Способ выявления ферропротеидов
7 (II) Союз Советских
Социалистических
Республик
ИЗОБРЕТЕН ИЯ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 17.04.75 (21) 2125496/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.02.77. Бюллетень ¹ 5 (45) Дата опубликования описания 17,03.77 ;51) И л. - С 01 N 33 16
Государственный комитет
Совета Министров СССР (53) УДК 612.1182 (088,8) по делам изобретений и открытии (72) Авторы изобретения (71) Заявитель
П. Г. Прокопенко, А. A. Терентьев и Л. H. Грачева
Второй Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ФЕРРОПРОТЕИДОВ
Изобретение относится к медицинской биохимии и может быть использовано в лабораторных и клинических исследованиях для определения белков.
Известен способ выявления ферропротеидов в биологических жидкостях путем электрофореза (1).
Целью изобретения является расширение диапазона определяемых белков.
Достигается это тем, что электрофореграмму обрабатывают одновременно 1 — 2 н. соляной кислотой и осаждающе-окрашивающим реактивом на железо, при этом в качестве осаждающе-окрашивающего реактива используют желтую или красную кровяную соль.
Способ осуществляют следующим образом.
Сыворотку крови донора подвергают дискэлектрофорезу в полиакриламидном геле.
Столбик геля погружают в реактив, приготовленный непосредственно перед употреблением из равных объемов 2",в-ного водного раствора желтой кровяной соли и 2 н. раствора соляной кислоты, через 12 ч инкубации в темноте при 4 C отмывают 1 н. раствором соляной кислоты. Зона трансферрина окрашивается в голубой цвет. Полностью аналогичны условия выявления ферропротеидов, содержащих двухвалентное железо, только проявляющий реактив готовится пз равных ооъемов 10 „ -ного водного раствора красной кровяной соли и 2 н. соляной кислоты. Для выявления общего железа в ферропротеидах проводят окраску на двухвалентное железо с одновременным восстановлением трехвалентного железа до двухвалентного, что достигается погружением геля с электрофоретически разделенными белками в раствор, состоящий пз равных объемов 10 !о-ного водного раствора красной кровяной соли и
10% -ного раствора метабисульфита натрия или калия, приготовленного на 2н. растворе соляной кислоты.
15 Используя указанные способы окраски в сыворотке донора удается выявить трансферрнн, белок в зоне макроглобулинов, а ь экстрактах различных тканей ферритин и показать его гетерогенность.
20 Результаты определения ферропротепдо можно читать па следующий день после постановки электрофорсза. Проявленную электрофореграмму можно сфотографировать и проденситометрирогать, количественно опре25 делив содержание ферропротепдов по интенсивности окраски. Эти электрофореграммь можно долго сохранять в качестве документального подтвержде".:,.я проведенного исследования. Для этого электрофореграмму отмывают в течение трех суток 1 н. раствором со545926
Составитель С. Малютина
Техрсд В. Рыбакова
Корректор В. Гутман
Редактор Л. Гончарова
Заказ 124/295 Изд. Ме 436 Тираж 1054 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
Москва, )К-35, Раушскап наб., д. 4/5
Тип. Харьк. фил. пред. <<Патент» ляной кислоты, меняя его раз в сутки, при 4 С в темноте. Фон полностью обесцвечивается и электрофореграмма хранится неограниченно долго.
Предлагаемый способ отличается простотой и высокой объективностью и может найти применение для изучения генетических групп трансферритов человека и животных, для выявления ферропротеидов в биологических жидкостях различного происхождения.
Формула изобретения
1. Способ выявления ферропротеидов в биологических жидкостях путем электрофореза, отличающийся тем, что, с целью расширения диапазона определяемых белков, электрофореграмму обрабатывают одновре5 менно 1 — 2 н. соляной кислотой и осаждающе-окрашивающим реактивом на железо.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, в качестве осаждающе-окрашивающего реактива используют желтую или красную кровяную соль.
Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:
1. С11п. Chim. Acta, 1958, 3, с. 523 — 530.
