Гц, H-5'''a), 3,89 (1H, d, J = 1,2 Гц, H-2'''), 3,88 (1H, dd, J = 1,2, 12,0 Гц, H-6''a), 3,79 (1H, d, J = 9,6 Гц, H-5'''b), 2,99 (1H, m, H-3a), 2,74 (1H, dd, J = 2,4, 16,8 Гц, H-3b). ¹³C-ЯМР (CD₃OD, 150 МГц) δ_C: 193,2 (C-4), 166,7 (C-7), 165,3 (C-8a), 159,0 (C-4'), 134,3 (C-1'), 129,9 (C-5), 128,8 (C-2', 6'), 117,6 (C-3', 5'), 114,9 (C-4a), 111,8 (C-6), 110,7 (C-1'''), 103,8 (C-8), 100,7 (C-1''), 80,7 (C-2), 80,6 (C-3'''), 78,8 (C-5''), 78,6 (C-2'''), 78,0 (C-2''), 77,9 (C-3''), 75,4 (C-4'''), 71,4 (C-4''), 66,0 (C-5'''), 62,4 (C-6''), 44,9 (C-3). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как ликвиритин-апиозид.

Соединение 6: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 387[M-H]^-, в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула соединения представляет собой C₁₇H₂₄O₁₀. ¹H-ЯМР (CD₃OD, 600 МГц) δ_H: 7,60 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-3), 5,55 (1H, d, J = 1,8 Гц, H-1), 5,48 (1H, m, H-8), 5,31 (1H, s, H-7), 5,29 (1H, m, H-10a), 5,25 (1H, m, H-10b), 4,67 (1H, d, J = 7,8 Гц, H-1'), 3,50 (1H, s, 7-OCH₃), 3,18 (1H, m, H-5), 2,63 (1H, m, H-9), 1,85 (1H, dd, J = 6,0, 13,2 Гц, H-6a), 1,69 (1H, td, J = 3,0, 13,8 Гц, H-6b). ¹³C-ЯМР(CD₃OD, 150 МГц) δ_C: 167,4 (C-11), 154,4 (C-4), 133,3 (C-8), 121,0 (C-10), 105,3 (C-4), 103,3 (C-7), 100,3 (C-1'), 98,5 (C-1), 78,3 (C-5'), 78,0 (C-3'), 74,6 (C-2'), 71,4 (C-4'), 62,6 (C-6'), 57,0 (7-OCH₃), 43,5 (C-9), 30,2 (C-6), 22,8 (C-5). Вышеуказанные характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как эпивогелозид.

Соединение 7: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 387[M-H]^-, в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула соединения представляет собой C₁₇H₂₄O₁₀. ¹H-ЯМР (CD₃OD, 600 МГц) δ_H: 7,58 (1H, d, J = 2,4 Гц, H-3), 5,55 (1H, d, J = 1,2 Гц, H-1), 5,47 (1H, m, H-8), 5,31 (1H, s, H-7), 5,29 (1H, m, H-10a), 5,26 (1H, m, H-10b), 4,66 (1H, d, J = 7,8 Гц, H-1'), 3,54 (1H, s, 7-OCH₃), 3,16 (1H, m, H-5), 2,67 (1H, m, H-9), 1,97 (1H, m, H-6a), 1,44(1H, m, H-6b). ¹³C-ЯМР(CD₃OD, 150 МГц) δ_C: 167,6 (C-11), 154,1 (C-4), 133,0 (C-8), 121,1 (C-10), 105,4 (C-4), 105,1 (C-7), 99,7 (C-1'), 97,9 (C-1), 78,4 (C-5'), 77,8 (C-3'), 74,7 (C-2'), 71,5 (C-4'), 62,6 (C-6'), 57,1 (7-OCH₃), 43,7 (C-9), 31,7 (C-6), 25,3 (C-5). Вышеуказанные характеристики водородного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и сигналам на углеродном спектре присвоены значения, и соединение идентифицировано как вогелозид.

