Способ получения антибиотика а204

 

> г

I э

ОП .:АНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ! 1 1,3М

296323

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

МПК С 12d 9/00

Заявлено 21.11.1969 (№ 1312342/30-15) Приоритет 23.II.1968, № 707841 и 06.XII.1968, № 801215, США

Комитет по делам изобретений и открытии при Совете Министров

СССР

Опубликовано 12.11.1971. Бюллетень № 8

УДК 615.779.9(088.8) Дата опубликования описания 6.1.1972

Авторы изобретения

Иностранцы

Роберт Л. Хэмилл и Мэрвин Мартин Хоен (Соединенные Штаты Америки) Иностранная фирма

«Эли Лилли Энд Компани» (Соединенные Штаты Америки) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА А204

Зависимый от патента №

Изобретение относится к биологическиМ способам получения и очистки физиологически активных веществ, в особенности к способам получения антибиотиков на основе культуры гриба-продуцента. 5

Известны способы получения антибиотиков, при которых гриб-продуцент выращивают ча питательной среде, содержащей источники усвояемого углерода, азота и минеральных солей, в аэробных условиях в глубинной куль- 10 туре при температуре 25 — 37 С до тех пор, пока B,êóëüòóðàëüíoé среде не образуется достаточное количество антибиотика, а в качестве гриба-продуцента берут представителя

Streptomyces. Антибиотик выделяют путем пе- 15 ревода его в соль с последующей адсорбцией этой соли на ионообменной смоле и элюированием ее из последней.

Предлагается аналогичный способ получения антибиотика А204, при котором в качесг- 20 ве гриба-продуцента используют Streptomyces

albus Х1 К1 3384.

Соединение А204 представляет собой кристаллическое вещество белого цвета, которое, будучи перекрисгаллизовано из этилового эфи- 25 ра, плавится при 96 — 98 С, растворимо в сложных эфирах, бензоле, галоидированных углеводородах, диметилсульфоксиде, эфире- и кетонах. Оно слабо растворимо в спиртах и очень слабо растворимо в воде. Это вещество 30 имеет кислотный характер; содержит бдну тигруемую группу с рК=6,1, имеет молекулярный вес около 900 при определении по данным титрования. Примерный состав этого вещества, %: С 61,74, Н 9,37, О 28,38; удельное вращение плоскости поляризации (а) п25 =++68,12 (С=1вес. %/объем в метаноле). Раствор в хлороформе дает полосы инфракрасного спектра поглощения в интервале от 2,0 до 15,0 мкм, 2,95; 3,43; 5,95; 6,87; 7,26; 7,80;

8,52; 8,95; 9,17; 9,34; 9,59; 9,82; 10,07; 10,24;

10,51; 10,77; 11,40; и 11,80 мкм и не имеет характерного ультрафиолетового спектра поглощения. Инфракрасный спектр поглощения антибиотика А204 в хлороформе показан на фиг. 1, Антибиотик А204 получают путем выращивания S. albus в аэробных условиях в среде, содержащей усвояемый источник углерода, азота и минеральных солей. .Впервые S. albus был выделен оиз образцов почвы, взятых в Перри (шт. Флорида, США), путем суспендирования образцов почвы в стерильной дистиллированной воде и нанесения суспензии на пластинки питательной среды.

Последние выдерживали в течение нескольких дней при температуре около 30 С. В конце инкубационного периода колонии организмов, образующих А204, были перенесены с помощью стерильной платиновой петли на ко.

2и(1323

Агар Эмерсона

Агар Беннета

Питательный агар

Действие »а молоко

3 сой агар. Инокулированный косой агар затем выдерживали с целью образования больших количеств инокулиума для получения антибиотика А204.

Этот организм, способный образовывать 5 антибиотик Л204, был депонирован в коллекции Северного научно-исследовательского отдела Сельскохозяйственного департамента

CIIIA в Пеория, Иллинойс и известен под номером NRRL 3384. 10

Ниже дана подробная характеристика штамма NBRL 3384.

Рост обильный; обратная сторона серовато-желтая; обильное спорообразование, воздушный мицелий желтовато-серого цвета; растворимый пигмент отсутствует.

Рост очень незначительный, окраска пе обнаружена.

Рост значительный, обратная сторона серовато-желтая; значительное спорообразование, воздушный мицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует.

Через 14 дней изменений нет.

Нитраты восстанавливает, Образует.

Восстановление нитрата

Образование меланина

Морфология

Роста нет.

