Штамм бактерий продуцент щелочной внеклеточной рибонуклеазы

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 010876 (21) 2389167/28-13 (51) < Кл.

С 12 К 1/00

С 12 Р 13/10 с присоединением заявки №

Г001деретеееный еенетет

С0Вете Меиеетеее СССР

00 ДВВВВт ВВВЕЕетеВВС

0 ВтеентеС (23) Приоритет (43) Опубликовано 050178.Бтоллетень № 1 (45) Дата оп) бликования описания 1101,78 (53) УДК 577.15.663. .1 (088.8) И.Б. Лещинская, P.A.

N.Н. Капранова и

Казанский ордена Труд государственный униве (54) hTANM БАКТЕРИЙ Вас1Иие inter me81us

7р-пРОдуЦент @елО тнОй БнеклетО тнОй

РИБОНУКЛЕАЗЫ

Б табл. представлены данные о рибонуклеаэной активности разных штаммов Вас1т,сus 1п1егrned1us, 80 выделенных из образцов почв Татарии. е. 1

Изобретение относится к нроизвсд= ству ферментов и представляет собой новый штамм бактерий SaciEFus irrterrn е 61us lð, выделенный из почвы и отобранный по признаку наибольшей ибонуклеазнсй активности, который может быть использован для производства щелочной рибонуклеазы.

Известнср что наиболее eLKTHBHbMH в отношении синтеза внеклеточной щелочной рибонуклеазы являются раз-: ные штаммы Bacillus subtiEis, Вас1Иоэ rnesentep1cvsуВас1ееОь astevosponus (1.) °

Однако известные штаммы обладают недостаточно высокой активностью и

s настоящее время бактериальные рибонуклеазы не выпускаются промышленностью.

Цель изобретения — получение нового штамма бактерий Заc1ГСus inter гпе81и s 7р-продуцента щелочной внеклеточной рибонуклеазы.

Штамм выделен из почвы Татарии с последующим клонированием.

Для получения штамма бактерии выделяли из образцов почв Татарии, боготых органическими остатками животного и растительного происхождения. ,Для выделения бактерий-продуцентов

2 нуклеолитических ферментов была применена методика элективных сред. Испольэовали среду, содержащую нуклеиновые кислоты в качестве единственного источника фосфора. На среде с рибонуклеазой в основном выделялись представители семейства В а с i с Ва с еа е.

Определение дс вида производилось по определению Красильникова (1949) .

При лабораторной проверке активности выделенных штаммов оказалось, что наиболее высокой активностью щелочной рибонуклеазы обладают разные штаммы

bacillus irrterrrrediuS .. Наиболее активным оказался штамм

SaciHus 1п1е me 81ое (. Методом естественного рассева из микробной популяции был отобран клон по признаку максимальной .РНКаэной активности (штамм те 7р). При выращивании отобранного клона на МПБ в течение 48 ч на качалках 100-120 об./мин при

27 С активность его дос-игала 400500 ед.

587156

200

1.

2 °

210

280

200

200 б.

220

250

10.

210

12, 200

13.

14.

15.

Штамм Bere,if(us inter me dius 1Ф 7 росле клонирования методом естественного рассева и отбора колонии. даю-. 38 щей повышенную активность РНКаэы

400-500 ед., был обозначен как штамм, 7р. Штамм бактерий BaciKEus inter пзед vs „

7р имеет с едующие морфологические и-40 физиологические признаки.

Морфологические признаки.

Величина клеток односуточной культуры на мясо-пептонном агаре 3-6 х х 0,9 мк . Клетки палочковидные, в 45 основном одиночные, реже соединяются в короткие цепочки, подвижные, перитрихи, грамположительные. Образуют овальные споры, не превышающие диаметра клетки и не раздувающие клетку. Споры >О располагаются эксцентрально. На мясо" пептонном arape образуются белые, гладкие, блестящие, слегка выпуклые колонии, старые культуры образуют матовые, слегка шероховатые, плоские ко 5 лонии; колонии не врастают в субстрат и легко снимаются петлей. Пигменты не образуются. На картофеле влажноблестящий налет без пигментации. На мясо-пептонном бульене образуется

1 муть и осадок, планка не образуется.

Физиологические признаки.

Аэроб, максимум роста при 25-27 С.

Молоко пептонизирует и свертывает.

Желагину разжижает . Крахмал гидролизует. Усваивает глюкозу, сахарозу, мальтозу с образованием кислоты. Нитраты восстанавливает. На синтетической среде растет плохо.

При культивировании Bac EEus inter тей ь7рприменяют питательную среду следующего состава, % в объеме воды: глюкоза 0,5; пептон 2,0; трис 0,24;

НаСЕ 0,3; Mg 50 7Н О О,ОЗуСаСР "

"2H О 0,01; мпьО, 0,01, рН 7,5 (видоизмененная среда из работы

Na1caieta8 1965, У. В1ос? егп, 57, 96. ) .

Рибонуклеазная активность 20002500 ед. Рибонуклеазная активность

Вас. Sv trtipvs И Вас.rnesentenicus в этих условиях 1000-1200 ед.

Были проведены пробные ферментации в ЦЗЛ Вильнюсского ферментного завода на ферментерах марки Биолофит, с объемом среды 10 л при 30 С, энергетичной аэрации, постоянном рН

7,5-8,0. В этих условиях через 20 ч

РНКазная активность н среде 10000 ед., тогда как активность Bac. rnesentenicus в этих же услониях 3000 ед.

Штамм бактерий Baci P.Cus inter me81 U s 7р обладает рибонуклеазной активностью, превышающей в 2-2,5 раза активность других споровых бактерий.

Формула изобретения

Штамм бактерий Вас-I p. gus in te en m eQ иь 7р продуцент щелочной внеклеточной рибонуклеазы. Хранится н коллекции каферды микробиологии

Казанского государственного университета.

Морфологические признаки.

Клетки палочконидные, длина от 3 до 6 мк, диаметр 0,9 мх, в основном одиночные, реже соединяются в цепочки, подвижные, перитрихи, грамположительные. Споры овальные, не превышают диаметра клетки, расположены эксцентрально.

Мясо-.пептонный агар. Белые, гладкие, блестящие, слегка выпуклые колонии с ровными краями, старые культуры образуют матовые, слегка шероховатые колонии. Колонии легко снимаются петлей. Пигменты не образуются.

Картофель. Блестящий налет без пигментации. Мясо-пептонный бульон.

Образуется муть и осадок, пленка не образуется.

Физиологические признаки.

Аэроб, максимум роста при 25-27 С.

Иолоко пептонизирует и свертывает. Желатину разжижает. Крахмал гидролизует.

Глюкозу, сахарозу, мальтозу усваинает с образованием кислоты, без выделения

587156

Составитель Т. Серебренникова

Ре акто Л. Волкова Техред Е.Давидович Корректор В.Сердюк

6 Ы

Заказ 162/48 Тираж 567 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва, Ж-35 Раушская наб.с д. 4 5

Заказ Филиал ППП Патент, г. Ужгород., ул. Проектная, 4 газа. Нитраты восстанавливает ° Плохо растет на синтетических средах.

Активность щелочной РНЛаэы выше, чем y Bcaei t tus sv btitis, Sacittus Tnesen1е с,vs в 2-2,5pasaИсточники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Юсупова О.И. и др. Ферменты микроорганизмов . М., Наука, 1973, 6 с. 163.