Соединение 8: белый порошок, ESI-MS масса/заряд: 209[M + H]⁺, в сочетании с данными ЯМР определили, что молекулярная формула данного соединения представляет собой C₁₁H₁₂O₄. ¹H-ЯМР (DMSO-d₆, 600 МГц) δ_H: 7,46 (1H, d, J = 15,9 Гц, H-7), 7,04 (1H, brs, H-2), 6,99 (1H, d, J = 8,1 Гц, H-6), 6,75 (1H, d, J = 8,1 Гц, H-5), 6,24 (1H, d, J = 15,9 Гц, H-8), 4,15 (2H, q, J = 7,1 Гц, H-10), 1,24 (3H, t, J = 7,1 Гц, H-11). ¹³C-ЯМР (DMSO-d₆, 150 МГц) δ_C: 166,5 (C-9), 148,6 (C-4), 145,0 (C-7), 145,6 (C-3), 121,3 (C-6), 125,3 (C-1), 115,7 (C-5), 114,7 (C-2), 113,9 (C-8), 59,6 (C-10), 14,3 (C-11). Приведенные выше характеристики водородного спектра и данные углеродного спектра в основном согласуются с литературными сведениями, и соединение идентифицировано как этилкофеат.

Пример 2

Взвешивают в пропорциях: 30 кг форсайтии свисающей, 20 кг жимолости японской, 30 кг вайды красильной, 6 кг ревеня лекарственного, 10 кг пачули, 20 кг высушенных корневищ щитовника, 6 кг родиолы розовой, 0,5 кг ментола, 10 кг эфедры китайской, 6 кг горького миндаля, 30 кг гуттуинии сердцелистной, 6 кг корня солодки, 30 кг гипса, и выполняют выделение в соответствии со следующим способом:

(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью 1,10, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;

(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до экстракта с относительной плотностью 1,15, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.

1. Инструменты и материалы такие же, как в Примере 1.

2. Извлечение и выделение

Берут 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины согласно настоящему решению, адсорбируют на макропористую смолу d-101; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом, 50% этанолом, после концентрирования получают экстракты каждой части; другие стадии выполняют как в примере 1.

3. Результаты оценивали так же, как в примере 1, восемь выделенных соединений представляют собой точно такие же, как полученные в примере 1.

Пример 3

Получают состав лекарственного средства из: 27,8 кг форсайтии свисающей, 29,4 кг жимолости японской, 28,5 кг вайды красильной, 5,5 кг ревеня лекарственного, 9,5 кг пачули, 29 кг высушенных корневищ щитовника, 8,7 кг родиолы розовой, 0,85 кг ментола, 8,8 кг эфедры китайской, 8 кг горького миндаля, 28,4 кг гуттуинии сердцелистной, 9,5 кг корня солодки, 27,7 кг гипса и выполняют выделение в соответствии со следующим способом:

(4) жимолость японскую, гипс, вайду красильную, высушенные корневища щитовника, корень солодки, родиолу розовую добавляют в 12-кратное количество воды и нагревают до кипения, добавляют горький миндаль и 2 раза нагревают, каждый раз в течение 1 часа, экстракты объединяют и фильтруют, фильтрат объединяют с фильтратом, полученным после экстракции масла пачули на этапе (2), концентрируют до прозрачной пасты с относительной плотностью 1,13, измеренной при 60°C, добавляют этанол с доведением концентрации спирта до 70%, помещают в холодильник, фильтруют и удаляют этанол до исчезновения запаха спирта, получают прозрачную пасту, подлежащую применению;

(5) объединяют экстракт, полученный на этапе (4), со спиртовым экстрактом, полученным на этапе (3), концентрируют до экстракта с относительной плотностью 1,18, измеренной при 60°С, и высушивают с получением общего экстракта, подлежащего применению.

1. Инструменты и материалы такие же, как в Примере 1.

