Способ выделения ферментов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

3I5366

Союз Советских

Социалистических

Республик

Заявлено 16.IX.1968 (Pk 1272233/28-13)

Приоритет 02.II.1968, № ВП6а/129971, ГДР

МПК С 12d 13/10

С 070 7/028

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете 1йинистров

СССР

УДК 577.15.07(088.8) Опубликовано 21.IX.1971. Бюллетень № 28

Дата опубликования описания 02.XI.1971

Авторы изобретения

Иностранцы

Хорст Тепфер, Клаус Пише и Герхард Шефер (Германская Демократическая Республика) Иностранное предприятие

«ФЕБ Арцнаимиттельверк» (Германская Демократическая Республика) Заявитель

СПОСОБ ВЬ1ДЕЛЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ

Зависимый от патента №

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам .выделения ферментов.

При известном способе выделения ферментов из фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании их продуцентов, путем введения в фильтрат танина с последующим его удалением ацетонам, недостаточно полно выделяются ферменты.

С целью более полного выделения ферментов в фильтрат наряду с танином вводят органическое вещество, а именно казеиновый и мясной пептон, желатин, сухое .цельное молоко, обезжиренное молоко, сыворотку, замочную кукурузную воду, причем устанавливают рН фильтрата 5,0 — 6,0.

Желательно вводит танин в виде раствора, содержащего 3 — 5 г танина, в количестве

30 мл на 1 л фильтрата; молоко или сыворотку — в количестве 50 — 200 мл на 1 л фильтрата, замочную кукурузную воду — в количестве 10 — 100 мл на 1 л фильтрата, содержащую

3% суммарного азота.

Способ заключается в следующем.

Фильтрат культуральной жидкости, полученный при выращивании продуцентов ферментов, смешивают с растворимым белком, способным осаждаться танином. ,В зависимости от величины добавки белка изменяется специфическая активность ферментных препаратов при почти неизменном выходе.

При производстве ферментов, применяющихся для фармацевтических препаратов пли для повышения качества пищевых продуктов, в качестве добавок используют казеин, молоко, сухое молоко, сыворотку, желатин, оксижелатин, пептон и растительные белки, например замочную кукурзную воду.

10 Для производства ферментов в техническом масштабе используют замочную кукурузную воду.

Перед введением танина устанавливают рН фильтрата,культуральной жидкости 5,0 — 6,0

15 введением кислоты или щелочи, При прибавлении танина образуется нерастворимый комплекс белка с танином, которьш содержит большое количество ферментов и

20 мажет быть отделен ат х<идкой фазы известным способом после выдерживания в течение

2 — 24 час.

Из выделенного осадка танин извлекают при помощи многократного перемешпвания с

25 ацетоном.

Танин вводят в виде раствора, содержащего 3 — 5 г танина, в количестве 30 мл на 1 л фильтрата, молоко или сыворотку вводят в количестве 50 — 200 мл на 1 л фильтрата, и

30 замочную кукурузную воду — в количестве

315366 4

Составитель В. Дунье

Редактор Г. Бялобжеская Техред 3. Н. Тараненко Корректор Т. А. Миронова

Заказ 3154/16 Изд. № 1325 Тираж 473 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

10 — 100 мл на 1 л фильтрата, содержащую

3% суммарного азота, Пример 1. 5 л фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании штамма Aspergillus ochraceus, соединяют при перемешивании со 100 мл жидкости, которая содержится в кукурузе. Полученный раствор доводят до рН 5,5 добавление IN едкого патра. Непосредственно за этим, для осаждения ферментов, медленно прибавляют при легком перемешивании раствор 20 г танина в 150 мл воды.

При этом образуется осадок, который выделяют после выдерживания в течение 2 чав при комнатной температуре с помощью центрифугирования.

Полученный влажный оcàäîê трижды перемешивают с 250 мл ацетона в течение 10 мин для удаления танина из комплекса фермента с танином.

Промытый ацетоном концентрат фермента сушат под вакуумом при комнатной температуре и получают 8,65 г сухого вещества со специфической активностью 0,81 СЕ/мг. Это соответствует выходу 1400 СЕ на л ферментационного раствора.

П р и мер 2. 300 мл культурального фильтрата штамма Aspergillus ochraceus, доведенного до рН 5,5 добавление IN едкого натра, смешивают с 600 мг казинового пептона, растворенного в 7,5 мл воды. Для осаждения протеазы при легком перемешивании добавляют 9 мл раствора танина, в котором содержится 1,2 г танина, в результате образуется осадок в виде хлопьев, представляющий собой комплекс танина с ферментами.

Полученный осадок отделяют от раствора центр ифугированием под воздействием силы в 5000 г и непосредственно за этим четыре раза перемешивают с ацетоном для отделения

5 танина.

Полученный продукт сушат в вакуум-эксикаторе.

По окончании суц1ки получают 520 мг протеазы со специфической активностью, равной

l0 0,58 СЕ(мг.

Это соответствует выходу 1005 СЕ на л культурального фильтра ra.

Предмет изобретения

15 1. Способ выделения ферментов из фильтрата культуральной жидкости, полученной при выращивании их продуцентов, путем введения в фильтрат танина с последующим его удалением ацетоном, отличающийся тем, что, 20 с целью более полного выделения ферментов, в фильтрат наряду с танином вводят органическое вещество, а именно казеиновый и мясной пептон, желатин, сухое цельное молоко, обезжиренное молоко, сыворотку, замочную

25 кукурузную воду, причем рН фильтрата устанавливают равным 5,0 — 6,0.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что танин вводят в виде раствора, содержащего

3 — 5 г танина, в количестве 30 мл на 1 л

30 фильтрата.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что молоко или сыворотку вводят в количестве

50 — 200 мл на 1 л фильтрата.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

35 замочную кукурзную воду вводят в количестве 10 — 100 мл на 1 л фильтрата, содержащую

3% суммарного азота.