Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза AH Латвийской CCP (71) Заявитель (54) ФУРАН-3 вЂ” КАРБОНОВЫЕ АМИДЫ L-АСПАРАГИНАЗЫ, ОВЛАДАЮЦИЕ ПРОТИВОЛЕЙКОЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

СО вЂ” ХНвЂ” !

К 0 В, 30

Изобретение относится к новым соединениям вЂ” фуран-3-карбоновым амидам

L-аспарагиназы, обладающим противолейкозной активностью, которые могут найти применение в медицине.

Известно применение L- аспарагиназ как противолейкозных средств(1), В настоящее время арсенал средств подобного действия пополняется за счет химически модифицированных Lаспарагиназ, например ациласпарагиназы, амидоаспарагиназы (2 вЂ” 4).

Однако все описанные модификации

L-аспарагиназы по спектру и интенсивности противоопухолевого действия не 15 отличались от -активного белка.

Относительное увеличение противолейкозного действия аспарагиназы было достигнуто введением в молекулу белка 20 нитрофурилполиенхинолиновых ocTатков (5).

Цель изобретения вЂ” повышение противолейкозной активности L-аспарагиназы, создание противоопухолевых препаратов нового структурного типа и расширение ассортимента средств, оказывающих противолейкоэный эффект, Это достигается при помощи фуран

3-карбоновых амидов L-аспарагиназы общей формулы где Н В2 R3 водород или метил-! радикал, Данные соединения получают введением в белковую молекулу L-аспарагиназы остатков алкилфуран-3-карбоновых кислот, ацилируя фермент хлорангидридами 2,5-диметил-3-фуран- карбоновой и

2,4,5-триметил-3-фуран-карбоновой кислот °

Пример 1. В 4 мл раствора

Na-ацетата (62 г CH3COONa в 100 мл воды рН 7,0), содержащего 10600 МЕ

L-аспарагиназы (1,78 10 М; концентрация белка 14,7 мг/мл, уд. активность

180 МЕ/мг белка), растворяют при перемешивании на магнитной мешалке

l4 мг (8,1 10 4 М) хлорангидрида

2,4,5-триметилфуран-3-карбоновой кислоты. Перемешивают 2 ч при комнатной (20 С) температуре. Затем проводят диализ в течение 36 ч против

5х700 мл бидистиллированной воды.

Полученный амид аспарагиназы имеет

583622

Формула изобретения

Составитель О. Скородубона

Редактор Л.Письман Техред Н. Келушак

Корректор В.Бутяга

Заказ 3250/49 Тираж 397

ВЧИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, r. Ужгород,. Ул. Проектная, 4 удельную активность 139 ME/Mã белка, изоэлектрическую точку главной зоны р1 5,20; глубину модификации

8,2Ъ NH -групп1 противоопухолевый эффект вЂ” 47% выживания мышей с лейкозом L 5178У.

Пример 2. Модификацию прсводят идентично примеру 1, пользуясь

12,9 мг (8,1 ° 10 " M) хлорангидрида

2,5-диметилфуран-3-карбоновой кислоты. Модифицированный фермент имеет удельную активность 115 МЕ/мг белка; .иэоэлектрическую точку главной эоны р1 5,06; глубину модификации 10,5%

ИН -групп; протиноопухолевый эффект

86Ъ выживания мышей с лейкозом

5178У и 16% выживания с асцитной опухолью Эрлиха.

Противолейкозное действие полученных фуранкарбоновых аминов Ь-аспарагинаэы изучено экспериментально на лимфоидной лейкемии L 5178У. Опыты проводились in vivo на мышах линии

ВАЬ В/с с принитым лемфолейкозом

1 5178У.

Изучаемые вещества вводят внутрибрюшинно ежедневно 5 раз. Первую дозу вводят через 72 ч после имплантации лейкоза.

2,4,5-Триметилфуран-3-карбоновый амид аспарагинаэы в пяти опытах для каждой дозы увеличивает в среднем продолжительность жизни подопытных мышей:

200 МЕ/кг на 47Ъ

500 МЕ/кг на 45%

1000 МЕ/кг на 40%.

2,5-диметилфуран-3-карбоновый амид аспарагиназы продлевает жизнь. мышей вЂ” опухоленосителей при этих дозах соответственно:

200 МЕ/кг на 86Ъ

500 МЕ/кг на 67Ъ

1000 МЕ/кг на 58%

Животные, получившие нативный фермент, имеют продлевание жизни относительно контроля:

200 МЕ/кг на 30Ъ

500 МЕ/кг на 30%

1000 МЕ/кг на 38Ъ.

При исследовании эффекта полученных соединений на имплантированную асцитную опухоль Эрлиха 2,5-диметилфуран-3-карбоновый амид аспарагиназы при дозах 2000 МЕ/кг продлевал жизнь в среднем на 16Ъ. Применение нативного фермента и других модифицированных форм аспарагинаэы в этой серии опытов не повышает выживание мышей относительно нелеченного контроля, Все исследования произведены в сравнении с нативной L-аспарагиназой, из которой получены модификации.

Критерием эффекта во всех случаях служила продолжительность жиэни подопытных мышей. Продление жизни нщэажено н процентах по сравнению с длительностью жизни контрольных (нелеченных) мышей, Фуран-3-карбочовые амиды L- аспарагиназы общей формулы

R2 60 NH (1, ас арагииа а

81 где R„, R>, R„ водород или метил, обладающий протинолейкозной актинЗО, иост ью.

Источники информации, -принятые во цнимание при экспертлзе

1. Makime Н,, Ба1оп Н,, Kuroiwa Т

Jamasaki Sh, Tamaura Jn ° Jhoda 3п. (mmunochemica1 properties of asparaginaze modifical by chemical substiluons.â€” "jmmunochemi s t ry", 1975, Р 12, с, 183, 2, Патент ФРГ Р 1803782, кл, б а 22/10, опублик, 1968.

3. Патент ФРГ Р 2039061, кл, 6 а 22/10, опублик. 1971.

4. Патент ФРГ Р 1807303, кл. б а 22/10, опублик. 1968.

5. Заянка Р 2093433, 24,09,76, по которой принято положительное решение о выдаче авторского свидетельства,