Способ получения гидрокортизона и ацетата кортизона

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 494382

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено I3 I2 73 (21)I977208/28-I3 (51) М. Кл. С 07с I67/08

С I2* I3/ОО с присоединением заявки

Государственный комитет

Совета Министров СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет(43) Опубликован005 2 75 Бюллетень 3ЧФ» (45) Дата опубликования описания И.12 . (53) УДК 663 I (088 8) Г.g.Ыогипьницкий, К.А.Кощеенко, Е.Н.Пономарева, Г.К.Скрябин и

М.И.Бухар (72) Авторы изобретения (71) Заявитель Институт биохимии и физиопогии микроорганизмов,АН СССР (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГИДРОКОРТИЗОНА И

АЦЕТАТА КОРТИЗОНА

Изобретение относится к микробиоnorическим способам попучения гормонапьных веществ и может быть испопьзовано в медицинской промышпенности дпя попучения лекарственных препаратов гидрокортизона и ацетата кортизона.

Известен способ попучения гидрокортизона и ацетата кортизона путем микробиопогической трансформации вещества " 4 " ейхштейна ипи его

- 2I-ацетата в растворе органического растворитепя, например зтанопа, диметипсупьфоксида, при помощи отмыто Ю d; Д,Я., выращенного в питатедьной среде, содержащей источники угперода, азота, сопи фосфора, серы, магния, с поспедующим выдеI

1 пением гидрокортизона из реакционной смеси и химическим превращением остапьных продуктов трансформации в ацетат кортиэона.

Известный способ мапопроизводитепен, так как позвопяет проводить трансформацию исходного стероида при концентрации его не выше 0,5 г/и °

Повышение концентрации исходного стероида приводит пибо к ингибированию процесса трансформации из-as токсичности растворитепя, дибо к яо стимупированию процессов деструкции стероидов.

С цепью интенсификации процесса предпожено в питатепьную среду допопнитепьно вводить сопи капия, кадьция и меди, а вещество " » " Рейхштейна ипи его 2I-ацетат вносить дробно

494382 а в таком количестве, чтосы его концентрация в реакционной смеси не превышала 0,4-0,8 г/и.

21-ацетат вещества " Р " Рейхштейна целесообразно вносить в растворе этанопа в концентрации 25 мг/мп порциями по О,Х5-0,20 г/и череа каждые 2 час а до коне чной к он цен тра ци и

I,5-2,О г/л, а в растворе диметипсупьфоксида в концентрации 25 мг/мл порциями по 0,2-0,3 г/л через каждые

2 часа до конечноИ концентрации

2,5-3,0 г/и.

Вещество " Ф " Рейхштейна удобно вносить в ХО/-НоМ метанопьном растворе СаС(в концентрации

30-35 мг/мл порциями по О,I5 г/л через каждые 2 часа до конечной концентрации 2,0-2,5 г/л.

Из солей калия, кальция и меди рекомендовано испольэовать,Я Рой, в количестве 2 г/и, CaCOэ - 0,5 г/л

И (.мЫй х CH20 — О пОХ5 Г/П °

Пример I. Культуру гриба К ((—

Аь штамм 233 поддерживают на скошенном сусле-агаре Во флаконах ипи пробирках.

При пересеве гриб выращивают

I2-I4 дней при 28 С, а затеи 6-8 днеИ при комнатноИ температуре. йпя трансформации испольауют культуру, выращенную при пересеве с косяков не более, чем месячноИ давности.

Споры гриба смывают с поверхности егере сверпвьпой водой ввбо с едой и

1 ип споровой суспепвпп (й IO спор/пп) засевают среду в конические колбы объемом 750 мп со IOO мп среды С5 следующего состава (в г/л) : кукурузный экстракт 20,0; сахар-рафинад30,0; K HPO q 2,0; К 0,5> ц д .ц,Q 0 03; ((.2, ЯН О С 915

СаС03 0,5; вода водойроводывя I n.

Среду стерипизуют при 0,8 втм

30 мин, рН после стерилизации 5,5.

Культуру выращивают в течение

20-22 час при 28 C на круговой квчап1 ке (220 об/мин).

Полученным ин окупят ом в коп ичестве 1

5-7 мл засевают такие же колбы со

IOO мп среды С5 и проводят вторую инокупяцию в указанных условиях.

Мицелий гриба, отфильтрованный и отмытый от питательной среды водой о (рН,7,0), испольауют дпя проведения процесса трансформации.

Трансформацию проводят также в Lt6дицинских колбах объемом 750 мл со

?00 мп водопроводной воды (рН 7,0)

В воду вносят мицеп ий гриба из расчета 8,0-9,0 г/и (по весу воздушно® сухого мицел ия) и вносят раствор исходного стероида в этанопе (25 мг/мл; растворителя) иа расчета О, I5-0,20 г/п и затеи такое же количество стероида каждые 2 часа. Режим аэрации, температуру и перемеш иван ие сре ды поддерживают такими, как при выращивании

30 куль туры.

