Способ профилактики или лечения побочного эффекта опухолевой терапии

Настоящая заявка относится к применению высвобождающего оксид азота агента при получении лекарственного средства для профилактики или лечения заболеваний или нарушений, связанных с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Настоящая заявка дополнительно предоставляет способ профилактики или лечения заболеваний или нарушений, связанных с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту, включающий введение профилактически или терапевтически эффективного количества высвобождающего оксид азота агента объекту, нуждающемуся в этом. 2 н. и 28 з.п. ф-лы, 28 ил., 18 табл., 159 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящая заявка относится к лечению заболеваний, например, к способу профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Было обнаружено, что мутация или сверхэкспрессия рецептора фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR) связана с различными видами рака, и пациентов, страдающих такими видами рака, можно лечить с помощью терапии, ингибирующей VEGFR и/или VEGF (например, путем введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF). Однако данный тип терапии обычно вызывает серьезные побочные эффекты, особенно на коже, органах лица и в желудочно-кишечном тракте. Серьезные побочные эффекты, вызванные терапией, ингибирующей VEGFR и/или VEGF, будут ставить под угрозу качество жизни пациентов, снижая соблюдение режима терапии и резистентность пациентов, вызывая отмену лекарственных препаратов или недостаточную дозу ингибитора VEGFR/VEGF, тем самым отрицательно влияя на терапевтический эффект, или даже приводя к ускоренному развитию заболеваний и сокращению выживаемости пациентов.

В настоящее время не существует эффективного терапевтического режима, контролирующего побочные эффекты, связанные с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Таким образом, существует острая необходимость в терапевтическом режиме, способном успешно контролировать данные побочные эффекты.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящая заявка предоставляет способ профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. В частности, настоящая заявка относится к применению высвобождающего оксид азота агента для профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту, которое может эффективно контролировать побочные эффекты, вызванные ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF, такого как заболевание или нарушение кожной ткани, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, заболевание или нарушение органа лица, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF и/или желудочно-кишечное заболевание, или нарушение, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и подобное.

В отличие от использования более высокой дозы (такой как приблизительно 2%) высвобождающего оксид азота агента (такого как нитроглицерин) для профилактики или лечения стенокардии, в данной заявке, как ни удивительно, доза применения высвобождающего оксид азота агента (такого как нитроглицерин) может составлять от низкой до 0,5% или менее, такой как менее 0,4%, менее 0,3%, менее 0,25%, менее 0,2%, менее 0,15% или менее 0,1% и оказывает влияние на профилактику или лечение побочных эффектов противоопухолевой терапии, например, оказывает влияние на профилактику или лечение заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, например, оказывает влияние на профилактику или лечение заболевания или нарушения кожной ткани, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, заболевания или нарушения органа лица, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или желудочно-кишечного заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и подобного. До настоящей заявки высвобождающий оксид азота агент не применялся для лечения вышеуказанного заболевания.

В одном аспекте настоящая заявка предоставляет применение высвобождающего оксид азота агента при получении лекарственного средства. Лекарственное средство может быть использовано для профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, заболевание или нарушение может быть вызвано введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR или ингибитор VEGF используется для лечения опухоли. В некоторых вариантах осуществления локализация заболевания или нарушения отличается от локализации опухоли. В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство составлено таким образом, чтобы оно подходило для местного введения. В некоторых вариантах осуществления место указанного местного введения не является первичным местом опухоли или потенциальным местом метастазирования опухоли. В некоторых вариантах осуществления концентрация высвобождающего оксид азота агента в лекарственном средстве составляет от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 50% (масс./масс.). В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство составлено таким образом, чтобы оно подходило для наружного введения. В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство составлено в виде мази. В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство дополнительно содержит один или более дополнительных активных ингредиентов. В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство по существу не оказывает влияния на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF (например, на эффект лечения рака).

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет высвобождающий оксид азота агент для профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту. Например, заболевание или нарушение может быть вызвано введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет способ профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту, включающий профилактически или терапевтически эффективное количество высвобождающего оксид азота агента, вводимое объекту. В некоторых вариантах осуществления объект включает человека или животное, не являющееся человеком. Например, животное, не являющееся человеком, может включать животное, выбранное из группы, состоящей из обезьяны, курицы, гуся, кошки, собаки, мыши и крысы. В некоторых вариантах осуществления объект включает объект, страдающий раком. В некоторых вариантах осуществления объекту вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR или ингибитор VEGF. В некоторых вариантах осуществления объект страдает или подвержен указанному заболеванию или нарушению, связанному с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. В некоторых вариантах осуществления степень тяжести заболевания или нарушения увеличивается после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. В некоторых вариантах осуществления объект не страдал заболеванием или нарушением до введения ингибитора VEGFR или ингибитора VEGF. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит высвобождающего оксид азота агента. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит нитроглицерина. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение вызвано введением объекту ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, высвобождающий оксид азота агент может быть введен до, одновременно или после введения объекту ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF используется для лечения опухоли. В некоторых вариантах осуществления локализация заболевания или нарушения отличается от локализации опухоли. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят местно. В некоторых вариантах осуществления локализация указанного местного введения не является первичной локализацией опухоли или потенциальным местом метастазирования опухоли. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят в концентрации от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 50% (масс./масс.). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят наружно. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержится в мази для введения. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят вместе с одним или более дополнительными активными ингредиентами. В некоторых вариантах осуществления введение высвобождающего оксид азота агента не влияет по существу на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет комбинацию лекарственных средств или набор. Комбинация лекарственных средств или набор может включать: 1) ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и 2) высвобождающий оксид азота агент. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и высвобождающий оксид азота агент не смешивают друг с другом. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и высвобождающий оксид азота агент каждый независимо присутствует в отдельном контейнере. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент составлен таким образом, чтобы он был пригоден для наружного введения. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент составлен в виде мази. В некоторых вариантах осуществления концентрация высвобождающего оксид азота агента составляет от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 50% (масс./масс.). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент по пункту 2) способен предотвращать или лечить заболевания или нарушения, вызванные ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF по пункту 1). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент по пункту 2) по существу не влияет на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF пункту 1). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент по пункту 2) вводят до, одновременно или после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF по пункту 1).

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет способы, включающие введение высвобождающего оксид азота агента объекту, которому вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и который страдает или подвержен заболеванию или нарушению, связанному с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет способы профилактики или лечения заболевания или нарушения, включающие введение высвобождающего оксид азота агента объекту, которому вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет способы профилактики или лечения заболевания или нарушения, включающие введение высвобождающего оксид азота агента объекту, который подвержен или страдает заболеванием или нарушением, и указанное заболевание или нарушение представляет собой ладонно-подошвенный синдром.

В некоторых вариантах осуществления объекту вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет способы, включающие стадии: 1) контроль одного или более признаков кожной ткани, органа лица и/или желудочно-кишечного тракта объекта, которому вводят ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF; 2) когда контроль показывает, что объект страдает заболеванием или нарушением кожной ткани, заболеванием или нарушением органа лица и/или желудочно-кишечным заболеванием или нарушением, связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, объекту вводят высвобождающий оксид азота агент.

В некоторых вариантах осуществления способ дополнительно включает постоянный контроль заболевания или нарушения кожной ткани, заболевания или нарушения органа лица и/или заболевания или нарушения желудочно-кишечного тракта и необязательно снижение или отмену ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В некоторых вариантах осуществления степень тяжести заболевания или нарушения увеличивается после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В некоторых вариантах осуществления объект не страдал заболеванием или нарушением до введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит высвобождающего оксид азота агента. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит нитроглицерина.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение эпителия.

В некоторых вариантах осуществления введение ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF используют для лечения рака. В некоторых вариантах осуществления локализация указанного заболевания или нарушения отличается от локализации рака.

В некоторых вариантах осуществления объекту вводят высвобождающий оксид азота агент местно.

В некоторых вариантах осуществления местное введение высвобождающего оксид азота агента объекту в локализации заболевания или нарушения, которое по существу не включает опухолевые клетки. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят объекту в локализации, где нет рака.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из ингибиторов VEGFR, как описано в настоящей заявке, непосредственно действует на белок VEGFR и/или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок VEGFR.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один из ингибиторов VEGFR, как описано в настоящей заявке, непосредственно действует на белок VEGF и/или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок VEGF.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR настоящей заявки и/или ингибитор VEGF настоящей заявки используют для лечения рака.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR настоящей заявки включает низкомолекулярный ингибитор VEGFR, макромолекулу белка, которая специфически связывается с VEGFR, РНКи, которая ингибирует экспрессию белка VEGFR, и/или антисмысловой олигонуклеотид, который ингибирует экспрессию белка VEGFR.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGF настоящей заявки включает захватывающий VEGF агент и агент, снижающий экспрессию VEGF.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR настоящей заявки ингибирует VEGFR1, VEGFR2 и/или VEGFR3.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF настоящей заявки включает Рамуцирумаб, Бевацизумаб, Регорафениб, Понатиниб, Кабозантиниб, Ленватиниб, Сорафениб, Пазопаниб, Апатиниб, Акситиниб, Нинтеданиб, Вандетаниб, Сунитиниб, Мидостаурин, Тивозаниб, Фруквинтиниб, Цедираниб, Бриваниб, Донафениб, Сульфатиниб, Анлотиниб, Фамитиниб, Тезеватиниб, Вороланиб, Мотесаниб, Линифаниб, Семаксаниб, Довитиниб, Орантиниб, Ваталаниб, Телатиниб, Глезатиниб, Делитиниб, Илорасертиб, Ребастиниб, Голватиниб, Форетиниб, Нингетиниб, Тафетиниб, Алтиратиниб, TAS-115, Чиаураниб, Хенатиниб, 4SC-203, AAL-993, ACTB-1003, AEE-788, AMG-628, Аренобуфагин, BAW2881, BIBF-1202, BMS-690514, BMS-794833, CEP-11981, CEP-5214, CP-547632, CYC116, DW532, ENMD-2076, FIIN-1, GFB-204, BFH-772, BMS599626, BMS690514, PP 121, аналог MGCD 265, AC480, Ki 8751, KRN 633, WHI-P 154, TAK593, JI 101, AZD-2932, SCR-1481B1, Изоликвиритигенин, JNJ-26483327, KI-20227, LY2457546, ODM-203, OSI-930, PF-00337210, CGP41231, R1530, RAF265, SAR131675, Семаксиниб, SIM010603, SKLB1002, SKLB610, SU 5205, SU11652, SU14813, SU-1498, SU-4312, SU5402, T-1840383, Таншинон IIA, TAS-115, TG 100572, TG 100801, TG100572 HCl, Тоцераниб, ингибитор фосфорилирования тирозина A9, Тезеватиниб, XL-844, XL999, ZD4190 HCl, ZM-306416, ZM323881 HCl, ABT-510, NVP-ACC789, ADT-OH, BMS-645737, EG 00229, XL-820, SGI-7079, Эндостатин, Таксифолин, Афлиберцепт, их фармацевтически приемлемую соль и/или любую комбинацию вышеперечисленного.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF настоящей заявки вводят в комбинации с одним или более дополнительными терапиями. Одна или более дополнительных терапий могут включать одну или более дополнительных противоопухолевых терапий.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение настоящей заявки вызвано ингибированием VEGFR и/или VEGF.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение настоящей заявки включает заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органа лица и/или желудочно-кишечное заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органа лица и/или желудочно-кишечное заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF настоящей заявки, включает заболевание или нарушение эпителия, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF в кожной ткани, органах лица и/или желудочно-кишечном тракте.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение эпителия, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF настоящей заявки, включает заболевание или нарушение, связанное с поражением эндотелиальной клетки, и/или заболевание или нарушение, связанное с поражением эпителиальной клетки, и в котором поражение эндотелиальной клетки и/или эпителиальной клетки связано с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Эндотелиальная клетка может включать эндотелиальную клетку сосудов. Эпителиальная клетка может включать эпителиальную клетку кожи, эпителиальную клетку ротовой полости, эпителиальную клетку носовой полости, эпителиальную клетку желудка и/или эпителиальную клетку кишечника.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, выбранное из группы, состоящей из сыпи, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ладонно-подошвенного синдрома, связанного с введением с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, зуда, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эритемы, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксероза кожи, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, алопеции, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, паронихии, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, нарушения пигментации, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, мукозита слизистой оболочки ротовой полости, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксеростомии, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, носового кровотечения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, назофарингита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, хейлита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эзофагита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, катарального гастрита, язвы желудка, диареи, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, рвоты, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, тошноты, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, анорексии, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, запора, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или боли в животе, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, включает ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В некоторых вариантах осуществления степень тяжести заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, составляет степень 1 или выше, степень 2 или выше, степень 3 или выше, степень 4 или выше и/или степень 5 или выше в соответствии с NCI-CTCAE V5.0.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент способен производить вещество, выбранное из группы, состоящей из NO⁺, NO^-, N₂O, NO, N₂O₃, NO₂, NO₃^- и NO₂^-. Например, высвобождающий оксид азота агент способен прямо или косвенно производить NO. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит NO.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит вещество, содержащее органическую молекулу, неорганическую молекулу, макромолекулу, наноматериал и/или аммонийокисляющий микроорганизм (АОМ).

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит органическую молекулу и указанная органическая молекула содержит нитроглицерин, изосорбида мононитрат, пентаэритритила тетранитрат, изосорбида динитрат, тролнитрат, Никорандил, пропатилнитрат, Молсидомин, 5-амино-3-(4-морфолинил)-1,2,3-оксадиазол, изоамилнитрит, 3,3-ди(аминоэтил)-1-гидроксил-2-карбонил-1-триазен (NOC-18), сульфонуклеофильную комплексную динатриевую соль, S-нитрозоглутатион, S-нитрозо-N-ацетилпеницилламин, 4-фенил-3-фуронитрил, (±)-(E)-4-этил-2-[(E)-гидроксиимино]-5-нитро-3-гексенамид, Стрептозоцин, NG-гидрокси-L-аргинина ацетатную соль, O₂-(2,4-динитрофенил)-1-[(4-этоксикарбонил)пиперазин-1-ил]диазен-1-ия-1,2-диолат, N-нитрозодибутиламин, 3-морфолино-сиднонимин, Линзидомин, 3-(4-ацетилфенил)сиднон, диэтиламино-нуклеофильный комплекс/AM и/или Итрамин. Например, органическая молекула может быть выбрана из группы, состоящей из нитроглицерина, изосорбида мононитрата, изосорбида динитрата и их любой комбинации. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит органическую молекулу, и органическая молекула содержит нитроглицерин.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит неорганическую молекулу, и неорганическая молекула содержит нитрильный комплекс, нитрозильный комплекс, металлнитрозаминовый комплекс, нитрат и/или нитрит. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит неорганическую молекулу, и неорганическая молекула содержит нитропруссид натрия.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит аммонийокисляющий микроорганизм (AOM), и аммонийокисляющий микроорганизм (AOM) содержит аммонийокисляющие бактерии (АОБ). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит аммонийокисляющий микроорганизм (AOM), и указанный аммонийокисляющий микроорганизм (AOM) содержит Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira, Nitrosocystis, Nitrosolobus и/или Nitrosovibrio.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент имеет относительную молекулярную массу 2000 дальтон или ниже, 1500 дальтон или ниже, 1200 дальтон или ниже, 1000 дальтон или ниже, 900 дальтон или ниже, 800 дальтон или ниже, 700 дальтон или ниже, 600 дальтон или ниже, 500 дальтон или ниже, 400 дальтон или ниже, 300 дальтон или ниже, 200 дальтон или ниже или 100 дальтон или ниже.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент содержит макромолекулы или наноматериал, и макромолекула или наноматериал содержит наносферы S-нитрозотиола диоксида кремния, S-нитрозоэтандитиола хитин и/или NONOат хитозана с привитым олигопропилендиамином.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент имеет одну или более групп, как представлено ниже: диазенийдиолат, гидроксидиазенсульфоновая кислота, S-нитрозотиол, фуроксан, оксим, N-нитрозоамин, N-гидроксигуанидин, нитрат, нитрит, сложный эфир нитрата, сложный эфир нитрита, сиднонимин, сиднон, оксатриазол-5-имин, оксатриазол-5-он, гидроксиамин, диоксадиазациклобутен, N-гидроксинитрозоамин, N-нитрозоимин, гидроксимочевина и металлнитрозаминовый комплекс.

Специалист в данной области техники сможет понять другие аспекты и преимущества данного раскрытия из подробного описания, приведенного ниже. Последующее подробное описание раскрывает и описывает только примерные варианты осуществления данного раскрытия. Как должно быть очевидно специалисту в данной области техники, данное раскрытие позволяет специалисту в данной области техники модифицировать раскрытые варианты осуществления, не выходя за рамки сущности и объема настоящей заявки. Соответственно, чертежи и описание в настоящей спецификации являются только иллюстративными, но не ограничивающими.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Признаки изобретения, заявленные в настоящей заявке, определяются прилагаемой формулой изобретения. Признаки и преимущества изобретений, раскрытых в настоящем описании, можно лучше понять, обратившись к примерным вариантам осуществления и прилагаемым чертежам. Чертежи кратко описаны, как представлено ниже:

На ФИГ. 1 представлена примерная схема синтеза наносфер S-нитрозотиола диоксида кремния.

На ФИГ. 2 представлена примерная схема синтеза S-нитрозоэтандитиол хитина.

На ФИГ. 3 представлена примерная схема синтеза NONOата хитозана с привитым олигопропилендиамином.

На ФИГ. 4A-4C представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в клетки HUVEC.

На ФИГ. 5A-5C представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 6А-6С представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в клетки НОК.

На ФИГ. 7A-7C представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в клетки GES-1.

На ФИГ. 8A-8C представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в клетки FHs 74 Int.

На ФИГ. 9A-9D представлены относительные уровни внутриклеточного и внеклеточного NO клеток HUVEC и GES-1.

На ФИГ. 10A-10D представлены относительные уровни внеклеточного NO после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом.

На ФИГ. 11A-11D представлены относительные уровни внутриклеточного NO после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом.

На ФИГ. 12A-12B представлены относительные уровни внутриклеточного и внеклеточного NO в различные моменты времени после обработки клеток HUVEC Силденафилом.

На ФИГ. 12C-12D представлены относительные уровни внутриклеточного и внеклеточного NO после 24 часов обработки клеток HUVEC различными концентрациями Силденафила.

На ФИГ. 13A-13B представлены относительные уровни внутриклеточного и внеклеточного NO после 24 часов обработки клеток GES-1 100 мкМ Силденафила.

На ФИГ. 13C-13D представлены относительные уровни внутриклеточного и внеклеточного NO после 24 часов обработки клеток HaCaT 100 мкМ Силденафила.

На ФИГ. 14 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы модели крысы с ладонно-подошвенным синдромом, вызванным ингибированием VEGFR и/или VEGF.

На ФИГ. 15 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы крысы (с введением в левую лапу) в группах введения примеров 55-100 и 111-112 настоящей заявки.

На ФИГ. 16 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы крысы (с введением в правую лапу) в группах введения примеров 101-108 настоящей заявки.

На ФИГ. 17 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы крысы (с введением в левую лапу) в группах введения примеров 113-123 настоящей заявки.

На ФИГ. 18 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы крысы (с введением в правую лапу) в группе введения примера 124 настоящей заявки.

На ФИГ. 19 представлен эффект изменения объема опухоли у крысы, несущей опухоль, которую обрабатывают ингибитором VEGFR/VEGF, когда высвобождающий оксид азота агент примера 143 настоящей заявки вводят наружно.

На ФИГ. 20 представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или дилтиазема) в клетки HUVEC.

На ФИГ. 21 представлен примерный результат клеточной пролиферативной токсичности, определенный после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 22 представлены относительные уровни NO после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 23 представлен уровень экспрессии кальмодулина (CaM) после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 24 представлен результат анализа серого значения уровня экспрессии кальмодулина (CaM) после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 25 представлен уровень экспрессии кальретикулина после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 26 представлен результат анализа серого значения уровня экспрессии кальретикулина после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCaT.

На ФИГ. 27 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы крысы (с введением в левую лапу и правую лапу) в группах введения примеров 148-153 настоящей заявки.

На ФИГ. 28 представлены фотографии левой лапы, передней стороны и правой лапы крысы (с введением в левую лапу и правую лапу) в группах введения примера 154 настоящей заявки.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Варианты осуществления настоящей заявки описаны ниже с помощью определенных примеров. Специалист в данной области техники может легко понять другие преимущества и эффекты изобретений, как описано в настоящей заявке, из раскрытия настоящего описания.

Ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF

Используемый в настоящем описании термин «VEGFR» обычно относится к рецептору фактора роста эндотелия сосудов, который принадлежит к семейству рецепторных тирозинкиназ (RTKs). Он состоит в основном из трех подтипов, включая VEGFR1, VEGFR2 и VEGFR3, как сообщалось. Из них VEGFR1 и VEGFR2 в основном распределяются на поверхности эндотелия сосудов опухоли, регулируя ангиогенез опухоли; и VEGFR3 в основном распределяется на поверхности эндотелия лимфы, регулируя лимфангиогенез опухоли. Сообщается, что VEGFR2 представляют собой первичные рецепторы передачи сигнала VEGF во время процессов ангиогенеза и митоза. Семейство VEGF включает в основном VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E и плацентарный фактор роста (ПФР). VEGF-A в комбинации с VEGFR-1 и VEGFR-2 может регулировать почти все клеточные ответы на VEGF, как сообщалось. Активация VEGFR-2 в эндотелиальных клетках приводит к увеличению пролиферации, миграции, выживаемости и улучшенной проницаемости сосудов (см. Waldner, Maximilian J. et al., the Journal of Experimental Medicine 207.13, 2010). Экспрессия VEGFR или его повышенная киназная активность связана с серией раковых заболеваний человека.

Используемый в настоящем описании термин «VEGF» обычно относится к фактору роста эндотелия сосудов, который известен как специфический фактор роста ключевых эндотелиальных клеток, необходимых для сигнального пути патологического ангиогенеза, в соотвествии с сообщениями. Ингибирование сигнального пути рецепторной тирозинкиназы VEGF блокирует ангиогенез во время роста опухолей, что приводит к стагнации или регрессии ангиогенных опухолей (см. Gerald McMahon, the Oncologist 2000, 5:3-10).

Используемый в настоящем описании термин «ингибитор VEGFR» обычно относится к любому веществу или агенту, способному вызывать снижение экспрессии, количества или активности VEGFR, которые известны в данной области техники или могут быть обнаружены в будущем, включая любое вещество, которое может вызывать ингибирование биологической активности, связанной с активностью VEGFR, когда вещество или агент вводят объекту (включая ингибирование последующего биологического эффекта, вызываемого комбинацией любого VEGFR с его природным лигандом). В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR может включать любой агент, способный блокировать активность VEGFR или его любой последующий биологический эффект во время лечения рака. Например, ингибитор VEGFR может быть использован для лечения опухолей. Например, ингибитор VEGFR может непосредственно ингибировать одну или более функций VEGFR. Например, ингибитор VEGFR может сочетаться с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей VEGFR. Например, ингибитор VEGFR может снижать уровень транскрипции белка VEGFR.

