Способ получения 6-аминопенициллановой

 

ОП НИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимый от патента ¹â€”

М.Кл. С 12d 13/06

Заявлено 30.Х.1968 (№ 1279808/31-16)

Приоритет 31.Х.1967, № 679557, CLUA

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий

УД К 615.779.932 (088.8) Опубликовано ЗО.Х1.1973. Бюллетень № 48

Дата опубликования описания 17.VII.1974

Автор изобретения

Иностранец

Мильтон Харви Вейнер (Соединенные Штаты Америки) Иностранная фирма

«Бристоль — Майерз Компани» (Соединенные Штаты Америки) Заявитсль

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 6-АМИНОП ЕН И ЦИЛЛА НОВОЙ

КИСЛОТЫ

Изобретение огносится к области медицины, в частности к производству антибиотиков.

Известен способ получения 6-аминопенициллановой кислоты, заключающийся в том, что раствор пенициллина, например пепицилл3ьна V, ш3кубируют с культурой Streptomyces

cavendu1ae прп температуре 25 — 60 С и рН

6,0 — 11,0 в течение 2 — 24 час с последующим выделением целевого продукта.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта и сокращение длительности процесса его получения.

Достигается это тем, что ферментативное расщепление пенициллина осуществляют в присутствии гидразида, например бензгидразида, взятого в количестве 0,5 — 2,0 3!оля на

1 3!оль субстрата.

Пример 1. Приготовление клеток Streptomyces cavendulae для гидролиза амидазы.

Культуру Streptomyces cavcndulae А.Т.С.С.

21138 засевают в сосуд с питательной средой, содержащеи (%): сахарозы 2,5, фармамедиа

l,5, кукурузной муки 1,0, сульфата аммония

0,3, карбоната кальция 0,2. Культуру выращии;i!or в течение 24 — -48 час. Затем 1 л выращенной культуры Str. cavendulae засевают в

9 — )0 л среды, содержащей (/o): нутрисой 3,0, фа))маluед33а 0,5, хлористого 3lаTpия 0,5, карбо ната кальция 0,3, цсрелозы 5,0, сахарозы 2,0.

Культуру выращивают в течение 4 — 5 днеи, 2 мицелий собирают фильтрованием пли центрифугированием, промывают и затем используют для энзпмятического гидролпза пенициллина.

Пример 2. Получение 6-аминопенициллановой кислоты из 2/o-ного пенициллина V.

Промытый мицелпй, отфильтрованный из

600,3!л культуральной жидкости, полученной по примеру 1, суспендируют в 1 л дистиллированной воды, рН доводят до 7 и добавляют

20 г пенициллина калия и 10 г 1%-ного бензгидразида. Температуру суспензии поддерживают на уровне 35 С. Добавлением гидроокиси натрия сохраняют первоначальное значение

15 рН (7). Пробы берут периодически и определяют хроматографических! способом. Максимальный выход 6 — АПК получают между 2—

4 час; он составляет 90 /o и более.

Пример 3. Полученпс 6-аминопенициллановой кислоты из пенициллина G.

Промытый мпцслий, полученный из 500 3!л кулыуральной жидкости по сп! собу, описанному в 33рнмсрс ), cycncllдиру3от l3 л дистиллированной воды, )3)-1 доводят до 7, добавляют 20 г пенициллина и 20 г 2%-ного бензидралиля. Выход 6-АПК составляет около 32%, »олученных примерно за 2 — 6 час.

Тот же самый опыт, проведенный без бензгидразида, дает 10% выхода 6-АПК. зо Пример 4. Получение 6-ав3инопет3ициЛ409427

Предмет изобретения

Составитель С. Щеиева

Текрец Г. Васильева

Корректор Е. Зимина

Редактор Н. Спиридонова

Заказ 1771 Изд. М 1838 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Загорская типография

3 лановой кислоты из пенициллина G при использовании EscJ1erichia coli и 1 /о-ного бензгидразида.

Берут 500 мл густой суспензии клеток

Е. coli АТСС 11105 в фосфатном буферном

J)QcTBope, рН 7.5 доводят до 8,5 раствором карбоната натрия. Добавляют 1 мг% лизозима, 0,5 /О дезоксихолата натрия, 0,01 моля этилен-диаминтетраацетата натрия и 0,4 /О толуола, Далее суспензию выдерживают при температуре 37 C в течение 2 час, чтобы вызвать лизис бактериальных клеток, после чего рН доводят опять до 7,5 при помощи НСl. Остаточные клетки, не охваченные действием лизиса, и другие нерастворимые остатки отделяют центрифугнрованием. Жидкий экстракт разбавляют дистиллированной водой до 1 л, добавляют

20 г пенициллина G калия и 10 г 1 %-ного бензгидразида. Температуру поддерживают около

37 С. Максимальный выход б-АПК вЂ” 90О/о и более, получеиный за 1 — 2 час. Феноксиацетилбензгидразид был выделен и опознан, Пример 5. Получение б-аминопенициллановой кислоты из 8 /о-ного пенициллина V.

Промытый мицелий, полученный из 500 мл культуральной жидкости по способу, описанному в примере 1, суспендируют в 1 л дистиллированной воды, рН доводят до 8,2. Затем добавляют 80 г пенициллина V калия и 30 .

3 /о-ного бензгидразида. Температуру поддергкивают на уровне 40 С при перемешивании.

Пробы периодически отбирают и анализируют хроматографическнм способом. Максимальный выход 6-АПК получают в течение 4—

6 час, он составляет 75 /о.

Пример б. Получение 6-аминопенициллановой кислоты из пенициллина V и 2 /о-ного

4-метилбензгидразида.

Опыт проводят как в примере 5, с той раз5 ницей, что 30 г бензгидразида заменяют 20 г

4-метилбензгидразида. Выход 6-АПК вЂ” 510/o, Затем вместо 80 г пенициллина V и 30 г бензгидразида (см. пример 5) используют

120 г пенициллина V и 20 г 4-метилбензгидра10 зида. Выход 6-АПК 35 /о.

Пример 7. Получение 6-аминопепициллановой кислоты из пенициллина V и 2 /о-ного салицилгидразида.

Опыт проводят как в примере 5 с тем ис15 ключснием, что 80 г пенициллина V и 30 г бензгидразида, использованных в этом примере, заменяют 120 г пенициллина V и 20 г 2 /О-ного сачицилгидразида. Получают 51 /в 6-ARK.

Способ получения 6-аминопенициллановой кислоты путем ферментативного расщепления пенициллина в водной среде при комнатной температуре или при нагревании при рН 6,0 ——

1 J,0 в течение 2 — 24 час с последующим выде30 лснием целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и сокращения длительности процесса, расщепление осуществляют в присутствии гидразида, например бензгидразида, взятого в

35 количестве 0,5 — 2,0 моля на 1 моль субстрата.