Способ количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственных средствах
Владельцы патента RU 2772608:
Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России) (RU)
Группа изобретений относится к области фармацевтической химии. Раскрыты способы количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственных средствах, включающие приготовление растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрациях 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, приготовление 2 мг/мл и 0,1 мг/мл растворов испытуемых образцов, при этом в качестве растворителя применяют смесь ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80, проведение хроматографирования методом ВЭЖХ 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида, 2 мг/мл испытуемого раствора для количественного определения родственных примесей и 0,1 мг/мл раствора испытуемого образца для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном средстве в условиях градиентного элюирования, количественное содержание папаверина гидрохлорида и его родственных примесей рассчитывают методом внешнего стандарта. Группа изобретений обеспечивает повышение точности одновременного количественного определения основного вещества и родственных примесей и сокращение времени пробоподготовки образцов и проведения испытания. 3 н. п. ф-лы, 5 ил., 7 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области фармацевтической химии, в частности к способам определения основного вещества папаверина гидрохлорида и родственных примесей папаверина гидрохлорида в различных лекарственных формах, а именно может быть использовано для контроля качества следующих лекарственных средств: «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл», «Папаверин, суппозитории ректальные, 20 мг», «Папаверин, таблетки 40 мг», по показателям «Количественное определение» и «Родственные примеси».
Папаверина гидрохлорид (Papaverini hydrochloridum) - лекарственное средство, относящееся к группе миотропных спазмолитиков. Применяется в медицинской практике в виде раствора для инъекций, суппозиториев ректальных и таблеток при спазмах гладких мышц органов брюшной полости, бронхов, периферических сосудов, сосудов головного мозга, почек; стенокардии в составе комбинированной терапии, также в качестве вспомогательного препарата для премедикации. Фармакологическое действие основано на способности папаверина гидрохлорида ингибировать фермент фосфодиэстеразу, вызывать накопление в клетке циклического 3',5'-аденозинмонофосфата и уменьшать содержание внутриклеточного кальция. В результате снижается тонус гладких мышц внутренних органов и сосудов при спастических состояниях, что ведет к расширению артерий и способствует увеличению кровотока (Справочник лекарственных препаратов Vidal. https://www.vidal.ru).
Впервые папаверин был выделен из млечного сока незрелых плодов мака снотворного (Papaver somniferum) - опиума, где его содержание достигает 1%. В настоящее время субстанцию папаверина получают синтетическим путем. В медицинской практике папаверин применяется в виде гидрохлорида (Солодухина ЛА, Абросимова ЛА. Способ получения папаверина гидрохлорида. Патент Российской Федерации № 2647583 C2; 2018. Маринченко ДМ. Алкалоиды группы изохинолина и их применение в медицине и фармации. В кн.: Сикорский АВ, Доронина ОК, ред. Актуальные проблемы современной медицины и фармации. Сб. тезисов докладов LXXI Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых. Минск: БГМУ; 2017. C. 202). По химическому строению папаверина гидрохлорид относится к алкалоидам, производным бензилизохинолина (1-[(3,4-диметоксифенил)метил]-6,7-диметоксиизохинолина гидрохлорид).
К родственным примесям папаверина относятся носкапин, тебаин, которые являются сопутствующими алкалоидами при получении папаверина из опиума; а также папаверинол, дигидропапаверин, папавералдин, тетрагидропапаверин, относящиеся к промежуточным продуктам синтеза папаверина гидрохлорида (Hifnawy MS, Muhtadi FJ. Analytical profile of papaverine hydrochloride. Analytical Profiles of Drug Substances. 1988:17;367-447. https://doi.org/10.1016/S0099-5428(08)60223-3).
В обзоре методов количественного определения алкалоидсодержащих лекарственных препаратов показано, что наиболее широко в настоящее время применяются хроматографические, оптические и электрохимические методы, в частности, потенциометрия (Лизунова ГМ, Ямбулатова ЕВ. Обзор методов количественного определения алкалоидсодержащих лекарственных препаратов. Молодой ученый. 2013;(5):187-92). Количественное определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в лекарственных формах, содержащих папаверина гидрохлорид, не предусмотрено в нормативной документации, включенной в Государственный реестр лекарственных средств (Государственный реестр лекарственных средств https://grls.rosminzdrav.ru).