Пептон + железо +

20 агар

Три птон-дрожжевой экстракт

Сжижение желатины

Роста нет.

Характеристики культуры на различныхых средах

Малат кальция

25 Температурные требования

Влияние изменения. рН на мицелий основания

Томатная паста с овсяной мукой

ICP №2 (дрожже-солодовый агар) Влияние изменения рН на растворимый пигмент

IСР №3 (овсяная мука + агар) 40 углерода: (†) ,(+) .(+) +

IСР № 4 (неорганические соли + крахмальный агар) 45

IСР №5 (глицерин + аснара гиновый агар) 50

Агар Чапека

55 (+) (†) Тирозиновый агар

Глюкоза + аспарагин.

Полученная спиральная плацента содержит от 3 до 50 спор в цепи, обычно от 10 до

50; споры удлиненные, яйцевидные 1,9Х1,3; под электронным микроскопом поверхность спор гладкая.

Образования обильные, обратная сторона бледная, желто-зеленая, обильное спорообразование, воздушный мицелик бледно-желтый; растворимый пигмент отсутствует; среда слегка осветленная, Обильный рост; обратная сторона серовато-желтая; обильное спорообразование, воздушный мицелий белый; растворимый пигмент отсутствует.

Обильный рост; обратная сторона серовато-желтая; обильное спорообразование, мицелий светло-желтый; растворимый пигмент отсутствует.

Рост значительный; обратная сторона белая; значительное спорообразование, воздушный мицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует.

Рост обильный; обратная сторона серовато-желтая; обильное спорообразование, воздушный мицелий бледпожелтого цвета; растворимый пигмент отсутствует, Рост обильный; обратная сторона бледного желто-зеленого цвета; обильное спорообразование, воздушный мицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует.

Рост хороший; обратная сторона белая; хорошее спорообразовапие, воздушный мицелий белого цвета; растворимый пигмент отсутствует.

Рост очень незначительный, окраска не обнаружена.

Рост значительный; обратная сторона желтая; значительное спорообразоваиие, воздушный мицелий бледно-желтого цвета; растворимый пигмент отсутствует, В течение 14 дней не происходит.

Рост и спорообразование значительные при 26"С, хорошие при 30 С; вегетативный рост при 37 С; следы образования только вегетативного роста при 43 — 49 С. При 55 С роста нет.

Для всех сред, кроме ICP № 4, влияние отсутствует. В случае IСР № 4 при обработке

005 н. НСI или 05 í. NaOH происходит изменение цвета от коричневого до белого или обесцвечивание.

Растворимый пигмент отсут. ствует.

Усвоение различных источников

l-арабиноза сахароза

d-ксилоза

d-фруктоза глюкоза рамноза рафиноза

1-инозит

d-маннит среда без углерода (контроль)

Условные обозначения: усваивает усвоение возможно усвоение мало вероятно не усваивает.

Как видно из приведенного, описанный

60 штамм может использовать различные источники энергии, и следовательно могут быть применены различные среды. Однако с целью экономии, получения максимального выхода целевого продукта и более легкого выделения б5 последнего, предпочтительно применять некО296323 торые относительно.:простые среды. Например, к числу сред, пригодных для получения антибиотика, относятся усвояемые источники углерода, такие, как глюкоза, фруктоза, крахмал, глицерин, мелясса, декстрин, сахар-сырец и т. д. Лучшим источником углерода является глюкоза. Кроме того, применяемые среды включают источники усвояемого азота, например соевую муку, замоченную кукурузу, дрожжи, размолотые семена хлопчатника, мясной экстракт, пептоны (мяса или сои), казеин, смеси аминокислот и т. п. Лучшими источниками азота являются пептоны, соевая мука, смеси аминокислот и т. п. Из неорганических питательных солей, которые могут быть включены в среду, ооычно применяются соли, способные образовывать ионы натрия, калия, аммония, кальция, фосфат-ион, сульфат-ион, хлорид-ион, карбонат-ион и т. д.

Для оптимального роста и развития штамма в среду необходимо также включать микроэлементы. Такие элементы ооычно присутствуют в малых количествах в других компонентах среды, причем количество их достаточно для роста используемого штамма.

Первоначально значение рН среды может быть различным. Однако наиболее предпочтительно от 6,5 до 7,5. При изучении других актиномицетов наблюдалось постепенное повышение рН среды в процессе роста организма по мере образования антибиотика до 7,0 — 7,6 и выше, причем конечное значение рН, хотя и частично, зависит от первоначального значения рН среды, присутствующих в среде буферных компонентов и продолжительности роста организма.

