Штамм n96-продуцент ферментов,лизирующих стрептококк группы а

 

ц 528340

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Сове боевтскик

Социалистических

Ресоублик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 10.04.75 (21) 2122227/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.09.76. Бюллетень № 34

Дата опубликования описания 13,10.76 (51) М. Кл."- С 12К 1/04//

С 12Р 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 615.779.94 (088.8) (72) Авторы изобретения В. Д. Кузнецов, 3, Ф. Рахманова, Е. П. Савельев и Г. И. Петров (71) Заявитель Центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей (54) ШТАММ ACTINOMYCES LEVOR1S № 96 — ПРОДУЦЕНТ

ФЕРМЕНТОВ, ЛИЗИРУЮЩИХ СТРЕПТОКОКК ГРУППЪ| А

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известны штаммы актиномицетов, продуцирующие ферменты, обладающие широким спектром литического действия, например штамм Actinomyces cellulosae ¹ 41 продуцирует ферменты, лизирующие клетки дрожжей (1).

Однако ферменты, продуцируемые этим штаммом не лизируют клетки стрептококка группы А.

Целью изобретения является новый штамм

Actinomyces levoris, который продуцирует ферменты, лизирующие стрептококк группы

А.

Штамм Actinomyces levoris № 96 — продуцент ферментов, лизирующих стрептококк группы

А хранится в коллекции культур ВНИИА под номером 96 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Штамм Actinomyces levoris № 96 образует прямые, слегка загнутые спороносцы. Споры шаровидные и овальные с гладкой оболочкой.

Среда Чапека с глюкозой. Воздушный мицелий мучнисто-бархатистый, зеленовато-палевый. Субстратный мицелий темно-коричневый.

Среда Чапека с крахмалом. Воздушный мицелий мучнисто-бархатистый, зеленовато-палевый. Субстратный мицелий серо-темно-фиолетовый.

Овсяный агар. Воздушный мицелий мучнисто-бархатистый, зеленовато-палевьш. Суб5 стратный мицелий темно-песочный.

Кукурузная среда № 2. Воздушньш мпцелий белесоватый. Субстратньш мицелий светло-коричневый.

10 Гороховый агар. Воздушный мицелий белесоватый, субстратный мицелпй коричневый.

Среда Гаузе № 2. Воздушный мицелий белесоватый, субстратный мицелий светло-бурый.

15 Физиолого-биохимические признаки.

Молоко слабо пептонизирует, но не свертывает.

5Келатину разжижает слабо. Крахмал гидролизует (зона 6 мм). Сахарозу не инвертп2д рует. Нитраты в нитриты восстанавливает слабо.

На клетчатке не растет. Использует глюкозу, ксилозу, фруктозу, галактозу, мальтозу.

Не использует сахарозу, рамнозу, рафинозу, 25 маннит, лактозу.

Меланоидных пигментов не образует.

Пример 1. Биосинтез ферментов при поверхностном способе выращивания Ас11потпуces levoris № 96.

30 В колбы Эрленмейера емкостью 750 мл

0,2

0,1

0,002

0,001

Составитель С. Малютина

Техред М. Семенов Корректор И. Позняковская

Редактор Т, Девятко

Заказ 1827/17 Изд. 1554 Тираж 575 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, ß(-35, Раушская наб., д. 4i5

Типография, пр. Сапунова, 2

3 вносят по 50 мл жидкой питательной среды следующего состава, вес. %:

Гидролизат казеина 0,5

Глюкоза 0,5

Хлористый натрий 0,5

Фосфорнокислый калий двухзамещенный

Сульфат меди

Сульфат железа

Сульфат цинка рН 6,6 — 7,2.

Среду стерилизуют при давлении 0,8 ати в течение 30 мин. После стерилизации производят засев каждой колбы суспензией спор актиномицетов, смытых 9 мл стерильной дисстиллированной воды с поверхности 14-ти суптучной культуры штамма № 96, выращенной на скошенном овсяном агаре при 26 — 28 С.

Засеянные колбы выдерживают в термостате при 26 — 37 С в течение 2 — 6 сут, после чего производят определение в культуральной жидкости активности ферментов, лизирующих стрептококк группы А. С этой целью культуральную жидкость отделяют от мицелия с помощью центрифугирования в течение 10 мин.

Активность ферментов, присутствующих в нативном растворе, определяют по степени лизиса суспензии клеток стрептококка в течение

1 ч.

Реакционная смесь при определении активности лизирующих ферментов содержит 1,0 мл суспензии клеток стрептококка в 0,075 м (рН=7,6) фосфатом буфере и 2,0 мл нативного раствора. Степень лизиса клеток стрептококка определяют по изменению оптической плотности реакционной смеси при 650 нм в течение 1 ч. Ферменты, содержащиеся в культуральной жидкости Actinomyces levoris, штамм № 96, лизирует клетки стрептококка группы А в течение 1 ч на 150%.

П ри м е р 2. Биосинтез ферментов при глубинном способе выращивания Actinomyces

levoris № 96.

Конические колбы емкостью 750 мл заполняют 100 мл жидкой питательной среды следующего состава, г:

Гидролизат казеина 5,0

Глюкоза 2,5

Хлористый натрий 2,5

Фосфорнокислый калий двухзамещенный 1,0

Вода водопроводная, л 1,0 рН 6,2 — 7,2.

Среду стерилизуют при давлении 0,8 ати в течение 30 мин. Колбы со стерильной средой ф инокулируют 3 мл водной взвеси снор нродуцента или 5 мл взвеси двухсуточного вегетативного мицелия, выращенного глубинным способом и выращивают на круговой качалке

5 при 26 — 37 С в течение 2 — 5 сут.

Активность ферментов, лизирующих клетки стрептококка группы А, определяют как описано в примере 1.

Формула изобретения

Штамм Actinomyces levoris № 96 — продуцент ферментов, лизирующих стрептококк группы А, хранится в коллекции культур

ВНИИА под номером 96.

15 Культурально-морфологические признаки.

Образует прямые, слегка загнутые спороносцы. Споры шаровидные и овальные с гладкой оболочкой.

Среда Чапека с глюкозой.

Воздушный мицелий мучнисто-бархатистый, зеленовато-палевый. Субстратный мицелий темно-коричневый.

Среда Чапека с крахмалом.

Воздушный мицелий мучнисто-бархатистый, 25 зеленовато-палевый. Субстратный мицелий серо-темно-фиолетовый.

Овсяный агар.

Воздушный мицелий мучнисто-бархатистый, зеленовато-палевый. Субстратный мицелий

30 темно-песочный.

Кукурузная среда № 2.

Воздушный мицелий белесоватый. Собстратный мицелий светло-коричневый.

Гороховый агар.

35 Воздушный мицелий белесоватый, субстратный мицелий коричневый.

Среда Гаузе № 2.

Воздушный мицелий белесоватый, субстратный мицелий светло-бурый.

40 Физиолого-биохимические признаки.

Молоко слабо пептонизирует, но не свертывает. Желатину разжижает слабо. Крахмал гидролизует (зона 6 мм). Сахарозу не инвертирует. Нитраты в нитриты восстанавливает

45 слабо.

На клетчатке не растет.

Использует глюкозу, ксилозу, фруктозу, галактозу, мальтозу.

Не использует сахарозу, рамнозу, рафинозу, 50 маннит, лактозу.

Меланоидных пигментов не образует.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе заявки:

1. Авт. св. № 358360, М. Кл. С 12Р 13/10, 55 1973 (протетип).