Аналогом заявляемого изобретения является способ оценки родственных примесей методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и спектрофотометрический способ количественного определения папаверина, описанные в Фармакопейной статье «Раствор папаверина гидрохлорида 2% для инъекций» (ФС 42-1704-97). Сущность известного способа на основе методики ТСХ заключается в экстракции определяемых веществ хлороформом, нанесении на хроматографическую пластинку, элюирование в камере со смесью растворителей толуол-этилацетат-диэтиламин (70:20:10) и просмотре в УФ свете при длине волны 254 нм.
Недостатками данного способа являются полуколичественная оценка родственных примесей (определение соединений непосредственно на пластинке методом визуального сравнения размеров площадей пятен и их окраски с соответствующими параметрами пятен стандартных образцов), влияние большого числа факторов на качество разделения компонентов смеси: предварительное насыщение камеры и слоя сорбента парами подвижной фазы; стартовый размер пятна; расстояние от старта до нижнего края пластинки; относительная влажность воздуха лабораторного помещения; средний диаметр частиц и их форма; толщина и равномерность нанесения слоя сорбента; наличие микроповреждений слоя; тип вещества, связывающего сорбент; скорость элюирования; объем растворителя в камере; наличие примесей в элюенте; конвекция в газовой фазе внутри камеры.
Спектрофотометрический способ количественного определения папаверина заключается в измерении оптической плотности стандартного раствора папаверина и испытуемого раствора препарата в 0,1 М растворе кислоты хлористоводородной на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 309 нм (Арзамасцев А. П. Фармацевтическая химия. - Гэотар-мед, 2004).
Недостатком данного подхода является недостаточная селективность метода. Поскольку спектрофотометрический метод основан на поглощении электромагнитного излучения соединений, содержащих хромофорные и ауксохромные группы в связи с чем, спектры родственных соединений могут накладываться друг на друга, результаты количественного определения могут давать завышенные результаты.
Прототипом заявляемого изобретения выбран способ определения родственных примесей в субстанции папаверина гидрохлорида (ФС.2.1.0153.18. Папаверина гидрохлорид. Папаверин. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV изд. Т. 3. М.; 2018), при котором субстанцию папаверина гидрохлорида растворяют в смеси растворителей ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80, затем проводят определение примесей методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), хроматографирование проводят на обращенно-фазовой колонке, заполненной сорбентом октасилил силикагелем, деактивированным по отношению к основаниям (С8), размер колонки 250×4,6 мм, размер частиц 5 мкм, в условиях градиентного элюирования с детектированием при 238 нм, при этом в качестве раствора сравнения используют раствор субстанции папаверина гидрохлорида в концентрации 0,1% по отношению к испытуемому раствору.
Недостатком прототипа является невозможность использования его для количественного определения основного вещества в лекарственных формах: растворе для инъекций, таблетках и суппозиториях ректальных.
Актуальной задачей является разработка чувствительного и селективного способа одновременного количественного определения родственных примесей и основного вещества в различных лекарственных формах: растворе для инъекций, таблетках и суппозиториях ректальных, содержащих папаверина гидрохлорид.
Предлагаемый авторами способ позволяет повысить точность количественного определения содержания основного вещества папаверина гидрохлорида и родственных примесей папаверина гидрохлорида в лекарственных препаратах в форме раствора для инъекций, таблеток и суппозиториев ректальных, а также проводить одновременно количественное определение основного вещества папаверина гидрохлорида и родственных примесей и сократить время пробоподготовки стандартного и испытуемого образцов и проведения испытания.
