Штамм -19продуцент -ацетилглюкозаминидазы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистические

Республик (11) 5&7155 (6l) Дополнительное к авт, свид-ву— (22) Заявлено 190776 (21) 2385737/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 05.01.78Бтоллетень № 1 (45) Дата опубликования описания llo178

2 (51) М. Кл.

С 12 К 1/00

С 12 Р 13/10

Геердеретеееныд ееметет

Вееете Меееетрее СОВР ее делам леееретееей

N еткрыте% (53) УДК 577.15.663.. 1 (088.8) (72) Авторы изобретения

П.Д,Валанчюс, В,Ю.Авиженис, А ° С ° A Глемжа, С.С. Валанчене, Ю.Ф.Василяускас н Т.Ю.Падегимас

Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии (7l) Заявитель (54) 3. 3ТАММ Ь а с1 0 Р ц & s u bt i P i e -19-пРОдуцент 33 -АпетилГлюк03АиинидАзы!

Изобретение относится к микробиологической промышленности.

Известен штамм 2acili!us биЫ46з Рсинтезирующий экэо- ф - И вЂ” ацетилглюкоэаминидазу Г 1) . 5

Однако такои штамм не способен синтезировать эндо-/3 — е3-ацвтилглюкозаминидазу, что ограничивает область применения данного ферментного препарата. 30

Кроме того, известный штамм выделяет фермент, который связан с клетками продуцента, что затрудняет получение ферментного препарата в условиях производства. i5

Цель изобретения — получение нового штамма Вос1П и а su bt i P i S Q -19, обладающего более богатым спектром биосинтеза ферментов К -ацетилглюкоэаминидазы.

333тамм BaciPPus вцЫ Йа Ст -19 выде лен иэ почвы лугов. Культура хранится ф коллекции лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-исследовательского института прикладной мик-"5 робиологии.

Полученный новый штамм BaciPPus.

subtiEis Q -19 характеризуется следующими морфологическими, культуральными и физиологическими признаками. 80

Величина клеток односуточной культуры на мясо-пептонном агаре (1,73,2)х (0,5-0,6)мкм. Палочки располагаются цепочками. Клетки окрашиваются разбавленным основным фуксином причем протоплазма окрашивается однообразно. Грамположительные палочки беэ капсул, подвижные с помощью перетриховых ресниц-жгутиков.

Культура образует споры ° Величина спор (l 0-1, 5) х (0,7-0,9) мкм, форма эллипсоидальная, .иногда цилиндрическая, Прорастают споры экваториально путем разрыва мембраны споры вдоль экватора.

На мясо-пептонном агаре после 24; часовой инкубации в термостате образуются колонии диаметром 2-6 мм. Колонии сероватые, желтоватые, непрозрачные, иногда края гладкие, складчатые в центральной части. Иногда колонии твердо врастают в агар.

На ломтиках картофеля культура после 48 ч роста образует пленку беложелтоватого цвета. Пленка сморщена и окружена выступами, быстро образует споры, иногда центральные, не деформирующиеся. Пленка сухая в начале роста, далее становится вязкой.

587155

На поверхности мясо-пептонного бульона после 18-24-часовой инкубации в термостате образуется толстая сморщивающаяся бело-желтоватая пленка, сам бульон остается прозрачным, Оптимальная температура роста 3537 С при рН 6,2-6,6. Дыхание строго аэробное. Гидролиэует крахмал, разжижает желатинуг пептонизирует молоко с образованием. сгустка, t0

Усваивает глюкозу, сахарозу и фруктоэу. Не усваивает лактозу, мальтозу, ксилозу, арабиноэу, рамнозу, сорбит, маннит, дульцит и инозит, Нитраты восстанавливаются до нитритов. Растет в среде с цитратами. На среде Кларка образуется ацетилметилкарбинол. Индола и сероводорода не образует. Гемолитическими, плазмокоагулирующими и фибринолитическими свойствами не обладает. М

Для выращивания нового штамм- Бос.

doubt i ti и Q -19 служит специальная среда, содержащая источники органического углерода, азата и минеральные соли.

Стерильную питающую среду в копбах 25 засевают штаммом Sac.Subtile з 4 — 19 и инкубируют в термостате при 37 С на круговой качалке (180 об/мин), а также на бродильных установках типа Биолофит . 30

На 16-24 ч роста в культуральной жид! ости определяют К вЂ ацетилглюкозаминидаэную активность вискоэиметрическим методом.

Эа единицу активности принимают такое количество фермента, которое снижает вязкость культуральной жидкости Boc subti 1i з (используемой для получения препарата Амилосубтилина с вязкостью 9600-10100) мП на 100 мП за 1 мин при 40 С.

