Способ культивирования клеток стабильных линий животного происхождения

 

дО6.ЖЮЗНАЯ

О П И © A-H--ЙИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союа Советских Социалистических

Республик

Х АВТОРСКОМУ СВЙДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт, свидетельства №

Заявлено 29.IV.1970 (№ 1431102/31-16) М. Кл. С 12k 9/00 с присоединением заявки №

Приоритет

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 576.8.093.1(088.8) Опубликовано 07.V11.1972. Бюллетень ¹ 21

Дата опубликования описания 14.VIII.1972

Авторы изобретения

М. С. Бенюмович и E. В. Сорокина

Заявитель Институт экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР

СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК СТАБИЛЪНЬ1Х ЛИНИЙ

ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к культурам животных клеток.

Известен способ культивирования клеток стабильных линий животного происхождения в перемешиваемой суспензии путем периодического удаления части кульгуры с последующим добавлением свежей питательной среды.

Однако клетки, выращенные в этих условиях, в значительном количестве погибают.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности выращиваемых клеток. 3ТВ цель достигается тем, что клетки культивируют стационарно, периодически встряхивают и инкубируют в монослое в течение 3 — 4 недель, Пример. Клетки стабильной линии ДАПТ, полученной из человеческой дедифференцированной астроцитомы пилоидного типа, выращивают во флаконе Карреля, диаметр которого равен 5 см. Общий объем суспензии постепенно доводят до 15 мл. Культивирование длится свыше 3 месяцев. Начиная со второго месяца, каждые 3 — 6 дней извлекают по 10 мл суспензии. Достигаемая плотность суспензия составляет в среднем 70 клеток на >/, часть камеры Горяева, что составляет 3,9 10 клеток в 1 мл. Средний «урожай» культуры при извлечении 10 мл суспензии равен 3,9 10 клеток, За 109 дней с момента начала суспензионного культивирования «урожаи» извлекают

28 раз. Общее количество извлеченных клеток за этот период составляет около 10 . При окраске трипановьв| синим доля диффузно окрашивающихся клеток не превышает 5%.

Колебания величин достигаемых плотностей суспензии обусловлены прикреплением части клеток к поверхности стекла.

П р и it е р 2. Клетки стабильной линии

1о ДАПТ выращивают в матрасе, площадь дна которого составляет около 260 см, объем

1,5 л. Объем суспензии постепенно доводят до

250 мл. Культивирование длится около 3 месяцев. Каждые 2 — 6 дней извлекают 100 —15 200 мл суспензии. Достигаемые плотности суспензии составляют в среднем 50 клеток на гго часть камеры Горяева, что составляет 2,8 10" клеток в 1 мл. «Урожай» культуры при извлечении 150 мл суспензии равен 42 10о клеток.

20 С момента начала суспензионного кульгивирования «урожаи» извлекают 19 раз. Общее количество извлеченных клеток за этот период составляет 7,2 10о. При окраске трипановым синим доля диффузно окрашивающихся кле25 ток не превышает 5%.

Пример 3. Клетки стабильной линии

HeL, полученной из раковой опухоли шейки матки человека, выращивают во флаконе Карреля, диаметр которого равен 5 см. Обьем

30 суспензии доводят до 15 мл. Культивирование

343993

Предмет изобретения

Составитель Т. Головина

Техред T. Ускова

Редактор Д. Пинчук

Корректор Т. Китаева

Заказ 2499/4 Изд. Хи 987 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 длится около 3 месяцев. Каждые 4 — 6 дней извлекают по 10 ил суспензии. Достигаемая плотность суспензии составляет в среднем

80 клеток на 1/> ччаасстть ь ккааммеерры ы 1Гоорряяеевваа, что составляет 4,4 10з клеток в 1 мл. «Урожай» культуры при извлечении 10 л л суспензии равен 4,4 10 клеток. С момента начала суспензионного культивирования клетки извлекают

17 раз, общее количество извлеченных клеток за этот период составляет около 0,8 10 . При окраске трипановым синим доля диффузно окрашивающихся клеток не превышает 5%.

Способ культивирования клеток стабильных линий животного происхождения в суспензия путем периодического удаления части культуры с последующим добавлением свежей питательной среды, отличающийся тем, что, с целью повышения жизнеспособности выращиваемых клеток, их культивируют стационарно, l0 периодически кратковременно встряхивают и инкубируют в монослое в течение 3 — 4 недель.