Способ определения содержания амилозы в полисахариде

 

485277

Н И

ОП ИСЛ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства 425105 (22) Заявлено 26.06.72 (21) 1801645/28-13 с присоединением заявки № (51) M. Кл. G Oln 33/10

С 13l 1/08

Государственный комитет (32) Приоритет

Опубликовано 30.12.74. Бюллетень ¹ 48

Совета Министров СССР оо делам изобретений (53) УДК 664.22/27 (088.8) и открытий

Дата опубликования описания 12.02.75 (72) Авторы изобретения

В. И. Деулин и И. Г. Вилутис (71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт крахмалопродуктов (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АМИЛОЗЫ

В ПОЛИСАХАРИДЕ

Изобретение относится к крахмало-паточной промышленности.

Известен способ определения содержания амилозы в полисахариде по авт. св. 425105, включающий растворение полисахарида, смешивание полисахарида с йодйодидным раствором с получением раствора йодполисахаридного комплекса при нормированных концентрациях йода и йодида (например, содержащего 0,5 — 3 мг полисахарида в 100 мл 0,001 н. йода в 0,1 н. йодида калия), колориметрирование полученного раствора при длинах волн около 600 и около 500 нм и определение содержания амилозы по отношению оптической плотности при большей длине волны и оптической плотности при меньшей длине волны.

При этом для каждого вида крахмала необходимо строить индивидуальную калибровочную кривую.

Цель изобретения — повысить точность определения путем предотвращения влияния на результаты анализа природных свойств крахмалов.

Это достигается тем, что анализируемый полисахарид перед смешиванием с йодом и йодидом подвергают кислотному гидролизу при рН менее 2, температуре 20 — 50 С в течение 15 — 60 минут.

Пример 1. 2 — 10 мг кукурузного крахмала на кончике ножа вводят в пробирку, суспензируют примерно в 3 мл дистиллированной воды, добавляют при перемешивании около 3 мл 2 н. гидроокиси натрия, выдерживают раствор в течение 1 час при комнатной темпе5 ратуре для крейстерпзацип н нейтрализуют

1 н. соляной кислотой.

Затем осуществляют гидролиз пробы. Вводят необходимый избыток 1 н НС1 до децинормальной концентрации ее в растворе. Ра10 створ термостатируют 20 мин при температуре 50 С и охлаждают, выливая в два объема дистиллированной воды.

В мерную колбу на 50мл вводят 5мл 0,01 н. йода в 1 н. йодиде калия, 5 мл 1 н. соляной

15 кислоты, примерно 20 мл воды и при перемешивании приливают раствор крахмала до достижения плотной сине-зеленой окраски. Колбу доводят до метки, и полученный измеряемый раствор перед колориметрированием

20 10 мин выдерживают при комнатной температуре.

Стандартный раствор готовят разбавлением до 100 мл смеси 10 мл 0,01 н. йода в 1 н.

25 йодиде калия с 10 мл 1 н. соляной кислоты.

В прямоугольную кювету длиной 20 мм фотоэлектроколориметра (ФЭК-56) заливают измеряемый раствор и по отношению к воде определяют его оптическую плотность Д> со

30 светофильтром № 5 (максимум пропускания

455277

0,92

0,73

0,59

0,5 0,43

0,405 0,31

0,38

Д7

0,98

0,715

0,54

0,245

0 8 1 035 1 27 1 41 1 51 1 6 1 68 1 76 2 0

Редактор А. Купрякова

Корректор Н. Лебедева

Техр ед Г. Дворина

Подписное

Заказ 182/19

Изд. № 1996

Тираж 651

Сапунова, 2

Типография, пр.

3 при 490 нм), затем оптическую плотность Дт со светофильтром № 7 (максимум пропускания при 582 нм) .

Из кюветы отбира.от 2 — 3 мл измеряемого раствора, возмещают отобранну1о часть примерно таким же объемом стандартного растНа миллиметровой бумаге строят график, откладывая по оси ординат значения Дт, а по оси абсцисс значения Д„.