Для получения антибиотика А204 выбраны аэробные условия выращивания в глубинной культуре. При получении сравнительно небольших количеств можно применять встряхивание колбы и поверхностное выращивание в бутылях. Но для получения больших количеств лучше применять аэробиое выращивание в глубинной культуре в стерильных условиях. Среда в стерильной емкости может быть инокулирована спорообразующей суспензией.

Но ввиду замедления роста, наблюдаемого при применении спорообразующей суспензии, предпочтительной является вегетативный инокулиум, при этом оборудование для ферментации используется более эффективно, Желательно сначала получить вегетативный инокулиум путем инокуляции сравнительно небольшого количества среды спорами организма, а после того, как будет получен молодой активный вегетативный инокулиум, перенести его в асептических условиях в большую емкость. Среда, в которой получается вегетативный инокулиум, может быть либо той же, какая применяется для промышленного производства антибиотика А204, либо другой.

Рост организма, дающего антибиотик А204, происходит в широком интервале температур от 25 до 37 С. Оптимальной является температура 25 — 30 С. Обычно максимальное обра5

15 го

Я зование антибиотика происходит в течение

48 — 72 час после инокуляции среды.

Ввиду того, что процесс выращивания проводят в глубинной культуре в аэробных условиях, через среду продувают стерильный воздух. Для эффективного роста организма и производства антибиотика А204 расход воздуха, подаваемого в емкости, составляет от 0,2 до 0,4 объема в 1 лшн на 1 объем культуры.

Предпочтительно применять 0,35 объема воздуха в 1 чик на 1 объем среды.

Концентрацию антибиотика в среде в процессе ферментации можно легко проверять путем анализа образцов среды на активность замедления роста тест-организмов. Установлено, что для этой цели можно применять Staphylococcus aureus, Sarcina lutea, Mycobacterium avium u Bacillus subtilis. Испытание образцов можно проводить хорошо известными методами нефелометрии или методом колпач«а и пластинки.

Как правило, максимальное образование

А204 происходит в течение двух-трех дней после инокуляции среды в,процессе глубинного аэробного выращивания или во встряхиваемой колбе.

Активный антибиотик, получаемый в процессе ферментации, может находиться в бульоне или в мицелии, либо и там и там.

Соответственно, методика выделения, применяемая при получении А204, рассчитана на максимальное извлечение антибиотика из люоого или обоих источников. Так, например, полученный бульон можно профильтровать, и фильтр ат экстр агировать соответствующим растворителем с целью извлечения антибиотика, не задержавшегося в лепешке мицелия. Кроме того, антибиотик, находящийся в лепешке мицелия, извлекается путем тщательной экстракции соответствующим растворителем. Во всех случаях антибиотик можно выделить из экстрагирующего растворителя известными методами.

Химический и физический анализ кристаллического А204 свидетельствует о присутствии четырех-пяти метоксигрупп.

Хроматография антибиотика А204 на бумаге Ватман М 1 дает следующие значения:

Rf=0,14 при применении в качестве растворителя воды, метанола, ацетона и бензола при объемном соотношении 72:24,5:3:0,5; Rf

=0,87 при применении в качестве растворителя 10/О-ного водного раствора и-пропанола

%=0,33 в растворителе, содержащем воду, метанол и уксусную кислоту в соотношении

12:3:1 (раствор был доведен до рН 10,4 добавлением NH:OÍ, а затем до рН 7,3 добавлением Н РО.,). При определении указанных вь:ше данных антибиотик наносили на бумагу в виде метанольного раствора. Биоавтографы получали, помещая бумажные хроматограммы на пластинки агара с посевом Bacillus

subtilis в качестве тест-организма.

Если А204 подвергнуть хроматографии в тонком слое на пластинках силикагеля. в- ра296323

Была приготовлена става, г/л:

Соевая мука

Казеин

КаКОз

Сироп глюкозы

СаСОз

Водопроводная среда следующего со15,0

1,0

3,0

20,0

2,5 до 1 л

55 вода

60 б5 створителе этилацетате с применением ванилина или серной кислоты в качестве индикатора, то значения Rf составят около 0,8.

Натриевая соль антибиотика А204 представляет собой кристаллическое твердое вещество белого цвета с т. пл. 144 — 145 С и имеет молекулярный вес около 960 при определении с помощью рентгеновского анализа.