В укаэанных усп ов иях общее коп ичество превращаемого стероида в тече- з ние всего процесса составляет

I,5-2,О г/л.

Продопжительнос ть процесса контролируютт методами хроматографии Hs бумаге или тонкослойной хроматографии нв сипикагеле (силуфопе). После исчеано45 вения иэ реакционной смеси вещества

" д» " Рейхштейна и его 21-ацeтвта процесс останавп ивают подкиспением

5о среды I0$-ноИ H>SOq до рН 2,0.

Продолжительность трансформации в указанных условиях составляет 26-28 час.

Выход стероидов составляет в среднеМ (в $) е зпигидрокортизон 20,0

rидрокортизон 60,0 кортизон 2,0 веществе " / " Рейхштейна и его

2I-ацетвт следы.

Выделение гидрокортизона и превращение энигидрокортиаона и кортизона в вцетат кортиэона проводят известными методами.

494382 о

6 ОРМУЗ ИЯОБРЕТЕН ИЯ

35

55

65 то

Пример 2. Выращивание и подготовку мицепия гриба,/. 4ì ë: и-трансформации проводят, к ак в примере I, Исходный стероид вносят в растворе диметипсупьфоксида (20-25 мг/мп растворитепя) из расчета 0,2-0,3 r/и и затем такое же количество стероида через каждые 2 часа.

Режим аэрации, температуру и перемешивание среды поддерживают такими, как при выращивании куньтуры.

В указанных условиях общее копичество превращаемого стероида за период ферментации состввпяет 2,5-5,0 г/п.

Контроль за ходом трансформации проводят, как в примере I.

Продолжительность трансформации в указанных усповиях составпяет

32-Зб час. Выход стероидов в среднем составляет (в $): эпигидрокортизон

20,0, гидрокортизон 50,0, кортизон, веществе " " ейхштейна и его

2I-ацетат спеды.

Пример 3. Выращивание, обработку гриба Аюу айс a штамм

233 и трансформацию проводят так же, как в примере I.

Исходный стероид - вещество "d " ейхштейна вносят в Тоф-ном метанопьном растворе Ca, в концентрации

30-35 мг/мп растворитепя из расчета

0,I5 г/п и затем такое же копичество стероида вносят через каждые 2 часа.

Общее копичество вносимого стероида за период трансформации составпяет

2,0-2,5 r/a.

Продопжитепьн ос ть трансформации

i 32"36 час.

По окончании процесса трансформации в купьтурапьной жидкости содержится I5-20$ эпигидрокортизона, 45-50$ гидрокортизона, Зф кортизона и спеды вещества " O " Рейхштейна.

I. Способ попучения гидрокортизона и ацетата кортизона путем микробиопогической трансформации вещества "ф

Рейхштейна ипи его 2I-aöåòàrà в растворе орган ического растворитепя,например этанопа, диметипсупьфоксида, при ооиоии оимыгого. мицеиия гриба йо Ь6, 4 Ц.., ВЫРаЩЕННОГО г В питатепьной среде, содержащей источники угперода, азота, соли фосфора, серы, магния, с пос педующим выделением гидрокортизона из реакционной смеси и химическим превращением остальных продуктов трансформации в ацетат кортизона, о т п и ч а ю шийся тем, что, с цепью интенсификации процесса, в питатепьную срелу допопнитепьно вводят сопи капия, капьция и меди, а вещество " P " Рейхштейна ипи его

21-ацетат вносят дробно в таком количестве, чтобы его концентрация в реакционной смеси во время трансформации составляла 0,4-0,8 г/л.

2. Способ по п.I, о т л и ч а юшийся тем, что 2I-aqerar вещества "6 " Рейхштейна вносят в растворе этанопа порциями по О,I5-0,20 г/и через каждые 2 час до конечной концентрации I,5-2,0 г/л.

3. Способ по D.I, о т п и ч а юшийся тем, что 2I-ацетат вещества " / "Рейхштейна вносят в растворе диметилсупьфоксида порциями по

0,2-0,3 г/и через каждые 2 часа до конечной концентрации 2,5-3,0 г/п.

Ф. Способ по a.I, о т п и ч а юшийся тем, что вещество "д "

Рейхштейна вносят в метанольном растворе Я Я в концентрации 30-35 мг/мп порциями по О,I5 г/и через каждые

2 чаы до конечной концентрации

2,0-2,5 r/и

5 Способ по пн.I-4 о т и и ч аю шийся тем, что из сопей капьция и меди испопьзуют К2НРО в копичестве 2 г/и, СаСО - 0,5 г/и и СЖ< х 2 Н О О,OI5 г/д.