Используемый в настоящем описании термин «ингибитор VEGF» обычно относится к любому веществу или агенту, способному вызывать снижение экспрессии, количества или активности VEGF, который известен в данной области техники или может быть обнаружен в будущем, включая любое вещество, которое может вызывать ингибирование биологической активности, связанной с активностью VEGF, когда вещество или агент вводят объекту. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGF может включать любой агент, способный блокировать активность VEGF или его любой последующий биологический эффект во время лечения рака. Например, ингибитор VEGF можно использовать для лечения опухолей. Например, ингибитор VEGF может непосредственно ингибировать одну или более функций VEGF. Например, ингибитор VEGF может сочетаться с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей VEGF. Например, ингибитор VEGFR может снижать уровень транскрипции белка VEGF.

Используемый в настоящем описании, независимо от того in vitro или in vivo, способ обнаружения и/или оценки уровня ингибирования VEGF и/или VEGFR является обычным в данной области техники. И этот способ можно использовать для проверки, стандартизации, скрининга и/или оценки ингибитора VEGF и/или ингибитора VEGFR настоящей заявки.

Используемый в настоящем описании термин «заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF» обычно относится к заболеванию или нарушению, связанному с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту. Например, заболевание или нарушение может представлять собой заболевание или нарушение, вызванное введением объекту ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, заболевание или нарушение может включать заболевание или нарушение кожной ткани, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, заболевание или нарушение органа лица, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или желудочно-кишечное заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, заболевание или нарушение может включать сыпь, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, зуд, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эритему, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксероз кожи, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, алопецию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, паронихию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, нарушение пигментации, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксеростомию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, носовое кровотечение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, назофарингит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, хейлит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эзофагит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, язву желудка, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, диарею, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, рвоту, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, тошноту, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, анорексию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, запор, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или боль в животе, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. В настоящей заявке заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может представлять собой ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Используемый в настоящем описании термин «опухоль» обычно относится к новообразованию, полученному в результате локальной пролиферации клеток ткани под действием различных онкогенных факторов, которое также известно как неоплазма. В соответствии с клеточными свойствами новообразования и степенью вреда для организма опухоли, в свою очередь, подразделяются на два типа, то есть доброкачественные опухоли и злокачественные опухоли, и рак является общим термином для злокачественных опухолей. Опухоли могут быть выбраны из группы, состоящей из злокачественных эпителиальных опухолей (злокачественных опухолей, происходящих из эпителия), рака легких (например, немелкоклеточного рака легких), рака груди, рака кожи, рака мочевого пузыря, рака толстой кишки, рака кишечника, рака простаты, рака поджелудочной железы, рака матки, рака шейки матки, рака яичников, рака пищевода, рака головы и шеи, рака желудка и рака гортани. Например, опухоль может быть раком печени, раком почки, колоректальным раком, раком желудка, раком пищевода или раком щитовидной железы.

Используемый в настоящем описании ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF можно идентифицировать или подвергать скринингу с помощью способа, известного в данной области техники, например, путем обнаружения изменения экспрессии или активности VEGFR и/или VEGF после введения вещества кандидата/агента. Экспрессия VEGFR и/или VEGF также может быть обнаружена с помощью способа, известного в данной области техники, например, иммуногистохимического метода, ПЦР, ОТ-ПЦР, гибридизации in situ, Саузерн-блоттинга, Вестерн-блоттинга, Нозерн-блоттинга, спектрофотометрии, и ИФА, и подобного.

Используемый в настоящем описании по меньшей мере один (например, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10 или более) ингибитор VEGFR может непосредственно действовать на белок VEGFR и/или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок VEGFR.

Используемый в настоящем описании по меньшей мере один (например, по меньшей мере 1, по меньшей мере 2, по меньшей мере 3, по меньшей мере 4, по меньшей мере 5, по меньшей мере 6, по меньшей мере 7, по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10 или более) ингибитор VEGF может непосредственно действовать на белок VEGF и/или нуклеиновую кислоту, кодирующую белок VEGF.

Например, ингибитор VEGFR может включать низкомолекулярный ингибитор VEGFR, макромолекулу белка, которая специфически связывается с VEGFR, РНКи, которая ингибирует экспрессию белка VEGFR, и/или антисмысловой олигонуклеотид, который ингибирует экспрессию белка VEGFR.

Используемый в настоящем описании термин «низкомолекулярный ингибитор VEGFR» может включать низкомолекулярный ингибитор VEGFR, обратимо или необратимо связывающийся с VEGFR, или низкомолекулярный ингибитор VEGFR, специфически связывающийся с мутантным VEGFR. Например, низкомолекулярный ингибитор VEGFR может включать Регорафениб, Понатиниб, Кабозантиниб, Ленватиниб, Сорафениб, Апатиниб, Акситиниб, Нинтеданиб, Вандетаниб, Сунитиниб, Мидостаурин, Тивозаниб, Фруквинтиниб, Цедираниб, Бриваниб, Донафениб, Сульфатиниб, Анлотиниб, Фамитиниб, Тезеватиниб, Вороланиб, Мотесаниб, Линифаниб, Семаксаниб, Довитиниб, Орантиниб, Ваталаниб, Телатиниб, Глезатиниб, Луцитаниб, Илорасертиб, Ребастиниб, Голватиниб, Форетиниб, Нингетиниб, Тафетиниб, Алтиратиниб, TAS-115, Чиаураниб, Хенатиниб, 4SC-203, AAL-993, ACTB-1003, AEE-788, AMG-628, Аренобуфагин, BAW2881, BIBF-1202, BMS-690514, BMS-794833, CEP-11981, CEP-5214, CP-547632, CYC116, DW532, ENMD-2076, FIIN-1, GFB-204, BFH-772, BMS599626, BMS690514, PP 121, аналог MGCD 265, AC480, Ki 8751, KRN 633, WHI-P 154, TAK593, JI 101, AZD-2932, SCR-1481B1, Изоликвиритигенин, JNJ-26483327, KI-20227, LY2457546, ODM-203, OSI-930, PF-00337210, CGP41231, R1530, RAF265, SAR131675, Семаксиниб, SIM010603, SKLB1002, SKLB610, SU 5205, SU11652, SU14813, SU-1498, SU-4312, SU5402, T-1840383, Таншинон IIA, TAS-115, TG 100572, TG 100801, TG100572 HCl, Тоцераниб, ингибитор фосфорилирования тирозина A9, Тезеватиниб, XL-844, XL999, ZD4190 HCl, ZM-306416, ZM323881 HCl, ABT-510, NVP-ACC789, ADT-OH, BMS-645737, EG 00229, XL-820, SGI-7079, Эндостатин и/или Таксифолин.

Используемый в настоящем описании термин «специфическое связывание» обычно означает, что в сложной смеси ингибитор VEGFR может специфически распознавать и связываться с VEGFR, но по существу не распознает или не связывается с другими компонентами в сложной смеси. Например, сродство ингибитора к VEGFR может быть по меньшей мере в 2 раза выше сродства ингибитора к другим неспецифическим связывающим ингредиентам (например, по меньшей мере в 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз и более). В некоторых вариантах осуществления константа равновесной диссоциации ингибитора VEGFR с VEGFR менее или равна 10^-6 (например, менее или равна 10^-7 М, менее или равна 10^-8 М, менее или равна 10^-9 М, менее или равна 10^-10 М или менее).

Используемая в настоящем описании макромолекула белка, которая специфически связывается с VEGFR, может представлять собой антитело, вариант антитела, слитый белок, производное или его фрагмент, нацеленный на VEGFR. Например, она может представлять собой антитело, которое специфически связывается с VEGFR, или его фрагмент связывания с антигеном.

Используемое в настоящем описании «антитело» обычно относится к молекуле полипептида, способной специфически распознавать и/или нейтрализовать определенный антиген. Например, антитело может содержать иммуноглобулин, состоящий по меньшей мере из двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, которые связаны друг с другом дисульфидной связью, и включать любую молекулу, содержащую его антигенсвязывающую фракцию. Термин «антитело» может включать моноклональное антитело, фрагмент антитела или производное антитела, включая, но не ограничиваясь ими, человеческое антитело (полное гуманизированное антитело), гуманизированное антитело, химерное антитело, одноцепочечное антитело (например, scFv) и фрагмент антитела, связывающийся с антигеном (например, фрагмент Fab, Fab' и (Fab)₂). Из них химерное антитело может представлять собой антитело, в котором часть аминокислотной последовательности каждой тяжелой цепи или легкой цепи гомологична соответствующей аминокислотной последовательности антитела, происходящего от вида, или принадлежит к определенной классификации, в то время как остальной сегмент цепи гомологичен соответствующей последовательности другого вида. Из них гуманизированное антитело может относиться к химерному антителу, которое содержит небольшое количество последовательности, полученной из нечеловеческого иммуноглобулина, тем самым снижая иммуногенность, когда гетеро-антитело вводят человеку, но сохраняя полную аффинность связывания с антигеном и специфичность антитела. Из них полное гуманизированное антитело может содержать антитело, продуцируемое человеком или иммунными клетками человека или полученное из нечеловеческого источника (например, генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, с использованием библиотеки гуманизированных антител), или другие последовательности, кодирующие человеческое антитело.

Используемый в настоящем описании фрагмент связывания антигена с антителом может представлять собой один или более фрагментов, имеющих специфическую функцию связывания с антигеном. Функция связывания антигена с антителом может быть достигнута с помощью полноразмерного фрагмента антитела. Функция связывания антигена с антителом также может быть достигнута с помощью: тяжелой цепи, содержащей Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab’ или F(ab’)₂-фрагмент, или легкой цепи, содержащей Fv, ScFv, dsFv, Fab, Fab’ или F(ab’)₂-фрагмент. (1) Fab-фрагмент, который представляет собой одновалентный фрагмент, состоящий из VL, VH, CL и CH-доменов; (2) F(ab’)₂-фрагмент, который представляет собой двухвалентный фрагмент, содержащий два Fab-фрагмента, связанных дисульфидной связью в шарнирной области; (3) Fd-фрагмент, состоящий из VH и CH-доменов; (4) Fv-фрагмент, состоящий из VL и VH-доменов одного плеча антитела; (5) dAb-фрагмент, состоящий из VH-домена (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546); (6) изолированный гипервариабельный участок (CDR); (7) комбинация двух или более изолированных CDR, которые могут быть необязательно связаны через линкер; (8) верблюжье однодоменное антитело, которое представляет собой антитело, содержащее две вариабельные области тяжелой цепи, но не содержащее легкой цепи, и (9) нанотело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, CH2 и CH3. Кроме того, он может дополнительно содержать одновалентную одноцепочечную молекулу Fv (scFv), образованную спариванием VL и VH (scFv) (см. Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; and Hustonet al. (1988) Proc.Natl.Acad.Sci. 85: 5879-5883). Термин «часть связывания антигена» может дополнительно включать слитый белок иммуноглобулина, содержащий связывающие домены, выбранные из группы, состоящей из (1) пептида связывающего домена, слитого с пептидом шарнирной области иммуноглобулина; (2) константной области СН2 тяжелой цепи иммуноглобулина, слитой с шарнирной областью; и (3) константной области СН3 тяжелой цепи иммуноглобулина, слитой с константной областью СН2.

Например, макромолекула белка, которая специфически связывается с VEGFR, может представлять собой рамуцирумаб, фрагмент связывания с антигеном или его функциональным вариантом.

Используемый в настоящем описании термин «захватывающий VEGF агент» обычно относится к агенту, способному захватывать VEGF путем его связывания. Например, захватывающий VEGF агент может быть выбран из группы, состоящей из Бевацизумаба и Афлиберцепта.

Используемый в настоящем описании термин «снижающий экспрессию VEGF агент» обычно относится к веществу, способному прямо или косвенно снижать экспрессию VEGF у объекта. Например, снижающий экспрессию VEGF агент может быть выбран из группы, состоящей из Темсиролимуса и Талидомида.

Используемый в настоящем описании термин «РНКи» обычно относится к РНК-интерференции, которая обычно представляет собой экзогенную или эндогенную молекулу двухцепочечной РНК или низкомолекулярную РНК, и обычно ингибирует экспрессию или трансляцию целевого гена посредством специфической деградации РНКи, вызванной путем нацеливания на мРНК. Обычно РНКи включает два типа низкомолекулярных РНК: микроРНК (миРНК) и короткую интерферирующую РНК (киРНК), которые способны связываться с другими молекулами мРНК, тем самым увеличивая или уменьшая их активность, например, предотвращая трансляцию мРНК в белок. У эукариотических животных путь РНКи расщепляет длинную двухцепочечную РНК (дцРНК) ферментом РНКазой III (например, Dicer, DCL или Drosha) до фрагментов двухцепочечных киРНК, имеющих длину приблизительно 20-23 нуклеотида. Каждая киРНК расщепляется на две одноцепочечные РНК (оцРНК), то есть пассажирскую цепь и направляющую цепь. Пассажирская цепь разрушается, а направляющая цепь включается в РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (RISC). Когда направляющая цепь комплементарна молекуле мРНК, RISC расщепляет молекулу мРНК, таким образом приводя к деградации молекулы мРНК.

Используемая в настоящем описании РНКи, которая ингибирует экспрессию белка VEGFR, может ингибировать экспрессию или трансляцию VEGFR путем нацеливания на мРНК, кодирующую VEGFR, с целью специфического разрушения мРНК. Используемая в настоящем описании РНКи, ингибирующая экспрессию белка VEGF, может ингибировать экспрессию или трансляцию VEGF путем нацеливания на мРНК, кодирующую VEGF, с целью специфического разрушения мРНК.

Используемый в настоящем описании термин «олигонуклеотид» обычно относится к олигомеру или полимеру рибонуклеиновой кислоты (РНК) или дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), или их имитаторам, или структурно модифицированной нуклеиновой кислоте. Термин включает олигонуклеотиды, состоящие из встречающихся в природе азотистых оснований, пентозы и ковалентного нуклеозида (основная цепь), и не встречающихся в природе олигонуклеотидов, имеющих сходную функцию. Модифицированный или замещенный олигонуклеотид обычно превосходит встречающиеся в природе формы в том виде, в каком они есть, например, повышенное поглощение клетками, повышенное сродство к целевой нуклеиновой кислоте и повышенная стабильность в присутствии нуклеазы.

Используемый в настоящем описании термин «антисмысловой олигонуклеотид» обычно относится к одноцепочечному олигонуклеотиду, имеющему последовательность азотистых оснований, которая может по меньшей мере частично гибридизоваться с соответствующей областью или фрагментом целевой нуклеиновой кислоты. Используемый в настоящем описании антисмысловой олигонуклеотид может содержать от приблизительно 8 до приблизительно 50 азотистых оснований.

Используемый в настоящем описании ингибитор VEGFR способен ингибировать VEGFR1, VEGFR2 и/или VEGFR3. Например, ингибитор VEGFR способен ингибировать один, два или три из VEGFR1, VEGFR2 и VEGFR3.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR может включать Рамуцирумаб, Бевацизумаб, Регорафениб, Понатиниб, Кабозантиниб, Ленватиниб, Сорафениб, Пазопаниб, Апатиниб, Акситиниб, Нинтеданиб, Вандетаниб, Сунитиниб, Мидостаурин, Тивозаниб, Фруквинтиниб, Цедираниб, Бриваниб, Донафениб, Сульфатиниб, Анлотиниб, Фамитиниб, Тезеватиниб, Вороланиб, Мотесаниб, Линифаниб, Семаксаниб, Довитиниб, Орантиниб, Ваталаниб, Телатиниб, Глезатиниб, Луцитаниб, Илорасертиб, Ребастиниб, Голватиниб, Форетиниб, Нингетиниб, Тафетиниб, Алтиратиниб, TAS-115, Чиаураниб, Хенатиниб, 4SC-203, AAL-993, ACTB-1003, AEE-788, AMG-628, Аренобуфагин, BAW2881, BIBF-1202, BMS-690514, BMS-794833, CEP-11981, CEP-5214, CP-547632, CYC116, DW532, ENMD-2076, FIIN-1, GFB-204, BFH-772, BMS599626, BMS690514, PP 121, аналог MGCD 265, AC480, Ki 8751, KRN 633, WHI-P 154, TAK593, JI 101, AZD-2932, SCR-1481B1, Изоликвиритигенин, JNJ-26483327, KI-20227, LY2457546, ODM-203, OSI-930, PF-00337210, CGP41231, R1530, RAF265, SAR131675, Семаксиниб, SIM010603, SKLB1002, SKLB610, SU 5205, SU11652, SU14813, SU-1498, SU-4312, SU5402, T-1840383, Таншинон IIA, TAS-115, TG 100572, TG 100801, TG100572 HCl, Тоцераниб, ингибитор фосфорилирования тирозина A9, Тезеватиниб, XL-844, XL999, ZD4190 HCl, ZM-306416, ZM323881 HCl, ABT-510, NVP-ACC789, ADT-OH, BMS-645737, EG 00229, XL-820, SGI-7079, Эндостатин, Таксифолин, Афлиберцепт и/или фармацевтически приемлемую соль вышеуказанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Используемый в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемая соль» может относиться к фармацевтически приемлемой соли соединения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтически приемлемая соль может быть выбрана из группы, состоящей из Сорафениба тозилата, Сунитиниба малата, Пазопаниба гидрохлорида и Довитиниба (TKI258) лактата.

Используемый в настоящем описании ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF можно вводить в комбинации с одной или более дополнительными терапиями. В некоторых вариантах осуществления одна или более дополнительных терапий могут включать одну или более дополнительных противоопухолевых терапий. Например, дополнительная противоопухолевая терапия может включать цитотоксические противораковые агенты, иммунотерапевтические противораковые агенты или гормонотерапевтические противораковые агенты. Дополнительные противоопухолевые терапии могут дополнительно включать лучевую терапию или хирургическую терапию.

Как используется в настоящем описании, когда ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF вводят в комбинации с дополнительными противоопухолевыми терапиями, их можно вводить объекту одновременно или индивидуально с интервалами. Например, дополнительная противоопухолевая терапия может быть частью единичной лекарственной формы и смешиваться с ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF с образованием единичной композиции. В качестве другого примера дополнительная противоопухолевая терапия может представлять собой отдельный агент, который вводят отдельно от ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Как используется в настоящем описании, если дополнительная противоопухолевая терапия и ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF образуют единую композицию, ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF может присутствовать и/или вводиться на уровне приблизительно 1-99% (например, приблизительно 5-95%, приблизительно 1%, приблизительно 5%, приблизительно 10%, приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90%, приблизительно 95% или приблизительно 99%) по отношению к общей дозе.

Цитотоксические противораковые агенты, используемые при лечении рака, могут включать алкилирующие агенты, такие как хлорметин, азотистого иприта N-оксид гидрохлорид, хлорамбуцил, циклофосфамид, ифосфамид, тиотепа, изотиоцианат, бусульфан, нимустина гидрохлорид, митропия бромид, мелфалан, дакарбазин, ранимустин, прометамина натрия фосфат, диэтилентриамин, кармустин, ломустин, стрептозотоцин, пипоброман, этоглюцид, карбоплатин, цисплатин, мириплатин, недаплатин, тенетамид, омустин, дихлорпиридин, флупицтеин, преднимустин, пумитепа, рибомустин, темозоломид, диклофенак, тровафлоксацин, зинстатин, симвастатин, пенемы, цистемустин и бизелезин; антиметаболит, такой как меркаптопурин, 6-меркаптопурина гликозид, 6-тиоинозин, метотрексат, пеметрексед, вортиоксетин, цитарабин, оксалиплатин, тизанидина гидрохлорид, 5-ФУ и подобные производные (такие как фторурацил, тегафур, UFT, доксициклин, кармофур, капецитабин и т.д.); противоопухолевый антибиотик, такой как актиномицин D, актиномицин C, митомицин, хромомицин A3, блеомицина гидрохлорид, блеомицин, цетимицина гидрохлорид, доксорубицина гидрохлорид, митоксантрона гидрохлорид и идарубицина гидрохлорид; и/или цитотоксические противораковые средства растительного происхождения, такие как этопозид, этопозида фосфат, винбластина сульфат, винкристина сульфат, тенипозид, паклитаксел, паклитаксел и винорелбин и подобные; ингибитор VEGF, такой как бевацизумаб, и такой ингибитор VEGF, который раскрыт в заявке РСТ на патент WO 2005/012359, WO 2005/044853, WO 98/45332, WO 96/30046, WO 94/10202, патенте США 7060269, US 6582959, US 6703020, US6054297, заявке на патент США US2006/009360, US2005/0186208, US2003/0206899, US2003/0190317, US2003/0203409 и US2005/0112126.

Агент для иммунотерапии, используемый при лечении рака, может включать бубинани, крестин, бензофуразан, лентинан, убенимекс, интерферон, интерлейкин, макрофагальный колониестимулирующий фактор, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, эритропоэтин, лимфотоксин, БЦЖ, Corynebacterium Parvum, эверолимус, левамизол, полисахарид К, прокодазол и/или ингибитор контрольных точек иммунитета (такой как ингибитор CTLA4, ингибитор TIM-3, ингибитор PD-1 (такой как Ниволумаб, Пембролизумаб, Пидилизумаб, AMP514 (Амплиммун), AMP-224 и другие ингибиторы PD-1, раскрытые в заявке PCT на патент WO2006/121168, WO2009/114335, WO2009/101611, патенте США US8609089, заявке на патент США US2010/028330, US2012/0114649), ингибитор PD-L1 (такой как YW243.55.S70, MPDL3280A, MEDI-4736, MSB-0010718C, MDX-1105 и другие ингибиторы PD-L1, раскрытые в заявке РСТ на патент WO2010/077634 и патенте США US7943743)).

Гормональный терапевтический противораковый агент, используемый при лечении рака, может включать уринастатин, Диэтилстильбестрол, хлорированный костен, Медроксипрогестерона ацетат, Мегестрола ацетат, Ципротерона ацетат, Ципротерона ацетат, Даназол, аллилэстренол, прогестерон, мепартрицин, Ралоксифен, Левофлоксацин, Антиэстроген (такой как Тамоксифена цитратная соль, ТореМифена цитратная соль и подобное), противозачаточные таблетки, простациклин, тестолактон, аминосукцинимид, агонист LH-RH (такой как Гозерелина ацетат, Бусерелин, Лейпрорелин и подобное), Дролоксифен, эпиандростерон, Этинилэстрадиола сульфонат, флубендазола гидрохлорид, анастрозол, летрозол, экземестан, ворозол, антиандрогены (такие как Флутамид, Бикалутамид, Нилутамид и подобное), 5α-статин (такой как финастерид, эпристерид), кортикостероид (такой как Дексаметазон, Преднизолон, Бетаметазон, Триамцинолона ацетонид и подобное) и/или антагонисты андрогенов (такие как Абиратерон и подобное).

Заболевание или нарушение, связанное с ингибированием VEGFR и/или VEGF

Используемое в настоящем описании заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может быть статистически значимо связано с ингибированием VEGFR и/или VEGF. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, вызвано ингибированием VEGFR и/или VEGF. Например, заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может включать заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органа лица и/или желудочно-кишечное заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органа лица и/или желудочно-кишечное заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может включать заболевание или нарушение эпителия, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF в кожную ткань, органы лица и/или желудочно-кишечный тракт. В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, включает побочные эффекты или неблагоприятные реакции, вызванные ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF.

