Способ оценки состояния печени

 

) Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОВРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (») á 47209 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 30.05.75 (21) 2139406/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.02.77. Бюллетень № 7 (4б) Дата опубликования описания 10.05.77 (51) -М. КлР А 61 В 5/00

G 01 N 1/28

Гасударственный комитет

Сааета Миниотроа СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 616.36(088.8) (72) Автор изобретения

В. С. Сергеева (71) Заявитель

Второй Московский государственный ордена Ленина медицинский институт нм. Н. И. Пирогова (54) СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ ПЕЧЕНИ

Изобретение относится к области экспериментальной медицины.

Известен способ оценки состояния печени путем введения в кровоток витального красителя, взятия кусочка ткани, экстракции красителя и измерения количества красителя в единице веса ткани (1) .

Однако этот способ не обеспечивает высокой точности оценки состояния печени.

Целью изобретения является повышение точности оценки состояния печени.

Это достигается тем, что перед трансплантацией, в воротную вену вводят 0,3% — 1,0 o — ный раствор нейтрального красного в количестве 2 мл на 10 г веса печени, через 2 — 2,5 мин забирают кусочек печени, из одной части экстрагируют краситель, а другую подвергают криомикроскопическому и гистологическому исследованию, измеряют на гистологическом препарате соотношение заполненных и незаполненных красителем зон микроциркуляции, определяют содержание сорбированного красителя в отдельных клетках, а сдвиг рН клеток определяют по смещению максимума в спектре поглощения красителя.

Способ осуществляют следующим образом.

В афферентный сосуд (воротную вену) переживающей печени с током крови или перфузата вводят нейтральный красный. Важным условием является введение точного количества этого красителя (0,5 o-ный раствор в количестве 2 мп на 10 г веса печени), так как это создает возможность количественной оценки изучаемых параметров. Через 2 — 2,5 мин. вырезают небольшой кусочек печени и делят его HR две части. Одну замораживают в жидком

1р азоте, другую помещают в состав, экстрагирующий краску, адсорбироватптую печенью. Из замороженного кусочка готовят срезы для гистологического и цитофометрического анализа, определения рН и микроциркуляции крови. Состав с экстрагированИ ной краской колориметрируют (с целью выявления показателей сорбционной способности клеток и расчета суммарного объема кровоснабжаемдй ткани) .

На гистологическом препарате участки, где в результате переживания развился блок микроциркуляции, остаются неокрашенными. Определяют соотношение окрашенных и неокрашенных площадей и получают картину эффективности микроциркуляции, которая зависит от продолжительности и тяжести перенесенной ишемии. Регистрируют цито547209

Составитель С. Малютина

Техред M. Ликович

Корректор Н. Золотовская

Редактор А. Бер

Тираж 677 Подписное

ЦИИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам нзо бретеннй н открытиИ

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 909/83

Филиал ППП " Патент ", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 спектрофотометрически количество красителя, сорбированного печеночными клетками, и определяют их сорбционную способность. Микроскопируют окрашенный нейтральным красным гистологический препарат и выявляет морфологические нарушения структуры клеток, связанные с перенесенной ишемией, Определяют смещение положения максимума в спектре поглощения красителя на препарате и устанавливают сдвиг рН в клетках.

Пример. Применение предлагаемого способа 1О для установления времени тепловой ишемии печени. У белой беспородной крысы путем перевязки воротной вены и печеночной артерии воспроизводят тепловую ишемию печени. Через неопределенное время (в пределах 40 мин. ) лигатуру снимают, в 15 воротную вену вводят 0,5 o-ный раствор нейтрального красного (2 мл на 10 г веса) печени. Время введения 2 мин. Из печени вырезают кусочек весом 0,8 — 1,0 г. Последний делят на две части. Один помещают в 5 мл раствора 70 спирта, подкисленного (2 мл на NO мл) серной кислоты, экстрагирующего нейтральный красный. Экстракт колориметрируют на колориметре ФЭК-56 М, фильтр 6 (длина волны 540 н, 10), контроль — дистиллированная вода. 25

Оптическая плотность измеряемого раствора 0,93. Затем кусочек печени, из которого была экстрагирована краска, высушивают в термостате о при 70 С в течении 2 час и после этого определяют количество экстрагированного красителя на 1 г 80 сухого веса ткани. Сухой вес ткани 0,128 г

О, 12 Я вЂ” — — — — — 0,93 1 0,93

10 --- X

Х= =TZ6

0 128

) 1

Количество поглощенного красителя на изучаемом сроке ишемии печени 7,26, что составляет

141% по сравнению с сорбцией красителя печенью в контроле и соответствует 15-минутной ишемии.

Из второго кусочка после его замораживания в жидком азоте готовят срезы толщиной Sp. При стандартных условиях увеличения фотографируют препараты, а затем планиметрируют, определяя площадь окрашенных зон печени. В данном случае они составляют 11,3%, что соответствует 16-ой минуте ишемии органа.

На этом же препарате цитоспектрофотометрически определяют положение максимума в спектре поглощения красителя клетками. Последний равен 514 и О, что соответствует 15 — 16-ой минуте ишемии.

Осуществление предлагаемого способа занимае меньше времени, что позволяет его применять для получения экспресс — информации о жизнеспособности печени в условиях ее консервации с целью трансплантации. Предлагаемый способ менее трудоемок, он более экономичен, посколькуне требует применения дорогостоящих реактивов, Предлагаемый способ позволяет количественно определить объем некровоснабжаемых зон микроциркуляции, получить данные о продолжительности перенесенной ишемии печени, оценить такие показатели состояния печени, как гистологические сдвиги, сорбиционную и десорбционную способность клеток печени, сдвиг рН.

Формула изобретения

Способ оценки состояния печени путем введения в кровоток витального красителя, взятия кусочка ткани, экстракции красителя и измерения количества красителя в единице веса ткани, о т л ич а ю щи и с я тем, что, с целью повышения точности оценки перед трансплантацией в воротную вену вводят 0,3% - 1,0 o-ный раствор нейтрального красного в количестве 2 мл на 10 r веса печени, через 2 — 2,5 мин забирают кусочек печени, из одной части экстрагируют краситель, а другую подвергают криомикроскопическому и гистологическому исследованию, измеряют на гистологическом.препарате соотношение заполненных и незаполненных красителем зон микроциркуляции, определяют содержание сорбированного красителя в отдельных клетках, а сдвиг рН клеток определяют по смещению максимума в спектре поглощения красителя.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Журнал "Патологическая физиология и экспериментальная терапия",1960, Р 3 (прототип) .