Поставленная задача решается вариантами способа количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственных средствах, который включает приготовление раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрациях 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, приготовление испытуемых растворов в концентрациях 2 мг/мл и 0.1 мг/мл, при этом в качестве растворителя применяют смесь ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80, далее проводят хроматографирование методом ВЭЖХ 0,1 мг/мл раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида, 0,004 мг/мл раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида, 2 мг/мл испытуемого раствора для количественного определения родственных примесей и 0.1 мг/мл испытуемого раствора для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственных средствах в форме раствора для инъекций, таблеток и суппозиториев ректальных в условиях градиентного элюирования, рассчитывают количественное содержание папаверина гидрохлорида и его родственных примесей методом внешнего стандарта, при этом количественное содержание папаверина гидрохлорида (Х) в растворе для инъекций (1), таблетках (2), суппозиториях ректальных (3) вычисляют по формулам (1)-(3), соответственно:
Х = 
, мг/мл, (1)
Х = 
, мг/табл., (2)
Х = 
, мг/супп., (3),
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 - навеска препарата, мг;
V - объем препарата, мл;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
G - средняя масса одной таблетки (одного суппозитория), мг.
Количественное содержание родственных примесей в растворе для инъекций (1), таблетках (2), суппозиториях ректальных (3) в процентах (Х) рассчитывают по формулам (1-3), соответственно:
(1);
(2);
(3);
где Si - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (Б);
- навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
V1 - объём препарата, мл;
a1 - навеска препарата, мг;
G - средняя масса одной таблетки, мг
L - заявленное количество папаверина гидрохлорида в препарате, мг/мл (мг; мг).
На фигуре 1 приведена хроматограмма раствора для проверки пригодности хроматографической системы (папаверина гидрохлорид, носкапин); на фигуре 2 - хроматограмма 0,1 мг/мл раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида; на фигуре 3 - хроматограмма испытуемого раствора («Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл»); на фигуре 4 - хроматограмма испытуемого раствора («Папаверина гидрохлорид, таблетки, 40 мг»); на фигуре 5 - хроматограмма испытуемого раствора (суппозитории ректальные).
На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы показана удовлетворительная разделяющая способность хроматографической системы, коэффициент разделения составляет 4,5.
Предлагаемый авторами способ количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственных средствах реализуется следующим образом.
Для всех лекарственных форм: раствора для инъекций, таблеток и суппозиториев, готовят испытуемые растворы в концентрации 2 мг/мл для определения родственных примесей и в концентрации 0,1 мг/мл для количественного определения папаверина.
Пример 1. Количественное определение папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном препарате «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл» заявляемым способом.
Процесс пробоподготовки включает приготовление фосфатного буферного раствора с рН 3,0, растворителя, растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида и испытуемых растворов, растворов для проверки пригодности и чувствительности хроматографической системы.
Для приготовления фосфатного буферного раствора с рН 3,0 растворяют 3,40 г калия дигидрофосфата в 900 мл воды, корректируют рН раствора потенциометрически до 3,0 с помощью фосфорной кислоты концентрированной и доводят объем раствора водой до 1000,0 мл. В качестве растворителя для приготовления растворов используют смесь ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80.
Для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном средстве «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл» готовят раствор стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрации 0,1 мг/мл по следующей методике: 50,51 мг стандартного образца папаверина гидрохлорида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в растворителе и доводят объём раствора растворителем до метки. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём растворителем до метки (раствор А).
Для количественного определения родственных примесей в лекарственном средстве «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл» готовят раствор стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрации 0,004 мг/мл, что по отношению к концентрации основного вещества в испытуемом растворе соответствует максимально ожидаемой концентрации любой неидентифицируемой примеси, нормируемой на уровне 0,2%. Для приготовления вышеуказанного раствора 1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объём растворителем до метки (раствор Б).
Для определения родственных примесей готовят раствор испытуемого образца в двух повторностях: объём препарата, соответствующий около 20 мг папаверина гидрохлорида, помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят растворителем до метки.
Для количественного определения папаверина гидрохлорида готовят раствор испытуемого образца в трех повторностях: 1,0 мл испытуемого раствора, приготовленного для определения родственных примесей, помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводят объём раствора растворителем до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы готовят, растворяя 12,015 мг носкапина (примесь А, CAS 128-62-1) и 12,250 мг стандартного образца папаверина гидрохлорида в растворителе в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводя объём раствора растворителем до метки.
Для установления порога игнорирования готовят раствор для проверки чувствительности хроматографической системы в концентрации 0,001 мг/мл, что соответствует 0,05% от содержания основного вещества в испытуемом растворе. Для приготовления вышеуказанного раствора 5,0 мл раствора Б стандартного образца папаверина гидрохлорида помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводят объём раствора растворителем до метки.
