Способ дифференциальной диагностики ортомиксовирусных и парамиксовирусных болезней птиц

 

О П И С А Н И Е,11 539073

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социалистически, Республик. (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 03.06.74 (21) 2031674 15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Оп .бликоваио 15.12.76. Бюллетень ¹ 46 (51) М. Кл."- С 12К 1, 04

А 61В 10 00

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УД К 61 6-07 (088.8) ло делам изобретений и открытий

Дата опубликования описания 29.12.76 (72) Авторы изобретения

Г. А. Сафонов и Л, И. Володина

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ

ОРТОМИКСОВИРУСНЪ|Х И ПАРАМИКСОВИРУСНЫХ

ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БОЛЕЗНЕЙ ПТИЦ

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии. Способ может быть использован при диагностике для идентификации возбудителей гриппа птиц (ортомиксовирус) от болезни Ньюкасла и 10каипа (парам иксовирусы) .

Грипп птиц — одно из распространенных заболеваний, которое наносит значительный экономический ущерб птицехозяйствам всех стран мира. Особенностью возбудителя этой болезни является гысокая антигенная изменчивость.

К настоящему времени установлено 8 антигенных вариантов вируса гриппа птиц, не исключена возможность появления новых вариантов.

Высокая антигеш1ая вариабельность вируса в значительной степени затрудняет идентификацию возбудителя принятыми в настоящее время методами. Дифференциальную диагностику приходится проводить главным образом с парамиксовирусами (вирусы болезней Ньюкасла и 10каипа), так как клиническая картина и патологоапа — o..tè÷åñêèå изменения при орто- и парамиксовирусных заболеваниях птиц очень сходны. До сих пор диагноз ставят после выделения вируса в куриных эмбрионах и идентификации его в серологической реакции связывания комплемента (11. РСК вЂ” одна из самых сложных сепологических реакций. Для ее постановки требуются кроме испытуемого образца стандартные антигены — нормальный и специфический, стандартные сыворотки нормальная и специфическая, комплемент

5 морской свинки. гемолизин, эритроциты бара»а и физиологический раствор. Реакцию ставят в два этапа: первый — вспомогательный опыт — подбор оптимальной концентрации компонентов реакции, второй — основной

lO опыт — определение степени серологического родства испытуемого образца по отношению к стандартным компонентам реакции. Для постановки PCK холодным методом необходимо ие менее двух дней после выделения вируса.

15 Наиболее близким IIQ технической сущности к предложенному способу является использование для диагностики ортомиксовирусных и парамиксовирусных болезней птиц диагностических препаратов, действие которых основа20 ио иа иммунологическом родстве одной из диагностических сывороток с выделенным возбудителем, который выявляется посредством серологической реакции — реакции задержки гсмагглютинации (РЗГА) (2). Такой способ

25 диагностики требует больших затрат времени и средств на его проведение. Кроме того, диагностические препараты, изготовленные для использования в РЗГА, имеют штаммовую специфичность и позволяют идентифицировать

30 лишь изученпые серологические варианты

539073

Гел!агглютинирующий! титр вируса

Исслелуелп.!! !

?итамар возоудителя! ! обработанконтр)ль-

Заключение ного азотистой кислотой ного

1

Росток (гр!и!и) 1:64

0 ортогииксовирус

Чехов, 72 (грипп), 1:128

11(болезнь Вьюка- 1:256 ела)

l(B7ii59 (Ю!(аипа) 1:64

1:128 парагииксовир,;с

1182 .оставитсль А. Ллексеенои

Редактор T. ГОринкова

Техрез IYL. Сел(евон

1(орре!.тор О, Тюр B.a

Тираж 575

Заказ 2. ?,!11

Изд. ¹ 1854

Поди ис?ие

Типография, ир. Сапунова, 2

Возоуди 1сля, iTO снижает зна !еиис (.СролОГичссi(и реaкцliй ири идсlп!Iфик2ции Виp „ с2

ГPHUUB> ООЛ(1даЮН!Е! 0 БЫСОКОИ (1НТИГСН110!й Б2риабельностью.

LI,cëB ПЗООретсния — ПОВышсиис эфф(. KTUBl! OCT!1 . 1 не! ГИОСТИКИ вЂ” ДОС Г!! Г(IСТ(. Я T0>?, ЧТО и

ВЫДС И(ПОЛ?У Б?!РУC ИР П !12ЛI! I!1ï ГСЛ?2 ГГЛIОТI(ниру?он(ей активност:; с(о пс шике 1: 64 до03 В !я101 В ра В?lых Объс;13х 4М;) ",cTBop E!ÇOTнокис.юго нагрия н 0,1 М раствор ацетатного буфера, смесь пня бируют в течение 1 ч пр?!

3! С, после чего при у TE!Hîâëåølè полной потери вирусом гемагглютпиирующсй активноCTiI ВОЗОУДIПСЛЬ ОТHOCEIT К ОРТОЛ?11КCOВИРУС2М, а прн сохрансни;I исходной актив| ости или незначи 1 сльио\? сии)кснии ее (В 2 — pa32) ВозОудитсль ОТИ0051т и парал?1!ксовирусал! и 1 иц.

