Способ получения сыворотки против опухоли эрлиха

 

Способ получения сыворотки против опухоли Эрлиха путем иммунизации мышей опухолевым антигеном с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности сыворотки, в качестве антигена используют штамм клеток асцитной карциномы Эрлиха АКЭМ-1 или АКЭС-1.

t

Ф (с„r — . i

,.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

3(5Ц А 61 К 39 395

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H ABTOPCHOIVIY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2155371/13 (22) 18,06..75 (46) 15.05.84.Бюл. 9 18 (72) Н.В.Турбин, Г.Н.Лобко, Г.И.Порубова и Г.И.Рыдуха (71) Институт генетики и цитологии

AH БССР (53) 615.373.3(088.8) (56) 1. Патент Франции 9 2081565, кл. A 61 К 23/00, 1972 (прототип). (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СЫВОРОТКИ ПРОТНВ ОПУХОЛИ ЭРЛИХА . .(57) Способ получения сыворотки против опухоли Эрлиха путем иммунизаций мышей опухолевым антигеном с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения активности сыворот ки, в качестве антигена используют штамм клеток асцитной карциномы Эрлиха АКЭМ-1 или АКЭС-1.

563752

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в онкологии I при иммунотерапии рака.

Известны способы получения сыворотки для иммунотерапии рака путем иммунизации животных клетками (анти- 5 геном) исходной опухоли Г11 .

Однако сыворотка, полученная этим способом, недостаточно активна.

С целью повышения активности сыворотки по предлагаемому способу н 0 качестве антигена используют штамм клеток асцитной карциномы Эрлиха

АКЭМ-1 или АКЭС-1.

Штамм опухоли AK3N-1 получен из исходного штамма опухоли Эрлиха, пас-15 сируется на мышах в Институте генетики и цитологии AH БССР.

Получают штамм АКЭМ-1 следующим образом. Мьплам (самцам) линии Ц вводят н хвостовую вену по 1.10 клеток опухоли Эрлиха, предварительно отмытых (трехкратно) раствором Хэнкса. На 22-й день после введения опухолевых клеток из легкого выделяют опухоленый узелок размером с просяное зерно. Прививкой нормальным

25 мышам выделенного опухолевого узелка получают штамм опухоли АКЭМ-1.

Опухоль АКЭМ-1 представляет собой гетерогенную популяцию клеток, состоящую н основном иэ двух хромосом- 30 ных классов: тетраплоидного и околооктаплоидного с выраженным преобладанием тетраплоидного. В популяции клеток доминирующими являются три клеточных клона с 80-, 82-, 84-хро- З5 мосомными наборами. В метафазных пластинках присутствуют маркерные хромосомы: 1-2 большие суб- и метацентрические 1-2 телоцентрические с двойной перетяжкой. Почти в каждой метафазной пластинке встречаются

1-2 малые метацентрические хромосоMht .

Опухоль растет н асцитной и солидной формах на мышах, линейнонеспецифична, продолжительность жизни 45 при ннутрибрюшинном введении мышам линии Ау (по 5.10 опухолевых кле4 ток) составляет 22+4 дня.

Для получения сыворотки против опухоли Эрлиха группу мышей линии 50 иммунизируют путем внутрибрюшинного (3-кратного с интервалом 7 дней) введения облученных (10 000 ) клеток штаж»а опухоли АКЭМ-1 (по 3, 10 клеток). Мышей линии СЭН/Sn нммуни- 55 зируют путем внутрибрюшинного (6кратного с интервалом 7 дней) введения облученных (10 000 " )клеток опухоли АКЭС-1 (по 1, 10 клеток на мышь) .

На 10-й день после последней иммунизации у мышей получают сыворотку из крови.

Влияние сыворотки анти АКЭМ-1 и сыворотки анти АКЭС-1, полученных путем иммунизации мышей клетками опухоли АКЭМ-1 или АКЭС-1, и сыворотки анти АКЭ, полученной ранее известным способом, т.е. иммунизацией мышей клетками опухоли Эрлиха, на скорость роста опухоли Эрлиха, приведены в таблице.

Мышам линии Д или C3H/Sn внутрибрюшинно прививают но 5 104 клеток опухоли Эрлиха. Через 24 и 48 ч после прививки опухоли мышам вводят двухкратно внутрибрюшинно: первой группе по 0,5 мл сыноротки анти

АКЭМ-1, второй — по 0,5 мл сыворотки анти АКЭС-1, третьей — по 0,5 мл сыворотки анти АКЭ.Контрольной серией служат мыши, получившие по указанной схеме сыворотку интактных мышей или раствор Хэнкса. Привинаемость опухоли у мышей при введении им по 5х10 клеток АКЭ составля4 ет 100%.

О противоопухолевом эффекте антисывороток судят по скорости роста опухоли, которую определяют по среднему количеству опухоленых клеток, накапливающихся н брюшной полости у мышей к 14-му дню (мыши линии А» ) или к 10-му дню (мыши линии СЗН/Sn) после прививки. Определяют процент торможения опухолевого роста. Проводят цитогенетический анализ популяции опухолевых клеток н контрольных и опытнь|х сериях. В каждой серии анализируют по 50 метафазных пластинок.

Из таблицы видно, что сыворотки анти АКЭМ-1 или анти АКЭС-1, введенные мышам с привитой опухолью Эрлиха, вызывают торможение опухолевого роста на 86% и 51% соответственно, в то время как сыворотка анти АКЭ и сыворотка интактных мин;ей не оказывают достоверного влияния на скорость роста этой опухоли.

Предлагаемый способ позволяет голучать иммунную сыворотку протин опухоли Эрлиха, ко".îðàÿ при введении мышам с пр :витой исходной опухолью вызывает значительное (до 86%) торможение опухоленого роста., 563752

Мыши сзн/

Серия опыта

Мыши линии

С3н /5п, Коли-! често мышей сеии, т. т. ле х

Клетки АКЭ+сыворотка интактных мышей

17 365+51 — 18 235 42 — 1-2)0,05 1-2>0,05

Клетки АКЭ+сыворотка анти АКЭ

16 392+64 7,0 20 193> 51 10,2 2-3(0,05 2-3(0,05

Клетки АКЭ+сыворотка анти АКЭМ-1 16 49+6 86,0

1-3(0,05

Клетки АКЭ+сыворотка анти АКЭС-1

18 . 106+23 51,1

1-4<0,05

П р и и е ч а н и е: Р— достоверность данных по линиям.

Редактор Л.утехи-;а Техред А.Бабине:т Корректор Л.Пилипенко

Заказ 3889/1 Тираж 688 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.,4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная, 4

Среднее количество опухолевых клеток х 106

Клетки АКЭ+раствор Хенкса 18 447 92

Торможе ние роста опухоли ф

Коли- СР е- не тво ко мышей че се- во ии, ton

20 213+12 — 1"5)0,05 1-5>0,05