Пригодность хроматографической системы для получения достоверных данных хроматографирования проверяют следующим образом:
1) на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика папаверина должно быть не менее 10;
2) на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R) между пиками папаверина и носкапина должно быть не менее 1,5;
3) на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (раствор Б) фактор асимметрии пика (AS) папаверина должен быть не более 2,0, а относительное стандартное отклонение площади пика папаверина должно быть не более 5,0 % (5 определений);
4) на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (раствор А) фактор асимметрии пика (AS) папаверина должен быть не более 2,0 и относительное стандартное отклонение площади пика папаверина должно быть не более 5,0 % (5 определений).
Испытание проводят в условиях градиентного элюирования. Условия хроматографирования приведены в таблице 1.
Таблица 1
| Колонка | Размер 250 × 4,6 мм, сорбент силикагель октадецилсилильный для хроматографии (С18), 5 мкм | ||
| Подвижная фаза | А - фосфатный буферный раствор рН 3,0 Б - ацетонитрил В - метанол |
||
| Способ элюирования | программа градиента | ||
| Время, мин | А, об. % | Б, об. % | В, об. % |
| 0 - 5 | 85 | 5 | 10 |
| 5 - 12 | 85 → 60 | 5 | 10 → 35 |
| 12 - 20 | 60 | 5 | 35 |
| 20 - 24 | 60 → 40 | 5 → 20 | 35 → 40 |
| 24 - 27 | 40 | 20 | 40 |
| 27 - 32 | 40 → 85 | 20 → 5 | 40 → 10 |
| 32 - 40 | 85 | 5 | 10 |
| Температура колонки | 35 °С | ||
| Скорость потока | 1,0 мл/мин | ||
| Детектор | спектрофотометрический или диодная матрица | ||
| Длина волны | 238 нм | ||
| Объём вводимой пробы | 5 мкл |
Относительное время удерживания соединений: папаверина
гидрохлорид - 1 (около 20 мин); носкапин - около 1,07.
Хроматографируют раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрации 0, 004 мг/мл (раствор Б), раствор стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрации 0,1 мг/мл (раствор А), испытуемые растворы: 2 мг/мл испытуемый раствор для количественного определения родственных примесей и 0,1 мг/мл испытуемый раствор для количественного определения папаверина гидрохлорида. Получают 5 хроматограмм стандартного образца папаверина гидрохлорида раствора А и раствора Б для оценки воспроизводимости (относительного стандартного отклонения, RSD) значений площадей пиков. Результаты считают достоверными, так как выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы». Хроматограммы раствора для проверки пригодности хроматографической системы, раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (раствор А), испытуемого раствора представлены на фиг. 1-5. Время удерживания основного пика папаверина гидрохлорида составляет 19 мин.
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%), а также пики с временами удерживания менее 4 мин.
Для расчета содержания определяемых веществ применяют метод внешнего стандарта.
Содержание каждой из примесей в растворе для инъекций в процентах (X) вычисляют по формуле:
где Si - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (Б);
а0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
V1 - объем препарата, мл;
L - заявленное количество папаверина гидрохлорида в препарате, мг/мл.
На хроматограмме испытуемого раствора обнаружено две неидеитифицированные примеси с временем удерживания 16,47 (1) и 17,14 (2) мин (фиг. 3).
Содержание неидентифицированной примеси (1) вычисляют по формуле:
Среднее значение содержания неидентифицированной примеси (1) составляет X=0,011%
Содержание неидентифицированной примеси (2) вычисляют по формуле:
Среднее значение содержания неидентифицированной примеси (2) составляет 
= 0,038%
В расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Сумма примесей рассчитывается путем арифметического сложения и составляет 0,049%.
Результаты количественного определения родственных примесей в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, раствор для инъекций» приведены в Таблице 2.