Через нанесенные на графике точки проводят прямую и определяют усредненное значеСодержание амилозы, % 0 10 20 30

Полученное значение Ид = 1,37 соответствует содержанию 26,5% амилозы в анализируемом образце кукурузного крахмала. При идентичных анализах высокоамилозного кукурузного, пшеничного, картофельного и рисоaoro крахмалов получают значения Ид соответственно 1,63; 1,35; 1,31 и 1,25 соответствующие содержанию амилозы, в полисахаридах

54; 25; 22 и 19%, что согласуется с данными, полученными другими методами, основанными на индивидуальной калибровке.

Пример 2. Около 10 мг кукурузного крахмала заливают, примерно, 5 мл 0,5 н НС1 и термостатируют 30 мин при температуре

50 С (гидролиз), разбавляют суспензию водой, примерно, до 25 мл, определяют осадок центрифугированием, суспензируют осадок, примерно, в 3 мл воды, растворяют (клейстеризуют) добавлением, примерно, 3 мл 2 н

NaOH, выдерживают в течение 1 часа при комнатной температуре, нейтрализуют 1 н

HCl и разбавляют, примерно, до 20 мл.

Далее полученный раствор анализируют, как в примере 1, получая И„= 1,36, соответствующее содержанию амилозы 26%.

При идентичных анализах высокоамилозного кукурузного, пшеничного, картофельного и рисового крахмалов получают соответственно значения Ид 1,62; 1,38; 1,31 и 1,26, соответствующие содержанию амилозы 52,5; 27;

22 и 19 5%.

Пример 3. 5 — 10 мг крахмала высокоамилозной кукурузы на кончике ножа вводят в пробирку и подвергают гидролизу и клейстеризации. Для этого добавляют 4 мл соляной кислоты (1-1С1) с уд. вес. 1,11 при комнатной температуре в течение 15 мин, Раствор

35 вора, перемешивают содержимое стеклянной палочкой и колориметрируют, получая очередную пару значений Д5 и Дт.

Значения оптических плотностей для последовательных разбавлений измеряемого раствора: ние оптических плотностей Ид как тангенс угла наклона прямой к оси абсцисс (И„= 1,37).

Анализируя полисахариды известного состава получают универсальную калибровочную кривую

40 50 60 70 100 разбавляют примерно, 30 мл дистиллированной воды и анализируют, как в примере 1, но без добавления 1 н НС1 в измеряемый раствор, получая значение Ид = 1,64, соответствующее содержанию амилозы 55%. При идентичных анализах кукурузного, пшеничного, картофельного, рисового, а также смеси: 3 части высокоамилозного и 7 частей амилопектинового крахмала получают значения Ид соответственно 1,37; 1,36; 1,30; 1,26 и 1,18, соответствующие содержанию амилозы 26,5; 26;

21,5; 19,5 и 16%.

Пример 4. Приблизительно 10 мг эндосперма, высверленного из одного зерна высокоамилозной кукурузы, подвергают гидролизу и клейстеризации, примерно, в 3 мл соляной кислоты с уд. вес, 1,11 при комнатной температуре в течение 15 минут, разбавляют водой, примерно, до 25 мл, осаждают белок добавлением 5 мл 0,1%-ной фосфорно-вольфрамовой кислоты, отделяют примеси центрифугированием и анализируют раствор, как в примере 3, получая Ид = 1,62, что соответствует содержанию амилозы 52,5%.

Предмет изобретения

Способ определения содержания амилозы в полисахариде по авт. св. 425105, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности определения путем предотвращения влияния на результаты анализа природных свойств крахмалов, анализируемый полисахарид перед смешиванием с йодом и йодидом подвергают кислотному гидролизу при рН менее 2, температуре 20 — 50 С в течение 15—

60 мин.