Способ лlожет Оыть использОВан Б 11000Н ветерш(арио-бактериологической лаборатории н I!03БОЛ5IСT прОВес Ги ди(j)(j)ppcициaцliio Возбудителей в те !ение 2 ч с лн)мента выделеш;я вируса независимо от серологической принадлежности варианта.

Диф(рсре!,циацшо вирусов проводят следу!o-I(Uì образом.

1 ооьем Бируссодср)кащей суспенз!ш, обладаlощсй активиос(ь!О В PcaKUUU Гсл!!?ГГ1ютинации (РГЛ) не ниже 1: 64, смспшвают с 0,5 обьема 4М раствора Ха(ХО и 0,5 обьема 0,2М ацстaòUîãî буфера рН 4,35. Смесь в течение ! ч инкубируют при 37 С, после чего опредеЛ51!От осТ2 50911» Io ?ктив!юсть BUp)coB Б Р Г." !.

Полная потеря гемагглюти(шру(о!Цей активности или сохранеш!е ее в пределах 1: 2 — 1: 4 свидетельствует о наличии ортомиксовирусной инфскции1 co_#_paUc!IHC исходной актиВИОстн или незначительное (Б 2 — 4 раза) сниже?!Пе

cp — О Ua;! Ii lilU парал?иксовирусов.

П р и м е 1). На куриных эмбрионах из IIBTматериала выделены 4 штамма Возбудителей болезней птиц, обладгнощне гсмгитлютинирующей актшшостью. Необходимо установить, являются ли указанные возбудители штам!3ми ортомиксовпрусов нли иарамш(совирусов. ,Для !100TBHOB".(!i диагноза В иробирк:! вносили по 0>5 (мл Вируссодсржащси экстраlэмориональной )кидкости (по 2 пробирки, ко?прольиук) и оиьпную, на каждый штамм). В пробирки с пробами вноси;ш по 0,25 мл 4 М раствора Х!3ХО в дистиллированной воде (276 г

КаХ? "О в 1 л раствора) и по 0,25 мл 0,1 М ацстатного буфера рН 4,35 (для прл!Готовления буферы 4 ХЗОН и 17 мл лед?шой уксусной кис:?оты PacTBoPcUiз! B QHcTII;I, I liPOBBIU ОЙ Воде и оби нй обьсм доведен ""о,д.-ой до 1 л).

В контрольиыс пробирки вносили по 0,5 мл ф!(Зиоло! Ичсского раствора. Содер)кимое пробирок перемешивал:. :и пробирки помешали в термос!ат при 37 па 1 ч, после -!его опредеЛ5:.(П 2КТ!. БНОСТЬ БИРУCB Б П )003Х И Б КОНТРО!

5;.;., cTaБя РГ.-Д с !о()- ыми эр працитами пеГЛ Ха.

5 В таблш!0 —.i )i!Bc,lcl:ы результаты идентифиHcöUU Выделенных Возбуд!пелей .; етодол; поДа 1 ICH!15! ГЕЛ?2ГГЛ?ОТИИИГ)УЮ!Цсй 2КТИВИОСТИ азотистой кислотой.

Предлагаемый метод испытан в лаборато рии на 80 штал мах ор)омиксовирусов и парам иксов;!русов птиц, прошел комиссиош(у!о ировср,у во ВНИИВВиМ и уже нашел широкое прил!енснис (идентифицирую:цие растворы без указания состава и:, еханизма действия введены в выпускаемый ВНИИВВИМ

89 набор для дифференциалы!ой диагностики

Вируса болезн Н(иокасла и г(шппа гтиц!. (1) о р .",i у л а и з о б р с т е н и я

85 Способ дифференциально!! диагностики ортомиксовирусны.(и парал!Иксовирусных возбудителей болсзнсй птиц, Включающий выделение BUpyca и е"0 идентификацию по ге)иагглютннирующсй активности, о т л U ч а ю щ и Й с 51

40 тем, что, с целью повышения эффективности диапюст?lêï, к иыдс..с!шому в;!русу ири íà I! чии гсмагглютип!!ру::ощсй ак1!!Бности его не иижс 1: 64 доб(!в.!5!!От в равных обьемах 4 М

pBcTBo;) азот (стокислого натрия и 0,1 М раст4-, BOр ацетатного оуфера, смесь (шкубируют B течение ч при 3 "С, после чего при установ. iP1iUli ИОЛНОИ ПОТСРИ BII 1)) COi I ГЕМ 2ГГЛIОТИНИрующей активности возбудитель относят к орГомикcoBUpycaлц а ири сохранении исходной

5:) активности и1U незначительном снижсшяi ес (2 — 4 раза) всзбудитель относят к парамик(овируса!и птиц. ! cTo 1UUå и:1(РОР л?ац!1и, U j) !IH5?т! !Й BO Бии )?2н?!с при экспертизе:

«Лаборатоpaàa диа; ности и гирус!.ых и рикстс!юзных заболеваний» под ред. 3. Леннета

11. Шл!Пдта, М., «Медицина». 1974 г., тр. 26 — 34 1j U стр. 38 — 42 (21.