Таблица 2
| Определяемая величина | Стандартный образец папаверина гидрохлорида | Испытуемый раствор, содержание неидентифицированной примеси |
|
| примесь 1 | примесь 2 | ||
| Площадь пика | 105,3 104,8 104,6 105,1 104,8 Среднее значение (S0): 104,9 |
5,79 5,79 Среднее значение: 5,79 |
19,55 19,59 Среднее значение: 19,57 |
| 5,84 5,83 Среднее значение: 5,84 |
19,60 19,65 Среднее значение: 19,63 |
||
| Содержание неидентифицированной примеси, % | 0,011 0,011 |
0,038 0,038 |
|
| Среднее значение содержания неидентифицированной примеси, % |
 0,011 |
0,038 |
Таким образом, в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, раствор для инъекций» обнаружены две неидентифицированные родственные примеси папаверина гидрохлорида и рассчитаны по предложенной авторами формуле - 0,011% и 0,038%, в сумме примеси составили 0,049%.
Допустимое содержание родственных примесей составляет:
- любая неидентифицированная примесь - не более 0,2 %;
- сумма примесей - не более 1,0 %.
Количественное определение содержания папаверина гидрохлорида (Х) в растворе для инъекций вычисляют по формуле:
Х = , мг/мл,
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного образца;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
V - объем препарата, мл;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
где Х1, Х2, Х3 - содержание папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата; в расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Результаты количественного определения папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, раствор для инъекций» приведены в Таблице 3.
Таблица 3
| Определяемая величина | Стандартный образец папаверина гидрохлорида | Испытуемый раствор, содержание папаверина гидрохлорида |
| Площадь пика | 2527 | 2496 2493 |
| 2537 | ||
| 2531 | 2488 2489 |
|
| 2527 | ||
| 2529 | 2478 2481 |
|
| Среднее значение: | ||
| 2530,2 | ||
| Содержание папаверина гидрохлорида, мг/мл | 19,899 19,851 19,779 |
|
| Среднее значение содержания папаверина гидрохлорида, мг/мл | 19,83 | |
| Относительное стандартное отклонение (RSD), % | 0,30 |
Содержание папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, раствор для инъекций» составило 19,83 мг/мл (RSD = 0,30%).
Таким образом, пример 1 подтверждает возможность применения заявленного способа для количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном средстве «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл».
Пример 2. Количественное определение папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном препарате «Папаверина гидрохлорид, таблетки» заявляемым способом.
Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 3,0, растворителя, растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида в двух концентрациях: 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, растворов для проверки пригодности и чувствительности хроматографической системы проводят аналогичным образом, описанным в примере 1.
Для определения родственных примесей готовят испытуемый раствор с концентрацией 2 мг/мл: 330,890 мг точная навеска порошка растёртых таблеток, соответствующая около 40 мг папаверина гидрохлорида, помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, прибавляют 10 мл растворителя, обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин, охлаждают до комнатной температуры, доводят объём раствора тем же растворителем до метки и фильтруют через мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.
Для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном препарате «Папаверина гидрохлорид, таблетки» готовят испытуемый раствор с концентрацией 0,1 мг/мл: 1,0 мл испытуемого раствора, приготовленного для определения родственных примесей, помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводят объём раствора растворителем до метки.
Далее проводят проверку пригодности хроматографической системы аналогично проверке в примере 1.
Хроматографируют при условиях, приведенных в таблице 1, испытуемый раствор для количественного определения папаверина гидрохлорида (в концентрации 0,1 мг/мл) и родственных примесей (в концентрации 2 мг/мл). Хроматограмма раствора испытуемого образца представлена на Фиг. 4. Время удерживания основного пика папаверина гидрохлорида составляет 19 мин.
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05 %).
Содержание каждой из примесей в таблетках в процентах (X) вычисляют по формуле:
где Si - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина (Б);
а0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
ai - навеска порошка растертых таблеток, мг;
L - заявленное количество папаверина гидрохлорида в одной таблетке, мг;
G - средняя масса одной таблетки, мг.
На хроматограмме испытуемого раствора обнаружено две неидентифицированные примеси с временем удерживания 17,09 (1) и 21,66 (2) мин. Хроматограмма раствора испытуемого образца представлена на фиг. 4.
Среднее значение содержания неидентифицированной примеси (1) составляет X=0,018%
Содержание неидентифицированной примеси (2) вычисляют по формуле:
Содержание неидентифицированной примеси (1) вычисляют по формуле:
Среднее значение содержания неидентифицированной примеси (2) составляет = 0,028%
В расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Сумма примесей рассчитывается путем арифметического сложения и составляет 0,046%.
