Штамм 268 erwinia carotovora, продуцирующий l-аспарагиназу

 

! о латент но-тех н и чесиате бнбя! OT !(a « 1

О П :-Д Я вЂ” Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

40687 У

Сое3 советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 24.IX.1971 (№ 1701533/3.1-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 21.XI.1973. Бюллетень № 46

Дата опубликования описания 2.IV.1974

М. Кл. С 12d 13/00

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР оа делам нвооретений и открытий

УДК. 577.155.32(088.8) Авторы изобретения

Р. К. Озолинь, П. П. Гривинь, С. И. Аузан, P. И. Гвоздяк, В. П. Волкова и Л. М. Яковлева

Институт микробиологии им. А, Кирхенштейна и Институт микробиологии и вирусологии им. Д. К. Заболотного

Заявители

ШТАММ 268 ERWINIA CAROTOVORA, П РОДУ ЦИ РУЮ ЩИ и L-AC ПАРА ГИ НАЗУ

Изобретение относится к области микробиологии.

Предложен новый штамм 268 Erwinia

carotovora, продуцирующий 1 -аспарагиназу, характеризующийся тем, что представляет собой полиморфные палочки 0,6 — 0,9 2 — 4 мкм, концы закруглены, расположены попарно или небольшими цепочками, граммотрицательные, капсулы и споры не образует; на мясопептонном агаре колонии серые, просвечивающиеся в проходящем свете, неправильно круглой формы, мелкие колонии имеют приподнятый центр в виде колпачка, центр слабо уплотнен; на картофельном агаре с дрожжевым экстрактом колонии серовато-белые, слегка приподнятые с перламутровым блеском, края зазубрены, у молодых колоний центр возвышается, поверхность зернистая, колонии просвечивают; на бульоне Хоттингера равномерная муть с осадком и пленка; на глюкозе и манните слабо образует кислоту и газ, на лактозе и сахарозе образует кислоту без газа, мальтозу и сорбит не ферментирует, желатину разжижает медленно послойно, молоко слабо свертывает, нитраты восстанавливает до питритов, аммиак че образует, быстро разрушает ломтики картофеля и моркови, выход 1-аспарагиназы в полупроизводственных условиях составляет

10 000 — 13 000 МЕ/л культуральной жидкости с активностью от 4,0 до 4,5 МЕ/мг сухого веса клеток, т. е. 8 — 9 МЕ/мг белка.

Штамм бактерии Erwinia carotovora 268 получен путем селекции культуры, выделенной из растительных остатков кукурузы.

Предложенный штамм 268 при культивировании при 28 — 30 С в колбах на качалке с

180 об/мин образует L-аспарагиназу на средах, содержащих в качестве источника азота

10 пептон, гидролизат казенна, фосфат аммония; в качестве источника углерода — глюкозу, сахарозу, глицерин, цитрат натрия, аспарагин.

Пример 1. Посевной материал выращивают в течение 24 — 48 час на картофельном

15 агаре. Состав ферментационной среды (%):

Глюкоза 0,1

Гидролизат казеина 0,5

Дрожжевой экстракт 0,5

К НР04 0,3

20 Начальное значение рН 7,7. После 18 час культивирования удельная активность L-аспарагиназы 7,1 Me/мг белка, выход биомассы

1,55 г/л по сухому весу. При замене глюкозы на сахарозу удельная активность 1-аспарагн2s пазы составляет 6,3 Ме/мг белка, биомасса—

1,73 г/л. При замене глюкозы íà L-аспарагпн удельная активность 1-аспарагнназы достигает 12 МЕ/мг белка, выход биомассы 1,1 г/л.

В конце ферментации рН культуральной жидСоставитель С. Щенева

Техред Е. Борисова

Корректор В. Жолудева

Редактор К. Шанаурова

Заказ 786711 Изд. Мв 1026 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб., д. 475

Типография, пр. Сапунова, 2 кости двух первых сред 8,75, среды с L-acnaр а ги но м — 9,5.

Пример 2. Посевной материал, условия ферментации такие же, как в примере 1.

Состав ферментационной среды (% ):

Цитрат натрия 0,14

Пептон 2,0

Дрохкжевой экстракт 0,3

К2НР04 0,3

Удельная активность 1 -аспарагиназы составляет 9,0 ME/мг белка, выход биомассы

1,2 г/л.

1 -аспарагиназа, выделенная разрушением клеток прессом или толуолизацией, проявляет активность в широком диапазоне значений рН: от 3,7 до 10,2 и имеет оптимум действия при рН 7,25.

Предмет изобретения

Штамм 268 Erwinia carotovora продуцирующнй 1 -аспарагиназу, характеризующийся тем, что представляет собой полиморфные палочки

0,6 — 0,9 2 — 4 мкм, концы закругленные, располохкены попарно или небольшими цепочками, граммотрицательные, капсулы и споры йе образует; на мясопептонном агаре колонии серые, просвечивающиеся в проходяи1ем свете, неправильно круглой формы, мелкие колошш имеют приподнятый центр в виде колпачка, центр слабо уплотнен; на картофельном агаре с дрожжевым экстрактом колонии сероватобелые, слегка приподнятые с перламутровым блеском, края зазубрены, у молодых колоний

10 центр возвышается, поверхность зернистая, колонии просвечивают; на бульоне Хоттингера равномерная муть с осадком и пленка; на глюкозе и манните слабо образует кислоту и газ, на лактозе и сахарозе образует кислотч

15 без газа, мальтозу и сорбит не ферментирует, желатину разжижает медленно послойно, молоко слабо свертывает, нитраты восстанавливает до нитритов, аммиак не образует, быстро разрушает ломтики картофеля и моркови, вы20 ход 1 -аспарагиназы в полупроизводственных условиях составляет 10000 †130 МЕ/л культуральной жидкости с активностью от 4,0 до

4,5 МЕ/мг сухого веса клеток, т. е. 8 — 9 МЕ/мг белка.