2. Извлечение и выделение

Берут 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины согласно настоящему решению, адсорбируют на макропористую смолу HPD-100; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом, 50% этанолом и, соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части; другие стадии выполняют как в примере 1.

3. Оценка результатов

Оценка результатов такая же, как в примере 1, восемь выделенных соединений представляют собой точно такие же, как полученные в примере 1.

Выше приведены только предпочтительные варианты осуществления согласно настоящему решению, и они не предназначены для ограничения настоящего решения. Любая модификация, эквивалентная замена или улучшение, осуществленные в соответствии с идеями и принципами настоящего решения, включены в объем защиты настоящего решения.

1. Способ выделения восьми соединений из композиции на основе лекарственных средств китайской медицины, состоящей из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 200-300, эфедры китайской 60-100, ревеня лекарственного 40-60, гуттуинии сердцелистной 200-300, жимолости японской 200-300, вайды красильной 200-300, пачули 60-100, высушенных корневищ щитовника 200-300, родиолы розовой 60-100, ментола 5-9, горького миндаля 60-100, корня солодки 60-100 и гипса 200-300; при этом способ выделения включает следующие этапы: (1) общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют водой, 10% этанолом, 30% этанолом и 50% этанолом, соответственно, собирают элюат каждой части и после концентрирования получают экстракт каждой части;

(2) берут экстракт элюированной 50% этанолом части, полученный на этапе (1), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец и выполняют разделение с помощью полой обращенно-фазовой колонки ODS-AQ-HG; последовательно элюируют раствором метанол-вода при соотношениях 20:80, 40:60, 60:40, 80:20 и 100% метанолом с получением в результате Fr.A - Fr.E;

(3) берут образец Fr.A, полученный на этапе (2), добавляют в обращенно-фазовый силикагель ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75-60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, представляющего собой алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид;

фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, представляющего собой матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид;

(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со временем удерживания 10-11 мин, 17-19 мин и 21-24 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении; при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, представляющему собой эпивогелозид; 21-24 мин - соединению 7, представляющему собой вогелозид; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, и после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, представляющее собой ликвиритин-апиозид;

(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин соответственно, и удаляют растворитель при пониженном давлении, собранную жидкость, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, осаждают с образованием белого осадка с помощью раствора метиленхлорида-метанола с объемным соотношением 2:1 с получением соединения 8, которое представляет собой этилофеат; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, колонка для хроматографии: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 1, представляющего собой 10-O-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту.

2. Способ по п. 1, при этом способ выделения включает следующие этапы: (1) 5 кг общего экстракта композиции на основе лекарственных средств китайской медицины адсорбируют на макропористую смолу AB-8; затем элюируют с помощью 150 л воды, 87,5 л 10% этанола, 225 л 30% этанола и 250 л 50% этанола;

(3) берут 50,0 г образца Fr.A, полученного на этапе (2), добавляют к 50 г обращенно-фазового силикагеля ODS-AQ-HG, после высыхания перемешанного образца загружают образец с ODS в колонку, получают жидкую фазу для разделения под средним давлением и выполняют градиентное разделение под средним давлением с помощью полученной жидкой фазы, объемное соотношение метанола-воды: 25:75-60:40, скорость потока: 25 мл/мин, в конической колбе получают фракции одинакового объема 500 мл и концентрируют при пониженном давлении, объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии и снова концентрируют при пониженном давлении, получают Fr.A-1 – Fr.A-7;

(4) берут 3,2 г образца Fr.A-2, полученного на этапе (3), и смешивают его с 6,4 г силикагеля, 200-300 меш, помещают в колонку с силикагелем, соотношение высоты слоя 1:50, разделяют в изократическом режиме с объемным соотношением дихлорметана-метанола 8:1, получают фракции одинакового объема 50 мл при объеме элюирования 800 мл, и объединенные фракции идентифицируют с помощью тонкослойной хроматографии, и снова концентрируют при пониженном давлении с получением Fr.A-1-1 – Fr.A-1-4;