Результаты количественного определения родственных примесей в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, таблетки» приведены в Таблице 4.
Таблица 4
| Определяемая величина | Стандартный образец папаверина гидрохлорида | Испытуемый раствор, содержание неидентифицированной примеси |
|
| примесь 1 | примесь 2 | ||
| Площадь пика | 105,3 104,8 104,6 105,1 104,8 Среднее значение (S0): 104,9 |
8,72 8,70 Среднее значение: 8,71 |
13,53 13,51 Среднее значение: 13,52 |
| 8,87 8,90 Среднее значение: 8,88 |
13,81 13,78 Среднее значение: 13,80 |
||
| Содержание неидентифицированной примеси, % | 0,018 0,018 |
0,028 0,028 |
|
| Среднее значение содержания неидентифицированной примеси, % |
0,018 |
0,028 |
В образце лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, таблетки» обнаружены две неидентифицированные родственные примеси папаверина гидрохлорида в количестве 0,018% и 0,028%, сумма примесей - 0,046%.
Норма содержания родственных примесей приведена в примере 1.
Количественное определение содержания папаверина гидрохлорида (Х) в таблетках вычисляют по формуле:
Х = , мг/табл.,
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного образца;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 - навеска препарата, мг;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
G - средняя масса одной таблетки, мг.
где Х1, Х2, Х3 - содержание папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата; в расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Результаты количественного определения папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, таблетки» приведены в Таблице 5.
Таблица 5
| Определяемая величина | Стандартный образец папаверина гидрохлорида | Испытуемый образец, содержание папаверина гидрохлорида |
| Площадь пика | 2527 | 2274 2277 |
| 2519 | ||
| 2517 | 2468 2464 |
|
| 2527 | ||
| 2529 | 2364 2365 |
|
| Среднее значение: | ||
| 2523,8 | ||
| Содержание папаверина гидрохлорида, мг/мл | 38,49 39,30 38,69 |
|
| Среднее значение содержания папаверина гидрохлорида, мг/мл | 38,83 | |
| Относительное стандартное отклонение (RSD), % | 1,09 |
Содержание папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, таблетки» составило 38,83 мг/мл (RSD = 1,09 %).
Таким образом, пример 2 подтверждает возможность применения заявленного способа для количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном средстве «Папаверин, таблетки 40 мг».
Пример 3. Количественное определение папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном препарате «Папаверина гидрохлорид, суппозитории ректальные» заявляемым способом
Приготовление фосфатного буферного раствора с рН 3,0, растворителя, растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида в двух концентрациях: 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, растворов для проверки пригодности и чувствительности хроматографической системы проводят аналогичным образом, описанным в примере 1.
Для определения родственных примесей готовят испытуемый раствор в концентрации 2 мг/мл: 3125,00 мг массы измельченных суппозиториев, соответствующей 50 мг папаверина гидрохлорида, помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл фосфатного буферного раствора рH 3,0, нагревают на водяной бане до расплавления основы и тщательно взбалтывают в течение 3 мин при нагревании. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, фильтруют в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора фосфатным буферным раствором рH 3,0 до метки.
Для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном препарате «Папаверина гидрохлорид, суппозитории ректальные» готовят испытуемый раствор 0,1 мг/мл: 1,0 мл испытуемого раствора, приготовленного для определения родственных примесей, помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл и доводят объем раствора растворителем до метки.
Далее проводят проверку пригодности хроматографической системы аналогично проверке, приведенной в примере 1.
Хроматографируют испытуемый раствор для определения родственных примесей и испытуемого раствор для количественного определения папаверина гидрохлорида. Хроматограмма испытуемого раствора представлена на фиг.5. Время удерживания основного пика папаверина гидрохлорида составляет 19 мин.
Не учитывают пики, площадь которых составляет менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05 %), а также пики с временами удерживания менее 4 мин.
