Способ получения гормона роста из гипофизов человека

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕПДЬСТВУ

ЬМ4, . т-е чр. Ц, (11) 463449

Союз Советских

Социалистических

Республик, 1 (61) Дополнительное к авт. свид-ay— (22) Заявлено 06.06,73(21) 1946800/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет(43) Опубликовано 25 08 у у Бюллетень №31

2 (51) М. Кл, А 61 К 37/32

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изаоретений и открытий (53) УДК 615.7,739 (088,8) (46) Дата опубликования описания 28,09,т7

А. Ф. Лазарев (72) Автор изобретения

Московский научно-исследовательский онкологический институт им. П, А, Герцена (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГОРМОНА РОСТА

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к получению эндокринных препаратов, Известен способ получения гормона роста (соматотропного гормона, СТГ) из гипофи- 5 зов человека, заключаюшийся в том, что гипофизы высушивают и обезжиривают ацетоном, измельчают, экстрагируют ледяной уко сусной кислотой при 70 С, фильтруют, белковые примеси осаждают ацетоном, а сырец 10

СТГ выделяют из центрифугата серным эфиром, затем растворяют в 0,1 н уксусной . кислоте, сорбируют на оксицеллюлозе, фильтруют, фильтрат подшелачивают крепким раствором КОН, подкисляют до рН 8,5, центри- 1б фугируют, удаляя образовавшийся осадок, а гормон выделяют из центрифугата этанолом, .Однако известный способ частично денатурирует гормон, не обеспечивает его чистоту и является относительно сложным. 20

С целью упрощения способа и повышения степени чистоты целевого продукта экстракцию осушествляют разбавленной уксусной о кислотой, например 2 М, при 4О-13 С, а очистку проводят осаждением сырца rnMaxo- 25

IЖ цдсрс.асора рр,и .,», Взамен ранее изданиощ,,„ тропного гормона сульфатом аммония при

1,8-2,2% насышения, промывкой сырца дистиллированнойводой, растворением его в

0,15-0,2 М щелочи, например едком кали, подкислением раствора до рН 8,0-8,2, разо мешиванием при 37-39 С в течение приблизительно 1,5 ч, дальнейшим подкислением до рН 4,8-5, 2, Способ осушествляют следуюшим образом, 100 г высушенных ацетоном человеческих гинофизов (или 250 г замороженных о при — 20 С) измельчают и размешивают о

1 5 ч при 40-43 С с 2000 мл 2 М уксусной кислоты, затем центрифугируют при комнатной температуре 0,5 ч при 6000 об/мин, Гипофизарный остаток вновь экстрагируют в

1500 мл той же кислоты и в тех же условиях в течение 1 ч.

К объединенному экстракту медленно при перемешивании добавляют полунасышенный раствор сернокислого аммония до 1,8-2,2 С его насыщения и смесь выдерживают при о

4-8 С до полного формирования осадка. Образовавшийся осадок сырца СТГ собира.: т центрифугированием и смешивают с 2000 мл постепенно добавляемой дистиллированной воды, а затем центрифугируют 45 мин при

6000 об/м и центрцфугат отбрасывают, Промывку повторяют, уменьшая количество воды до 1500 мл.

Промытый осадок сырца СТГ суспендируют в 450 мл воды и к суспензии добавляют при перемешивании 50 мл 1,5 М КОН, При этом осадок должен полнос.гью раствориться, в противном случае количество добавляемой щелочи немного увеличивают.

Раствор сразу же затем начинают подкислять, приливая понемногу 2М уксусную кислоту до рН 8,0 — 8,2, При этом рН и тем- пературе 37-39 С слегка мутный раствор медленно перемешивают в течение 1,5 ч, а затем продолжают подкислять уже оез подогрева до РН 4,8 — 5,2, проверяя полноту образования осадка. Смесь выдерживают о

2-3 ч при 4 — 8 С и центрифугируют. Оса— док переосаждают из 400 мл водного раствора (рН 8,0 — 8,2), повтоояя подкисление дорН 4,8 -5,2, Бентрифугаты от основного осаждения и

25 переосаждения осадка обьединяют и после нейтрализации диализируют против нескольких смен дистиллированной воды в течение

10-12 ч, Лиализат, который должен быть абсолютно прозрачным, охлаждают и медлен- ag но смешивают при интенсивном охлаждении с равным объемом постепенно добавляемого холодного этилового спирта. Через 1 ч добавление спирта заканчивают, однако, размешивание продолжают на холоду еще 30 м у и смесь выдерживают в холодильнике до полного формирования осадка, Образовавшийся осадок высокоактивного, низкомолекулярного СТГ собирают центрифугированием при охлаждении, промывают холодным спиртом, а затем ацетоном и досушивают в вакуумэксикаторе. Выделение СТГ спиртом можно заменить лиофилизацией, подвергнутого стерильной фильтрации диализата.

Выход готового препарата СТГ составляет в среднем до 4% от веса гипофизарного высушенного ацетоном порошка при условии, если гипофизы были свежими и хранились в высушенном состоянии в холодильнике в герметической упаковке не более

6 месяцев, Выход из замороженных гипофизов до 8%, Формула изобретения

Способ, получения гормона роста путем экстракции измельченного гипофиза человека уксусной кислотой, освобождения экстракта от примесей и выделения целевого продукта из фильтрата„ о т л и ч а ю щ и йс я тем, что,, с целью упрощения способа и повышения сгепени чистоты целевого продукта. экстракцию осуществлякгг разбавленной уксусной кислотой, например 2М, при а

40-43 С, а очистку проводят осаждением сырца гормона сульфатом аммония при 1,82,2 насыщения, промывкой сырца дистиллироьанной водой, растворением в 0,150,2 М щелочи, например едком кали, подкислением раствора до рН 8,0-8,2, размешиванием при 37 — 3 9 С в течение приблизительно 1,5 ч, дальнейшим подкислением до рН 4„8 — 5,2, Составитель С. Малютина

Редактор П, Горькова Техред 3. Фанта Корректор И. Гоксич

Заказ 3134/55 Тираж 6 77 Подписное

ПНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проегтчая, 4