(5) берут образец Fr.A-1-2, полученный на этапе (4), растворяют в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 50:50, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм; соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 6-8 мин, 9-10 мин, 12-13 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении, и выполняют следующие разделения: фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 6-8 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 8-9 мин, и удаляют растворитель при пониженном давлении с получением соединения 2, представляющего собой алоэ-эмодин-8-O-β-D-глюкопиранозид; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 9-10 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 45:55, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 21-23 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 3, представляющим собой кверцетин; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-12 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 25:75, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 9-10 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 4, представляющего собой матаирезинол-4'-O-β-D-полиглюкозид;

(6) берут образец Fr.A-1-3, полученный на этапе (4), растворяют его в метаноле, раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, объемное соотношение метанола-воды в подвижной фазе составляет 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, соответственно, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 10-11 мин, 17-19 мин, 21-24 мин соответственно, и растворитель удаляют при пониженном давлении, при этом время удерживания 17-19 мин соответствует соединению 6, представляющему собой эпивогелозид, время удерживания 21-24 мин - соединению 7, представляющему собой вогелозид, фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 10-11 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 15:85, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 14-16 мин, после удаления растворителя при пониженном давлении получают соединение 5, представляющее собой ликвиритин-апиозид;

(7) берут образец Fr.A-3, полученный на этапе (3), и растворяют его в метаноле, и раствор пропускают через микропористую мембрану с размером пор 0,45 мкм, проводят предварительное разделение с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: метанол-вода с объемным соотношением 60:40, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, собирают фракции, соответствующие хроматографическим пикам со значениями времени удерживания 14-15 мин и 19-21 мин, растворитель удаляют при пониженном давлении и собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 19-21 мин, в растворе дихлорметана-метанола с объемным соотношением 2:1 осаждают белый осадок с получением соединения 8, которое представляет собой этилкофеат; фракцию, соответствующую хроматографическому пику при 14-15 мин, дополнительно очищают с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, подвижная фаза: ацетонитрил-вода с объемным соотношением 30:70, скорость потока: 12 мл/мин, длина волны детектирования: 210 нм, хроматографическая колонка: YMC-Pack R&D ODS-A, 250 × 20 мм, S-10 мкм, при этих условиях собирают фракцию, соответствующую хроматографическому пику со временем удерживания 18-20 мин, и растворитель удаляют при пониженном давлении с получением соединения 1, представляющего собой 10-О-(п-гидроксициннамоил)-адоксозидовую кислоту.

3. Способ по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 200, жимолости японской 300, вайды красильной 200, ревеня лекарственного 40, пачули 60, высушенных корневищ щитовника 300, родиолы розовой 100, ментола 9, эфедры китайской 60, горького миндаля 100, гуттуинии сердцелистной 200, корня солодки 100 и гипса 200.

4. Способ по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 300, жимолости японской 200, вайды красильной 300, ревеня лекарственного 60, пачули 100, высушенных корневищ щитовника 200, родиолы розовой 60, ментола 5, эфедры китайской 100, горького миндаля 60, гуттуинии сердцелистной 300, корня солодки 60 и гипса 300.

5. Способ по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что композиция на основе лекарственных средств китайской медицины состоит из следующих фармацевтических ингредиентов в массовых долях: форсайтии свисающей 278, жимолости японской 294, вайды красильной 285, ревеня лекарственного 55, пачули 95, высушенных корневищ щитовника 290, родиолы розовой 87, ментола 8,5, эфедры китайской 88, горького миндаля 80, гуттуинии сердцелистной 284, корня солодки 95 и гипса 277.