Натриевая соль растворима в сложных эфирах, бензоле, галоидированных углеводородах, диметилформамиде, диметильсульфоксиде, простом эфире и кетонах; слабо растворима в спиртах. Установлено, что удельное вращение плоскости поляризации (а)п25 кристаллической натриевой соли антибиотика А204, высушенной при комнатной температуре в вакууме над безводным хлористым кальцием в течение

15 час, составляет+54,95 (С=2 вес. о/о объем в метаноле).

Инфракрасный спектр поглощения натриевой соли антибиотика А204 в хлороформе показан на фиг. 2. Ниже приводятся различимые полосы инфракрасного спектра в интервале от 2,0 до 15,0 мкм 3,1-3,2 (расплывчатые);

3,44; 6,26; 6,87; 7,29; 7,67; 7,79; 8,45; 8,96; 9,11;

9,18; 9,36; 9,56; 9,82; 10,05; 10,26; 10,54; 10,95; и 11,77 мкм.

Молекулярный вес кристаллогидрата серебряной соли антибиотика А204, определенный по данным рентгенографии, составляет 1099.

Кристаллы серебряной соли бесцветны, но чувствительны к действию света и рентгеновых лучей и становятся темно-коричневыми после двух дней облучения на воздухе. Плотность серебряной соли, определенная флотацией в водном ZnCI, равна 1,293 г/см .

Единственным правилом затухания является hkl: h+k=Zn, что указывает на нецентральную моноклинную пространственную группу Сз. Имеется четыре асимметричных моноклинных единицы и одна молекула на асимметричную единицу в ячейке, имеющей размеры, А: а 25,977; о 14,517; С 14,418;

В 91,94.

Как и многие антибиотики, А204 иногда включает несколько тесно связанных компонентов. Второй компонент не найден во всех процессах ферментации, а если он присутствует, то количество его обычно составляет меньше 5 /о от общего выхода. Этот второй, редко обнаруживаемый микрокомпонент, был условно обозначен как А20411. До сих пор он был получен только в виде смешанной натриево-калиевой соли. Установлено, что смешанная натриево-калиевая соль А20411 обладает активностью, сопоставимой с антибиотиком А204.

Средний из нескольких элементарных анализов кристаллической смешанной натриевокалиевой соли А204, высушенной в вакууме при 80 С над пятиокисью фосфора, дал следующие результаты, %. С 60,66, Н 8,76 и

О 27,09, 25

Несколько анализов на атомарную абсорбцию показали, что соединение является смешанной натриево-калиевой солью с различными соотношениями, содержащей 1 моль смешанного катиона на 1 моль А204.

Смешаннная натриево-калиевая соль А20411 не имеет характерного ультрафиолетового спектра поглощения. Хроматография этой соли (II фактора) в тонком слое на силикагелевых пластинках дает Rf=0,75 в этилацетате с применением серной кислоты в качестве индикатора.

Антибиотик А204 проявляет инсектицидную, анадиицидную, микробицидную и фунгицидную активность, в том числе против организмов, вредных для сельскохозяйственных животных и растений.

Ниже даны примеры, иллюстрирующие изобретение.

Пример 1. Получение антибиотика А204 во встряхиваемой колбе.

Споры S. albus NRRL 3384 наносили на пластинки питательного агара, изготовленного из

10 г декстрина, 2 г ферментационного переваренного казеина, 1 г мясного экстракта, 1 г дрожжевого экстракта, 20 г агара и воды, в количестве, достаточном для доведения объема до 1 л, и выдерживали их в течение 4—

5 дней при 30 С. Пластинки были залиты стерильной дистиллированной водой, и их слегка поскоблили с целью удаления организмов и создания их водной суспензии. Для инокуля-. ции 100 л л вегетативной смеси брали 1 мл суспензии спор.

Вегетативную культуральную среду готовили путем смешения 15 г глюкозы, 15 г соевой муки, 5 г твердых частиц замоченной кукурузы, 5 г хлористого натрия, 2 г карбоната кальция в водопроводной воде из расчета доведения объема до 1 л. Вегетативный инокулиум встряхивали на поршневой качалке, имеющей ход 2 дюйма (4,8 см) при 108 об/мин. Полученный таким образом инокулиум затем применяли для получения антибиотика А204 следующим образом.

Порции по 100 л л этой среды поместили в колбы Эрленмейера на 500 л л и стерилизовали при 120 С в течение 30 мин. После охлаждения каждую колбу инокулировали 5 /о-ным вегетативным инокулиумом, полученным, как описано выше.

