Способ выделения олигосахаридов — фрагментов хитозана'- о:с2нля. :':'.::; :^мдя;'•,:•'•'••:'—' if «ч,-•••-.." 1 tsirt

 

О П И С А Н И Е 3)9 607

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 18.IV.1968 (№ 1233429/23-4) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 02.XI.1971. Бюллетень ¹ 33

Дата опубликования описания 3.1.1972

МПК С 08b 19/14

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 547.455.03(088.8) Авторы изобретения

В. И..Максимов и В. А. Мосин

Институт органической химии им. Н. Д. Зелинского

Заявитель

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ОЛИ ГОСАХАРИДОВ—

ФРАГМЕНТОВ ХИТОЗАНА

Известен способ обнаружения олигосахаридов с применением раствора антрона, а также способ его выделения, заключающийся в том, что к солянокислым растворам олигосахаридов после их хроматографического разделения добавляют избыток карбоната свинца, доводя рН до 4 — 5. Смеси фильтруют, фильтраты обрабатывают сероводородом, снова фильтруют и удаляют избыток сероводорода, пропуская через каждый раствор ток азота. Полученные растворы упаривают в вакууме. Однако известный способ громоздок и требует большой затраты труда и времени.

Поскольку элюирование с колонки производится соляной кислотой, концентрация производится соляной кислотой, концентрация которой к концу процесса становится довольно высокой (2,5 л и выше), то соляная кислота оказывает гидролитическое действие на олигосахариды, что приводит к загрязнению индивидуальных олигосахаридов.

Цель изобретения — упростить процесс и повысить чистоту целевых продуктов.

Этот хке способ может быть применен для обнаружения олигосахаридов. В основу положен принцип — осаждение олигосахаридов из раствора, При добавлении ацетона к фракциям в случае присутствия олигосахаридов наблюдается помутнение раствора.

Уже .чисто визуального наблюдения достаточно, чтобы определить в каких фрак них вещество содержится и в каких его нет.

Кроме того нефелометрическое измерение на

5 фотоколориметре позволяет оценить количественное распределение веществ во фракциях.

Предлагаемый способ позволяет быстро обнаружить все углеводы до пентасахарида.

Обнаружение моносахарида предлагаемым

10 способом требует несколько больше времени, так как он не образует мутной суспензии, а медленно выпадает в кристаллическом виде.

Но поскольку соляная кислота (концентрация

0,5 н.) не вызывает изменений D-r z>o>zoaa izna, 15 то эта задержка не является существенной.

Выделение олигосахаридов из растворов основано на осаждении их ацетоном. Выделение дисахарида из раствора ацетоновым осаждением осуществить не удается, так как вещест20 во образует очень устойчивую коллоидную суспензию, которая не коагулирует при добавлении избытка безводного ацетона. Выделение дисахарида достигается осторожным упариванием раствора на роторном испарителе. Как

25 показывают хроматографический и электрофоретический анализы, дисахарид удается получить достаточно чистым. Препарат дисахарида содержал лишь следы D-глюкозамнна, образующегося, видимо, в результате гидроли30 за дисяханип о время упаривания. Осталь319607

Объем элюата, с которым выходит вещество, мл

Выход вещеглюкозамин НС1 (pl (с 1,0 в воде), град

Вещества

Моносахарид

Дисахарид

37 (65 — 102) 30 (135 †1) 45 (195 — 240) 38 (262 — 300) 40 (135 — 355) 135 1

+72,4

0,49

+42,7 0,4

+26,4 1,0

+22,5 0„.8

-, 16,4+0„7

Трисахарид

0,18

Тетрасахарид

Пентасахарид

0,05

35 0

Предмет изобретения

Составитель Н. Антипова

Редактор О. Юркова Техред 3. Тараненко Корректоры: Н. Шевченко и T. Бабакина

Заказ 3628/12 Изд. Мв 1555 Тираж 473 Подписное

LI,HHHHH Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ные фракции полностью однородны. Из всех пяти фракций, только дисахарид гигроскопичен, остальные не изменяются при хранении на воздухе.

Пример. 1,2 г сухого гидролизата хитозана растворяют в 100 мл воды, полученный раствор пропускают через колонку со смолой

Дауэкс 50Х4 (Н+, 1,6);40 см), колонку промывают 0,03 н. соляной кислотой (250 мл), и вещества элюируют градиентом соляной кислоты. Для достижения градиентного элюирования в смеситель помещают 200 мл 0,3 н. соляной кислоты, а в предсмеситель — 200 мл

3,5 н. соляной кислоты. Объем фракций составляет 2,5 мл, скорость 2 мл/мин, общее время для разделения первых 5 олигосахаридов составляет 3 час. Для обнаружения веществ во фракциях из каждой фракции отбирают 0,2 мл раствора в пробирки и туда же добавляют по 5 мл безводного ацетона. Наличие вещества во фракции обнаруживают по выпадению осадка (обычно мгновенное помутнение раствора, в случае моносахарида— медленное выделсние кристаллического осадка). Фракции, в которых есть вещество, собирают вместе соответственно для каждого олигосахарида и для выделения веществ из растворов к растворам (кроме раствора дисахарида) добавляют ацетон до общего объема

0,5 л. Для быстрой коагуляции трисахарида целесообразно пользоваться безводным ацетоном, для коагуляции тетра- и пентасахаридов использование безводного ацетона не обязательно. Скоагулировавшие осадки оседают на дно, жидкость декантируют, а вещество промывают несколько раз безводным ацетоном с последующей декантацией и высушивают.

Дисахарид выделяют осторожным уцариванием раствора в вакууме. Полученный желтый,, гигроскопичный порошок очищают осаждени. ем из спиртового раствора ацетоном. Характе ристика и выход выделенных веществ приво дится в таблице.

25 Хроматография проводилась на бумаге 227 «М» в си< теме бутанол — пиридин — вода (6: 4: 3).

Способ выделения олигосахаридов — фрагментов хитозана из водных растворов, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения чистоты целевых продуктов, раствор олигосахаридов обрабатывак>т ацетоном.