И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 05 05 72 (23) 1776551/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано05 08.77Бюллетеиь F9 (4Ь) Дата опубликования описания 12.09.77 (51) М. Кл.

С 12 3 9/22

Гооуааротаенный комитет йввта Инннотроа СССР но делам нзобретеннй н открмтнй (53) УДК 615.779.9 (088.8) Г. Ф. Гаузе, Т. П. Преображенская, Л. П. Терехова, Л. П. Иваницкая, Л. B. Макухо, Г. В. Кочеткова, Т. П. Коробкова, М. Г. Бражникова, Н. В. Константинова, А. С. Мезенцев, И. В. Толстых, И. А. Гришин, Л. С; Покрас, В. А. Шорин и С. П. Шаповалова (72) Авторы изобретении

Институт по изысканию новых антибиотиков АМН СССР (7l) Заявитель (54} ШТАММ 2739 Йосси Й1а аюаОссе вр.ъоч;ПРОДУЦЕНТ РИФАМИЦИНА В

Изобретение относится к производству ан тибиотиков.

Предложен новый ранее в литературе не

Ьпт санный штамм 2739 Йосо1гд1се a(sjat1ся ар. пОО.) продуцируюший рифамицин В, харак-- 5 териэу|ошийся тем, что на минеральной среде № 1 образует белый скудный воздушный мицелий и бесцветный субстратный мицелий, гифы воздушного мицелия распадаются по всей длине на продолговатые споры с гладкой поверхностью, на органической среде % 2 воздушного мицелия нет, субстратный мипелий ярко-оранжевый, среда не окрашена, рост хороший; на среде Чапека образует хорошо развитый мицелий розоватога цвета, субст- l6 ратный мицелий ярко-красный до вишневого, окраска субстратного мицелия обусловлена образованием красного пигмента, пигмент в среду не проникает; на среде CP-1 Красильникова, глюкозо-аспарагиновом" агаре и сре- 20 де Линденбайна образует розоватый воздушный мицелий и от оранжевого до ярко-крас:ного цвета субстратный мицелий, среда не окрашена ) на среде Треснера-Кореняко образует белый скудный воздушный мицелий и ЗО темно-вишневый субстратный мицелий, пигментт среду не окр ливает; меланина не образует; усваивает фруктоэу, гьлактоэу, глиперин, сахарозу, рафинозу, ксилоэу, арабинозу, инозит, рамнозу, маннит и не.усваивает целлюлозу; гидролизаты цельных клеток содержат меэо-циамииопимелииовую кислоту, арабиноэу и галактозу; образует до 400 мквМл антибиотика, Штамм 2739 Nocavgsa оыцОса sp поо; выделен из почвы и имеет следующие особеннос ти прч выращивании иа различных агаровых сре» цах при 28 С в течение 7-21 дней. Определение цвета субстратного мипелия проводят по шкале пветов Бондарпева и по, шкале Праузера, а окраски воздушного мицелия - по шкале Треснера.

Минеральная cpella N 1. Воздутпный мипелий тонкий, белый. Гяфы воздушного мицелия по всей длине распадаются на продолговатые споры с гладкой поверхностью. Субстратный мицелий беспветный; при росте на свету от оранжевого go вишневого. Среду не окраши» вает. Рост скудный.

4811 98

Ужг. тип., з. 763-77 г ., т. 2500, Органическая среда № 2. Воздушного мицелия нет. Субстратный мицелий ярко вЂ” оранжевый. Среда не окрашена. Рост хороший.

Среда Чапека. Воздушный мицелий бельф до розоватого, хорошо развит. С "бстрятный ми- 5 целий ярко-красный ао ви 1невого. Окраска субстратного мицелия обусловлена образоЙанием красно|о пигмента, который экстрагируется из мицегп9я ацетоном. Среда не окрашена. Рост обильный.

Среда СР-1 Красильникова и глккозоаспарагиновая среда. Воздушный мицелий белый по светло-розоватого. Субстратный мицелий от оранжевого по ярко-красного. Среда не окрашена. Рост хорошчй.

Овсяная среда. Воздушный мицелий белый. Субстратный мицелий оранжево-красный, Срепа не окрашена. Рост умеренный.

Среда Линденбайна, Воздушный мицелий кремово-розовый. Субстратный мицелий ярко 20 вишневый. Среда не окрашена. Рост хороший.

Среда Треснера-Кореняко, Воздушный, мицелий белый, скудный. Суостратный мицелий темно-вишневый. Среда не окрашена.

Рост хороший. 25

Среда Змерсона. Воздушного мицелия нет .

Субстратный мицелий желтовато-оранжевь1й..

Среда не окрашена. Рост умеренный.

Картофельный агар. Воздушного мицелия нет. Субстратный мицелий желтоватый, Сре- 30 да не окрашена. Рост умереннь й.

Среда с пептоном и лимонно-кислым >келезом. Меланина не образует.