6. Способ по любому из пп. 1, 2, отличающийся тем, что общий экстракт композиции на основе лекарственных средств китайской медицины получают с помощью следующих этапов:

Настоящее изобретение относится к применимому в медицине и фармацевтике соединению формулы (1), композициям и продуктам на его основе, способу лечения с его использованием: (1).Предложено новое соединение (1aS,1bS,2S,4S,5aR,6S,6aS)-1a-(гидроксиметил)-4-метокси-2-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)октагидрооксирено[2',3':4,5]циклопента[1,2-с]пиран-6-ил-4-гидроксибензоат, эффективное для предотвращения или облегчения аллергического заболевания, воспалительного заболевания, астмы или хронической обструктивной болезни легких, фармацевтическая композиция на его основе для получения лекарственных средств, а также функциональный пищевой продукт и пищевой продукт лечебного назначения, содержащий терапевтически эффективное количество соединения по п.

Новое соединение, выделенное из pseudolysimachion rotundum var. subintegrum, с высоким содержанием активного ингредиента, композиция, содержащая указанное соединение, для предотвращения или лечения аллергического заболевания, воспалительного заболевания, астмы или хронической обструктивной болезни легких и их применение // 2685732

Изобретение относится к новому (3R,5S,5aS,6R,7S,8R,8aS)-8-хлор-8a-гидрокси-5-(((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-тригидрокси-6-(гидроксиметил)тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)окси)-1Н-3,6-метанциклопента[е][1,3]диоксепин-7-ил-3,4-дигидроксибензоату (KS534), представленному химической формулой (1). Изобретение также относится к фармацевтической композиции и к функциональному пищевому продукту, содержащим терапевтически эффективное количество соединения (KS534), для лечения или предотвращения заболевания, вызванного повышенным продуцированием белка MUC5AC, повышенным уровнем эозинофилов, воспалением легких, гиперсекрецией слизи, иммунным ответом, повышенным уровнем ИЛ-6, ФНО-альфа в бронхоальвеолярном лаваже (БАЛ) или повышенным количеством воспалительных клеток.

Способы химического синтеза филлирина // 2667917

Изобретение относится к способу химического синтеза филлирина, который может быть применен в химической промышленности. Предложенный способ включает следующие этапы: (1) растворение акцептора гликозила - филлигенина и донора гликозила - 2,3,4,6-тетра-О-ацил-D-глюкопиранозил трихлорацетимидата в атмосфере инертного газа при добавлении катализатора и молекулярного сита в безводном дихлорметане или безводном трихлорметане для гликозилирования с получением тетраацил-филлирина, (2) растворение тетраацил-филлирина в органическом растворителе, добавление метоксида натрия для деацилирования, добавление кислотного регулятора рН для доведения значения рН реакционной смеси до нейтрального и проведение очистки для получения филлирина.

Способ получения композиции частиц, содержащей безводную кристаллическую 2-о-альфа-d-глюкозил-l-аскорбиновую кислоту // 2599252

Настоящее изобретение относится к способу получения композиции в форме частиц, содержащей безводный кристаллический 2-глюкозид аскорбиновой кислоты, и может быть применено в фармацевтической промышленности. Предложенный способ включает воздействие цикломальтодекстринглюканотрансферазы на раствор, содержащий либо разжиженный крахмал, либо декстрин и L-аскорбиновую кислоту в качестве исходных материалов, и затем обеспечение воздействия глюкоамилазы на полученный раствор с получением раствора, содержащего 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновую кислоту, с выходом продуцирования 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты по меньшей мере 27% по массе; очистку полученного раствора, содержащего 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновую кислоту, с получением содержания 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты более 86% по массе, в расчете на массу сухого твердого вещества; осаждение безводной кристаллической 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты из очищенного раствора с содержанием 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты более 86% по массе, в расчете на массу сухого твердого вещества, способом контролируемого охлаждения или способом псевдоконтролируемого охлаждения; сбор осажденной безводной кристаллической 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты и выдерживание, сушку и необязательно измельчение собранной безводной кристаллической 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты без растворения и перекристаллизации с получением композиции в форме частиц, содержащей безводную кристаллическую 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновую кислоту, которая содержит 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновую кислоту в количестве, в расчете на массу сухого твердого вещества, более 98,0% по массе, но менее 99,9% по массеи имеет степень кристалличности безводной кристаллической 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты по меньшей мере 90%, при вычислении на основе профиля порошковой рентгеновской дифракции композиции в форме частиц; где способ контролируемого охлаждения представляет собой способ охлаждения, где температура раствора Т в момент времени выражается формулой Т=Т0-(Т0-Tf)(t/τ)3, где τ представляет собой операционное время, установленное для стадии кристаллизации, Т0 представляет собой температуру раствора в начале кристаллизации, и Tf представляет собой целевую температуру жидкости после завершения кристаллизации; и где способ псевдоконтролируемого охлаждения представляет собой способ охлаждения, где температуре жидкости Т дают линейно или постепенно снижаться относительно времени t, так чтобы (Т0-Tm) составляло по меньшей мере 5%, но менее 50% от общего изменения температуры (T0-Tf), где Tm представляет собой температуру жидкости в момент времени t=τ/2.

