Штамм с1-продуцент -аспарагиназы

 

«.ч

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (ii) 46О748

Союз Советскл

Социалистических

Республик (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 27.03.73 (21) 1898833/28-13 с присоединением ".аявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.08.75. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 28.10.75 (51) М. Кл. С 12d 13/10

С 12k 3/00

Государственный комитетСовета Министров СССР по селам изобретений и.открытий (53) УДК 577.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

Е. И. Голуб, М. М. Гараев, H. Б. Романова, Г. И. Бурд и T. H. Большакова (71) Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт антибиотиков (54) БПАММ ESCHERICHIA COLI CI — ПРОДУЦЕНТ

1;АСПАРАГИ НАЗЫ

Изобретение относится к медицинской и ферментной промышленности и направлено на получение активных штаммов — продуцентов

I -аспарагиназы.

Известны штаммы Escherichia coli CI-inpoдуценты 1 -аспарагиназы.

Ферментативная активность этих штаммов составляет около 2 международных единиц (МЕ) L-аспарагиназы на 1 мг сухого веществ а б а ктер ий.

Предлагаемый штамм отличается от известных морфологическими и физиологическими свойствами, обладает более высоким уровнем биосинтеза фермента и характеризуется повышенной устойчивостью ситеза 1 -аспарагиназы к наличию углеводов в питательной среде.

Штамм Е. coli CI образует в среднем 3,4—

4,0 МЕ/мг 1-аспарагиназы.

Штамм имеет следующую характеристику.

Морфология.

Палочки размером 1Х2 мкм, грамотрицательны.

Физиологические признаки.

Колонии, образуемые при культивировании в течение 18 час при 37 С: а) на 1,5%-ной мясо-пептонной агаризованной среде выпуклые, матовые, неправильной округлой формы с неоформленным центром; б) на агаризованной среде, содержащей кукурузный экстракт, колонии конусовидные, матовые, неправильной округлой формы в диаметре 2 мм; в) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2% глюкозы, ко5 лонии выпуклые, блестящие, неправильной округлой формы в диаметре 1 мм; г) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2% глицерина, колонии матовые, неправильной округлой форlo мы без ободка в диаметре 0,8 мм.

Штамм образует индол, дает отрицательную реакцию фогес-Проскауера.

Отношение к источнику углерода.

15 Усваивает глюкозу, фруктозу, галактозу, лактозу, арабинозу, мальтозу, глицерин. Не усваивает сахарозу, нитрат и маннит.

Факультативный аэроб. Оптимальная температура роста 37 — 42 С.

20 Пример использования данного штамма для получения L-аспарагиназы.

Культивирование в лабораторных условиях проводят в колбах емкостью 750 мл, содержащих 100 мл ферментационной среды, в тече25 ние 18 — 20 час на подвесной качалке, делающей 270 об/мин.

Ферментационная среда состоит из 4% (по сухому весу) кукурузного экстракта, содержащего меньше 0,2% углеводов, с добавкой 0,1%

30 сульфата аммония.

460748

Š— аспарагиназная активность

Данные лабораторных и полупроизводственных испытаний

Ме/мг

Ме/мл

2,2

3,6

2,1

4,0

11,0

19,0

9,0

19,0 исходный штамм штамм С! исходный штамм

Штамм CI

Составитель Л. Минеева

Техред 3. Тараненко

Корректор Л. Котова

Редактор Л. Василькова

Заказ 2587,3 Изд. № 1675 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Засев производят из расчета 0,04 мг клеток (по сухому весу) на 1 мл питательной среды.

Культивирование в полупроизводственных условиях ведут в ферментерах емкостью 100 л на той же ферментационной среде.

В таблице показано сравнение L-аспарагиназной активности исходного штамма и штамма Cl.

В отличие от исходных штаммов предлагаемый штамм обладает большей активностью.

В отличие от всех других, описанных в литературе штаммов Е. coli, продуцентов 1-аспарагиназы, штамм CI имеет то преимущество, что является более устойчивым к репрессорному влиянию глюкозы на биосинтез 1-аспарагиназы.

Предмет изобретения

Штамм Escherichia coli CI-продуцент I -аспарагиназы.

Штамм хранится в музее культур ВНИИА за Хв 1527.

Морфология.

5 Палочки размером 1 2 мкм, грамотрицательны.

Физиологические признаки.

Колонии, образуемые при культивировании в течение 18 час при 37 С:

10 а) на 1,5% -ной мясо-пептонной агаризованной среде выпуклые, матовые, неправильной округлой формы с неоформленным центром; б) на агаризованной среде, содержащей кукурузный экстракт, колонии конусовидные, 15 матовые, неправильной округлой формы в диаметре 2 мм; в) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2 глюкозы, колонии выпуклые, блестящие, неправильной

20 округлой формы в диаметре 1 мм;

r) на агаризованной среде, содержащей в качестве источника углерода 2% глицерина, колонии матовые, неправильной округлой формы без ободка в диаметре 0,8 мм.

Штамм образует индол, дает отрицательную реакцию фогес-Проскауера.

Отношение к источнику углерода.

Усваивает глюкозу, фруктозу, галактозу, 30 лактозу, арабинозу, мальтозу, глицерин. Не усваивает сахарозу, цитрат и маннит.

Факультативный аэроб. Оптимальная температура роста 37 — 42 С.