Содержание каждой из примесей в лекарственном препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где Si - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина (Б);
- навеска препарата, мг;
- навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
G - средняя масса одного суппозитория, мг;
L - заявленное количество папаверина гидрохлорида в одном суппозитории, мг;
На хроматограмме испытуемого раствора обнаружено две неидентифицированные примеси с временем удерживания 16,70 (1) и 17,41 (2) мин.
Содержание неидентифицированной примеси (1) вычисляют по формуле:
Среднее значение содержания неидентифицированной примеси (1) составляет = 0,007%
Содержание неидентифицированной примеси (2) вычисляют по формуле:
Среднее значение содержания неидентифицированной примеси (2) составляет = 0,007%
В расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Сумма примесей рассчитывается путем арифметического сложения и составляет 0,014%.
Норма содержания родственных примесей приведена в примере 1, пункт «Расчет».
Результаты количественного определения родственных примесей в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, суппозитории ректальные, 20 мг» приведены в Таблице 6.
Таблица 6
| Определяемая величина | Стандартный образец папаверина гидрохлорида | Испытуемый раствор, содержание неидентифицированной примеси |
|
| примесь 1 | примесь 2 | ||
| Площадь пика | 105,3 104,8 104,6 105,1 104,8 Среднее значение (S0): 104,9 |
3,62 3,72 Среднее значение: 3,67 |
3,39 3,42 Среднее значение: 3,41 |
| 3,89 3,78 Среднее значение: 3,83 |
3,44 3,41 Среднее значение: 3,43 |
||
| Содержание неидентифицированной примеси, % | 0,018 0,018 |
0,028 0,028 |
|
| Среднее значение содержания неидентифицированной примеси, % |
0,018 |
0,028 |
В испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, суппозитории ректальные, 20 мг» обнаружены две неидентифицированные родственные примеси папаверина гидрохлорида в количестве 0,007% и 0,007%, сумма примесей - 0,014%.
Допустимое содержание родственных примесей приведено в примере 1.
Количественное определение содержания папаверина гидрохлорида (Х) в суппозиториях ректальных вычисляют по формуле:
Х = , мг/супп.,
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 - навеска препарата, мг;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
G - средняя масса одного суппозитория, мг.
где Х1, Х2, Х3 - содержание папаверина гидрохлорида в испытуемом образце лекарственного препарата; в расчетах использованы средние значения площадей пиков.
Результаты количественного определения папаверина гидрохлорида в испытуемом растворе лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, суппозитории ректальные, 20 мг» приведены в Таблице 7.
Таблица 7
| Определяемая величина | Стандартный образец папаверина гидрохлорида | Испытуемый образец, содержание папаверина гидрохлорида |
| Площадь пика | 2533 | 2330 2327 |
| 2521 | ||
| 2531 | 2326 2332 |
|
| 2531 | ||
| 2522 | 2336 2337 |
|
| Среднее значение: | ||
| 2527,6 | ||
| Содержание папаверина гидрохлорида, мг/мл | 18,59 18,59 18,66 |
|
| Среднее значение содержания папаверина гидрохлорида, мг/мл | 18,61 | |
| Относительное стандартное отклонение (RSD), % | 0,25 |
Содержание папаверина гидрохлорида в образце лекарственного препарата «Папаверина гидрохлорид, суппозитории ректальные, 20 мг» составило 18,61 мг/мл (RSD = 0,25 %).
Таким образом, пример 3 подтверждает возможность применения заявленного способа для количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном средстве «Папаверин, суппозитории ректальные, 20 мг».
Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат для цели иллюстрации.
Предлагаемый авторами способ позволяет повысить точность количественного определения содержания родственных соединений и основного вещества папаверина гидрохлорида в лекарственных препаратах в форме раствора для инъекций, таблеток и суппозиториев ректальных за счет применения метода внешнего стандарта при расчете концентрации анализируемого вещества по хроматографическим данным, полученным методом ВЭЖХ; одновременно проводить количественное определение основного вещества папаверина гидрохлорида и его родственных примесей за счет создания этапа пробоподготовки стандартного образца папаверина гидрохлорида для определения папаверина гидрохлорида в концентрации 0,1 мг/мл и для определения родственных примесей папаверина гидрохлорида в концентрации 0,004 мг/мл, а также испытуемых растворов для определения в концентрации папаверина гидрохлорида 0,1 мг/мл и для определения родственных примесей папаверина гидрохлорида в концентрации 2 мг/мл; сократить время пробоподготовки за счет использования одного способа для стандартизации заявленных лекарственных средств по показателям «Родственные примеси» и «Количественное определение».