Фармацевтическая композиция, содержащая экстракт жимолости и антибиотик, фармацевтический набор и применение экстракта жимолости для получения лекарственных препаратов // 2571281

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения заболевания, вызываемого бактерией, включающей экстракт жимолости, содержащий секологановую кислоту в определенном количестве и антибиотик. Фармацевтический набор для профилактики и/или лечения заболевания, вызываемого бактерией, включающий экстракт жимолости, содержащий иридоидные соединения, и антибиотик.

Препарат в виде твердых частиц дисперсной фазы, содержащий безводную кристаллическую 2-о-α-d-глюкозил-l-аскорбиновую кислоту, способ его производства и его применения // 2532671

Настоящее изобретение относится к композиции в виде твердых частиц, включающей безводную кристаллическую 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновую кислоту, которая включает 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновую кислоту в количестве, которое больше 98,0% в весовом отношении, но меньше 99,7% в весовом отношении, на основе сухого остатка, которая имеет составляющую 90% или более степень кристалличности безводной кристаллической 2-O-α-D-глюкозил-L-аскорбиновой кислоты, при расчете на основе дифракционной картины рентгеновских лучей для порошка в виде указанной композиции, которая содержит частицы с размером частиц, составляющим менее 150 мкм, в количестве, составляющем 70% в весовом отношении или более относительно всей дисперсной композиции, и частицы с размером частиц, составляющим по меньшей мере 53 мкм, но менее 150 мкм, в количестве, составляющем от 40 до 60% в весовом отношении относительно всей дисперсной композиции, и которая имеет восстановительную способность всей композиции, составляющую менее 1% в весовом отношении.

Способ получения наноразмерного амфотерицина в // 2491288

Способы получения кристаллических форм a, c и d фумарата производного эритромицина, сами формы и способы получения промежуточных соединений // 2266295

Растворимые в воде фосфонооксиметиловые эфиры затрудненных спиртов или фенолов, фармацевтические композиции на их основе, способ анестезии и способ лечения опухолевых заболеваний // 2235727

Изобретение относится к новым растворимым в воде фосфонооксиметиловым эфирам затрудненных спиртов и фенолов. .

Производные класса олеандомицина и способ их получения // 2234510

Способ получения комбинированного препарата из плаценты животных и фитосырья // 2769508

Изобретение относится к ветеринарной фармакологии, а именно к способу получения препарата, предназначенного для профилактики послеродового задержания последа у коров и лечения эндометрита у коров. Способ получения препарата, предназначенного для профилактики и лечения заболеваний, выбранных из группы: профилактики послеродового задержания последа у коров и лечения эндометрита у коров, включает смешивание гидролизата плаценты коров с экстрактом боровой матки в соотношении 4:1, получение 5%-ного водного раствора препарата из смеси, где гидролизат плаценты коров и экстракт боровой матки получены определенными способами.