В табл. 1 приведены данные об активности фермента К -ацетилглюкозаминидазы. !

1)тамм Вас, зцЬ1 Р!5 -19 обладает способностью синтезировать кроме эндо- Ч -ацетилглюкозаминидазы и зкзо— К -ацетилглюкозаминидаэу, активность которой определяют по синтетическому субстрату !т -нитрофенил- К -ацетил- Р—

-глюкоэаминиду.

В табл. 2 приведены данные сравнительного анализа предложенного штамма и прототипа.

При использовании штамма Вае.вцЪ06 — 19 получают комплексные препараты К -ацетилглюкозаминидазы с повышенной активностью и различной степенью очистки.

Таблица 1

Способ выращивания

Количество опытов

В колбах

В Биолофитах

8 4

Таблица 2

Результаты сопоставительного анализа

Прототип

Предложе

Экзо- Х - ацетилглюкоэаминидаэная активность по синтетичЕскому субстрату и -нитрофенил-Х -ацетил- Р -глюкоэаминиду 6,67 мед/мл

Выше почти в 2 раза

Не синтезирует эндо— К вЂ ацетилглюкозаминидазу

Наибольшая часть ферментов адсорбирована на клетках бактерий

Экзо- К -ацетилглюкоэаминидазная активносТь по синтетическому субстрату и -нитрофенил- К -ацетил-/3 -глюкозаминиду

13 мед/мл

Эндо- И - ацетилглюкозаминидаэная активность (вискоэиметрический метод)

15,2 ед/мл

Выделяет в культуральную жидкость Ферменты в растворимом виде

К -ацетилглюкоэаминидазная активность, ед/мл

Bac ° &ОЬ1.i Рiь Q — 19 обладает более богатым спектром бисси н тез а ферментов М -ацетилглюкозаминидазы

Облегчаются технологические операции при выделении ферментов из культуральной жидкости

Вас. аи Ь1» Р<э - !9

587155

Формула изобретения

Составитель Г.Серебренникова

Техред М.Келемеш Корректор A.Ëàêèéà

Редактор Л.Волкова

Заказ 84/21 Тираж .Я/ Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ртам Вас Ицв вцЫ з Q — 19-продуцент Ц -ацетилглюкозаминидазы. Хранится в коллекции лаборатории чистых микробных культур Всесоюзного научно-ис5 следовательского института прикладной знзимологии.

Морфологические признаки. Клетки имеют форму палочек размерами (1,7-3,3)

«(0,5-0,6) мкм. Палочки располагаются цепочками. Палочки подвижные с помощью перетриховых ресниц-жгутиков, грамположительные, окрашены разбавленным основным фуксином, причем протоплазма окрашивается однообразно, темных форм нет. Культура образует споры размером (1, 0-1, 5) «(О, 7-0, 9) мкм, форма спор эллипсоидальная, реже цилиндрическая. Прорастают споры экваториально путем разрыва мембраны вдоль 20 экватора.

Культуральные признаки. На мясопептонном агаре после 24-часовой инкубации в термостате культура образует колонии диаметром 2-6 мм. Колонии сероватые, желтоватые, непрозрачные, иногда края гладкие, складчатые в центральной части поверхности. Иногда культура твердо врастает в агар. ®

Культура на ломтиках картофеля после 48 ч роста образует пленку беложелтоватого цвета. Пленка сморщена и окружена выступами, быстро образует субконечные споры, иногда центральные, 85 не деформирующиеся. Пленка сухая в начале роста, становится далее вязкой.

На поверхности мясо-пептонного бульона культура образует толстую сморщивающуюся пленку бело-желтоватого цвета, гри этом мясо-пептонный бульон остается прозрачным.

Физиологические признаки. Оптимальная температура роста 35-37 С при рН

6,2-6,6. Дыхание строго аэробное. Усваивает глюкозу, сахарозу и фруктозу с образованием кислоты без выделения газа. Не усваивает лактозу, мальтозу, ксилозу, арабинозу, рамнозу, сорбит, маннит, дульцит и инозит.

Гидролизует крахмал, разжижает желатину, пептонизирует молоко с образованием сгустка.

Растет в среде с цитратами. Нитраты восстанавливают до нитритов. На среде Кларка образует ацетилметилкарбинол.

Индола и сероводорода не образует. Гемолитическими, плазмокоагулирующими и фибринолитическими свойствами не обладает.

Культура хранится в консервированном виде на ломтиках картофеля в пробирках, лишенных кислорода, с дополнительной пробкой, смоченной пирогаллолом, а также в лиофилизированном виде.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1.Х.М,Or iz.М.С W.Бегке3еу "В а С)те „ц,, д,„Р" 134, 2 71-281, 1973 .