Колбы встряхивали в течение 48 час при

30 С на ротационной качалке, работающей со скоростью 250 об/мин. рН инокулированиой

296323

0,4

5 до 1 л

КС1

КН2Р04

Соевая мука

Водопроводная вода

20 среды был в пределах от 6,5 до 7,5. К концу ферментационного цикла значение рН повысилось до 7,0 — 7,6. Активный антибиотик был обнаружен и в бульоне и в мицелии. Его активность определяли путем проверки действия бульона и мицелия на В. subtilis с применением известного дискового метода или метода колпачка и пластинки.

Весь бульон (25 л), полученный описанным выше способом, профильтровали в вакууме через диатомовую землю. Лепешку мицелия три раза подвергали экстракции половиной объема 50 -ного водного метанола. Три полученных экстракта соединили и концентрировали в вакууме с целью удаления метанола.

Профильтрованный бульон и водный концентрат растворов экстрактов мицелия соединили, рН смеси довели до 3 добавлением соляной кислоты и экстрагировали раствор два раза половиной объема этилацетата, Этилацетатные экстракты объединили и концентрировали до сухого состояния; затем растворили в хлороформе (10 мл на 1 г твердого вещества).

Раствор в хлороформе пропустили через колонку размером 12к 40 дюймов (29+96 см), наполненную Питтсбургским углем, содержащим 2 г углерода на 1 г твердого вещества.

Затем колонку промыли пяти — десятикратным объемом хлороформа (по отношению к первоначальному объему) .

Промывочные фракции хлороформа соединили, концентрировали в вакууме до сухого состояния, растворили в небольшом количестве теплого метанола, охладили и полученные кристаллы отфильтровали, После перекристаллизации было получено 8,9 г кристаллов антибиотика А204, содержащих от 1200 до

1400 микробиологических единиц на 1 мг.

Кристаллы были идентифицированы как антибиотик А204 с помощью ХМК, инфракрасного спектра, хроматографии в тонком слое и хроматографии на бумаге; т. пл. кристаллов 96—

98 С.

Пр имер 2. Получение антибиотика А204.

Антибиотик А204 получили по методике, описанной в примере 1, но применяли среду следующего состава, г:

Глюкоза 15

Соевая мука 15

Замоченная кукуруза 5

NaC1 5

СаСОз 2

Водопроводная вода до1л

Полученный антибиотик был идентифициюван, как А204 и имел т. пл. 96 — 98 С.

Пр имер 3. Получение антибиотика А204.

Антибиотик А204 получали способом, опианным в примере 1, но применяли среду следующего состава, г:

Глюкоза 20 (ХН4) 2$0ф 5

СаСОз 8

Полученный антибиотик был идентифицирован, как А204 и имел т. пл. 96 — 98 С.

П р и мер 4. Получение антибиотика А204.

Антибиотик А204 получили способом, описанным в примере 1, но применяли среду следующего состава, г:

Глюкоза 10

Усвояемая мелясса 20

Пеп тон 5

СаСОз 2

Водопроводная вода до 1 л

Полученный антибиотик был идентифицирован, как А204 и имел т. пл. 96 — 98 С.

Пример 5. Получение антибиотика А204 на пилотной установке.

В колбу на 250 мл поместили 50 мл вегетативной среды, включающей 10 г/л декстрозы, 25 г/л растворимого крахмала, 15 г/л оорушенных соевых бобов, 10 г/л жидкости после замочки кукурузы и 2 г/л СаСО> в водопроводной воде; рН довели до 6,5 (NaOH) .

Содержимое колбы инокулировали 5 /о -ной суспензией, полученной способом, описанным в примере 1, из питательной среды, содержащей 10 г глюкозы, 10 г дрожжевого экстракта, 5 г NaC1, 0,01 г FeSO4.7НзО, 0,25 г MgSO X

;х,7НзО и 20 г агара Меера (промытого три раза) в 1 л деионизированной воды.

Инокулированную вегетативную среду выдерживали при 30 С в течение 48 час н ротационной качалке с дугой диаметром 2 дюйма (4,8 см), работающей со скоростью 250 об/мин.

Порция полученной таким образом вегетативной культуры в 16 мл применялась для ннокуляции колбы емкостью 1 л, содержащей

200 мл вегетативной среды. Инокулированную вегетативную среду выдерживали при 30 С в течение 30 час на ротационной качалке, имеющей дугу, диаметром 2 дюйма и работающей со скоростью 250 об/мин. Порцию 200 мл полученной вегетативной культуры применяли для инокуляции бродильного чана на 40 л, содержащего 25 л стерилизованной ферментационной среды, включающей 0,2 г/л пеногасителя, 25 г/л декстрозы, 15 г/л обрушенныхсоевых бобов, 3 г/л темной меляссы, 1 г/л казеина и 2,5 г/л СаСО> в водопроводной воде.