Используемое в настоящем описании заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может быть новым показанием, которое может отличаться от любого другого заболевания или нарушения в прошлом. Например, диагностические методы, способы лечения и/или симптомы заболевания или нарушения, связанные с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, все являются уникальными. Например, эритромициновая мазь способна лечить сыпь, но не оказывает никакого эффекта на лечение сыпи, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Используемый в настоящем описании термин «заболевание или нарушение кожной ткани» обычно относится к патологическим изменениям, произошедшим в морфологии, структуре и/или функции кожи (включая волосы и ногти). Например, заболевание или нарушение кожной ткани может включать, но не ограничивается ими, сыпь, ладонно-подошвенный синдром, зуд, эритему, ксероз кожи, алопецию, паронихию, нарушение пигментации и подобное.

Используемый в настоящем описании термин «сыпь» обычно относится к изменению кожи, способному влиять на цвет, внешний вид или текстуру кожи. Сыпь может локализоваться только на части тела или затрагивать кожу в целом. Сыпь дополнительно включает крапивницу.

Используемый в настоящем описании термин «ладонно-подошвенный синдром» также известен как ладонно-подошвенный синдром (ЛПС), или ладонно-подошвенная эритродизестезия (ЛПЭ), или ладонно-подошвенная кожная реакция (ЛПКР), которая была впервые описана в 1984 году Якобом Локичем и Цери Мурем из клиники Диаконис в Новой Англии при Гарвардской медицинской школе. Типичные клинические проявления являются прогрессивными. Первичные клинические проявления включают лихорадку пальца (пальца стопы), боль, эритематозный отек, опасное для человека шелушение, язву, и сильную боль, и т.д. Патологические проявления ЛПС в основном содержат, например, базальную кератиноцитную вакуольную дегенерацию, кожную периваскулярную лимфоцитарную инфильтрацию, кератиноцитный апоптоз, и отек кожи, и подобное. Например, ЛПС может включать ладонную или подошвенную дизестезию или акроэритему, вызванную химиотерапией, или подобное. У пациентов с опухолями могут развиться соответствующие симптомы в процессе химиотерапии или молекулярно-таргетной терапии (например, ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF).

В настоящее время существует множество методов классификации ладонно-подошвенного синдрома (ЛПС), в которых относительно широко используется критерий Национального института онкологии США (NCI). Данный критерий классифицирует ладонно-подошвенный синдром по 3 степеням: степень 1 представляет собой минимальные кожные изменения или дерматит с парестезией (например, исчезновение отпечатков пальцев, пигментация, эритема, декрустация, парестезия, дизестезия, онемение кожи и т.д.), но не влияет на повседневную деятельность; степень 2 представляет собой тот же уровень изменения кожи, что и степень 1 с болью, незначительно влияет на повседневную деятельность, и поверхность кожи не повреждена; и степень 3 представляет собой язвенный дерматит или серьезные болезненные поражения кожи, серьезно влияет на повседневную жизнь и имеет явное повреждение тканей (например, шелушение, волдыри, кровотечение, отек и т.д.).

Кроме того, Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) классифицирует ЛПС по четырем степеням: степень 1 представляет собой чувство дизестезии, парестезии или покалывания в руках и ногах; степень 2 представляет собой дискомфорт при удерживании предметов и ходьбе, безболезненный отек или эритему; степень 3 представляет собой болезненную эритему и отек ладоней и подошв, околоногтевую эритему и отек; и степень 4 представляет собой декрустацию, образование язв, образование пузырей и сильную боль.

Используемый в настоящем описании термин «эритема» обычно относится к локальным или системным красным пятнам, вызванным локальным или системным расширением папиллярной капиллярной сети кожных покровов.

Используемый в настоящем описании термин «паронихия» обычно относится к инфекционному поражению мягких тканей вокруг ногтей пальцев (пальцев стопы), которое, как правило, вызывается подкожной инвазией и размножением бактерий через незначительное повреждение кожи возле ногтей и имеет клинические проявления, включая болезненное покраснение и отек пораженного участка с воспалительной экссудацией и разрастанием грануляционной ткани и т.д.

Используемый в настоящем описании термин «нарушение пигментации» обычно относится к нарушению, при котором кожа имеет более светлый или темный цвет по сравнению с нормальными условиями, дает пятна или обесцвечивается. Гипопигментация возникает вследствие недостаточной выработки пигментов в организме, в то время как гиперпигментация возникает вследствие избыточной выработки пигментов в организме.

Используемый в настоящем описании термин «заболевание или нарушение органа лица» обычно относится к патологическому изменению, произошедшему в морфологии, структуре и/или функции органа, включая уши, брови, глаза, нос, рот и т.д. Например, заболевание или нарушение органа лица может включать, но не ограничивается ими, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, ксеростомию, носовое кровотечение, назофарингит и/или хейлит.

Используемый в настоящем описании термин «назофарингит» обычно относится к воспалительным реакциям слизистых оболочек носоглотки, подслизистых оболочек и лимфоидных тканей и может быть классифицирован как острый назофарингит и хронический назофарингит. Симптомы включают, но не ограничиваются ими, сухость и дискомфорт в носоглотке, липкие выделения, которые нельзя откашливать, и часто сопровождаются тошнотой, тяжелыми случаями охриплости голоса, болью в горле, головной болью, головокружением, усталостью, несварением желудка, переохлаждением, также как другими местными или системными симптомами. При обследовании носоглотки выявляется хроническая заложенность слизистой оболочки, гиперплазия, гипертрофия, покров секрета или сухая корка и т.д.

Используемый в настоящем описании термин «хейлит» обычно относится к воспалительному заболеванию или нарушению, возникающему на губах. Например, он может включать воспаления периоральной кожи, красной каймы и/или слизистой оболочки щек и подобное. Его можно разделить на: острый хейлит и хронический хейлит в соответствии с течением заболевания; эрозивный хейлит, экзематозный хейлит, десквамативный хейлит в соответствии с клиническими симптомами; и хронический неспецифический хейлит, гландулярный хейлит, хейлит доброкачественного лимфаденоза, гранулематозный хейлит, синдром Мелькерссона-Розенталя, актинический хейлит и аллергический хейлит и т.д. в соответствии с этиологией и патологией.

Используемый в настоящем описании термин «желудочно-кишечное заболевание или нарушение» обычно относится к патологическому изменению морфологии, структуры и/или функции тканей желудка или кишечника (например, тканей пищеварительного тракта от привратника желудка до заднего прохода). Например, желудочно-кишечное заболевание или нарушение может включать, но не ограничивается ими, диарею, рвоту, тошноту, анорексию, запор и/или боль в животе и подобное.

Используемый в настоящем описании ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF может быть использован для лечения опухоли. Например, локализация заболевания или нарушения отличается от локализации опухоли.

Используемое в настоящем описании заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органа лица и/или желудочно-кишечное заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может включать заболевание или нарушение эпителия, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF в кожную ткань, органы лица и/или желудочно-кишечный тракт.

Используемый в настоящем описании термин «эпителиальная ткань» включает один или более слоев, свободных и поверхностно-закрытых клеток, покрывающих все тело, включая поверхности кожи, слизистой оболочки, полости, пульпы и желез. Все эпителиальные слои включают два специальных домена, то есть верхний домен, обращенный к поверхности слизистой оболочки (или полости), и базолатеральную мембрану, обращенную к серозной (или глубокой) поверхности. Таким образом, важной функцией эпителиальных тканей является обеспечение надлежащего барьера для разделения и контроля различных физиологических процессов между двумя поверхностями. Эпителиальная ткань содержит эпителиальные клетки и эндотелиальные клетки.

Используемый в настоящем описании термин «заболевание или нарушение эпителия» обычно относится к заболеванию или нарушению, вызванному поражением эпителиальной клетки и/или эндотелиальной клетки. Например, заболевание или нарушение эпителия может включать сыпь, акне, зуд, алопецию, изменение волос, эритему, шелушение кожи, герпес, гирсутизм, гиперпигментацию, заболевания ногтей, паронихию и шизонихию, ксероз кожи, гиперчувствительность, мукозит, назофарингит, назофарингит, ксеростомию, хейлит, мукозит слизистой оболочки ротовой полости и/или повреждение слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта. В качестве другого примера заболевание или нарушение эпителия может также включать заболевание или нарушение эпителиальных клеток кожи (например, сыпь, акне, розацеа, атопический дерматит, контактный дерматит, себорейный дерматит, волчанку, склеродермию, пемфигус, пигментацию, черные точки, лейкодерму, крапивницу, дерматофитию туловища, зуд, алопецию, изменение волос, эритему, паронихию и шизонихию, ксероз кожи, гиперчувствительность и псориаз), заболевание или нарушение эпителиальных клеток ротовой полости (например, пемфигус, герпес губы, герпетический стоматит, гранулематозный хейлит, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, пемфигоид, ксеростомический синдром, болезнь Бехчета и саркоидоз ротовой полости и т.д.), заболевание или нарушение эпителиальных клеток носовой полости (носовое кровотечение, синусит, фурункул носа и полипы носа и т.д.), заболевания или нарушения эпителиальных клеток желудка (например, гастрит, кишечную метаплазию, перфорацию желудка, свищ желудка, язву желудка и желудочно-кишечный полип) и/или заболевание или нарушение эпителиальных клеток тонкой кишки (например, энтерит, болезнь Крона, перфорацию кишечника, свищ кишечника, изъязвление тонкой кишки, язвенный колит и заболевание кишечника, вызванное НПВП).

Используемое в настоящем описании заболевание или нарушение эпителия, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может включать заболевание или нарушение, связанное с поражением эндотелиальных клеток, и/или заболевание или нарушение, связанное с поражением эпителиальных клеток, при котором поражение эндотелиальных клеток и/или эпителиальных клеток связано с ингибированием VEGFR и/или VEGF.

Например, эндотелиальные клетки могут включать эндотелиальные клетки сосудов. Поражение эндотелиальных клеток сосудов может включать дисфункцию эндотелия. Например, поражение эндотелиальных клеток сосудов может включать дегенеративное сосудистое заболевание (например, атеросклероз, средний артериосклероз и артериолосклероз (например, адаптационный артериолосклероз и пролиферативный артериолосклероз)), воспалительное заболевание сосудов (например, инфекционный артериит, сифилитический артериит, гигантоклеточный артериит, облитерирующий тромбангиит и ревматический артериит), функциональное сосудистое заболевание (например, болезнь Рейно, акроцианоз и акродиническую эритему) и врожденное сосудистое заболевание (например, врожденный артериовенозный свищ) и подобное.

Используемая в настоящем описании эпителиальная клетка может включать эпителиальную клетку кожи, эпителиальную клетку ротовой полости, эпителиальную клетку носовой полости, эпителиальную клетку желудка и/или эпителиальную клетку кишечника. Например, поражение эпителиальных клеток может включать поражение эпителиальных клеток кожи (например, сыпь, акне, розацеа, атопический дерматит, контактный дерматит, себорейный дерматит, волчанку, склеродермию, пемфигус, пигментацию, черные точки, лейкодерму, крапивницу, дерматофитию туловища, зуд, алопецию, изменение волос, эритему, паронихию и шизонихию, ксероз кожи, гиперчувствительность и псориаз), поражение эпителиальных клеток ротовой полости (например, пемфигус, герпес губы, герпетический стоматит, гранулематозный хейлит, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, пемфигоид, ксеростомический синдром, болезнь Бехчета и саркоидоз ротовой полости и т.д.), поражение эпителиальных клеток носовой полости (носовое кровотечение, синусит, фурункул носа и полипы носа и т.д.), поражение эпителиальных клеток желудка (например, гастрит, кишечную метаплазию, перфорацию желудка, свищ желудка, язву желудка и полип желудочно-кишечного тракта) и/или поражение эпителиальных клеток тонкой кишки (например, энтерит, болезнь Крона, перфорацию кишечника, свищ кишечника, изъязвление тонкой кишки, язвенный колит и заболевание кишечника, вызванное НПВП).

Автор изобретения обнаружил, что ингибирование VEGFR и/или VEGF может вызывать повреждение эндотелиальных клеток и эндотелиальной ткани, вызывая тем самым заболевание или нарушение кожной ткани, ткани ротовой полости, ткани носовой полости и/или ткани желудочно-кишечного тракта. Во время возникновения и развития этого заболевания или нарушения течение заболевания обычно начинается с повреждения/поражения эндотелиальных клеток и эндотелиальной ткани вместе с симптомами поражения эпителиальных клеток и окончательно проявляется как поражение эндотелиальных клеток, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или поражение эпителиальных клеток, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF пациенту.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может включать сыпь, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, зуд, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эритему, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксероз кожи, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, алопецию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, паронихию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, нарушение пигментации, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксеростомию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, носовое кровотечение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, назофарингит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, хейлит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эзофагит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, катаральный гастрит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, язву желудка, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, диарею, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, рвоту, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, тошноту, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, анорексию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, запор, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или боль в животе, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, включает ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, степень тяжести ладонно-подошвенного синдрома, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, представляет собой степень 1 или выше, степень 2 или выше, степень 3 или выше, степень 4 или выше и/или степень 5 или выше в соответствии с NCI-CTCAE V5.0.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение может включать сыпь, ладонно-подошвенный синдром, зуд, эритему, ксероз кожи, алопецию, паронихию, нарушение пигментации, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, ксеростомию, носовое кровотечение, назофарингит, хейлит, эзофагит, катаральный гастрит, язву желудка, диарею, рвоту, тошноту, анорексию, запор и/или боль в животе. Например, заболевание или нарушение включает ладонно-подошвенный синдром.

В некоторых вариантах осуществления заболевание или нарушение, связанное с ингибированием VEGFR и/или VEGF, нельзя по существу вылечить или облегчить путем введения агента, выбранного из группы, состоящей из: 1% Силденафила, замороженной мочевины, мази c вазелином, мази с мочевиной, мази с бримонидином, мази с витамином B6, мази с никотином, мази с дексаметазоном, мази с гидрокортизоном, мази Vk1 (0,1%), мази с эритрозином и мази с триамцинолоном.

Высвобождающий оксид азота агент

Используемый в настоящем описании термин «высвобождающий оксид азота агент» обычно относится к любому веществу, способному вносить вклад в образование и/или высвобождение оксида азота. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент может непосредственно способствовать образованию и/или высвобождению оксида азота. Например, высвобождающий оксид азота агент может стимулировать другие вещества, чтобы способствовать, образовывать и/или высвобождать оксид азота. Например, высвобождающий оксид азота агент служит в качестве реагента химической или катализируемой ферментами реакции и способствует, образует и/или высвобождает оксид азота посредством такой реакции. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент служит катализатором химической или ферментативно-катализируемой реакции и стимулирует другие вещества, способствующие образованию и/или высвобождению оксида азота посредством такой реакции. Высвобождающий оксид азота агент может сам содержать оксид азота.

Высвобождающие оксид азота агенты можно идентифицировать или подвергать скринингу с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, например, можно определить способность исследуемого соединения вносить вклад, образовывать, высвобождать и/или прямо или косвенно переносить оксид азота путем обнаружения уровней нитрита, NO, NO^2- и/или S-нитрозотиола. Для определения уровня нитрита, NO, NO^2- и/или S-нитрозотиола можно использовать любой способ, известный в данной области техники. Например, высвобождающие оксид азота агенты могут быть идентифицированы или проверены путем обнаружения нитрита, например, анализа нитрита с помощью метода Грисса (молекулярные зонды), который основан на реакции между нитритом и пара-аминобензолсульфоновой кислотой с последующим обнаружением продукта реакции с помощью спектрофотометрии. Также возможно проводить измерения путем восстановления нитрита/нитрата до NO в дефлегматоре при 95ºC с помощью высокочувствительной хемилюминесцентной технологии. В качестве другого примера можно идентифицировать или проверить высвобождающие оксид азота агенты, определяя уровень Hb-NO в крови. Известно, что NO тесно связывается с гемоглобином (Hb), и взаимодействие между NO и Hb известно как основной путь метаболизма NO в кровеносных сосудах. Таким образом, уровень Hb-NO в крови является хорошим индикатором эндогенной выработки NO. В некоторых вариантах осуществления можно определить парамагнитный аддукт гемоглобин-NO (Hb-NO) в цельной крови и эритроцитах с помощью спектроскопии электронного парамагнитного резонанса (ЭПР), чтобы идентифицировать или проверить высвобождающие оксид азота агенты. В качестве другого примера можно идентифицировать или проверить высвобождающие оксид азота агенты с помощью амперометрии NO-специфического электрода. Данный метод требует введения NO-электрода в живое тело или образец. В качестве другого примера можно идентифицировать или проверить высвобождающие оксид азота агенты путем обнаружения S-нитрозотиола. В Eco Medics CLD 88 Exhalyzer (Annex, Herts, UK) S-нитрозотиол белка измеряют с использованием хемилюминесцентного детекторного анализа (Feelisch, M. et al., Concomitant S-, N-, and heme-nitros(yl)ation in biological tissues and fluids: implications for the fate of NO in vivo. FASEB. J 16, 1775-85 (2002)). В качестве другого примера можно косвенно определять уровень NO, чтобы идентифицировать или проверить высвобождающие оксид азота агенты. Например, метод EndoPAT используют для проведения неинвазивного определения функции эндотелия для измерения уровня NO. Конкретный метод обнаружения можно найти в патенте США US 9696324. Также можно указать уровень NO в сыворотке посредством специфического восстановления NO₃^- до NO₂^- с помощью нитратредуктазы, взаимодействия NO₂^- с хромогенным агентом для образования окрашенного вещества и измерения оптической плотности, таким образом идентифицируя или проверяя высвобождающие оксид азота агенты.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент способен производить по меньшей мере один из NO⁺, NO^-, N₂O, NO, N₂O₃, NO₂, NO₃^- и NO₂^-. Например, высвобождающий оксид азота агент способен прямо или косвенно производить NO.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может содержать органические молекулы, неорганические молекулы, макромолекулы, наноматериалы и/или и/или аммонийокисляющий микроорганизм (АОМ). Например, высвобождающий оксид азота агент может представлять собой NO.

Используемый в настоящем описании термин «органический молекулярный» обычно относится к соединению, содержащему элемент углерода и не содержащему оксид углерода, угольную кислоту, карбонат, цианоген, цианид, цианат, тиоцианоген, карбид металла и подобное.

Например, высвобождающий оксид азота агент может содержать органические молекулы, и органические молекулы могут содержать нитроглицерин, изосорбида мононитрат, пентаэритритила тетранитрат, изосорбида динитрат, тролнитрат, Никорандил, пропатилнитрат, Молсидомин, 5-амино-3-(4-морфолинил)-1,2,3-оксадиазол, изоамилнитрит, 3,3-ди(аминоэтил)-1-гидроксил-2-карбонил-1-триазен (NOC-18), сульфонуклеофильную комплексную динатриевую соль, S-нитрозоглутатион, S-нитрозо-N-ацетилпеницилламин, 4-фенил-3-фуронитрил, (±)-(E)-4-этил-2-[(E)-гидроксиимино]-5-нитро-3-гексенамид, стрептозоцин, NG-гидрокси-L-аргинина ацетатную соль, O₂-(2,4-динитрофенил)-1-[(4-этоксикарбонил)пиперазин-1-ил]диазен-1-ия-1,2-диолат, N-нитрозодибутиламин, 3-морфолино-сиднонимин, линзидомин, 3-(4-ацетилфенил)сиднон, диэтиламино-нуклеофильный комплекс/AM и/или Итрамин. Например, высвобождающий оксид азота агент может содержать органические молекулы, и органические молекулы могут содержать нитроглицерин, изосорбида мононитрат и/или изосорбида динитрат. В некоторых вариантах осуществления органические молекулы могут содержать нитроглицерин.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может содержать неорганическую молекулу, и неорганическая молекула может содержать нитрильный комплекс, нитрозильный комплекс, металлнитрозаминовый комплекс, нитрат и/или нитрит. Например, неорганическая молекула может содержать нитропруссид натрия.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может иметь относительную молекулярную массу 2000 дальтон или ниже, 1500 дальтон или ниже, 1200 дальтон или ниже, 1000 дальтон или ниже, 900 дальтон или ниже, 800 дальтон или ниже, 700 дальтон или ниже, 600 дальтон или ниже, 500 дальтон или ниже, 400 дальтон или ниже, 300 дальтон или ниже, 200 дальтон или ниже или 100 дальтон или ниже.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может представлять собой полимер, содержащий NO-донорные группы. Может быть использован любой подходящий полимер, включая сшитый или несшитый полимер, дендритный полимер, соединение металла, органическое соединение металла, неорганическое соединение и другие полимерные каркасы. NO-высвобождающие полимеры могут включать NO-высвобождающий соконденсированный диоксид кремния, такой как функционализированный диазоксида дисульфатом полисилоксан, NO-высвобождающий цеолит (см. заявку на патент США US2006/0269620 или US2010/0331968), NO-высвобождающий металлорганический каркас (MOF) (см. заявку на патент США US2010/0239512 или US2011/0052650), NO-высвобождающее мультидонорное соединение (см. заявку на патент США US2014/0171395), NO-высвобождающий дендритный полимер или металлическую структуру (см. заявку на патент США US2009/0214618), NO-высвобождающее покрытие (см. заявку на патент США US2011/0086234) и соединения, описанные в заявке на патент США US2010/0098733 и заявке PCT на патент WO2012/100174, раскрытие которых включено в настоящее описание в полном объеме посредством ссылки. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент представляет собой наноматериал, содержащий NO-донорную группу(ы), например, нанокристалл, который представляет собой соконденсированную силоксановую сетку, образованную диоксидом кремния.

В качестве другого примера NO-высвобождающий полимер может дополнительно включать наносферы S-нитрозотиола диоксида кремния, S-нитрозоэтандитиола хитин, хитозан с привитым олигопропилендиамином оксида азота/нуклеофильные комплексы и/или высвобождающие оксид азота агенты, производимые Novan Inc. (например, SB204, SB206, SB208, SB414 или NVN3100) и раскрытые в патентах США US8282967, US8956658, US8962029, US9403851, US9403852, US9187501, US8399005, US8981139, US9713652, US9238038, US9669041, US8591876, US9526738, US9737561, US9427605, заявках на патент США US2009/0214618, US2012/0021055, US2012/0034169, US2014/0005426, US2014/0058124, US2015/0182543, US2016/0060279, US2014/0065200, US2015/0225488, US2010/0297200, US2013/0196951, US2013/0344334, US2014/0017121, US2011/0086234, US2014/0134321, US2010/0098733, US2012/0230921, US2014/0171395, US2016/0083339, US2016/0199295, US2014/0255318, US2017/0246205, US2012/0136323, US2012/0156163, US2014/0057001, US2012/0134951, US2017/0056437, US2017/0312307, US2017/0216197, US2015/0024052, US2008/0311163, US2016/0256366, US2015/0111973, US2017/0196905, заявках PCT на патент WO2017/079268, WO2004/009253, WO2017/151905, WO2016/160089 и WO2017/019614.

