Способ получения ацетата д'-дегидрокортизона

 

О il И С А Н И Е 376440

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сома Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 30.111.1971 (¹ 1642306. 31-16) Ц Кл. С 12с! 13 0 0

A 61k 17/12 с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 05.1Ч.1973. Бюллетень № 17

Дата опубликования описания 7Х!.1973

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 615.45:615.361.45

Авторы изобретения

К, А. Кощеенко, Л. В. Соколова, Е. A. Борман, H. Ф. Ковылкина, T. Г. Баклашова, Л. В. Андереев, Н, H. Суворов и Г. К. Скрябин

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТАТА Л -ДЕГИДРОКОРТИЗОНА

Изобретение относится к микробиологическим способам получения лекарственных препарато в и касается, получения ацетата Л -дегидрокортизона (а цетата предцизона) . Известные способы получения ацетата

Л -дети дрокортизона путем микробиологичсско го п ревращения ацетата,кортизона и дальнейшего выделения целевого продукта малопроиз водительны.

Целью изобретения является интенсификация процесса получения конечного продукта.

Эта цель дости гается тем, что трансформацию осущест вляют с помощью культуры

Mycobacterium glohiforme 193, выращенной в присутствии индуктора ацетата кортпзона, а исходный стероид вносят в количестве 5 г/л среды и более.

А цетат кортизона можно вносить;в виде раствора в горячем метаноле, или малкодис пе рснай водной суспензии.

Пример 1. Культуру Mycobacterium

globiforme 193, сохраняемую на кукурузно глюкозцом агаре (1% êóêóðóçíîãî экстракта, 1% глюкозы, 3% airap-а гара, рН после стерилизации 6,8 — 7,2), выращивают на этой же среде IB течен ие 4 — 5 суток и,полученной водной ба ктериальной суспензией засевают колбы емкостью 0,5 л со 100 мл среды того же состава, но без агар-агара. Вместе с бактериальной суспснзией вносят 15 мг ацетата кортизона. Через 24 часа, когда концентрация биомассы достигает значения 1,6 — 1,7 г/л (сухой вес), вносят горячий метанольный раствор адетата кортизо на (500 мг в 16 мл метанола) при энергичном перехге шп ванни.

Концентра ция исходного стсроида составляет

5 г/л среды. Трансформацию осуществляют при 28 С на качалке при 200 — 220 o6/пигт в течение 9 — 12 час. Ход реакции дегид рнроваI0 ния.контролируют методом хроматографии на тонкослойных пластинах Silufol UV 254 в системе бензол-ацетон (3: 1), а также ic помощью поляро гра фии. В полученной культуральной жидкости содержание ацетата преднизона составляет 90 — 92%, ацетата кортизона 3 — 4%, преднизона 4 — 5%, 20 -оксипроизводного преднизона 1 — 2% (ua исходное количест во а цетата кортизона). Выделение ацетата преднизона проводят периодической

2р экст ракцией. 500 мл культуральной жидкости трижды экстра гируют хлористым метиленом (по 250 мл), раст воритель отгоняют в вакууме, а о статок перекристаллиз оковывают из

43 мл а бсолютного изопропиловото спирта с

25 0,2 г активированного угля. Кристаллизацию про водят прои 0 в течение 16 час. Осадок отфильтровьввают, промывают 2 — 3 м г охлажденно го изопропилового спирта и сушат прн

100 С. Выход 2,01 г препарата с т.,пл. 237—

30 238 С (86% от теоретического количества), 376440

Составитель В. Таратута

Техред Т. Курилко

Редактор Т. Караиова

Корректор А. Степанов»

Заказ 1651/8 Изд. № 422 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Я-35, Раушская паб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Из латочно го раствора можно дополнительно выделить 0,07 г препарата. П р и м е,р,2, Культуру,,выращиваемую, как это описано в примере Il, через 28 час роста .разводят в 2 раза водопроводной водой и IBHocsIT раствор а|цетата кортизона в .горячем метаноль ном растворе из расчета 5 г/л среды, После транофо рма ции в тех же условиях в течение 15 — 18 час и обработки, анало гично описанной в примере 1, получают

2,34 г а цетата преднизона (84,2% от теоретического).

Пример 3. Исходную культуру хранят и выращивают, как это опи сано в примере 1.

Затем 0,5 г а цетата кортизона растворяют в

16 мл горячего метанола,и смешивают с

16 мл холодной, воды. Из полученной смеси от гоняют метанол под ва куумом и смешивают полученную водную .суспензию с культуральной жид костью. Трансформацию проводят в колбах емкостью 250 мл в условиях, описанных в примере 1, в течение 18 — 20 час.

300 мл культуралыной жидкости обрабатывают тремя порциями по О,5 мл хлороформа; а дальнейшую обработку хлороформенно го экстракта ведут, как это описано в пр имсре 1.

Получают 2,35 г ацетата преднизона (83% от

5 тео рети ческого) .

Предмет изобретения

ll. Способ получения ацетата Л -дегидрокортизо на путем микробиологичес кого превраще10 ния а цетата кортизона и выделения конечно го продукта известными методами, отличающийся тем, что, с |целью интенсификации процесса, трансформацию осуществляют .с помощью культуры MycobacteriIIm globiforme 193, вы15 ращенной,в присутствии индуктора ацетата кортизона, а исходный стероид вносят в количестве 5 г/л среды и более.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ацетат кортизона BHolcBT в виде,раствора в

20 горячем метаноле.

13. С пособ по п. 1, о1тличающийся тсм, что ацетат,кортизона |вносят в виде мелкодислсрсной водной суспензии.