Ферментацию проводили при температуре

80 С в течение 30 час после инокуляции.

В процессе ферментации проводили перемешивание со скоростью 420 об, мин. Аэрацию во время ферментации производили со скоростью 0,4 куб. фута воздуха на 1 куб. фут среды в 1 мин. Выделение антибиотика осуществляли способом, описанным в примере 1. Полученный антибиотик был идентифицирован, как А204, и имел т, пл. 96 — 98 С. 296323

Предмет изобретения

/астпта (си ) 2000 150014001ЛЮ 1200 1100 . ОЙ7 Я50 000 850 800 750 700 б50 ба 4Ю Л67 2500

/00

60 ) 40

® 20

7 .3

5 б 7 8 9 10 и 12 15 М 1

Дпина Млны (мкм1

11

Пример 6. Получение солей антибиотика

А204 из бульона и мицелия.

Соли, образованные антибиотиком А204 и щелочным металлом, аммонием и амином, получали из бульона и мицелия способом, описанным в примере 1, путем доведения рН смеси профильтрованного бульона с водными концентратами экстракта мицелия по меньшей мере до 8,5 путем добавления соответствующей гидроокиси щелочного металла, аммония или амина, двухкратного экстрагирования половины объема этилацетата и дальнейшей обработки по описанной выше методике.

Кислоты и ее соли могут быть перекристаллизованы также из различных кетонов, слож ных эфиров, спиртов и бензол-углеводородных смесей, или могут быть очищены другими известными методами, например в хроматографической колонке и др.

Пример 7. Получение натриевой соли антибиотика А204.

К 100 мг антибиотика А204, полученного в примере 1, растворенного в 1 мл ацетона, добавили одну каплю 5 н. NaOH и 1 мл воды.

Смесь осветлили путем легкого нагревания и оставили стоять при 15 С до тех пор, пока не произошла кристаллизация. Кристаллы были отфильтрованы и перекристаллизованы из водного раствора спирта. Было получено 72 мг натриевой соли антибиотика А204 с т. пл.

144 †1 С.

Пример 8. Получение калиевой соли антибиотика А204.

Для получения калиевой соли в описанном выше способе каплю 5 н. NaOH заменили одной каплей 5 н. КОН.

Пример 9. Получение серебряной соли антибиотика А204.

670 мг натриевой соли антибиотика А204 растворили в 40 мл метанола, смешали с ра створом 270 мл нитрата серебра и 2 мл воды и оставили стоять при комнатной температур в темноте в течение 3 час. Раствор выпарили насухо и промыли водой с целью удаления избытка нитрата серебра. Остаток растворили

)0 в 10 мл метанола при нагревании, профильтровали в нагретом состоянии через воронку из пористого стекла и оставили стоять на

16 час при 50 С. Были получены крупные белые прямоугольные кристаллы серебряной со15 ли антибиотика А204. После перекристаллизации из водного ацетона получили 450 мл серебряной соли антибиотика А204. Молекулярный вес по данным рентгеновского анализа составил около 1099.

1. Способ получения антибиотика А204, включающий выращивание гриба-продуцента

25 из группы Streptomyces на питательной среде, содержащей источники усвояемого углерода, азота и минеральных солей, при температуре предпочтительно 25 — 37 С в глубинной культуре в аэробных условиях до тех пор, пока в

30 культуральной среде не образуется достаточное количество антибиотика, а также включающий выделение последнего, отличающийся тем, что в качестве гриба-продуцента берут

Streptomyces a1bus ЯКК1 3384.

35 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что выделение антибиотика А204 проводят путем его перевода в соль с последующей адсорбцией этой соли на смоле и элюирова нием ее из смолы. длина Ялны (we) Фиг.2

Составитель М. Дранишников

Редактор E. П. Хорина Техред 3. Н. Тараненко Корректор О. Б. Тюрина

Заказ 3827/19 Изд. № 1416 Тираж 473 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

5000 ФЮ 5ÆÐ 25Ю 2000 00 (?, во 60

140 ь 20

Иacmoma (см- )

nOO OOVOO ИЮ ИОО 1000060 т 060 000 760 700 660