Используемый в настоящем описании хитозан с привитым олигопропилендиамином оксида азота/нуклеофильный комплекс может содержать диазенийдиолат. Например, высвобождающий оксид азота агент может представлять собой NONOат. Используемый в настоящем описании NONOат может включать химическое соединение со структурой R¹R²N-(NO-)-N=O, в которой R¹ и R² оба представляют собой алкил.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может содержать аммонийокисляющие микроорганизмы (AOM), и аммонийокисляющие микроорганизмы (AOM) могут содержать аммонийокисляющие бактерии (АОБ). Например, аммонийокисляющие микроорганизмы (AOM) могут содержать Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira, Nitrosocystis, Nitrosolobus и/или Nitrosovibrio. Например, аммонийокисляющие микроорганизмы (AOM) могут содержать AOБиом, микробиоту, высвобождающую NO LLC (например, AOB101, AOB102, AOB103, AOB201, AOB201 или AOB203), и раскрытую в патентах США US7820420B2, US9738870B2, WO2017004534A2, US10078054B2, US2017189454A1, US20170191109A1, US20180092948A1, WO2018057710A1, WO2018017583A1, WO2018111888A1, US20070148136A1, US2005106126A1, US20170037363A1, CN1997731A, US20170189454A1 и WO2017004557A1.

Используемый в настоящем описании термин «полимер» обычно означает любое соединение с молекулярной массой более 2000 дальтон, более 3000 дальтон, более 4000 дальтон, более 5000 дальтон, более 6000 дальтон, более 7000 дальтон, более 8000 дальтон, более 9000 дальтон, более 10000 дальтон, более 12000 дальтон, более 15000 дальтон или более 20000 дальтон.

Используемый в настоящем описании термин «малая молекула» обычно означает любое соединение с молекулярной массой 2000 дальтон или менее, 1500 дальтон или менее, 1200 дальтон или менее, 1000 дальтон или менее, 900 дальтон или менее, 800 дальтон или менее, 700 дальтон или менее, 600 дальтон или менее, 500 дальтон или менее, 400 дальтон или менее, 300 дальтон или менее, 200 дальтон или менее или 100 дальтон или менее.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может иметь одну или более следующих групп: диазенийдиолат, гидроксидиазенсульфоновая кислота, S-нитрозотиол, фуроксан, оксим, N-нитрозоамин, N-гидроксигуанидин, диазенийдиолат, нитрат, нитрит, сложный эфир нитрата, сложный эфир нитрита, сиднонимин, сиднон, оксатриазол-5-имин, оксатриазол-5-он, гидроксиамин, диоксадиазациклобутен, N-гидроксинитрозоамин, N-нитрозоимин, гидроксимочевина и металлнитрозаминовый комплекс.

Например, высвобождающий оксид азота агент может иметь одну или более групп, выбранных из Таблицы 1:

Таблица 1

№	Соединение	Структура соединения	Описание
1	Диазенийдиолат		Среди них R, R1, R2 могут представлять собой органические химические группы; M может представлять собой катион металла; X может представлять собой неорганический анион; a, b, n могут представлять собой положительное целое число.
2	Диазенийдиолатный эфир
3	Гидроксидиазенсульфоновая кислота
4	S-нитрозотиол
5	Фуроксан
6	Оксим
7	N-нитрозоамин
8	N-гидроксигуанидин
9	Нитрат
10	Сложный эфир нитрата
11	Нитрит
12	Сложный эфир нитрита
13	Сиднонимин
14	Сиднон
15	Оксатриазол-5-имин
16	Оксатриазол-5-он
17	Гидроксиамин
18	Диоксадиазациклобутен
19	N-гидроксинитрозоамин
20	N-нитрозоимин
21	N-гидроксимочевина
22	Металлнитрозаминовый комплекс

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может быть положительно заряженным, электрически нейтральным или отрицательно заряженным при физиологических условиях. Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может иметь logP в диапазоне от 1 до 5. Например, высвобождающий оксид азота агент может иметь logP в диапазоне от 1,5 до 3,5.

Высвобождающий оксид азота агент настоящей заявки может быть использован для профилактики или лечения связанных с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболеваний или нарушений.

Способ профилактики и/или лечения заболеваний и связанные применения

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может быть использован для получения лекарственного средства для профилактики или лечения связанных с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболеваний или нарушений.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может быть использован для профилактики или лечения сыпи, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ладонно-подошвенного синдрома, связанного с введением с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, зуда, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эритемы, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксероза кожи, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, алопеции, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, паронихии, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, нарушения пигментации, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, мукозита слизистой оболочки ротовой полости, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксеростомии, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, носового кровотечения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, назофарингита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, хейлита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эзофагита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, катарального гастрита, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, язвы желудка, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, диареи, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, рвоты, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, тошноты, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, анорексии, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, запора, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или боли в животе, связанной с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, высвобождающий оксид азота агент может быть использован для профилактики или лечения ладонно-подошвенного синдрома, связанного с введением с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Используемый в настоящем описании высвобождающий оксид азота агент может быть использован для профилактики или лечения сыпи, ладонно-подошвенного синдрома, зуда, эритемы, ксероза кожи, алопеции, паронихии, нарушения пигментации, мукозита слизистой оболочки ротовой полости, ксеростомии, носового кровотечения, назофарингита, хейлита, эзофагита, катарального гастрита, язвы желудка, диареи, рвоты, тошноты, анорексии, запора и/или боли в животе. Например, оксид азота может быть использован для профилактики или лечения ладонно-подошвенного синдрома.

В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство составлено таким образом, чтобы быть подходящим для местного введения. В некоторых вариантах осуществления локализация местного введения может не быть основной локализацией опухоли или местом потенциального метастазирования опухоли. Например, место введения может не быть первичной локализацией опухоли. В другом случае место введения может не быть местом метастазирования опухоли. Например, место метастазирования может включать место метастазирования опухоли, вызванное лимфатическим метастазированием, сосудистым метастазированием и/или имплантационным метастазированием. В некоторых вариантах осуществления место метастазирования может включать кость, мозг, печень, желудок и/или легкие. В другом случае место введения может не быть местом рецидива опухоли. В лекарственном средстве настоящей заявки высвобождающий оксид азота агент может присутствовать в концентрации от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 50% (масс./масс.), например, она может варьироваться в диапазоне от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 10% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 9,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 9% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 8,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 8% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 7,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 7% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 6,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 6% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 5,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 4,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 4% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 3,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 3% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 2,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 2% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 1,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 1% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,01% (масс./масс.) или менее. В лекарственном средстве настоящей заявки может присутствовать высвобождающий оксид азота агент в концентрации, варьирующейся в диапазоне от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 1% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,9% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,6% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,4% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,3% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,2% (масс./масс.), от приблизительно 0,1% (масс./масс.) до приблизительно 0,2% (масс./масс.) или менее. Например, высвобождающий оксид азота агент может присутствовать в концентрации приблизительно 0,2% (масс./масс.) или высвобождающий оксид азота агент может присутствовать в концентрации приблизительно 0,1% (масс./масс.).

Используемое в настоящем описании лекарственное средство, содержащее высвобождающий оксид азота агент не может по существу влиять на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, при введении лекарственного средства, содержащего высвобождающий оксид азота агент, не требуется увеличивать дозу ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF для достижения по существу такого же терапевтического эффекта.

В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство составлено таким образом, чтобы быть подходящим для наружного введения.

В некоторых вариантах осуществления лекарственное средство составлено таким образом, чтобы быть подходящим для местного кожного введения. Например, лекарственное средство может быть мазью, лосьоном или кремом.

Используемое в настоящем описании лекарственное средство может дополнительно содержать один или более дополнительных активных ингредиентов. Например, активные ингредиенты могут относиться к мономерному соединению, обладающему медицинским эффектом или биологической активностью. Например, другие активные ингредиенты могут быть выбраны из группы, состоящей из противовоспалительных средств, анальгетиков, местных анестетиков, антигистаминных средств, консервантов, иммунодепрессантов и средств против кровотечения.

Используемое в настоящем описании лекарственное средство может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый носитель. Например, фармацевтически приемлемый носитель может быть выбран из группы, состоящей из наполнителей, адгезивов, дезинтегрирующих агентов, буферов, консервантов, скользящих веществ, ароматизаторов, загустителей, красителей и эмульгаторов.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет высвобождающий оксид азота агент, используемый для профилактики или лечения связанного с ингибированием VEGFR и/или VEGF заболевания или нарушения (например, связанного с ингибированием VEGFR и/или VEGF заболевания или нарушения эпителиальной ткани).

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет способ профилактики или лечения связанных с ингибированием VEGFR и/или VEGF заболеваний или нарушений у объекта. Способ, включающий введение объекту профилактически или терапевтически эффективного количества высвобождающего оксид азота агента настоящей заявки.

Используемый в настоящем описании термин «предотвращать» может использоваться взаимозаменяемо с «профилактически лечить». В настоящей заявке термин «предотвращать» обычно относится к предотвращению возникновения, повторного возникновения или распространения заболеваний или одного или более их симптомов путем принятия некоторых действий заранее. Используемый в настоящем описании термин «лечить» обычно относится к устранению или облегчению заболевания или ослаблению одного или более симптомов, связанных с заболеваниями.

Используемый в настоящем описании термин «объект» обычно относится к человеку или животному, не являющемуся человеком (включая млекопитающих, грызунов, и птиц, и т.д.), которым необходимо принять диагноз, прогноз, улучшение, профилактику и/или лечение. Например, объектом может быть домашний скот (например, корова, свинья, коза, курица, кролик или лошадь), или грызуны (например, крыса и мышь), или приматы (например, горилла и обезьяна), домашние животные (например, собака и кошка). Используемый в настоящем описании объект может представлять собой такой объект, которому для лечения или профилактики требуется высвобождающий оксид азота агент. Используемый в настоящем описании объект может включать больного раком. Например, объекту могли вводить, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF. Например, ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF может представлять собой ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF, описанный в настоящей заявке.

Используемая в настоящем описании степень тяжести заболевания или нарушения может увеличиваться после введения ингибитора VEGFR или ингибитора VEGF. Например, степень тяжести заболевания или нарушения может увеличиваться приблизительно на 5% или более, 10% или более, 15% или более, 20% или более, 25% или более, 30% или более, 35% или более, 40% или более, 45% или более, 50% или более, 60% или более, 70% или более, 80% или более, 90% или более, 100% или более, 200% или более или более.

Используемый в настоящем описании объект может не страдать заболеванием или нарушением до введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Используемый в настоящем описании термин «объект не страдает заболеванием или нарушением» обычно относится к объекту, у которого нет предшествующего медицинского анамнеза связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболевания или нарушения. Например, объект не страдает связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболеванием или нарушением в течение более одного дня, более одной недели, более одного месяца, более одного года, более десяти лет до введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF или с момента рождения объекта.

Используемый в настоящем описании ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит высвобождающий оксид азота агент. Например, ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит нитроглицерина.

Используемый в настоящем описании термин «эффективное количество» относится к количеству лекарственного средства, способному ослаблять или устранять заболевания или симптомы у объекта или профилактически ингибировать или предотвращать возникновение заболеваний или симптомов. В общем, конкретное эффективное количество может определяться в зависимости от массы тела, возраста, пола, режима питания, скорости выведения, медицинского анамнеза, текущей терапии, времени введения, лекарственной формы, режима введения, пути введения, комбинации лекарственных средств, состояния здоровья или перекрестного инфекционного потенциала объекта, аллергии, гиперчувствительности и побочных эффектов и/или степени развития заболевания эпителиальной (или эндотелиальной) ткани. Специалист в данной области техники (например, врач или ветеринар) может уменьшать или увеличивать вводимую дозу по частям в соответствии с этими или другими условиями.

В некоторых вариантах осуществления вводимый высвобождающий оксид азота агент может присутствовать в концентрации от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 50% (масс./масс.), например, она может варьироваться в диапазоне от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 10% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 9,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 9% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 8,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 8% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 7,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 7% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 6,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 6% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 5,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 4,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 4% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 3,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 3% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 2,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 2% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 1,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 1% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,01% (масс./масс.) или менее. В лекарственном средстве настоящей заявки может присутствовать высвобождающий оксид азота агент в концентрации, варьирующейся в диапазоне от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 1% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,9% (масс./масс.), от приблизительно 0,0001% (масс./масс.) до приблизительно 0,6% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,5% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,4% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,3% (масс./масс.), от приблизительно 0,05% (масс./масс.) до приблизительно 0,2% (масс./масс.), от приблизительно 0,1% (масс./масс.) до приблизительно 0,2% (масс./масс.) или менее. Например, высвобождающий оксид азота агент может присутствовать в концентрации приблизительно 0,2% (масс./масс.) или высвобождающий оксид азота агент может присутствовать в концентрации приблизительно 0,1% (масс./масс.).

Используемый в настоящем описании объект может включать человека или животное, не являющееся человеком. Например, животное, не являющееся человеком, может быть выбрано из группы, состоящей из обезьяны, курицы, гуся, кошки, собаки, мыши и крысы. Более того, животное, не являющееся человеком, может дополнительно включать любой вид животных, кроме человека, например, домашний скот, или грызунов, или приматов, или домашних животных, или домашних птиц. Человек может быть европеоидной, африканской, азиатской, семитской или другой расы или комбинацией различных рас. В качестве другого примера человек может быть пожилым, взрослым, подростком, ребенком или младенцем.

Эффективное количество для человека может быть получено из эффективного количества для лабораторных животных. Например, Freireich et al. описывают соотношение между дозами для животных и людей (миллиграммы на квадратный метр поверхности тела) (Freireich et al., Cancer Chemother. Rep. 50, 219 (1966)). Площадь поверхности тела может быть приблизительно определена в соответствии с ростом и массой тела пациента. См., например, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y., 537 (1970).

В способе настоящей заявки ингибирование VEGFR и/или VEGF может быть вызвано введением объекту ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Например, высвобождающий оксид азота агент можно вводить до, одновременно или после введения объекту ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Когда ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и высвобождающий оксид азота агент настоящей заявки вводят одновременно, высвобождающий оксид азота агент вводят на уровне приблизительно 0,0001-10% (например, приблизительно 0,005-10%, приблизительно 0,01-10%, приблизительно 0,05-10%, приблизительно 0,1-10%, приблизительно 0,2-10%, приблизительно 0,3-10%, приблизительно 0,4-10%, приблизительно 0,5-10%, приблизительно 0,6-10%, приблизительно 0,7-10%, приблизительно 0,8-10%, приблизительно 0,9-10%, приблизительно 0,95-10%, приблизительно 1-10%, приблизительно 2-10%, приблизительно 3-10%, приблизительно 5-10%, приблизительно 6-10%, приблизительно 8-10% или менее) по отношению к общей дозе. В варианте осуществления, в котором высвобождающий оксид азота агент и ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF вводят через интервалы, высвобождающий оксид азота агент может быть введен через интервалы до или после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Временной интервал может составлять 1 минуту, 2 минуты, 5 минут, 10 минут, 20 минут, 30 минут, 45 минут, 1 час, 2 часа, 3 часа, 4 часа, 5 часов, 6 часов, 12 часов, 18 часов, 1 день, 2 дня, 3 дня, 1 неделю, 2 недели, 3 недели, 1 месяц, 2 месяца, 3 месяца или более.

В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят наружным образом. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят в виде мази. В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент вводят вместе с одним или более дополнительными активными ингредиентами. В некоторых вариантах осуществления введение высвобождающего оксид азота агента по существу не влияет на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

В другом аспекте настоящая заявка предоставляет комбинацию лекарственных средств (например, набор). Комбинация лекарственных средств может включать: 1) ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF настоящей заявки и 2) высвобождающий оксид азота агент настоящей заявки. В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и высвобождающий оксид азота агент не смешиваются друг с другом.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и высвобождающий оксид азота агент каждый независимо присутствует в отдельном контейнере. Например, комбинация лекарственных средств может включать два или более лекарственных средств, которые упакованы отдельно друг от друга, в которой по меньшей мере одно из лекарственных средств содержит ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF настоящей заявки и в которой по меньшей мере одно дополнительное лекарственное средство содержит высвобождающий оксид азота агент настоящей заявки.

В некоторых вариантах осуществления комбинации лекарственных средств высвобождающий оксид азота агент по пункту 2) способен предотвращать или лечить заболевание или нарушение, связанное с ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF по пункту 1) (например, заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR или ингибитора VEGF настоящей заявки). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент по 2) по существу не влияет на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF по пункту 1). В некоторых вариантах осуществления высвобождающий оксид азота агент по пункту 2) вводят до, одновременно или после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF по пункту 1).

Используемый в настоящем описании термин «по существу не влияет» может относиться к сравнению с терапевтическим эффектом использования ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF независимо, терапевтический эффект использования высвобождающего оксид азота агента по пункту 2) или набора и ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF пункту 1) комбинации лекарственных средств является равным или значительно не хуже. Например, для любого объекта по сравнению с терапевтическим эффектом введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF независимо уменьшение объема опухоли при введении высвобождающего оксид азота агента по пункту 1) и ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF по пункту 2) комбинации лекарственных средств или набора равно или снижается не менее чем приблизительно на 5%, не менее чем приблизительно на 4%, не менее чем приблизительно на 3%, не менее чем приблизительно на 2%, не менее чем приблизительно на 1%, не менее чем приблизительно на 0,5%, не менее приблизительно на 0,1%, не менее чем приблизительно на 0,01%, не менее чем приблизительно на 0,001% или менее.

Настоящая заявка дополнительно предоставляет способ, включающий введение высвобождающего оксид азота агента объекту, среди которых объекту вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF и который страдает или подвержен связанному с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболеванию или нарушению.

Настоящая заявка дополнительно предоставляет способ, включающий введение высвобождающего оксид азота агента объекту, страдающему или подверженному заболеванию или нарушению, среди которых объекту вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF.

Используемый в настоящем описании объект может страдать заболеванием или нарушением, связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, или объект может иметь большую вероятность страдать заболеванием или нарушением, связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Используемый в настоящем описании термин «подверженный» обычно относится к объекту, который с большой вероятностью страдает связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболеванием или нарушением. Например, большая вероятность может относиться к вероятности, что объект страдает связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболеванием или нарушением, которая увеличивается приблизительно по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 100%, по меньшей мере на 150%, по меньшей мере на 200% или более по сравнению со здоровым объектом.

Настоящая заявка дополнительно предоставляет способ профилактики или лечения заболеваний или нарушений, включающий введение высвобождающего оксид азота агента объекту, который страдает или подвержен заболеванию или нарушению, среди которых заболевание или нарушение представляет собой ладонно-подошвенный синдром.

Например, объекту могли вводить, вводят или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF.

Например, заболевание или нарушение может представлять собой ладонно-подошвенный синдром. Например, заболевание или нарушение может представлять собой заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, заболевание или нарушение может представлять собой ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Настоящая заявка предоставляет способ, включающий стадии: 1) контроль одного или более признаков кожной ткани, органа лица и/или желудочно-кишечного тракта объекта, которому вводят ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF; 2) когда контроль показывает, что объект страдает заболеванием или нарушением кожной ткани, заболеванием или нарушением органа лица и/или желудочно-кишечным заболеванием или нарушением, связанным с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, введение высвобождающего оксид азота агента объекту.

Используемый в настоящем описании термин «признаки кожной ткани» обычно относится к признакам, способным представлять собой заболевание или нарушение кожной ткани. Например, признаки могут включать признаки, способные представлять собой заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, признак может включать признак, способный представлять собой сыпь, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, зуд, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эритему и/или пурпуру, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксероз кожи и/или трещину, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, алопецию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, паронихию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или нарушение пигментации, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, признак может включать площадь и степень эритемы, площадь и степень пурпуры, количество и степень прыщей, количество и степень пустулы, количество и степень узелка, диапазон и степень отека кожи, степень кожной язвы, степень ксероза, степень трещины кожи, степень кератинизации кожи, степень кожного лишая, площадь и степень десквамации кожи, состояние стянутости кожи, степень кожного зуда, степень сосудистого воспаления между дермой и гиподермой, степень некроза кожной ткани, степень кожной язвы, площадь сетчатого ливедо, степень пигментации кожи, количество волдырей и пузырей, часть/площадь/степень выпадения волос, степень грануляции кожи, степень себореи кожи, степень фолликулита, степень припухлости и покраснения околоногтевой области, степень паронихии, пигментацию околоногтевой кожи, степень онихатрофии или онихауксиса, аномальный цвет ногтевого ложа, ногтевой полосы, края ногтя, птеригиума ногтя и подобного.

Используемый в настоящем описании термин «признаки органа лица» обычно относится к признакам, представляющим заболевание или нарушение лица. Например, признаки могут включать признаки, представляющие заболевание или нарушение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, признаки могут содержать представляющие признаки. Признак может включать признак, способный представлять собой связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболевание или нарушение. Например, признак может включать признак, способный представлять собой мукозит слизистой оболочки ротовой полости, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксеростомию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, носовое кровотечение, связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, назофарингит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или хейлит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, признак может включать степень застоя слизистой оболочки ротовой полости, степень отека слизистой оболочки ротовой полости, степень герпеса слизистой оболочки ротовой полости, степень язвы слизистой оболочки ротовой полости, степень гландулярного дефекта подслизистой оболочки ротовой полости, степень поражения язычной железы/подъязычной железы/околоушной железы и атрофии, степень ксеростомии, степень кариеса, степень отека языка, степень отметки периферийного зуба, частоту носового кровотечения, количество носового кровотечения, степень отека слизистой оболочки ротоглотки и носоглотки, степень герпеса слизистой оболочки ротоглотки и носоглотки, степень язвы слизистой оболочки ротоглотки и носоглотки, степень гиперплазии слизистой оболочки ротоглотки и носоглотки, степень фолликулярной гиперплазии ротоглотки и носоглотки, степень отека губ и вокруг губ, степень герпеса губ и вокруг губ, степень эритемы губ и вокруг губ, степень десквамации кожи губ и вокруг губ, степень развития лишая кожи губ и вокруг губ, и степень эрозии кожи губ и вокруг губ, и подобное.

Используемый в настоящем описании термин «признаки желудочно-кишечного тракта» обычно относится к признаку, способному представлять собой желудочно-кишечное заболевание или нарушение. Например, признак может включать признак, способный представлять собой связанное с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF заболевание или нарушение. Например, признак может включать признак, способный представлять собой эзофагит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, катаральный гастрит, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, язву желудка, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, диарею, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, рвоту, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, тошноту, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, анорексию, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, запор, связанный с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или боль в животе, связанную с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, признак может включать степень потери аппетита, степень отрыжки из желудка, степень затрудненного проглатывания, степень жжения в груди, степень боли в груди, время и степень боли в верхней части живота (при голоде или насыщении), степень вздутия живота, степень диареи, количество дефекаций, время дефекаций, боль в животе перед дефекацией, ректальные тенезмы, изменения кала (такие как стул с черной кровью, стул со свежей кровью, стул со слизью, стул со слизью и кровью, водянистый стул, опадающий стул и т.д.), частоту рвоты, состояние рвоты, тошноту, степень недостаточности питания, степень недостаточности питательных микроэлементов и т.д.

Используемый в настоящем описании способ включает постоянный контроль заболевания или нарушения кожной ткани, заболевания или нарушения органа лица и/или желудочно-кишечного заболевания или нарушения, и, необязательно, уменьшение или отмену ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, постоянный контроль может относиться к контролю приблизительно по меньшей мере один день, по меньшей мере одну неделю, по меньшей мере десять дней, по меньшей мере две недели, по меньшей мере три недели, по меньшей мере один месяц, по меньшей мере три месяца или более после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, уменьшение или отмена может относиться к дозе введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту, уменьшению приблизительно по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 99% или 100% по сравнению с дозой введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF в качестве стадии 1) способа.

