Способ получения цитохрома bg

 

а..„..„.„„, O n Я С A H H E

Республик

ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельств", №

Заявлено 25.11.1971 (№ 1625823/31-16) :iL. Кл, А 6ik 17, 00 с присоединением заявки №

Приоритет

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Опубликовано 11.VI1.1973. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 21.XI.!973

Т(т 61 5 у ° ), ь 1 «с)6 (088.8) Авторы изобретения В. Я. Никитин, Л. Ф. Панченко, A. И. Арчаков и В. М. Девиченский

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦИТОХРОМА 8о

Йзобретснйе относится к химйко-фармацев-: тической промышленности, а именно к способам получения цитохрома В5.

Известен способ получения микросом из печени сульфатом аммония и центрифугированием до 20 000+g;

Однако этот способ имеет сложную технологию производства.

С целью упрощения технологии производства по предлагаемому способу после цснтри фугирования к надосадочной жидкости добавляют ацетон, а дальнейшую обработку ведут известным образом.

Приме р. 10 кг свежей печени крупно-рогатого скота измельчают в мясорубке и фарш гомогенизируют известным способом с 30 л

0,15 М KCI при 0 С.

Гомогенат центрифугируют при 10 000+g в течение 15 мин. Осадок отбрасывают. К супернатанту приливают при персмсшивании охлажденный ацетон (25% от объема супер атанта) и смесь центрифугируют при !

000;(д в течение 15 мин. Супернатант отбрасывают, осадок суспснзируют в 1000 мл

0,15 М КС! и диализуют против дистиллированной воды 20 час при 0 С.

После диализа в растворе определяют концентрацию белка и добавляют трппсин по

3 мг на каждые 100 мг белка. Смесь инкубируют 16 час., после чего в нее добавляют

5 сульфат аммония (55 г на каждые 100 мл раствора). Осадок, полученный после центрифугирования при 5000 (g 20 мин, отбрасывают. К супернатанту приливают 20%-ную трихлоруксусную кислоту (ТХУ) до рН 4,2.

10 Смесь центрифугируют прп 5000+g 15 мин и осадок растворяют в 250 мл 0,15 М КС1 и диализуют против дистиллированной воды

20 час. Диализат лиофилизуют.

Выход 500 л г цитохрома В5 с 1 кг печени.

Предмет изобретения

Способ получения цитохрома В„путем гомогенизацпи измельчен юй печени, цснтрифугирования гомогсната, отделения надосадоч20 ной жидкости с последующей дпализацией осадка, добавления трипспна, сульфата аммония, высушивания, orëè÷àþï èéñÿ тем, что, с целью упрощения технологии производства, к надосадочной жидкости добавляют ацетон

25 и дальнейшую обработку ведут известным образом.