Предложеннь и штамм хорошо усваивает фруктозу, глюкозу, галактозу, глицерин, са-, 35 ! 1 харозу, рафинозу, ксилозу, арабинозу, инозит рамнозу, маннит; не усваивает целлюлозу

11одавляет рост Sfc9phy>@coccus с и evs 209р;

Вас.m co9des Я; Вас.sub(9)9s Щ; 5агсл99а )99$

Гидролизаты целых клеток содержат мезо-диеминопимелиновую кислоту, арабинозу и гулака тозу.

Для получения антибидтика рифамицина из культуральной жидкости штамм 2739 выращивают глубинным методом на среде, содер- 45 жащей коМпоненты в следующих соотношениях, вес.%:

Соевая мука 1,5

Глицерин 3

Хлористый натрий 0,2 50

Карбонат кальция, 0,5

Медина л 0,1

Кашалотовый жир . 0,1

Вода по 100 мл.

Посевной мицелий выращивают в течение, 55

24 ч. ив жидкой питательной среде состава,% .

Перевар Хоттингера 3 по объему (28вЂ”

30 мг% ам79нного азота)

Глюкоза

rje!ITCH 0,5 60

Хлористы". натрий 0Я

Карбонат кальция 0,3

Вода Водопроводная

Максимальное накопление антибиотика в культуральной жидкости происходит на 5-6 сутки культивирования при 28-30 С и постигает 400 мкг/мл рифамицина "В".

Выпеляют рифамицин "В из культуральной жидкости следующим образом. Культуральную жидкость отфильтровывают от мицелия.

Натнвный раствор подкисляют до рН 4, анти- биотик экстрагируют с метиленхлоридом.

На первую экстракцию берут 0,1 часть, на вторую и на третью по 0,05 части по отношению к объему нативного раствора. Первый и второй экстракты объединяют. Третьим экстракч ом проводят вторичную экстракцию нативного раствора следующей ферментации.

Из метиленхлоридного экстракта антибиотик. переводят в 0,1 M фосфвтный буферный рас- твор с рН 7,0-7,5, содержаший 0,5% аскорбиновой кислоты. Реэкстракцию проводят 3

paad. На каждую операцию берут по 0,1 части от объема метиленхлоридного экстракта.

Все три водные реэкстракты объединяют, добавляют 5% (по отношению к объему реэкстракта) бутилового спирта, доводят рН раствора до 4,0, и антибиотик снова экстрагируют метиленхлорипом 3 раза. На первую экстгакцию берут 1 /2 объема, на вторую и третью по 1/4 объема реэкстоакта. Метиленхлоридные экстракты объединяют, концентрируют в вакууме при +40 С в 25-50 раз, и раствор о оставляют при 0-5 С. Через несколько часов выпадает кристалический рифамицин В. Kpucl таллы отфильтровывают, промывают этилацетатом. Рифамицин В путем окисления азотистой кислотой превращают в рифамицин

0. Затем рифамицин О гидролизуют соляной кислотой и получают рифамицин 5 . Рифамицин 5 востанавгп9вают аскорбиновой кислотой в рифамицин SV, из которого добавлением натриевой щелочи получают препарат натриевой соли рифа:",ицина ьу !

Формула изобретения

Штамм 2739 Мбссцч79о9 09ь9сйлсс9 sp, 9909P:вЂ” цродуцент рифамицина В,характеризующийся тем, что на минеральной среде ¹ 1 образует бе» лый скудный воздушный мицелий и бесцветный субстрвтный мицелий, гкфу воздушного мицелия распадаются цо всей длине иа продолговатые споры с гладкой поверхностью; нв органической среде ¹ 2 воздушного мицелия9 нет, субстратный мицелий ярко-оранжевый, среда не окрашена, рост хороший; на среде

Чапека образует хорошо развитый воздушный мицелий розоватого цвета, субстратный ми4811 98

Составитель С. Щенева

РедактоР Л. ЕмельЯнова ТехРед О. Луговая Корректор C. %meme

Заказ 2849/47 Тираж 541 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Ф4 целий ярко-красный до вишневого, окраска субстратного мицелия обусловлена образо-! ванием красного пигмента, пигмент в среду не проникает; на среде CP-1 Красильникова, глюкозо- спарагйновом агаре и среде Лин( денбайна образует розоватый воздушный мицелий и от оранжевого до ярко-красного цвета субстратный мицелий, среда не окрашена; на среде Треснера-Кореняко образует белый

1О скудный воздушный мицелий и темно-вишневый субстратный мнцелий, пигмент среду не окрашивает; меланина не образует; усваивает фруктозу, галактозу, глицерин, сахарозу, рафинозу, ксилозу, арабиноэу, инозит, рамноэу, маннит и не усваивает целлюлозу; гндролизаты цельных клеток содержат мезо-диаминопимелнновую кислоту, арабцнозу и галактозу; образует до 400 мкг/мл антибиотика.