Используемая в настоящем описании степень тяжести заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, может увеличиваться после введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF. Например, степень тяжести может увеличиться, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 10%, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или более.

Используемый в настоящем описании объект может не страдать заболеванием или нарушением до введения ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

Используемый в настоящем описании ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF может не содержать высвобождающий оксид азота агент. Например, ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF может не содержать нитроглицерина.

Используемое в настоящем описании заболевание или нарушение может представлять собой заболевание или нарушение эпителиальной ткани.

Используемое в настоящем описании введение ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF можно использовать для лечения рака. Например, локализация заболевания или нарушения может отличаться от локализации опухоли.

Как используется в настоящем описании, можно вводить объекту высвобождающий оксид азота агент. Например, можно вводить местно высвобождающий оксид азота агент в локализацию, по существу не содержащую опухолевых клеток. Как используется в настоящем описании, можно вводить высвобождающий оксид азота агент объекту местно. Например, можно вводить высвобождающий оксид азота агент объекту в место, которое по существу не содержит опухолевых клеток.

Используемый в настоящем описании термин «локализация, по существу не содержащая опухолевых клеток», обычно относится к органу ткани или локализации, в которой количество раковых клеток достаточно низкое, чтобы считаться, что они по существу не содержатся. Например, «по существу не содержатся» может относиться к количеству раковых клеток менее 0,01%, менее 0,005%, менее 0,001%, менее 0,0001%, менее 0,00001% или менее от общего количества клеток данной локализации.

В другом случае можно вводить высвобождающий оксид азота агент в нераковую локализацию.

Используемый в настоящем описании термин «нераковая локализация» обычно относится к месту, которое не является очагом рака или местом метастазирования при раке. Например, раковый узел может быть первичным местом рака. Например, место метастазирования при раке может быть местом той же опухоли, что и опухоль первичного участка. Например, место метастазирования при раке может быть образовано лимфатическим метастазированием, сосудистым метастазированием или имплантационным метастазированием.

В контексте настоящего изобретения (в частности в контексте следующей формулы изобретения, если не указано иначе в настоящем описании или явно не противоречит контексту, термины для единственного числа и «по меньшей мере один» и аналогичные обозначения следует понимать как содержащие как формы единственного, так и множественного числа. Если не указано иначе в настоящем описании или явно не противоречит контексту, когда за термином «по меньшей мере один» следует один или более перечисленных пунктов (например, «по меньшей мере один из A и B»), следует понимать как один из перечисленных пунктов (A или B) или любую комбинацию двух или более из перечисленных пунктов (A и B).

Если не указано иначе, термины «содержать», «иметь», «включать» и «состоять» предназначены для обозначения открытого термина (то есть означающего «включая, но не ограничиваясь ими»).

Не будучи привязанными к какой-либо теории, примеры, как изложено ниже, предназначены только для целей иллюстрации рабочих режимов устройства, способа и системы настоящей заявки, но не для ограничения объема изобретения.

ПРИМЕРЫ

В результатах примеров настоящей заявки ⃰⃰ представляет собой P˂0,01; ⃰ представляет собой P˂0,05; ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001, как статистически обнаружено с использованием t-критерия.

Пример 1. Синтез наносфер S-нитрозотиола диоксида кремния

Смешанный раствор 4 мл (3-меркаптопропил)триметоксисилана и 2 мл тетраэтилортосиликата вводили с помощью инъекционного насоса в смешанный раствор 30 мл деионизированной воды, 30 мл этанола и 30 мл аммиачной воды со скоростью 0,5 мл/мин. Во время инъекции реакционную смесь поддерживали при 0°C. После завершения инъекции реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2,5 ч и затем центрифугировали при 4000 об/мин в течение 8 мин. Осадки промывали один раз 100 мл ледяной воды и 100 мл этанола соответственно и высушивали под вакуумом с получением наносфер тиолированного диоксида кремния.

150 мг наносфер тиолированного диоксида кремния диспергировали в 4 мл метанола и охлаждали до 0°C. Смешанный раствор 2 мл 1 М нитрита натрия и 1 мМ диэтилтриаминпентауксусной кислоты добавляли при постоянном перемешивании и затем добавляли 2 мл 5 М водного раствора хлористоводородной кислоты. Реакционную смесь перемешивали в темноте при 0°C в течение 2,5 часов, центрифугировали при 4°C при 4000 об/мин в течение 5 минут. Осадки промывали один раз 30 мл 1 мМ водного раствора диэтилтриаминпентауксусной кислоты при 4°C и 30 мл метанола при 4°C соответственно и снова центрифугировали для сбора твердого вещества. В темноте и при температуре ниже -30°C твердое вещество высушивали под вакуумом в течение 30 минут с получением высушенного конечного продукта, который хранили при -20°C для следующего использования.

Конечный продукт растворяли в буферном растворе ФСБ с pH=7,4 и с помощью анализатора размера частиц и дзета-потенциала типа ZS90 измеряли, что гидродинамический радиус продукта составлял 423 нм и коэффициент полидисперсности составлял 0,061. УФ-видимый спектр раствора (измеренный с помощью УФ-спектрофотометра Thermo Fisher EV300 Type) имеет характерный пик поглощения при 330 нм. В условиях излучения 200 Вт в течение 5 часов накопление NO характеризовалось общим количеством высвобождаемого оксида азота, как определено с помощью набора для анализа NO Beyotime (метод Грисса, приобретенный у Shanghai Beyotime Biotechnology Inc.). Накопление NO в конечном продукте, как было измерено, составляло 1,87±0,55 мкмоль/мг.

Пример 2. Синтез S-нитрозоэтандитиола хитина

2 г хитина и 5 г хлорида лития диспергировали в 50 мл диметилацетамида и добавляли 20 мл N, N-диизопропилэтиламина при 0°C. 20 г п-толуолсульфонилхлорида растворяли в 20 мл диметилацетамида и полученную смесь добавляли в хитинсодержащий раствор, как описано выше. Смешанный раствор перемешивали при 4°C в течение 20 часов и затем выливали в 300 мл ацетона для осаждения и фильтрования. Осадки промывали один раз 300 мл метанола, 150 мл деионизированной воды и 300 мл ацетона соответственно и затем высушивали под вакуумом с получением п-тозилированного хитина.

1 г п-тозилированного хитина и 2,5 г хлорида лития диспергировали в 40 мл диметилацетамида и затем добавляли 3 мл N, N-диизопропилэтиламина и 1,5 мл 1,2-этандитиола. Смешанный раствор перемешивали при 60°C в атмосфере азота в течение 24 часов и затем выливали в 400 мл ацетона для осаждения и фильтрования. Осадки промывали 400 мл метанола и 400 мл ацетона соответственно, высушивали под вакуумом и затем диспергировали в 25 мл раствора 10 мМ 1,4-дитиотреитола и N, N-диизопропилэтиламина в диметилацетамиде. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа и отфильтровывали. Осадки промывали один раз 400 мл метанола и 400 мл ацетона соответственно и высушивали под вакуумом с получением тиолированного соединения хитина. 200 мг тиолированного соединения хитина диспергировали в 5 мл смешанного раствора диметилацетамид/метанол (при объемном соотношении 3/1), и добавляли 1 мл трет-бутилнитрита, и перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Затем смешанный раствор добавляли к 100 мл метанола и перемешивали в течение 30 минут, отфильтровывали и высушивали под вакуумом с получением конечного продукта.

Инфракрасная спектроскопия конечного продукта (как определено инфракрасным спектрометром Nicolet 6700 Type) имеет основные пики поглощения (волновые числа): 3600-3200, 3285, 1652, 1537, 1028, 3360-3220, 1250-1300, 1050-1070. Его УФ-видимый спектр диффузного отражения (как определено с помощью УФ-спектрофотометра Thermo Fisher EV300 Type) показывает характерный пик поглощения при 549 нм. В условиях излучения 200 Вт в течение 5 часов накопление NO характеризовалось общим количеством высвобождаемого оксида азота, как определено с помощью набора для анализа NO Beyotime (метод Грисса, приобретенный у Shanghai Beyotime Biotechnology Inc.). Накопление NO в конечном продукте, как было измерено, составляло 0,37±0,08 мкмоль/мг.

Пример 3. Синтез NONOата хитозана с привитым олигопропилендиамином

250 мкл 2-метилазиридина смешивали с 300 мкл 1 М водного раствора гидрохлорида и смесь добавляли по каплям в 10 мл 20 мг/мл водного раствора хитозана. Смешанный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней и при 78°C в течение 20 часов и затем выливали в 300 мл ацетона для осаждения и центрифугирования. Осадки дважды промывали метанолом и высушивали под вакуумом с получением хитозана, модифицированного вторичным амином. ¹H ЯМР спектроскопия (с использованием ЯМР-спектрометра Bruker Avance III Type, 400 МГц, CD₃OD) показывает пики при 0,8-1,1, 1,9, 2,3-2,7, 3,3-4,0 и 4,4.

50 мг хитозана, модифицированного вторичным амином, растворяли в смешанном растворе 1 мл воды и 3 мл метанола и смешанный раствор добавляли в гидрогенизатор с качанием Парра вместе со 100 мкл 6 М раствора метоксида натрия. Гидрогенизатор неоднократно продували азотом высокой чистоты для удаления кислорода, заполняли газообразным оксидом азота и выдерживали при 10 атм при комнатной температуре в течение 4 дней для реакции. После завершения реакции реакционный сосуд повторно продували азотом высокой чистоты для удаления непрореагировавшего оксида азота. Затем реакционную смесь добавляли в 300 мл ацетона для осаждения, центрифугировали для сбора осадка и высушивали под вакуумом с получением конечного продукта, который хранили при -20°C для следующего использования.

Инфракрасный спектр конечного продукта (содержащего диазенийдиолат) (как определено с помощью инфракрасного спектрометра Nicolet 6700) включает основные пики поглощения (волновые числа): 3600-3200, 3285, 1650, 1587, 1284 и 1059. Его спектры поглощения в УФ и видимой области (как определено с помощью УФ-спектрофотометра Thermo Fisher EV300 Type) содержит характерный пик поглощения при 252 нм. Образец растворяли в растворе ФСБ и определяли с помощью набора для анализа Beyotime NO (метод Грисса) общее количество высвобождаемого NO, чтобы определить, что накопление NO в образце составляло 0,77±0,11 ммоль/мл.

Примеры 4-15. Влияние высвобождающего оксид азота агента на снижение пролиферативной токсичности ингибитора VEGF/VEGFR в отношении клеток HUVEC и сравнение с Силденафилом

Силденафил пытались использовать для лечения побочного эффекта ладонно-подошвенной эритродизестезии (ЛПЭ), вызванного мультикиназным ингибитором анти-VEGF, как сообщалось (см. Kellen L. Meadows et al., Support Care Cancer. 2015 May 23 (5):1311-1319). Однако терапевтический эффект Силденафила в отношении ЛПЭ, вызванный мультикиназными ингибиторами анти-VEGF, очень ограничен, почти неэффективен. В настоящей заявке эффект высвобождающего оксид азота агента сравнивают с эффектом Силденафила.

Культивируемые клетки HUVEC расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 96-луночный планшет с 5000-10000 клеток на лунку. Лунки разделяли на: бланковую контрольную группу, группу ингибитора VEGF/VEGFR, группу ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента, группу растворителя ингибитора VEGF/VEGFR, контрольную группу растворителя высвобождающего оксид азота, группу ингибитора VEGF/VEGFR+Силденафила и контрольную группу растворителя Силденафила, в которых каждая лунка каждой группы содержала основную среду и конечный объем жидкости, содержащийся в каждой лунке, составлял приблизительно 100 мкл. Конкретная ситуация группирования состояла в следующем:

1) бланковая контрольная группа: раствор не добавляли за исключением обычной замены среды;

2) группа ингибитора VEGF/VEGFR: раствор ингибитора VEGF/VEGFR (конечная концентрация была показана в Таблице 1, и растворитель раствора ингибитора VEGF/VEGFR представлял собой ДМСО);

3) группа ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента: добавляли раствор ингибитора VEGF/VEGFR и раствор высвобождающего оксид азота агента (конечные концентрации ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента были показаны в Таблице 1, растворитель раствора высвобождающего оксид азота агента был выбран как этанол или стерильная вода в зависимости от растворимости высвобождающего оксид азота агента, и небольшая разница в общем объеме каждой группы дополнялась добавлением соответствующего выбранного растворителя);

4) группа растворителя ингибитора VEGF/VEGFR: добавляли равный объем ДМСО, как содержится в соответствующем растворе ингибитора VEGF/VEGFR в Группе 2);

5) контрольная группа растворителя высвобождающего оксид азота агента: равный объем того же типа растворителя (например, этанола или стерильной воды), как содержится в соответствующем растворе высвобождающего оксид азота агента в Группе 3);

6) группа ингибитора VEGF/VEGFR+Силденафила: сначала добавляли раствор ингибитора VEGF/VEGFR и затем добавляли раствор Силденафила (конечные концентрации ингибитора VEGF/VEGFR и Силденафила были показаны в Таблице 2, растворитель раствора Силденафила представлял собой ДМСО, и небольшая разница в общем объеме каждой группы дополнялась добавлением соответствующего выбранного растворителя);

7) контрольная группа растворителя Силденафила: добавляли равный объем ДМСО, как содержится в соответствующем растворе Силденафила в Группе 6).

Группа растворителя ингибитора VEGF/VEGFR не подвергалась обработке данных и служила только эталоном для оценки системной ошибки экспериментов. Контрольную группу растворителя высвобождающего оксид азота агента и контрольную группу растворителя Силденафила использовали для корректировки данных, таким образом устраняя влияние растворителей на результаты.

После культивирования в течение дополнительных 24-48 часов степень выживаемости клеток определяли с помощью набора для анализа Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (C0037, Shanghai Beyotime Biotechnology Inc., Beyotime Biotechnology) для расчета улучшающего эффекта ингибитора VEGF/VEGFR в отношении пролиферативной токсичности и улучшающего эффекта высвобождающего оксид азота агента или Силденафила в отношении пролиферативной токсичности. Программное обеспечение GraphPad Prism 6.0 и t-критерий использовали для проведения статистического анализа результатов и построения графика.

В Таблице 2 перечислены различные комбинации ингибитора VEGF/VEGFR с высвобождающим оксид азота агентом или Силденафилом и соответствующие экспериментальные результаты (в которых данные, указанные в столбце степени выживаемости клеток, представляли собой процент жизнеспособных клеток, увеличенный с помощью группы ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила), по сравнению с группой ингибитора VEGF/VEGFR). На ФИГ. 4A-4C представлены типичные результаты пролиферативной токсичности клеток, как определено методом CCK-8 через 24 часа после введения ингибитора VEGF/VEGFR сорафениба тозилата (V1), или Сунитиниба малата (V3), или Регорафениба (V4) и высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в клетки HUVEC соответственно. Среди них горизонтальная ось представляет собой различные экспериментальные группы и контрольные группы, и вертикальная ось представляет собой степень выживаемости клеток (процент выживаемости других экспериментальных групп или контрольных групп растворителя рассчитывается на основе 100% степени выживаемости клеток бланковой контрольной группы). Среди них ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001; ⃰⃰ представляет собой P˂0,01, указывая на то, что имеется существенное отличие от соответствующей группы, в которой ингибитор VEGF/VEGFR вводят отдельно; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на то, что имеется существенное отличие от соответствующей группы, в которой ингибитор VEGF/VEGFR вводят отдельно; как статистически обнаружено с использованием t-критерия.

Таблица 2. Экспериментальные условия и результаты примеров 4-15

Пр. No.	Ингибитор VEGFR	Конечная концентрация	Высвобождающий оксид азота агент	Конечная концентрация	Степень выживаемости клеток
4	Сорафениб	5 мкМ	Нитроглицерин	100 мкМ	Увеличена на 50-60%
	Апатиниб	10 мкМ			Увеличена на 60-70%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 50-60%
	Регорафениб	10мкМ			Увеличена на 30-40%
	Ленватиниба мезилат	10мкМ			Увеличена на 30-50%
	Пазопаниб	10мкМ			Увеличена на 20-30%
	Акситиниб	10мкМ			Увеличена на 20-30%
	Нинтеданиба эзилат	10мкМ			Увеличена на 30-50%
Талидомид	10мкМ	Увеличена на 20-30%
5	Сорафениб	5 мкМ	Молсидомин	100 мкМ	Увеличена на 30-40%
	Апатиниб	10 мкМ			Увеличена на 40-50%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 20-30%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-30%
	Ленватиниба мезилат				Увеличена на 30-50%
	Пазопаниба гидрохлорид				Увеличена на 20-30%
	Акситиниб				Увеличена на 20-30%
	Нинтеданиба эзилат				Увеличена на 30-50%
Талидомид	Увеличена на 20-30%
6	Сорафениб	5 мкМ	Никорандил	100 мкМ	Увеличена на 50-60%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-30%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 10-20%
	Ленватиниба мезилат	10 мкМ			Увеличена на 30-50%
	Пазопаниба гидрохлорид				Увеличена на 20-30%
	Акситиниб				Увеличена на 20-30%
	Нинтеданиба эзилат				Увеличена на 30-50%
	Талидомид				Увеличена на 20-30%
Апатиниб	Увеличена на 40-50%
7	Сорафениб	5 мкМ	Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличена на 30-40%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 20-25%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 15-20%
	Ленватиниба мезилат	10 мкМ			Увеличена на 30-50%
	Пазопаниба гидрохлорид				Увеличена на 20-30%
	Акситиниб				Увеличена на 20-30%
	Нинтеданиба эзилат				Увеличена на 30-50%
	Талидомид				Увеличена на 20-30%
Апатиниб	Увеличена на 40-50%
8	Регорафениб	10 мкМ	Изосорбида динитрат	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 20-30%
9	Регорафениб	10 мкМ	3-морфолиносиднонимин (SIN-1) линсидомин	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 10-20%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 30-40%
10	Регорафениб	10 мкМ	Изосорбида мононитрат	100 мкМ	Увеличена на 20-30%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 20-25%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 30-35%
11	Регорафениб	10 мкМ	Пентаэритритила тетранитрат	100 мкМ	Увеличена на 20-25%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 25-35%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 30-40%
12	Регорафениб	10 мкМ	3,3-Бис(аминоэтил)-1-гидрокси-2-оксо-1-триазен (NOC-18)	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 35-45%
13	Регорафениб	10 мкМ	наносферы S-нитрозотиола диоксида кремния	0,30 мг/мл	Увеличена на 10-30%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 15-30%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 20-25%
14	Регорафениб	10 мкМ	NONOат хитозана с привитым олигопропилендиамином	1,80 мг/мл	Увеличена на 20-25%
	Сунитиниб	5 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сорафениб	5 мкМ	Увеличена на 30-50%
15	Регорафениб	10 мкМ	Силденафил	100 мкМ	Нет существенных изменений
	Сунитиниб	5 мкМ
Сорафениб	5 мкМ

Из результатов в Таблице 2 и на ФИГ. 4A-4C можно увидеть, что высвобождающие оксид азота агенты оказывают значительно улучшающий эффект в отношении пролиферативной токсичности, и их улучшающий эффект по существу лучше, чем у Силденафила.

Примеры 16-32. Влияние высвобождающего оксид азота агента на снижение пролиферативной токсичности ингибитора VEGF/VEGFR в отношении иммортализованных эпителиальных клеток человека (HaCaT), эпителиальных кератиноцитов слизистой оболочки полости рта человека (HOK), эпителиальных клеток тонкого кишечника человека (FHs 74 Int), эпителиальных клеток желудка (GES-1) и сравнение с Силденафилом

Различные эпителиальные клетки культивировали для использования в экспериментах, в которых: в Примерах 16-20 использовали иммортализованные эпителиальные клетки человека (HaCaT), и результаты соответствуют Таблице 3; в Примерах 21-24 использовали эпителиальные кератиноциты слизистой оболочки рта человека (HOK), и результаты соответствуют Таблице 4; в Примерах 25-28 использовали эпителиальные клетки желудка (GES-1), и результаты соответствуют Таблице 5; в Примерах 29-32 использовали эпителиальные клетки тонкого кишечника человека (FH 74 Int), и результаты соответствуют Таблице 6.

Культивируемые клетки расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 96-луночный планшет с 5000-10000 клеток на лунку. Лунки разделяли на: бланковую контрольную группу, группу ингибитора VEGF/VEGFR, группу ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента, группу растворителя ингибитора VEGF/VEGFR, контрольную группу растворителя высвобождающего оксид азота, группу ингибитора VEGF/VEGFR+Силденафила и контрольную группу растворителя Силденафила, в которых каждая лунка каждой группы содержала основную среду и конечный объем жидкости, содержащийся в каждой лунке, составлял приблизительно 100 мкл. Конкретная ситуация группирования состояла в следующем:

1) бланковая контрольная группа: раствор не добавляли за исключением обычной замены среды;

2) группа ингибитора VEGF/VEGFR: раствор ингибитора VEGF/VEGFR (конечная концентрация была показана в Таблице 2, и растворитель раствора ингибитора VEGF/VEGFR представлял собой ДМСО);

3) группа ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента: добавляли раствор ингибитора VEGF/VEGFR и раствор высвобождающего оксид азота агента (конечные концентрации ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента были показаны в Таблице 2, растворитель раствора высвобождающего оксид азота агента был выбран как этанол или стерильная вода в зависимости от растворимости высвобождающего оксид азота агента, и небольшая разница в общем объеме каждой группы дополнялась добавлением соответствующего выбранного растворителя);

4) группа растворителя ингибитора VEGF/VEGFR: добавляли равный объем ДМСО, как содержится в соответствующем растворе ингибитора VEGF/VEGFR в Группе 2);

5) контрольная группа растворителя высвобождающего оксид азота агента: равный объем того же типа растворителя (например, этанола или стерильной воды), как содержится в соответствующем растворе высвобождающего оксид азота агента в Группе 3);

6) группа ингибитора VEGF/VEGFR+Силденафила: сначала добавляли раствор ингибитора VEGF/VEGFR и затем добавляли раствор Силденафила (конечные концентрации ингибитора VEGF/VEGFR и Силденафила были показаны в Таблице 2, растворитель раствора Силденафила представлял собой ДМСО, и небольшая разница в общем объеме каждой группы дополнялась добавлением соответствующего выбранного растворителя);

7) контрольная группа растворителя Силденафила: добавляли равный объем ДМСО, как содержится в соответствующем растворе Силденафила в Группе 6).

Группа растворителя ингибитора VEGF/VEGFR не подвергалась обработке данных и служила только эталоном для оценки системной ошибки экспериментов. Контрольную группу растворителя высвобождающего оксид азота агента и контрольную группу растворителя Силденафила использовали для корректировки данных, таким образом устраняя влияние растворителей на результаты.

После культивирования в течение дополнительных 24-48 часов выживаемость клеток определяли с помощью набора для анализа Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (C0037, Shanghai Beyotime Biotechnology Inc., Beyotime Biotechnology) для расчета пролиферативной токсичности ингибитора VEGF/VEGFR в отношении клеток и улучшающего эффекта высвобождающего оксид азота агента в отношении пролиферативной токсичности. Программное обеспечение GraphPad Prism 6.0 и t-критерий использовали для проведения статистического анализа результатов и построения графика.