1. Способ количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном средстве «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл», включающий приготовление растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрациях 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, приготовление 2 мг/мл и 0,1 мг/мл растворов испытуемых образцов, при этом в качестве растворителя применяют смесь ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80, проведение хроматографирования методом ВЭЖХ 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида, 2 мг/мл испытуемого раствора для количественного определения родственных примесей и 0,1 мг/мл раствора испытуемого образца для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном средстве «Папаверин, раствор для инъекций 20 мг/мл» в условиях градиентного элюирования, количественное содержание папаверина гидрохлорида и его родственных примесей рассчитывают методом внешнего стандарта, при этом количественное содержание папаверина гидрохлорида в мг/мл (Х) вычисляют по формуле:
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
V – объем препарата, мл;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
количественное содержание родственных примесей в процентах (Х) в растворе для инъекций вычисляют по формуле:
где
Si – площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 – площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (Б);
а0 – навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
V1 – объём препарата, мл;
L – заявленное количество папаверина гидрохлорида в препарате, мг/мл.
2. Способ количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном средстве «Папаверина гидрохлорид, таблетки, 40 мг», включающий приготовление растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрациях 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, приготовление 2 мг/мл и 0,1 мг/мл растворов испытуемых образцов, при этом в качестве растворителя применяют смесь ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80, проведение хроматографирования методом ВЭЖХ 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида, 2 мг/мл испытуемого раствора для количественного определения родственных примесей и 0,1 мг/мл раствора испытуемого образца для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном средстве «Папаверина гидрохлорид, таблетки» в условиях градиентного элюирования, количественное содержание папаверина гидрохлорида и его родственных примесей рассчитывают методом внешнего стандарта, при этом количественное содержание папаверина гидрохлорида в мг/табл. (Х) вычисляют по формуле:
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 - навеска препарата, мг;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
G - средняя масса одной таблетки, мг;
количественное содержание родственных примесей в растворе для инъекций вычисляют по формуле:
где
Si – площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 – площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (Б);
а0 – навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 – навеска препарата, мг;
V1 – объём препарата, мл;
L – заявленное количество папаверина гидрохлорида в препарате, мг.
3. Способ количественного определения папаверина гидрохлорида и его родственных примесей в лекарственном средстве «суппозитории ректальные», включающий приготовление растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида в концентрациях 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл, приготовление 2 мг/мл и 0,1 мг/мл растворов испытуемых образцов, при этом в качестве растворителя применяют смесь ацетонитрила и фосфатного буферного раствора рН 3,0 в соотношении 20:80, проведение хроматографирования методом ВЭЖХ 0,1 мг/мл и 0,004 мг/мл растворов стандартного образца папаверина гидрохлорида, 2 мг/мл испытуемого раствора для количественного определения родственных примесей и 0,1 мг/мл раствора испытуемого образца для количественного определения папаверина гидрохлорида в лекарственном средстве «суппозитории ректальные» в условиях градиентного элюирования, количественное содержание папаверина гидрохлорида и его родственных примесей рассчитывают методом внешнего стандарта, при этом количественное содержание папаверина гидрохлорида в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где
S1 - площадь пика папаверина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 - площадь пика папаверина на хроматограмме стандартного раствора;
a0 - навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 - навеска препарата, мг;
P - содержание папаверина гидрохлорида в стандартном образце папаверина гидрохлорида, %;
G - средняя масса одной таблетки (одного суппозитория), мг;
количественное содержание родственных примесей в растворе для инъекций вычисляют по формуле:
где
Si – площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 – площадь пика папаверина на хроматограмме раствора стандартного образца папаверина гидрохлорида (Б);
а0 – навеска стандартного образца папаверина гидрохлорида, мг;
a1 – навеска препарата, мг;
V1 – объём препарата, мл;
L – заявленное количество папаверина гидрохлорида в препарате, мг/мл (мг; мг).
