Способ выращивания продуцентов] протеолитических ферментовt- ha t

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВйДЕТЕЛЬСТВУ

386ОО4

Союз Советскик

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 28.Х11.1971 (№ 1730365, 28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 14.V1,1973. Бюллетень № 26

Дата опубликования описания 24.IX.1973

М. Кл. С 12b 8, 14 поыитет по делаю изобретений и открытий

llpN Совете ббинистров

СССР

УДК 663.14(088.8) Авторы изобретения

Заявители

P С. Балтрушис, З.-И. Г. Бересневичюс и А. Ю. Лугаускене

Каунасский политехнический институт и Институт биохимии АН

Литовской ССР

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ П РОДУЦEHTOB I

ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам выращивания продуцентов протеолитических ферментов, Известен способ выращивания продуцентов протеолитических ферментов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфора и стимулятор роста.

В известном способе продуцируемые ферменты не обладают необходимой активностью, Для,повышения активности продуцируемых ферментов по предлагаемому способу в качестве стимулятора роста используют амид

N-(5-хлор-2-пиридил)-Р-алании.

Предлагаемый способ опробирован в лабораторных условиях.

Пример. В качестве источников продуцируемых ферментов используют культуры Bacillus mesentericus  — 64 и Bacillus mesentericus ПБ — 8.

Культуры выращивают в колбах емкостью

250 мл и 50 мл на полусинтетической питательной среде следующего состава, в г/л: крахмал 100 глюкоза 10 цитрат аммония, гидрат 30 однозамещенный фосфорнокислый калий 2 двузамещенный фосфорнокислый натрий 3 сернокислый магний 1,5 сернокислый кальций, гидрат 1,5 железо, сернокислое, закисное, гидрат 0,02

5 марганец сернокислый 0,00125 медь сернокислая 0,0075

-а-аминобензойная кислота 0,01

Крахмал подвергают гидролизу с помощью амилазы до .появления с йодом коричневой ок10 раски.

В качестве стимулятора роста берут амид

N- (5-хлор-2-пиридил) Р-алании в количестве

0,0001 — 0,01 вес. е е от питательной среды. Вы.ращивание проводят на качалках при 37 С в

15 течение 42 — 44 час при начальном рН 7,2. После выращивания рН определяют рН-метром

ЛПУ-О I.

Далее вес сухой биомассы при 105 С определяют общеизвестными способами: протеоли2о тическую активность по методу Ансона, модифицированному Куницом; специфическую активность на 1 г сухой биомассы; содержание белка по методу Лаури; фосфора по методу Фишке и Суборау, модифицированному

Лаури и Лопезом.

На каждую концентрацию стимулятора проводят по шесть опытов и берут средние арифметические значения полученных данных для культур Bacillus mesentericus  — 64 и Bacillus

3Q mesentericus ПБ — 8, Ç86Î04

Результаты испытаний приведены в табл. 1 и 2.

Применение амида N- (5-хлор-2-пиридил) + аланина в концентрациях 0,0001 — 0,01 в качестве стимулятора роста полусинтетической питательной среды повышает активность источников продуцируемых ферментов культур

Bacillus mesentericus  — 64 и Bacillus mesentericus ПБ — 8 на 110 — 566%.

Таблица 1

Протеолитическая активность (ПА) Вес сухой массы рН среды в конце опыта

Белок, мг/мл

Фосфор, 100 мл культуральной жидкости т/мл о контролю к контролю

1900

Таблица 2

Протеолнтическая активность (ПА) Вес сухой массы рН среды в конце опыта

Белок, мг/мл

Фосфор, 100 мл культуральной жидкости

-1/мл к контролю

% к контролю

120

Предмет изобретепн;1 ра и стимулятор роста, Отличающийся тем, что, с целью повышения активности продуцируемых ферментов, в качестве стимулятора роста используют амид N-(5-хлор-2-пиридил)10 р-алании.

Способ выращивания продуцентов протеолитических ферментов на питательной среде, содержащей источники углерода, азота, фосфоСоставитель А. Бражникова

Техред 3. Тараненко Корректоры: Л. Новожилова и Г. Запорожец

Редактор В. Блохина

3a ка з 2444/12 Изд. )Ч 1609 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прн Совете Ж!инистров СССР москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2

Количество амид N-(5-хлор-2-пиридил)-,. -аланина, об

0,0001

0,001

0,0015

0,0025

0,005

0,01

Контроль

Количество амид N-(5-хлор-2-пирндил)+аналина, о, 0,0001

0,001

0,0015

0,0025

0,01

Контроль

7,71

7,68

7,62

7,65

7,51

7,54

7,62

7,60

7,66

7,59

7,99

7,67

7,545 в 100 мл культуральной жидкости

0,947

0,847

0,734

0,951

0,682

0,871

0,836 в 100 мл культуральной жидкости

0,515

0,588

0,517

0,584

0,557

0,554

113

101,1

113

104

100

106

105

100,5

100

118

112

124

ПО

128

221

100

566

133,3

166

100

Специфическая активность, ;/мг

8,6

7,1

7,1

6,4

7,1

11,4

5,2

Специфическая активность, y/ìë

2,4

1,1

0,49

0,47

2,90

ПА сухой биомассы

2386

2208

3577

4852

2272

ПА сухой биомассы

612

297,0

308,2

359

216,6

2,620

3,000

3,250

3,880

3,400

3,660

3,600

2,800

3,210

3,325

3,825

4,100

543

548,3

592,5

615,0

548,0

554,0

570,0

595,0

620,0