В Таблицах 3-6 перечислены различные комбинации ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента или Силденафила, и соответствующие экспериментальные результаты (в которых данные, указанные в столбце степени выживаемости клеток, представляли собой процент жизнеспособных клеток, увеличенный с помощью группы ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила), по сравнению с группой ингибитора VEGF/VEGFR). На ФИГ. 5 представлены экспериментальные результаты на клетках HaCaT, на ФИГ. 6 представлены экспериментальные результаты на клетках HOK, на ФИГ. 7 представлены экспериментальные результаты на клетках GES-1, на ФИГ. 8 представлены экспериментальные результаты на клетках FHs 74 Int. Среди них горизонтальная ось представляет собой экспериментальные результаты различных экспериментальных групп и контрольных групп; и вертикальная ось представляет собой степень выживаемости клеток (процент выживаемости клеток других экспериментальных групп или контрольных групп растворителя рассчитывается на основе 100% степени выживаемости клеток бланковой контрольной группы), в которых на ФИГ. 5A, 6A, 7A и 8A на каждой представлены типичные результаты пролиферативной токсичности клеток, как определено методом CCK-8 через 24 часа после введения Сорафениба тозилата (V1) ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в различные типы клеток; на ФИГ. 5B, 6B, 7B и 8B на каждой представлены типичные результаты пролиферативной токсичности клеток, как определено методом CKK-8 через 24 часа после введения Сунитиниба малата (V3) ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в различные типы клеток; и на ФИГ. 5C, 6C, 7C и 8C на каждой представлены типичные результаты пролиферативной токсичности клеток, как определено методом CKK-8 через 24 часа после введения Регорафениба (V4) ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента (или Силденафила) в различные типы клеток. Среди них ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001, указывая на существенное отличие от контрольной группы, в которой ингибитор VEGF/VEGFR вводят отдельно; ⃰⃰ представляет собой P˂0,01, указывая на существенное отличие от контрольной группы, в которой ингибитор VEGF/VEGFR вводят отдельно; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на существенное отличие от контрольной группы, в которой ингибитор VEGF/VEGFR вводят отдельно; как статистически обнаружено с использованием t-критерия.

Таблица 3. Экспериментальные условия и результаты Примеров 16-20

Пр. No.	Ингибитор VEGFR	Конечная концентрация	Высвобождающий оксид азота агент	Конечная концентрация	Степень выживаемости клеток
16	Сорафениб	10 мкМ	Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 28-35%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 35-45%
17	Сорафениб	10 мкМ	Молсидомин	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-25%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 55-65%
18	Сорафениб	10 мкМ	Нитроглицерин	100 мкМ	Увеличена на 30-40%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 30-40%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 50-60%
19	Сорафениб	10 мкМ	Никорандил	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 15-20%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 50-60%
20	Регорафениб	10 мкМ	Силденафил	100 мкМ	Нет существенных изменений
	Сунитиниб	10 мкМ
Сорафениб	10 мкМ

Из результатов в Таблице 3 и на ФИГ. 5 можно увидеть, что ингибиторы VEGF/VEGFR обладают пролиферативной токсичностью в отношении клеток кожи (HaCaT), в то время как высвобождающие оксид азота агенты оказывают значительно улучшающий эффект в отношении пролиферативной токсичности, вызванной ингибиторами VEGF/VEGFR, и улучшающий эффект по существу лучше, чем у Силденафила.

Таблица 4. Экспериментальные условия и результаты Примеров 21-24

Пр. No.	Ингибитор VEGFR	Конечная концентрация	Высвобождающий оксид азота агент	Конечная концентрация	Степень выживаемости клеток
21	Сорафениб	10 мкМ	Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличена на 90-100%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 65-75%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 15-20%
22	Сорафениб	10 мкМ	Молсидомин	100 мкМ	Увеличена на 90-100%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 60-70%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 15-20%
23	Сорафениб	10 мкМ	Нитроглицерин	100 мкМ	Увеличена на 90-100%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 80-90%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 20-30%
24	Сорафениб	10 мкМ	Никорандил	100 мкМ	Увеличена на 90-100%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 60-70%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 15-20%
20	Регорафениб	10 мкМ	Силденафил	100 мкМ	Нет существенных изменений
	Сунитиниб	10 мкМ
Сорафениб	10 мкМ

Из результатов в Таблице 4 и на ФИГ. 6 можно увидеть, что ингибиторы VEGF/VEGFR обладают пролиферативной токсичностью в отношении эпителиальных кератиноцитов слизистой оболочки полости рта человека (HOK), в то время как высвобождающие оксид азота агенты оказывают значительно улучшающий эффект в отношении пролиферативной токсичности, вызванной ингибиторами VEGF/VEGFR, и улучшающий эффект по существу лучше, чем у Силденафила.

Таблица 5. Экспериментальные условия и результаты Примеров 25-28

Пр. No.	Ингибитор VEGFR	Конечная концентрация	Высвобождающий оксид азота агент	Конечная концентрация	Степень выживаемости клеток
25	Сорафениб	10 мкМ	Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличена на 15-20%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 40-50%
26	Сорафениб	10 мкМ	Молсидомин	100 мкМ	Увеличена на 20-30%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 15-20%
27	Сорафениб	10 мкМ	Нитроглицерин	100 мкМ	Увеличена на 30-40%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 40-50%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 70-80%
28	Сорафениб	10 мкМ	Никорандил	100 мкМ	Увеличена на 20-30%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 30-40%
20	Регорафениб	10 мкМ	Силденафил	100 мкМ	Нет существенных изменений
	Сунитиниб	10 мкМ
Сорафениб	10 мкМ

Из результатов в Таблице 5 и на ФИГ. 7 можно увидеть, что ингибиторы VEGF/VEGFR обладают пролиферативной токсичностью в отношении эпителиальных клеток желудка (GES-1), в то время как высвобождающие оксид азота агенты оказывают значительно улучшающий эффект в отношении пролиферативной токсичности, вызванной ингибиторами VEGF/VEGFR, и улучшающий эффект по существу лучше, чем у Силденафила.

Таблица 6. Экспериментальные условия и результаты Примеров 29-32

Пр. No.	Ингибитор VEGFR	Конечная концентрация	Высвобождающий оксид азота агент	Конечная концентрация	Степень выживаемости клеток
29	Сорафениб	10 мкМ	Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличена на 40-50%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 10-15%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 45-55%
30	Сорафениб	10 мкМ	Молсидомин	100 мкМ	Увеличена на 40-50%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 10-15%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 10-15%
31	Сорафениб	10 мкМ	Нитроглицерин	100 мкМ	Увеличена на 60-70%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 20-30%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 70-80%
32	Сорафениб	10 мкМ	Никорандил	100 мкМ	Увеличена на 40-50%
	Регорафениб	10 мкМ			Увеличена на 10-15%
Сунитиниб	10 мкМ	Увеличена на 45-55%
20	Регорафениб	10 мкМ	Силденафил	100 мкМ	Нет существенных изменений
	Сунитиниб	10 мкМ
Сорафениб	10 мкМ

Из результатов в Таблице 6 и на ФИГ. 8 можно увидеть, что ингибиторы VEGF/VEGFR обладают пролиферативной токсичностью в отношении эпителиальных клеток кишечника человека (FHs 74 Int), в то время как высвобождающие оксид азота агенты оказывают значительно улучшающий эффект в отношении пролиферативной токсичности, вызванной ингибиторами VEGF/VEGFR, и улучшающий эффект по существу лучше, чем у Силденафила.

Примеры 33-46. Определение эффекта высвобождающего оксид азота агента на уровне внутри/внеклеточного NO

Культивируемые клетки HUVEC, HaCaT, HOK, FHs 74 Int или GES-1 расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 24-луночный планшет с 100000-200000 клеток на лунку. После присоединения клеток добавляли раствор высвобождающего оксид азота агента для достижения определенной конечной концентрации (например, как показано в Таблицах 7-8). В контрольную группу добавляли среду. В различные моменты времени после введения высвобождающего оксид азота агента (6 часов, 12 часов, 24 часа и 48 часов, например, как показано в Таблицах 7-8) 50 мкл супернатанта каждой группы собирали для определения уровня NO во внеклеточном супернатанте. Тем временем оставшийся супернатант удаляли и добавляли раствор для лизиса клеток. После достаточного лизиса брали 50 мкл лизата для определения уровня внутриклеточного NO. Набор для анализа NO (S0021, Beyotime Inc.) использовали для определения уровня NO.

Среди ФИГ. 9A-9D каждая представляет относительные уровни NO во внеклеточных HUVEC, внутриклеточных HUVEC, внеклеточных GES-1 и внутриклеточных GES-1 через 6 ч, 12 ч, 24 ч, 48 ч после введения высвобождающего оксид азота агента. НГЦ представляет собой нитроглицерин. Контрольная группа была основной средой, отражающей биологический уровень.

ФИГ. 10A-10D каждая представляет относительные уровни внеклеточного NO в клетках HUVEC, клетках GES-1, клетках HaCaT и клетках HOK после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом (изосорбида динитратом, никорандилом, молсидомином и изоамилнитритом). Контрольная группа была основной средой, отражающей биологический уровень. Среди них ⃰⃰ представляет собой P˂0,01, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; как статистически проанализировано с использованием t-критерия.

ФИГ. 11A-11D каждая представляет относительные уровни внутриклеточного NO в клетках HUVEC, клетках GES-1, клетках HaCaT и клетках HOK после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом (изосорбида динитратом, никорандилом, молсидомином и изоамилнитритом). Контрольная группа была основной средой, отражающей биологический уровень. Среди них ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; ⃰⃰ представляет собой P˂0,01, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; как статистически проанализировано с использованием t-критерия.

Из результатов в Таблицах 7-8 и на ФИГ. 9-11 можно увидеть, что высвобождающий оксид азота агент может высвобождать оксид азота и повышать уровень внутриклеточного NO.

Таблица 7. Экспериментальные условия и результаты Примеров 33-39

Пр. No.	Лекарственное средство	Конечная концентрация	Тип клеток (Внеклеточный)	Момент времени	Уровень NO
33	Нитроглицерин (НГЦ)	100 мкМ	HUVEC	6ч	Увеличен на 70-80%
				12ч	Увеличен на 100-120%
				24ч	Увеличен на 200-235%
48ч	Увеличен на 180-210%
34	Нитроглицерин (НГЦ)	100 мкМ	GES-1	6ч	Увеличен на 70-85%
				12ч	Увеличен на 87-128%
				24ч	Увеличен на 170-185%
48ч	Увеличен на 125-155%
35	Изосорбида динитрат	100 мкМ	HUVEC	24ч	Увеличен на 135-165%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 75-90%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 75-85%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 80-95%
36	Изосорбида динитрат	100 мкМ	HaCaT	24ч	Увеличен на 120-150%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 85-110%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 66-85%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 100-120%
37	Изосорбида динитрат	100 мкМ	HOK	24ч	Увеличен на 122-156%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 80-100%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 60-80%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 125-147%
38	Изосорбида динитрат	100 мкМ	FHs 74 Int	24ч	Увеличен на 110-150%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 80-100%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 50-80%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 110-125%
39	Изосорбида динитрат	100 мкМ	GES-1	24ч	Увеличен на 135-174%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 80-110%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 55-80%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 130-150%

Таблица 8. Экспериментальные условия и результаты Примеров 40-46

Пр. No.	Лекарственное средство	Конечная концентрация	Тип клеток (Внутриклеточный)	Момент времени	Уровень NO
40	Нитроглицерин (НГЦ)	100 мкМ	HUVEC	6ч	Увеличен на 10-20%
				12ч	Увеличен на 45-70%
				24ч	Увеличен на 45-60%
48ч	Увеличен на 1-20%
41	Нитроглицерин (НГЦ)	100 мкМ	GES-1	6ч	Увеличен на 10-30%
				12ч	Увеличен на 20-35%
				24ч	Увеличен на 20-25%
48ч	Увеличен на 20-30%
42	Изосорбида динитрат	100 мкМ	HUVEC	24ч	Увеличен на 40-55%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 30-45%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 15-25%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 15-30%
43	Изосорбида динитрат	100 мкМ	HaCaT	24ч	Увеличен на 20-40%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 15-30%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 10-25%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 20-40%
44	Изосорбида динитрат	100 мкМ	HOK	24ч	Увеличен на 20-40%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 10-30%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 9-30%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 15-35%
45	Изосорбида динитрат	100 мкМ	FHs 74 Int	24ч	Увеличен на 15-35%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 10-30%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 10-25%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 20-35%
46	Изосорбида динитрат	100 мкМ	GES-1	24ч	Увеличен на 20-40%
	Никорандил	100 мкМ			Увеличен на 15-25%
	Молсидомин	100 мкМ			Увеличен на 10-30%
Изоамилнитрит	100 мкМ	Увеличен на 25-35%

Примеры 47-54. Силденафил не высвобождает оксид азота, не увеличивает уровни внутри- и внеклеточного NO HUVEC, HaCaT или GES-1

Культивируемые клетки HUVEC, HaCaT или GES-1 расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 6-луночный планшет с 500000-1000000 клеток на лунку. После присоединения клеток добавляли раствор Силденафила для достижения определенной конечной концентрации (например, как показано в Таблицах 9-10). В контрольную группу добавляли основную среду. В различные моменты времени после добавления Силденафила (6 часов, 12 часов, 24 часа и 48 часов) 50 мкл супернатанта каждой группы собирали для определения уровня внеклеточного NO. В то время как оставшийся супернатант удаляли и добавляли раствор для лизиса клеток. После достаточного лизиса брали 50 мкл лизата для определения уровня внутриклеточного NO. Набор для анализа NO (S0021, Beyotime Inc.) использовали для определения уровня NO. На ФИГ. 12-13 перечислены экспериментальные результаты.

Среди ФИГ. 12A-12B каждая представляет относительные уровни вне- и внутриклеточного NO в различные моменты времени после обработки клеток HUVEC 100 мкМ Силденафила (6 часов, 12 часов, 24 часа, 48 часов). ФИГ. 12C-12D каждая представляет относительные уровни вне- и внутриклеточного NO через 24 часа после обработки клеток HUVEC различными концентрациями Силденафила. Контрольная группа была основной средой, отражающей биологический уровень.

ФИГ. 13A-13B каждая представляет относительные уровни вне- и внутриклеточного NO через 24 часа после обработки клеток GES-1 100 мкМ Силденафила. ФИГ. 13C-13D каждая представляет относительные уровни вне- и внутриклеточного NO через 24 часа после обработки клеток HaCaT 100 мкМ Силденафила. Контрольная группа была основной средой, отражающей биологический уровень.

Из данных результатов можно увидеть, что Силденафил не высвобождает оксид азота, не увеличивает внутри- и внеклеточные уровни NO в клетках HUVEC, HaCaT или GES-1.

Таблица 9. Экспериментальные условия и результаты Примеров 47-50

Пр. No.	Лекарственное средство	Конечная концентрация	Тип клеток (Внеклеточный)	Момент времени	Уровень NO
47	Силденафил	20 мкМ	HUVEC	24ч	Нет существенных изменений
		100 мкМ
		200 мкМ
500 мкМ
48	Силденафил	100 мкМ	HUVEC	6ч
				12ч
				24ч
48ч
49	Силденафил	100 мкМ	HaCaT	24ч
50	Силденафил	100 мкМ	GES-1	24ч

Таблица 10. Экспериментальные условия и результаты Примеров 51-54

Пр. No.	Лекарственное средство	Конечная концентрация	Тип клеток (Внутриклеточный)	Момент времени	Уровень NO
51	Силденафил	20 мкМ	HUVEC	24ч	Нет существенных изменений
		100 мкМ
		200 мкМ
500 мкМ
52	Силденафил	100 мкМ	HUVEC	6ч
				12ч
				24ч
48ч
53	Силденафил	100 мкМ	HaCaT	24ч
54	Силденафил	100 мкМ	GES-1	24ч

Примеры 55-108. Высвобождающий оксид азота агент способен предотвращать/лечить in vivo ладонно-подошвенный синдром, вызванный низкомолекулярными ингибиторами VEGFR/VEGF

Построение животной модели крыс: низкомолекулярный ингибитор VEGFR/VEGF, как показано в Таблице 11, вводили 8-недельной самке крысы SD через ежедневный желудочный зонд, и через несколько дней на лапах крысы появились симптомы ладонно-подошвенного синдрома (например, как показано на ФИГ. 14). Как и у людей, у крысы развиваются симптомы ладонно-подошвенного синдрома после введения ингибиторов VEGFR/VEGF, и симптомы были очень похожи у человека и крысы. Таким образом, крысы являются очень хорошими животными моделями для имитации побочных эффектов (например, ладонно-подошвенного синдрома), вызываемых ингибиторами VEGFR/VEGF.

Крыс (приблизительно 200 г) кормили в течение одной недели и затем делили на группы (каждая из которых содержала 10 крыс) для экспериментов с введением через желудочный зонд. Различные низкомолекулярные ингибиторы VEGFR/VEGF растворяли в смешанном растворе, имеющем соотношение Cremophor EL:этанол=1:1. Перед введением через желудочный зонд раствор лекарственного средства ингибиторов VEGFR/VEGF разбавляли ФСБ до желаемой концентрации (приблизительно в 3 раза разбавляли раствором ФСБ). Количество вводимого через желудочный зонд составляло не более 2 мл, и доза была показана в Таблице 11. После введения через желудочный зонд на левую лапу крысы (ладонь и щели лапы) местно наносили мазь, содержащую высвобождающий оксид азота агент (приблизительно 0,05 г), в то время как на правую лапу не наносили в качестве бланкового контроля. После введения крысу помещали в неподвижный цилиндр на 4 часа. Через 4 часа крысу высвобождали, протирали водой для удаления остатков лекарственного средства на участке нанесения и возвращали в клетку. Частота введения через желудочный зонд ингибитора VEGFR/VEGF показана в Таблице 11, но высвобождающий оксид азота агент вводили только один раз в день. Введение через желудочный зонд и нанесение повторяли каждый день, пока эксперимент не закончился. Количество крыс, у которых обработанная сторона сохранялась нормальной или симптомы ладонно-подошвенного синдрома были по существу менее серьезными, чем у необработанной стороны после 15-18 дней введения, рассчитывали как количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно подавлялся.

В Таблице 11 перечислены различные комбинации животных моделей ингибиторов VEGFR/VEGF и мазей высвобождающего оксид азота агента и соответствующие экспериментальные результаты (в которых значение в столбце степени контроля=количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно подавлялся в каждой группе/количество моделей ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе × 100%; показатель эффективности модели ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 30% до 70%, то есть существует приблизительно 3-7 эффективных моделей ладонно-подошвенного синдрома среди 10 крыс; во время процесса моделирования наступает гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование в различных группах введения, гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование в различных группах лекарственных средств).

Таблица 11. Экспериментальные условия и результаты Примеров 55-108

Эксперимент No.	Ингибитор VEGFR/VEGF	Доза	Частота	Введение	Концентрация	Лапа для введения	Дни	Степень контроля
55	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,05%	Левая	15	66,67%
56	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,15%	Левая	15	71,43%
57	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	15	60%
58	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,05%	Левая	15	60%
59	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,15%	Левая	15	60%
60	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	15	75%
61	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Нитроглицерин мазь	0,05%	Левая	18	50%
62	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Нитроглицерин мазь	0,15%	Левая	18	40%
63	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	60%
64	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,05%	Левая	18	50%
65	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,15%	Левая	18	60%
66	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	57,14%
67	Сунитиниб	120мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	15	50%
68	Кабозантиниб	50мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	66,67%
69	Акситиниб	50мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	50%
70	Нинтеданиб	110мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	75%
71	Бриваниб	80мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	33,33%
72	Ваталаниба сукцинат	150мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	15	50%
73	Фруквинтиниб	40мг/кг	один раз в день	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	16	66,67%
74	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Изосорбида мононитрат/Изосорбида динитрат (1:1) смешанная мазь	0,2%	Левая	15	42,86%
75	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Изосорбида мононитрат/Изосорбида динитрат (1:1) смешанная мазь	0,2%	Левая	15	50%
76	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Изосорбида мононитрат/Изосорбида динитрат (1:1) смешанная мазь	0,2%	Левая	18	50%
77	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Изосорбида мононитрат/Изосорбида динитрат (1:1) смешанная мазь	0,2%	Левая	18	42,86%
78	Сунитиниб	120мг/кг	один раз в день	Изосорбида мононитрат/Изосорбида динитрат (1:1) смешанная мазь	0,2%	Левая	15	33,33%
79	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Никорандил мазь	0,2%	Левая	15	33,33%
80	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Никорандил мазь	0,2%	Левая	18	42,86%
81	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Никорандил мазь	0,2%	Левая	18	40%
82	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Никорандил мазь	0,2%	Левая	15	25%
83	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Нитрат натрия мазь	0,2%	Левая	15	33,33%
84	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Нитрат натрия мазь	0,2%	Левая	18	42,86%
85	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Нитрат натрия мазь	0,2%	Левая	18	50%
86	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Нитрат натрия мазь	0,2%	Левая	15	40%
87	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Изоамилнитрит мазь	0,2%	Левая	15	33,33%
88	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Изоамилнитрит мазь	0,2%	Левая	18	42,86%
89	Регорафениб	90мг/кг	один раз в день	Изоамилнитрит мазь	0,2%	Левая	18	40%
90	Апатиниб	105мг/кг	один раз в день	Изоамилнитрит мазь	0,2%	Левая	15	20%
91	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Нитрит натрия мазь	0,2%	Левая	15	42,86%
92	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Нитрит натрия мазь	0,2%	Левая	18	33,33%
93	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Молсидомин мазь	0,2%	Левая	15	33,33%
94	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Молсидомин мазь	0,2%	Левая	18	40%
95	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Нитропруссид натрия мазь	0,2%	Левая	15	42,86%
96	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Нитропруссид натрия мазь	0,2%	Левая	18	28,57%
97	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	наносферы S-нитрозотиола диоксида кремния мазь	0,2%	Левая	15	40%
98	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	наносферы S-нитрозотиола диоксида кремния мазь	0,2%	Левая	18	33,33%
99	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	S-нитрозоэтандитиола хитин мазь	0,2%	Левая	15	28,57%
100	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	S-нитрозоэтандитиола хитин мазь	0,2%	Левая	18	16,67%
101	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	NONOат хитозана с привитым олигопропилендиамином мазь	0,2%	Правая	15	20%
102	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	NONOат хитозана с привитым олигопропилендиамином мазь	0,2%	Правая	18	14,29%
103	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	N-нитрозодибутиламин мазь	0,2%	Правая	15	33,33%
104	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	N-нитрозодибутиламин мазь	0,2%	Правая	18	25%
105	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	гидроксидиазенсульфоновая кислота-1-оксида динатриевая соль мазь	0,2%	Правая	15	20%
106	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	гидроксидиазенсульфоновая кислота-1-оксида динатриевая соль мазь	0,2%	Правая	18	33,33%
107	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	стрептозоцин мазь	0,2%	Правая	15	20%
108	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	стрептозоцин мазь	0,2%	Правая	18	16,67%

ПРИМЕЧАНИЕ: Показатели эффективности моделирования противораковых препаратов не являются постоянными: показатель эффективности модели ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 30% до 70%, то есть существует приблизительно 3-7 эффективных моделей ладонно-подошвенного синдрома среди 10 крыс, во время процесса моделирования наступает гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование в различных группах введения. Степень контроля относится к отношению количества крыс, у которых симптомы на обработанной лапе являются менее серьезными, чем на необработанной лапе, к общему количеству крыс с моделью ладонно-подошвенного синдрома в экспериментальных группах.

Из результатов в Таблице 11 можно увидеть, что высвобождающий оксид азота агент способен эффективно предотвращать и лечить ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибиторами VEGFR/VEGF. В то же время результаты на ФИГ. 15-16 также показывают, что высвобождающий оксид азота агент способен эффективно предотвращать и лечить ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибиторами VEGFR/VEGF. На ФИГ. 15 показано, что в группах введения Примеров 55-100 типичной крысе наносили на ее левую лапу (мазь высвобождающего оксид азота агента), и ладонно-подошвенный синдром на ее левой лапе значительно сокращался; на ФИГ. 16 показано, что в группах введения Примеров 101-108 типичной крысе наносили на ее правую лапу (мазь высвобождающего оксид азота агента), и ладонно-подошвенный синдром на ее правой лапе также значительно сокращался.

Примеры 109-110. Высвобождающий оксид азота агент способен предотвращать/лечить in vivo ладонно-подошвенный синдром, вызванный низкомолекулярным ингибитором VEGFR/VEGF

Получение лосьона Nitrosomonas europaea: Инокулировали Nitrosomonas europaea (ATCC 19718) в неорганическую среду (ATCC 2265), культивировали при приблизительно 200 об/мин, 26°С, в условиях темноты в течение 3-5 дней до тех пор, пока среда не стала мутной для получения исходного раствора бактерий. Разбавляли исходный раствор до различной концентрации раствора неорганической средой (например, 10⁷, 10⁸, 10⁹, 10¹⁰ клеток/мл). Концентрацию бактерий определяли с помощью цитометра и затем получали лосьон Nitrosomonas europaea.

Построение животной модели крыс: низкомолекулярный ингибитор VEGFR/VEGF, как показано в Таблице 12, вводили 8-недельной самке крысы SD через ежедневный желудочный зонд, и через несколько дней на лапах крысы появились симптомы ладонно-подошвенного синдрома. Как и у людей, у крысы развиваются симптомы ладонно-подошвенного синдрома после введения ингибиторов VEGFR/VEGF, и симптомы были очень похожи у человека и крысы. Таким образом, крысы являются очень хорошими животными моделями для имитации побочных эффектов (например, ладонно-подошвенного синдрома), вызываемых ингибиторами VEGFR/VEGF.

Крыс (приблизительно 200 г) кормили в течение одной недели и затем делили на группы (каждая из которых содержала 10 крыс) для экспериментов с введением через желудочный зонд. Различные низкомолекулярные ингибиторы VEGFR/VEGF растворяли в смешанном растворе, имеющем соотношение Cremophor EL:этанол=1:1. Перед введением через желудочный зонд раствор лекарственного средства ингибиторов VEGFR/VEGF разбавляли ФСБ до желаемой концентрации (приблизительно в 3 раза разбавляли раствором ФСБ). Количество вводимого через желудочный зонд составляло не более 2 мл, и доза была показана в Таблице 12. После введения через желудочный зонд крысу помещали в неподвижный цилиндр. Левую лапу крысы смачивали бактериальным лосьоном. Через 10 мин крысу высвобождали один раз в день, в то время как правая лапа не была смочена в качестве бланкового контроля. Частота введения через желудочный зонд ингибитора VEGFR/VEGF показана в Таблице 12, но высвобождающий оксид азота агент вводили только один раз в день. Эксперимент с введением через желудочный зонд и смачиванием повторяли каждый день, пока крыса не умерла. Количество крыс, у которых смоченная сторона сохранялась нормальной или симптомы ладонно-подошвенного синдрома были по существу менее серьезными, чем у необработанной стороны после 15-18 дней введения, рассчитывали как количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно подавлялся.

В Таблице 12 перечислены различные комбинации животных моделей ингибиторов VEGFR/VEGF и мазей высвобождающего оксид азота агента и соответствующие экспериментальные результаты (в которых значение в столбце степени контроля=количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно подавлялся в каждой группе/количество моделей ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе × 100%; показатель эффективности модели ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 30% до 70%, то есть существует приблизительно 3-7 эффективных моделей ладонно-подошвенного синдрома среди 10 крыс; во время процесса моделирования наступает гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование в различных группах введения, гибель отдельных крыс наступает в каждой группе введения).

Таблица 12. Экспериментальные условия и результаты Примеров 109-110

Эксперимент No.	Ингибитор VEGFR	Доза	Частота	Введение	Концентрация, масс.%	Лапа для введения	Дни	Степень контроля
109	Сорафениб	80мг/кг	один раз в день	Бактериальный лосьон	109 бактерий/мл	левая	15	33,33%
110	Ленватиниб	65мг/кг	два раза в день	Бактериальный лосьон	109 бактерий/мл	левая	15	25%

Из Таблицы 12 можно увидеть, что высвобождающий оксид азота агент способен эффективно предотвращать и лечить ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибиторами VEGFR/VEGF.

Примеры 111, 112. Высвобождающий оксид азота агент способен предотвращать/лечить in vivo ладонно-подошвенный синдром, вызванный белковым макромолекулярным ингибитором VEGFR/VEGF

Рамуцирумаб или Бевацизумаб разводили физиологическим раствором до желаемой концентрации. Крыс (приблизительно 200 г) кормили в течение одной недели и затем делили на группы (каждая из которых содержала 10 крыс) для экспериментов с введением инъекции. Разбавленный Рамуцирумаб вводили с помощью внутривенной инфузии в течение 60 минут с дозой 40 мг/кг. Его вводили один раз в неделю вместе с введением паклитаксела (10 мг/кг). В левую лапу (ладонь и щели лапы) крысы местно вводили мазь, содержащую высвобождающий оксид азота агент (приблизительно 0,05 г), в то время как в правую лапу не вводили в качестве бланкового контроля. После введения крысу помещали в неподвижный цилиндр на 4 ч. Через 4 ч крысу высвобождали, протирали водой для удаления остатков лекарственного средства на участке введения и возвращали в клетку. Эксперименты длились 2-4 недели. Экспериментальные явления наблюдали до тех пор, пока экспериментальная крыса не умерла и эксперимент не был закончен.

В Таблице 13 перечислены различные комбинации животных моделей ингибиторов VEGFR/VEGF и мазей высвобождающего оксид азота агента и соответствующие экспериментальные результаты (в которых значение в столбце степени контроля=количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно подавлялся в каждой группе/количество моделей ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе × 100%; показатель эффективности моделирования ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 10% до 30%, то есть существует приблизительно 1-3 модели ладонно-подошвенного синдрома у 10 крыс).

Таблица 13. Экспериментальные условия и результаты Примеров 111-112

Эксперимент No.	Ингибитор VEGFR/ингибитор VEGF	Классификация ингибитора	Доза	Частота	Введение	Концентрация	Лапа для введения	Дни	Степень контроля
111	Рамуцирумаб	Моноклональное антитело	Вводили в комбинации с паклитакселом, инъецировали более 60 мин	Внутрибрюшинно вводили один раз в неделю	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	23	50%
112	Бевацизумаб	Моноклональное антитело	Вводили в комбинации с 5-ФУ, инъецировали более 60-90 мин	Инъецировали через хвостовую вену один раз в неделю	Нитроглицерин мазь	0,2%	Левая	18	50%

ПРИМЕЧАНИЕ: Показатели эффективности моделирования противораковых препаратов не являются постоянными: показатель эффективности модели ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 10% до 30%, то есть существует приблизительно 1-3 модели ладонно-подошвенного синдрома среди 10 крыс, во время процесса моделирования гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование происходит в различных группах введения. Степень контроля относится к отношению количества крыс, у которых симптомы на обработанной лапе являются менее серьезными, чем на необработанной лапе, к общему количеству крыс с моделью ладонно-подошвенного синдрома в экспериментальных группах.

На ФИГ. 15 показано состояние левой лапы, передней стороны и правой лапы типичной крысы в группах введения примеров 111-112 после местного нанесения на ее левую лапу (мази высвобождающего оксид азота агента).

Из результатов в Таблице 13 и на ФИГ. 15 можно увидеть, что мазь высвобождающего оксид азота агента способна эффективно предотвращать ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибиторами VEGFR/VEGF на основе моноклональных антител.

Примеры 113-124. Эксперименты для иллюстрации способности лечения ладонно-подошвенного синдрома, вызванного низкомолекулярными ингибиторами VEGFR/VEGF, на моделях крыс

Крыс (приблизительно 200 г) кормили в течение одной недели и затем делили на группы (каждая из которых содержала 10 крыс) для экспериментов с введением через желудочный зонд. Ингибитор VEGFR/VEGF растворяли в смешанном растворе, имеющем соотношение Cremophor EL:этанол=1:1, и разбавляли ФСБ до желаемой концентрации (приблизительно в 3 раза разбавляли раствором ФСБ) перед введением желудочного зонда. Количество вводимого через желудочный зонд составляло не более 2 мл, и доза была показана в Таблице 14. Введение через желудочный зонд повторяли каждый день для ингибитора VEGFR/VEGF до тех пор, пока у крысы не развились симптомы ладонно-подошвенного синдрома. В это время начинали терапевтический эксперимент. В процессе терапевтических экспериментов крысе постоянно вводили через желудочный зонд ингибитор VEGFR/VEGF с низкой частотой (частота введения через желудочный зонд была описана в Таблице 14). После введения через желудочный зонд крысе местно вводили в ее левую лапу (ладонь и щели лапы) мазь высвобождающего оксид азота агента (приблизительно 0,05 г), в то время как в правую лапу не вводили в качестве бланкового контроля. После введения крысу помещали в неподвижный цилиндр на 4 часа. Через 4 часа крысу высвобождали, протирали водой для удаления остатков лекарственного средства на участке нанесения и возвращали в клетку. Частота введения через желудочный зонд ингибитора VEGFR/VEGF показана в Таблице 14, но высвобождающий оксид азота агент вводили только один раз в день. После 6-10 дней введения количество крыс, у которых обработанная сторона возвращалась к норме или показала значительно меньшую степень тяжести, чем необработанная сторона, подсчитывали как количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно подавлялся.

В Таблице 14 суммированы исследования на животных введения различных низкомолекулярных ингибиторов VEGFR/VEGF и мазей высвобождающего оксид азота агента и соответствующие экспериментальные результаты (в которых значение отношение улучшения=количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром был эффективно обработан в каждой группе/количество моделей ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе × 100%).

Таблица 14. Экспериментальные условия и результаты Примеров 113-124

Эксперимент No.	Ингибитор VEGFR	Доза	Частота	Дни введения моделирование	Введение	Дни введения	Концентрация	Лапа для введения	Степень улучшения
113	Сорафениб	80 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	8	Нитроглицерин мазь	5	0,2%	Левая	50%
114	Апатиниб	105 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	10	Нитроглицерин мазь	5	0,2%	Левая	40%
115	Ленватиниб	65мг/кг	Два раза в день во время моделирования и один раз в день после начала обработки	13	Нитроглицерин мазь	6	0,2%	Левая	42,86%
116	Регорафениб	90мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	12	Нитроглицерин мазь	5	0,2%	Левая	33,33%
117	Сунитиниб	120мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	10	Нитроглицерин мазь	6	0,2%	Левая	40%
118	Сорафениб	80 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	8	Изосорбида динитрат и изосорбида мононитрат смешанная мазь	8	0,2%	Левая	50%
119	Апатиниб	105 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	10	Изосорбида динитрат и изосорбида мононитрат смешанная мазь	7	0,2%	Левая	50%
120	Сорафениб	80 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	8	Никорандил мазь	9	0,2%	Левая	40%
121	Апатиниб	105 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	10	Никорандил мазь	9	0,2%	Левая	40%
122	Сорафениб	80 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	8	нитропруссид натрия мазь	8	0,2%	Левая	20%
123	Сорафениб	80 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	8	полимерная мазь	10	0,2%	Левая	33,33%
124	Сорафениб	80 мг/кг	Один раз в день во время моделирования и один раз в два дня после начала обработки	8	Молсидомин мазь	8	0,2%	Правая	16,67%

ПРИМЕЧАНИЕ: Показатели эффективности моделирования противораковых препаратов не являются постоянными: показатель эффективности модели ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 40% до 70%, то есть существует приблизительно 1-3 модели ладонно-подошвенного синдрома среди 10 крыс, во время процесса моделирования гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование происходит в различных группах введения. Степень контроля относится к отношению количества крыс, у которых симптомы на обработанной лапе являются менее серьезными, чем на необработанной лапе, к общему количеству крыс с моделью ладонно-подошвенного синдрома в экспериментальных группах.

На ФИГ. 17 показано состояние левой лапы, передней стороны и правой лапы типичной крысы в группах введения примеров 113-123 после местного нанесения на ее левую лапу (мази высвобождающего оксид азота агента). На ФИГ. 18 показано состояние левой и правой лап типичной крысы в группе введения примеров 124 после нанесения на ее правую лапу (мази высвобождающего оксид азота агента).

Из результатов в Таблице 14 и на ФИГ. 17-18 можно увидеть, что мазь высвобождающего оксид азота агента способна эффективно лечить ладонно-подошвенный синдром, вызванный низкомолекулярными ингибиторами VEGFR.

Примеры 125-142. Сравнение 0,2% нитроглицериновой мази с другими клинически доступными в настоящее время исследуемыми лекарственными средствами и другими высвобождающими оксид азота агентами в экспериментах по профилактике ладонно-подошвенного синдрома, вызванного низкомолекулярными ингибиторами VEGFR/VEGF

Крыс (приблизительно 200 г) кормили в течение одной недели, делили на группы (каждая из которых содержала 10 крыс) и затем подвергали экспериментам с введением через желудочный зонд. Ингибитор VEGFR растворяли в смешанном растворе, имеющем соотношение Cremophor EL:этанол=1:1, и разбавляли ФСБ до желаемой концентрации (приблизительно в 3 раза разбавляли раствором ФСБ) перед введением желудочного зонда. Количество вводимого через желудочный зонд составляло не более 2 мл, и доза была показана в Таблице 15. После введения через желудочный зонд на левую лапу (ладонь и щели лапы) крысы местно наносили мазь нитроглицерина (приблизительно 0,05 г) и на правую лапу местно наносили клинически доступные в настоящее время исследуемые лекарственные средства или другую мазь высвобождающего оксид азота агента таким же образом. После введения крысу помещали в неподвижный цилиндр на приблизительно 4 часа. Через 4 часа крысу высвобождали, протирали водой для удаления остатков лекарственного средства на участке нанесения и возвращали в клетку. Частота введения через желудочный зонд ингибиторов VEGFR/VEGF показана в Таблице 15, но другие клинически доступные лекарственные средства для кожи и высвобождающие оксид азота агенты вводили только один раз. Крысе вводили через желудочный зонд ингибиторы VEGFR/VEGF до тех пор, пока в лапе, обработанной клинически доступным исследуемым лекарственным средством (или другим высвобождающим оксид азота агентом), не развились симптомы ладонно-подошвенного синдрома или крыса не умерла. После 15-18 дней введения количество крыс, у которых лапа, обработанная мазью нитроглицерина, показала нормальное или значительно менее серьезное состояние, чем лапа, обработанная клинически исследуемым лекарственным средством (или другим высвобождающим оксид азота агентом), подсчитывали как количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно предотвращался.

В Таблице 15 представлена комбинация экспериментов с 0,2% нитроглицериновыми мазями и клинически исследуемыми лекарственными средствами (или другим высвобождающим оксид азота агентом) и соответствующие экспериментальные результаты (в которых значение в столбце относительной степени улучшения=количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром на левой лапе был значительно менее серьезным, чем ладонно-подошвенный синдром на правой лапе в каждой группе/модель ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе × 100%).

Таблица 15. Экспериментальные условия и результаты Примеров 125-142

Эксперимент No.	Ингибитор VEGFR	Доза	Частота	Введение	Дни введения	Относительная степень улучшения
Левая	Правая
125	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	1% Силденафил	15	66,67%
126	Апатиниб	105 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	1% Силденафил	15	75%
127	Ленватиниб	100 мг/кг	два раза в день	0,2% Нитроглицерин мазь	1% Силденафил	18	60%
128	Регорафениб	90 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	1% Силденафил	18	75%
129	Сунитиниб	120 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	1% Силденафил	15	66,67%
130	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	мочевина замороженная	15	60%
131	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	вазелиновая мазь	15	66,67%
132	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	мочевина мазь	15	57,14%
133	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	бримонидин мазь	15	60%
134	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	витамин B6 мазь	15	57,14%
135	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	никотин мазь	15	66,67%
136	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	дексаметазон мазь	15	75%
137	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	гидрокортизон мазь	15	60%
138	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицеринмазь	Vk1 мазь(0,1%	15	66,67%
139	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	эритроцин мазь	15	66,67%
140	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	триамцинолон мазь	15	60%
141	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Изоамилнитрит мазь	15	50%
142	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% стрептозоцин мазь	15	60%

Из результатов в Таблице 15 можно увидеть, что по сравнению с 1% Силденафилом 0,2% нитроглицериновые мази способны эффективно контролировать ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF; по сравнению с клинически доступными в настоящее время другими исследуемыми лекарственными средствами (которые практически не оказывают терапевтического эффекта на ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF) 0,2% нитроглицериновые мази способны эффективно подавлять ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF; по сравнению с другими мазями высвобождающего оксид азота агента 0,2% нитроглицериновые мази способны более эффективно контролировать ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибитором VEGFR и/или ингибитором VEGF. Концентрация 0,2% нитроглицериновых мазей значительно ниже, чем концентрации клинически доступных в настоящее время других исследуемых лекарственных средств, из чего можно отметить, что 0,2% нитроглицериновые мази имеют неожиданный технологический эффект.

Пример 143. Эффект высвобождающего оксид азота агента на терапевтический эффект ингибитора VEGFR/VEGF

Была сконструирована модель голой мыши BALB/C (опухоль, трансплантированная клетками рака печени HepG2). После того, как модели были стабильными, модельных мышей разделяли на три группы (в которых средний размер опухоли у мыши оставался одинаковым, насколько это возможно), каждая из которых включала 10 мышей, которых подвергали экспериментам с введением через желудочный зонд и местным введением.

Ингибитор VEGFR растворяли в смешанном растворе, имеющем соотношение Cremophor EL:этанол=1:1 (объемное соотношение), и разбавляли ФСБ до желаемой концентрации (приблизительно в 3 раза разбавляли раствором ФСБ) перед введением желудочного зонда. Количество вводимого через желудочный зонд составляло не более 0,2 мл, и доза составляла 30 мг/кг в день. Мышам с опухолью перорально вводили Сорафениб каждый день с целью контроля или уменьшения опухоли. В то же время лекарственное средство для лечения побочного эффекта вводили ввнешним образом в спину мыши способом внешнего введения (определенное группирование состояло в следующем: Группа A: введение через желудочный зонд+введение с эксципиентом; Группа B: введение через желудочный зонд+введение с 0,15% нитроглицериновой мазью; Группа C: введение через желудочный зонд+введение с 0,2% нитроглицериновой мазью; приблизительно 5,8 см² области введения помечали маркером, и область введения не может представлять собой область, которая может коснуться рта мыши, или область, близко расположенную к опухоли). После завершения введения через желудочный зонд каждый день местно вводили бланковую мазь для равномерного нанесения на отмеченную область спины модели мыши, чтобы кожа оставалась влажной. После введения каждую мышь держали в относительно независимом пространстве в течение 4 часов. Через 4 часа остатки мази на спине мыши вытирали бумажным полотенцем или более влажным бумажным полотенцем. Затем мышь возвращали в исходную клетку для нормальной деятельности. Размер опухоли измеряли и записывали каждые два дня. После 20 дней экспериментов мышь препарировали. Опухоль удаляли, взвешивали и записывали. Наблюдали изменение объема опухоли в различных экспериментальных группах.

Экспериментальные результаты показаны на ФИГ. 19. Из результатов на ФИГ. 19 можно увидеть, что в различных экспериментальных группах объем опухоли в группах, которым вводили мазь (Группа B или Группа C), является меньше, чем в экспериментальной группе (Группа A), и объем опухоли в Группе C близок или немного меньше, чем объем опухоли в Группе B. Таким образом, можно увидеть, что мазь для наружного применения, содержащая высвобождающий оксид азота агент, не будет снижать эффекты ингибитора VEGFR/VEGF на опухоли.

Примеры 144, 145. Эффект высвобождающего оксид азота агента на улучшение пролиферативной токсичности ингибитора VEGF/VEGFR в отношении клеток HUVEC, HaCaT и сравнение с блокаторами кальциевых каналов

Сообщалось, что блокаторы кальциевых каналов (такие как Дилтиазем) могут быть использованы для лечения побочного эффекта ладонно-подошвенного синдрома (ЛПС), вызванного мультикиназным ингибитором анти-VEGFR (см. заявку на патент США US2016/0101114A1). Однако терапевтический эффект Дилтиазема в отношении ЛПС, вызванного мультикиназными ингибиторами анти-VEGFR, очень ограничен. В настоящей заявке эффект высвобождающего оксид азота агента сравнивается с эффектом блокаторов кальциевых каналов.

Культивируемые клетки HUVEC, HaCat расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 96-луночный планшет с 5000 клеток на лунку. Лунки разделяли на: бланковую контрольную группу, группу ингибитора VEGF/VEGFR, группу ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента, группу растворителя ингибитора VEGF/VEGFR, контрольную группу растворителя высвобождающего оксид азота, группу ингибитора VEGF/VEGFR+блокатора кальциевых каналов и контрольную группу растворителя блокатора кальциевых каналов, в которых каждая лунка каждой группы содержала основную среду и конечный объем жидкости, содержащийся в каждой лунке, составлял приблизительно 100 мкл. Конкретная ситуация группирования состояла в следующем:

1) бланковая контрольная группа: раствор не добавляли за исключением обычной замены среды;

2) группа ингибитора VEGF/VEGFR: раствор ингибитора VEGF/VEGFR (конечная концентрация была показана в Таблице 16, и растворитель раствора ингибитора VEGF/VEGFR представлял собой ДМСО);

3) группа ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента: добавляли раствор ингибитора VEGF/VEGFR и раствор высвобождающего оксид азота агента (конечные концентрации ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента были показаны в Таблице 16, растворитель раствора высвобождающего оксид азота агента был выбран как этанол или стерильная вода в зависимости от растворимости высвобождающего оксид азота агента, и небольшая разница в общем объеме каждой группы дополнялась добавлением соответствующего выбранного растворителя);

4) группа растворителя ингибитора VEGF/VEGFR: добавляли равный объем ДМСО, как содержится в соответствующем растворе ингибитора VEGF/VEGFR в Группе 2);

5) контрольная группа растворителя высвобождающего оксид азота агента: равный объем того же типа растворителя (например, этанола или стерильной воды), как содержится в соответствующем растворе высвобождающего оксид азота агента в Группе 3);

6) группа ингибитора VEGF/VEGFR+блокатора кальциевых каналов: сначала добавляли раствор ингибитора VEGF/VEGFR и затем добавляли раствор блокатора кальциевых каналов (конечные концентрации ингибитора VEGF/VEGFR и Силденафила были показаны в Таблице 16, растворитель раствора Силденафила представлял собой ДМСО, и небольшая разница в общем объеме каждой группы дополнялась добавлением соответствующего выбранного растворителя);

7) контрольная группа растворителя блокатора кальциевых каналов: добавляли равный объем ДМСО, как содержится в соответствующем растворе блокатора кальциевых каналов в Группе 6).

Группа растворителя ингибитора VEGF/VEGFR не подвергалась обработке данных и служила только эталоном для оценки системной ошибки экспериментов. Контрольную группу растворителя высвобождающего оксид азота агента и контрольную группу растворителя блокатора кальциевых каналов использовали для корректировки данных, таким образом устраняя влияние растворителей на результаты.

После культивирования в течение дополнительных 24 часов степень выживаемости клеток определяли с помощью набора для анализа Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (C0037, Shanghai Beyotime Biotechnology Inc., Beyotime Biotechnology) для расчета эффекта улучшения ингибитора VEGF/VEGFR в отношении пролиферативной токсичности и эффекта улучшения высвобождающего оксид азота агента или блокатора кальциевых каналов в отношении пролиферативной токсичности. Программное обеспечение GraphPad Prism 6.0 и t-критерий использовали для проведения статистического анализа результатов и построения графика.

В Таблице 16 перечислены различные комбинации ингибитора VEGF/VEGFR с высвобождающим оксид азота агентом или (блокатором кальциевых каналов) и соответствующие экспериментальные результаты (в которых данные, указанные в столбце степени выживаемости клеток, представляли собой процент жизнеспособных клеток, увеличенный группой ингибитора VEGF/VEGFR+высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) по сравнению с группой ингибитора VEGF/VEGFR). На ФИГ. 20 представлены типичные результаты пролиферативной токсичности клеток, определенной методом CCK-8, через 24 часа после введения тозилата сорафениба (V1) ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента (или Дилтиазема) в клетки HUVEC соответственно. На ФИГ. 21 представлены типичные результаты пролиферативной токсичности клеток, определенной методом CCK-8, через 24 часа после введения сорафениба тозилата (V1) ингибитора VEGF/VEGFR и высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) в клетки HaCat соответственно. Среди них горизонтальная ось представляет собой различные экспериментальные группы и контрольные группы, и вертикальная ось представляет собой степень выживаемости клеток (процент выживаемости других экспериментальных групп или контрольных групп растворителя рассчитывается на основе 100% степени выживаемости клеток бланковой контрольной группы). Среди них ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001; ⃰⃰ представляет собой P˂0,01; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на то, что имеется существенное отличие от соответствующей группы, в которой ингибитор VEGF/VEGFR вводят отдельно; как статистически обнаружено с использованием t-критерия.

Таблица 16. Экспериментальные условия и результаты Примеров 144-145

Пр. No.	Тип клеток	Ингибитор VEGFR	Конечная концентрация	Высвобождающий оксид азота агент	Конечная концентрация	Степень выживаемости клеток
144	HUVEC	Сорафениб （V1）	10 мкМ	Нитроглицерин	50 мкМ	Увеличена на 25-50%
				Изосорбида мононитрат	50 мкМ	Увеличена на 20-40%
Дилтиазем	50 мкМ	Значительно уменьшена
145	HaCaT	Сорафениб （V1）	10 мкМ	Нитроглицерин	50 мкМ	Увеличена на 20-40%
				Изосорбида динитрат	50 мкМ	Увеличена на 20-50%
				Изосорбида мононитрат	50 мкМ	Увеличена на 20-50%
				Дилтиазем	50 мкМ	Нет значительного увеличения или снижения
				Верапамил	50 мкМ
Нифедипин	50 мкМ

Пример 146. Определение эффекта высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) на уровень внеклеточного NO

Сравнивали эффект высвобождающего оксид азота агента с блокатором кальциевых каналов на концентрацию внеклеточного NO. Результаты показали, что блокатор кальциевых каналов не был способен увеличивать концентрацию внеклеточного NO и не был способен продуцировать NO, следовательно блокатор кальциевых каналов не является высвобождающим оксид азота агентом.

Культивируемые клетки HaCaT расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 24-луночный планшет с 200000 клеток на лунку. После присоединения клеток добавляли раствор высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) для достижения определенной конечной концентрации (например, как показано в Таблице 17). В контрольную группу добавляли основную среду. Через 24 часа после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) 50 мкл супернатанта каждой группы собирали для определения уровня NO во внеклеточном супернатанте. Набор для анализа NO (S0021, Beyotime Inc.) использовали для определения уровня NO.

На ФИГ. 22 представлены относительные уровни внеклеточного NO в наружних клетках HaCaT после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом (или блокатором кальциевых каналов). Контрольная группа была основной средой, отражающей биологический уровень. Среди них ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001; ⃰⃰ представляет собой P˂0,01; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; как статистически проанализировано с использованием t-критерия.

Таблица 17. Экспериментальные условия и результаты Примеров 146

Пр. No.	Лекарственное средство	Конечная концентрация	Тип клеток (внеклеточный)	Момент времени	Уровень NO
146	Нитроглицерин	100 мкМ	HaCaT	24ч	Увеличен на 800-1000%
	Изосорбида динитрат	100 мкМ			Увеличен на 100-300%
	Нифедипин	100 мкМ			Нет существенных изменений
	Дилтиазем	100 мкМ
Верапамил	100 мкМ

Пример 147. Определение эффекта высвобождающего оксид азота агента на уровни экспрессии кальмодулина и кальретикулина в клетках HaCat

Кальмодулин (CaM) представляет собой интермедиат кальций-связывающего белка-мессенджера и внутриклеточную мишень вторичного мессенджера Ca²⁺ (Chin D and Means AR, 2000). Кальмодулин действует как часть пути передачи кальциевого сигнала, и связывание Ca²⁺ необходимо для активации кальмодулина, поэтому кальмодулины обычно действуют как маркер пути передачи сигнала кальция (Berchtold and Villalobo, 2014). Связывание кальретикулина (CRT) с Ca²⁺ инактивирует его (Michalak M, et al., 2002). В настоящей заявке сравнивается эффект высвобождающего оксид азота агента с блокатором кальциевых каналов на уровни экспрессии кальмодулина и кальретикулина в клетках HaCat.

Культивируемые клетки HaCaT расщепляли, суспендировали, подсчитывали и высевали в 6-луночный планшет с 200000 клеток на лунку. После присоединения клеток добавляли раствор высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) для достижения определенной конечной концентрации. В контрольную группу добавляли основную среду. Через 24 часа после введения высвобождающего оксид азота агента (или блокатора кальциевых каналов) для экстракции белка использовали лизат RIPA (P0013C, Beyotime Biotechnology). Изменение экспрессии кальмодулина и кальретикулина определяли с помощью вестерн-блоттинга.

На ФИГ. 23 представлен уровень экспрессии кальмодулина (CaM) в клетках HaCaT после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом (или блокатором кальциевых каналов). На ФИГ. 24 представлен результат анализа серых значений относительной экспрессии кальмодулина. На ФИГ. 25 представлен уровень экспрессии кальретикулина (CRT) в клетках HaCaT после 24 часов обработки высвобождающим оксид азота агентом (или блокатором кальциевых каналов). На ФИГ. 26 представлен результат анализа серых значений относительной экспрессии кальретикулина.

Image Lab использовали для анализа результатов серых значений. Программное обеспечение GraphPad Prism 6.0 и t-критерий использовали для проведения статистического анализа результатов и построения графика. Среди них ⃰⃰⃰ представляет собой P˂0,001; ⃰⃰ представляет собой P˂0,01; ⃰ представляет собой P˂0,05, указывая на существенное отличие от соответствующей контрольной группы; как статистически проанализировано с использованием t-критерия.

Из результатов на ФИГ. 23-24 можно увидеть, что по сравнению с контрольной группой кальмодулин группы высвобождающего оксид азота агента не имел значительных изменений, в то время как кальмодулин группы блокатора кальциевых каналов дилтиазема значительно снизился. Результаты на ФИГ. 25-26 показывают, что по сравнению с контрольной группой кальретикулин группы высвобождающего оксид азота агента немного снизился, в то время как экспрессия кальретикулина группы блокатора кальциевых каналов нифедипина значительно увеличилась. Следовательно, высвобождающий оксид азота агент не относится к блокатору кальциевых каналов.

Примеры 148-159. Сравнение 0,2% нитроглицериновой мази и других высвобождающих оксид азота агентов с блокатором кальциевых каналов в экспериментах по профилактике ладонно-подошвенного синдрома, вызванного низкомолекулярными ингибиторами VEGFR/VEGF

Крыс (приблизительно 200 г) кормили в течение одной недели, делили на группы (каждая из которых содержала 10 крыс) и затем подвергали экспериментам с введением через желудочный зонд. Ингибитор VEGFR/VEGF растворяли в смешанном растворе, имеющем соотношение Cremophor EL:этанол=1:1, и разбавляли ФСБ до желаемой концентрации (приблизительно в 3 раза разбавляли раствором ФСБ) перед введением желудочного зонда. Количество вводимого через желудочный зонд составляло не более 2 мл, и доза была показана в Таблице 18. После введения через желудочный зонд на левую лапу (ладонь и щели лапы) крысы местно наносили мазь нитроглицерина (или другие высвобождающие оксид азота агенты) (приблизительно 0,05 г) и на правую лапу местно наносили мазь блокатора кальциевых каналов таким же образом. После введения крысу помещали в неподвижный цилиндр на приблизительно 4 часа. Через 4 часа крысу высвобождали, протирали водой для удаления остатков лекарственного средства на участке нанесения и возвращали в клетку. Частота введения через желудочный зонд ингибиторов VEGFR/VEGF показана в Таблице 18. Крысе вводили через желудочный зонд ингибиторы VEGFR/VEGF до тех пор, пока в лапе, обработанной мазью блокатора кальциевых каналов, не развились симптомы ладонно-подошвенного синдрома или крыса не умерла. После 15-18 дней введения количество крыс, у которых лапа, обработанная мазью нитроглицерина (или другим высвобождающим оксид азота агентом), показала нормальное или значительно менее серьезное состояние, чем лапа, обработанная мазью блокатора кальциевых каналов, подсчитывали как количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром эффективно предотвращался.

В Таблице 18 представлена комбинация экспериментов с 0,2% нитроглицериновыми мазями (или другим высвобождающим оксид азота агентом) и мазью блокатора кальциевых каналов и соответствующие экспериментальные результаты (в которых значение в столбце относительной степени улучшения=количество крыс, у которых ладонно-подошвенный синдром на левой лапе был значительно менее серьезным, чем ладонно-подошвенный синдром на правой лапе в каждой группе/модель ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе × 100%).

Таблица 18. Экспериментальные условия и результаты Примеров 148-159

Эксперимент No.	Ингибитор VEGFR	Доза	Частота	Введение	Дни введения	Относительная степень улучшения
				Левая	Правая
148	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Дилтиазем мазь	15	83,33%
149	Апатиниб	105 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Дилтиазем мазь	15	60%
150	Ленватиниб	100 мг/кг	два раза в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Дилтиазем мазь	18	77,78%
151	Регорафениб	90 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Дилтиазем мазь	18	75%
152	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Верапамил мазь	15	71,43%
153	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Нитроглицерин мазь	0,2% Нифедипин мазь	15	66,67%
154	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Изосорбида динитрат и изосорбида мононитрат смешанная мазь	0,2% Дилтиазем мазь	15	60%
155	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Изосорбида динитрат и изосорбида мононитрат смешанная мазь	0,2% Нифедипин мазь	15	66,67%
156	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Изосорбида динитрат и изосорбида мононитрат смешанная мазь	0,2% Нифедипин мазь	15	60%
157	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Никорандил мазь	0,2% Дилтиазем мазь	15	66,67%
158	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Никорандил мазь	0,2% Верапамил мазь	15	57,14%
159	Сорафениб	80 мг/кг	один раз в день	0,2% Никорандил мазь	0,2% Нифедипин мазь	15	62,5%

ПРИМЕЧАНИЕ: Показатели эффективности моделирования противораковых препаратов не являются постоянными: показатель эффективности модели ладонно-подошвенного синдрома в каждой группе составляет от 30% до 90%, то есть существует приблизительно 3-9 эффективных моделей ладонно-подошвенного синдрома среди 10 крыс, во время процесса моделирования наступает гибель отдельной крысы или неэффективное моделирование в различных группах введения. Степень контроля относится к отношению количества крыс, у которых симптомы на лапе, обработанной нитроглицериновой мазью, являются менее серьезными, чем на лапе, обработанной другими лекарственными средствами, к общему количеству крыс с моделью ладонно-подошвенного синдрома в экспериментальных группах.

На ФИГ. 27 показано состояние левой лапы, передней стороны и правой лапы типичной крысы в группах введения примеров 148-153 после местного нанесения на ее левую лапу (0,2% Нитроглицерина мази) и на ее правую лапу (0,2% Дилтиазема мази). На ФИГ. 28 показано состояние левой лапы, передней стороны и правой лапы типичной крысы в группе введения примеров 154 после нанесения на ее левую лапу (0,2% Изосорбида динитрата и изосорбида мононитрата смешанной мази) и на ее правую лапу (0,2% Дилтиазема мази).

Из результатов в Таблице 18 и на ФИГ. 27 можно увидеть, что по сравнению с 0,2% мазью блокатора кальциевых каналов 0,2% нитроглицериновая мазь и другие высвобождающие оксид азота агенты способны эффективно контролировать ладонно-подошвенный синдром, вызванный ингибитором VEGFR/VEGF.

В настоящем раскрытии описаны предпочтительные варианты осуществления настоящей заявки, включая лучший вариант осуществления заявки, известный изобретателям. После прочтения описания варианты данных предпочтительных вариантов осуществления будут очевидны специалисту в данной области техники. Изобретатели ожидают, что специалист в данной области техники сможет применить такие варианты в случае необходимости, и изобретатели намереваются осуществить настоящую заявку способом, отличным от тех, которые конкретно описаны в настоящей заявке. Таким образом, настоящая заявка включает все модификации и эквиваленты объекта, описанные в прилагаемой формуле изобретения, как разрешено применяемым законодательством. Более того, настоящая заявка включает любую комбинацию всех возможных вариантов вышеупомянутых элементов, если не указано иначе или явно не противоречит контексту.

1. Применение высвобождающего оксид азота агента при получении лекарственного средства для профилактики или лечения заболевания или нарушения, связанного с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF объекту;

где указанное заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органов лица и/или заболевание или нарушение желудочно-кишечного тракта;

где указанный высвобождающий оксид азота агент способен производить по меньшей мере одно из NO⁺, NO^-, N₂O, NO, N₂O₃, NO₂, NO₃^- и NO₂^-, и где указанный высвобождающий оксид азота агент включает органическую молекулу, неорганическую молекулу, макромолекулу, наноматериал и/или аммонийокисляющий микроорганизм (АОМ); и

где указанное лекарственное средство составлено так, чтобы быть подходящим для местного введения, и содержит от примерно 0,01% (масс./масс.) до примерно 5% (масс./масс.) указанного высвобождающего оксид азота агента.

2. Применение по п.1, в котором указанное заболевание или нарушение вызвано указанным введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

3. Применение по любому из пп.1, 2, в котором указанный ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF предназначен для лечения опухолей.

4. Применение по любому из пп.1-3, в котором локализация указанного заболевания или нарушения отличается от локализации опухоли.

5. Применение по любому из пп.1-4, в котором указанный ингибитор VEGFR и/или указанный ингибитор VEGF включает Рамуцирумаб, Бевацизумаб, Регорафениб, Кабозантиниб, Ленватиниб, Сорафениб, Пазопаниб, Апатиниб, Акситиниб, Нинтеданиб, Сунитиниб, Фруквинтиниб, Бриваниб, Ваталаниб, их фармацевтически приемлемую соль и/или любую комбинацию вышеперечисленного.

6. Применение по любому из пп.1-5, в котором указанное заболевание или нарушение вызвано ингибированием VEGFR и/или VEGF.

7. Применение по любому из пп.1-6, в котором указанное заболевание или нарушение представляют собой заболевание или нарушение эпителия, при этом заболевание или нарушение эпителия включают заболевание или нарушение, связанное с поражением эндотелиальной клетки и/или эпителиальной клетки, и в котором поражение эндотелиальной клетки и/или эпителиальной клетки связано с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

8. Применение по любому из пп.1-7, в котором указанное заболевание или нарушение, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, включает сыпь, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, зуд, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эритему, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксероз кожи, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, алопецию, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, паронихию, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, нарушение пигментации, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, мукозит слизистой оболочки ротовой полости, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, ксеростомию, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, носовое кровотечение, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, назофарингит, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, хейлит, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эзофагит, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, эзогастрит, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, язву желудка, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, диарею, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, рвоту, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, тошноту, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, анорексию, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, запор, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, и/или боль в животе, связанную с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

9. Применение по п.8, в котором указанное заболевание или нарушение, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, включает ладонно-подошвенный синдром, связанный с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

10. Применение по любому из пп.1-9, в котором указанный высвобождающий оксид азота агент содержит NO.

11. Применение по любому из пп.1-9, в котором указанный высвобождающий оксид азота агент содержит органическую молекулу, и указанная органическая молекула содержит нитроглицерин, изосорбида мононитрат, пентаэритритила тетранитрат, изосорбида динитрат, тролнитрат, Никорандил, пропатилнитрат, Молсидомин, 5-амино-3-(4-морфолинил)-1,2,3-оксадиазол, изоамилнитрит, 3,3-ди(аминоэтил)-1-гидроксил-2-карбонил-1-триазен (NOC-18), сульфонуклеофильную комплексную динатриевую соль, S-нитрозоглутатион, S-нитрозо-N-ацетилпеницилламин, 4-фенил-3-фуронитрил, (±)-(E)-4-этил-2-[(E)-гидроксиимино]-5-нитро-3-гексенамид, Стрептозоцин, NG-гидрокси-L-аргинина ацетатную соль, O₂-(2,4-динитрофенил)-1-[(4-этоксикарбонил)пиперазин-1-ил]диазен-1-ия-1,2-диолат, N-нитрозодибутиламин, 3-морфолино-сиднонимин, Линзидомин, 3-(4-ацетилфенил)сиднон, диэтиламино-нуклеофильный комплекс/AM и/или Итрамин; и/или указанная неорганическая молекула содержит нитрильный комплекс, нитрозильный комплекс, металлнитрозаминовый комплекс, нитрат и/или нитрит; и/или указанная макромолекула или наноматериал содержит наносферу S-нитрозотиола кремния, S-нитрозоэтандитиола хитин и/или NONOат хитозана с привитым олигопропилендиамином; и/или аммонийокисляющий микроорганизм (AOM) включает Nitrosomonas, Nitrosococcus, Nitrosospira, Nitrosocystis, Nitrosolobus и/или Nitrosovibrio.

12. Применение по п.11, в котором указанная органическая молекула содержит нитроглицерин, изосорбида мононитрат и/или изосорбида динитрат; и/или указанная неорганическая молекула содержит нитропруссид натрия.

13. Применение по любому из пп.1-12, в котором указанный высвобождающий оксид азота агент имеет одну или более из следующих групп: диазенийдиолата, гидроксилдиазенсульфоновой кислоты, S-нитрозотиола, фуроксана, оксима, N-нитрозоамина, N-гидроксигуанидина, нитрата, нитрита, сложного эфира нитрата, сложного эфира нитрита, сиднонимина, синдона, оксатриазол-5-имина, оксатриазол-5-она, гидроксиамина, диоксадиазациклобутена, N-гидроксинитрозоамина, N-нитрозоимина, гидроксимочевины и металлнитрозаминового комплекса.

14. Применение по любому из пп.1-13, в котором локализация указанного местного введения не является основной локализацией опухоли или потенциальным местом метастазирования опухоли.

15. Применение по любому из пп.1-14, в котором указанное лекарственное средство составлено в виде мази.

16. Применение по любому из пп.1-15, в котором указанное лекарственное средство по существу не влияет на терапевтический эффект ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

17. Применение по любому из пп.1-16, в котором указанный объект включает пациента с опухолью.

18. Применение по любому из пп.1-17, в котором указанному субъекту вводили, вводят и/или будут вводить указанный ингибитор VEGFR и/или указанный ингибитор VEGF.

19. Применение по любому из пп.1-18, в котором указанный объект страдает или предрасположен к указанному заболеванию или нарушению, связанному с введением ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

20. Применение по любому из пп.1-19, в котором степень тяжести указанного заболевания или нарушения увеличивается после введения указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

21. Применение по любому из пп.1-20, в котором указанный объект не страдал указанным заболеванием или нарушением до введения указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

22. Способ предотвращения или лечения заболевания или нарушения, включающий введение высвобождающего оксид азота агента объекту, указанному объекту вводили, вводят и/или будут вводить ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF, и он страдает или подвержен заболеванию или нарушению, связанному с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF;

где указанный высвобождающий оксид азота агент составлен так, чтобы быть подходящим для местного введения, и присутствует в концентрации от приблизительно 0,01% (масс/масс) до приблизительно 5% (масс/масс);

где указанный высвобождающий оксид азота агент способен производить по меньшей мере одно из NO⁺, NO^-, N₂O, NO, N₂O₃, NO₂, NO₃^- и NO₂^-, и где указанный высвобождающий оксид азота агент включает органическую молекулу, неорганическую молекулу, макромолекулу, наноматериал и/или аммонийокисляющий микроорганизм (АОМ); и

где указанное заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение кожной ткани, заболевание или нарушение органов лица и/или заболевание или нарушение желудочно-кишечного тракта, связанное с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

23. Способ по п.22, включающий стадии:

1) контроль одной или более характеристик кожной ткани, органа лица и/или желудочно-кишечного тракта объекта, которому вводят ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF;

2) когда указанный контроль показывает, что указанный объект страдает заболеванием или нарушением кожной ткани, заболеванием или нарушением органа лица и/или заболеванием или нарушением желудочно-кишечного тракта, связанным с введением указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF, введение указанного высвобождающего оксид азота агента указанному объекту.

24. Способ по п.23, дополнительно включающий непрерывный контроль указанного заболевания или нарушения кожной ткани, заболевания или нарушения органа лица и/или заболевания или нарушения желудочно-кишечного тракта и необязательно сокращение или отмену указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF.

25. Способ по любому из пп.22-24, в котором указанный ингибитор VEGFR и/или ингибитор VEGF не содержит высвобождающего оксид азота агента.

26. Способ по любому из пп.22-25, в котором указанное заболевание или нарушение представляет собой заболевание или нарушение эпителия.

27. Способ по любому из пп.22-26, в котором указанное введение указанного ингибитора VEGFR и/или ингибитора VEGF предназначено для лечения рака.

28. Способ по любому из пп.22-27, в котором локализация указанного заболевания или нарушения отличается от локализации рака.

29. Способ по любому из пп.22-28, в котором местно вводят указанный высвобождающий оксид азота агент указанному объекту.

30. Способ по любому из пп.22-29, в котором вводят указанный высвобождающий оксид азота агент указанному объекту в локализации, где нет рака.